猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制

目的 :探讨猪 猕猴延迟性异种移植排斥反应 (DXR)的发生机制。方法 :建立湖北白猪 云南猕猴的腹腔异位心脏移植模型 ,应用中华眼镜蛇毒因子 (Y CVF)完全清除受者体内补体 ,并应用环孢素A(CsA)、环磷酰胺 (CTX)和甲泼尼龙 (M .P)三联免疫抑制治疗。检测血清C3、C4、抗猪内皮细胞天然抗体 ,免疫组化方法染色检测移植物中C3、C5b 9、IgG、IgM、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、单核巨噬细胞 (CD6 8)、NK细胞 (CD5 7)、CD4 +T细胞和CD8+T细胞的表达。结果 :移植心存活时间分别为 8、10、13和 13天 ,血清C3和补体总活性均下降为 0 ,抗猪内皮细胞天然抗体水平在移植后则有一个更为明显的下降 ,在移植心失功前 2～ 4天开始天然抗体稍有回升 ,但较术前正常时仍明显偏低。移植心有程度不等的C3、C4、C5b 9、IgG及IgM沉积 ,大量的单核细胞 (5 0 % ) ,少量的NK细胞 (8%～ 10 % )、CD4 +T细胞 (15 % )和CD8+T细胞(2 5 % )。移植物血管内皮细胞表面出现ICAM 1的表达上调 ,移植物间质中出现TNF α的表达增加。结论 :体液免疫和细胞免疫参与猪 猕猴DXR排斥反应的发生。

早期肠内营养在减轻急性胰腺炎急性期反应及改善疾病转归中的作用

目的 探讨早期肠内营养在减轻急性胰腺炎急性炎症反应和改善疾病转归中的作用。方法 检测 62例急性胰腺炎患者的APACHEⅡ积分、C反应蛋白、血清内毒素及CT积分 ,按严重程度分类并随机接受肠外或肠内营养 7d后再检测上述指标。结果 肠内营养组全身炎症反应综合征 (SIRS)、脓毒血症、器官功能不全发生率及重症监护时间明显降低 ,急性炎症反应性指标C反应蛋白及疾病严重程度积分指标APACHEⅡ明显改善 ,肠外营养组上述指标未见改变 ;并有内毒素升高 ;肠内营养组内毒素无变化。结论 早期肠内营养可缓和急性胰腺炎患者的急性期反应 ,改善疾病转归和预后 ,调节胰腺炎症和脓毒性反应 。

血小板聚集抑制剂TMVA减少异种移植急性血管性排斥反应时血栓的形成

目的 :在大鼠体内观察烙铁头蛇毒血小板聚集素TMVA对异种移植急性血管性排斥反应 (AVR)时血栓形成的影响。方法 :采用仓鼠到大鼠心脏移植模型 ,观察空白对照组及TMVA实验组中移植物存活时间 ,病理检查及移植心组织内TXB2 及 6 -keto -PGF1α含量。结果 :移植物存活时间未见明显延长 ;TMVA实验组排斥病理表现较轻 ,血栓形成明显减少 ,移植组织内TXB2 及 6 -keto -PGF1α含量两组未见明显差异。结论 :TMVA能明显减少发生AVR时异种移植物血管内血栓的形成 。

免疫活性细胞在异种移植急性血管性排斥反应中的意义

目的探讨免疫活性细胞在异种移植急性血管性排斥反应(AVR)中的意义。方法猪到猕猴腹腔内异位心脏移植,使用高纯度的眼镜蛇毒因子完全清除受体体内补体,建立AVR模型。常规病理检查,并采用免疫组化法检测移植心CD4+T细胞、CD8+T细胞和巨噬细胞浸润程度,检测细胞间黏附分子1(ICAM1)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的表达水平。结果移植心内大量淋巴细胞浸润,其中50%为巨噬细胞,CD4+T细胞占15%,CD8+T细胞占25%;ICAM1和TNFα表达明显上调。结论细胞机制在异种移植AVR发生、发展过程中发挥重要作用。

协调性异种移植物存活时间与受体IgM型诱生抗体水平的关系

目的 采用仓鼠到大鼠移植模型 ,观察移植物存活时间与受体血清IgM型诱生抗体水平的关系。 方法 仓鼠心脏移植于SD大鼠颈部 ,按不同剂量及配对方案给予免疫抑制剂 ,单磷酸肌苷 (次黄嘌呤苷 )脱氢酶抑制剂(ERL) 10～ 30mg/(kg·d)、雷帕霉素 (RAD) 1 0～ 1 5mg/(kg·d)、环孢素A (CyA) 5～ 10mg/(kg·d)。观察移植心存活时间 ,ELISA法测定移植心被排斥时血清IgM型诱生抗体水平 ,计算两者的相关系数。 结果 对照组移植心平均存活时间为 (3 7± 1 1)d。单用ERL和CyA组移植心存活时间无延长 ,RAD组有一定的延长 (6 0± 0 9)d ,P <0 0 1;联合用药组可见移植物存活时间明显延长 (P <0 0 1) :ERL +CyA、ERL +RAD、RAD +CyA及RAD +ERL +CyA组的移植物平均存活时间分别为 (8 0± 3 5 )d、 (10 3± 4 7)d、 (12 8± 2 9)d及 (10 0± 2 2 )d。排斥时大鼠抗仓鼠IgM反应显著受抑制 ,且平均抗体水平与平均移植物存活时间呈负相关 (r =- 0 86 2 ;P <0 0 5 )。结论 仓鼠移植物存活时间与受体血清IgM型诱生抗体水平呈显著的负相关 ,ERL、RAD与CyA配合使用能有效抑制大鼠抗仓鼠IgM并明显延长异种移植物的存活时间。

不同免疫重建时间对免疫缺陷小鼠排斥仓鼠移植心脏的影响

为探讨非特异性损伤因素对排斥反应所造成的影响 ,建立仓鼠对裸小鼠心脏移植模型 ,分别在手术当天 ,术后 10 0d及 2 70d重建受者免疫系统 ,观察仓鼠移植心的存活及移植心组织内热休克蛋白 70的表达水平。发现随术后免疫重建时间的推移 ,移植心组织内热休克蛋白 70的表达则逐渐降低 ,而受体排斥移植心所需时间逐渐延长。提示包括非特异性损伤(手术、缺血、感染等 )在内的各种因素能在相当长的时间内参与诱发移植排斥反应。

谈小学篮球教学

篮球运动在校园内的学生中很受欢迎。随着教育改革,校园篮球在体育课中的比例将逐步提高。根据学生的爱心和心理特点,合理的篮球训练在课堂上会产生事半功倍的效果。下面简要讨论篮球教学的不足,篮球教学的改进措施和遵守的原则。

FTY720作用机制及诱导移植免疫耐受的研究

目的 进一步探讨FTY72 0作用机制及诱导移植免疫耐受的可能途径。 方法 电泳观察FTY72 0 (10 μmol/L)对体外培养的小鼠脾细胞DNA的作用。利用BALB/c(H 2d)到C57BL/6(H 2b)小鼠颈部异位心脏移植模型 ,观察FTY72 0不同给药时间对移植物存活的影响。将受体鼠分为 6组 :第 1组 (n =6)为空白对照组 ,第 2～ 6组为实验组。第 2组 (n =14 )、第 3组 (n =6)、第 4组 (n =6)每天管饲FTY72 0 (3mg/kg体重 ) ;服药时间分别为 :第 2组移植前 3日～移植后第 11日 ,第 3组移植当日～移植后 14日 ,第 4组移植前 3日～移植当日。第 5组 (n =6)和第 6组 (n =6)于移植前 3日～移植后第 11日分别管饲环孢素A(10mg/kg体重 )和 40 氧 (2 羟乙基 ) 雷帕霉素RAD(3mg/kg体重 )。第 2组中长期存活鼠中 ,部分接受了二次 (皮肤 )移植 ,部分检测了全血清IL 4和IFN γ浓度。 结果 小鼠脾细胞与FTY72 0共育后 ,DNA出现典型的凋亡改变。第 1组移植物中位存活时间 (MST)为 8d ;第 2组所有移植物存活均超过 2 7d ,1/2的移植物存活超过 10 0d ;第 3组的MST为 16 5d ;第 4组的MST为 14d ,有 1只超过 10 0d ;第 5组、第 6组的MST分别为 10d和 13d。第 2组长期存活的小鼠IL 4水平明显升高 ,IFN γ水平稳定。 结论 FTY72

单核细胞、NK细胞和T细胞在猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应中的作用

目的 观察单核细胞、NK细胞和T细胞在猪 猕猴延迟性异种移植排斥反应 (DXR)中的作用。方法 建立湖北白猪 云南猕猴的腹腔异位心脏移植模型 ,实验分为 2组 :对照组 (n =5 ) ,不使用中华眼睛蛇毒因 (Y CVF) ;实验组 (n =4)应用Y CVF完全清除受者体内补体。 2组受体猴均采用环孢素A(CsA) ,环磷酰胺 (CTX)和甲基强的松龙 (MP)三联免疫抑制治疗。免疫组织化学方法检测移植心组织中细胞间黏附分子 (ICAM ) 1、肿瘤坏死因子 (TNF) α、单核细胞、NK细胞和T细胞的表达。结果 对照组 3个移植心在 15～ 60min内发生超急性排斥反应 (HAR) ,另 2个分别存活 2 2h及 6d ,移植心均未见明显的炎性细胞浸润及ICAM 1和TNF α的表达。实验组移植心存活时间分别为 8、10、13和 13d ,移植物浸润细胞中可见大量的单核细胞 (5 0 % ) ,少量的NK细胞 (8%～ 10 % ) ,CD4+ T细胞 (15 % )和CD8+ T细胞 (2 5 % )。移植物血管内皮细胞表面出现ICAM 1的表达上调 ,移植物间质中出现TNF α的表达增加。结论 单核细胞、NK细胞和T细胞介导的移植物损伤 ,在应用Y CVF处理的猪 猕猴DXR发生中发挥重要作用。

清除补体避免猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

目的 观察纯化的眼镜蛇毒因子 (CVF)对猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的影响。方法 以幼猪为供者 ,施行猪到猕猴腹腔内异位心脏移植 ,实验组 (n =4 )使用CVF完全清除受者体内补体 ,对照组 (n =5 )不使用CVF ,两个组术后均采用环孢素A、甲泼尼龙和环磷酰胺抑制排斥反应 ,通过检测血清C3、C4水平及总补体活性验证CVF的效果 ,移植心停跳时切取移植心进行病理检查。结果 在使用CVF后 ,实验组血清C3降为 0 ,总补体活性CH5 0值也几乎为 0 ,未发现明显毒副反应 ,移植猪心存活时间平均为 11d ,最长达 13d ,病理学提示均发生了延迟性异种排斥反应 ;对照组 3个移植心在移植后 6 0min内发生超急性排斥反应 ,另 2个分别存活 2 2h及 6d。结论 纯化的CVF有良好的清除补体的作用 ,且未见明显副作用 ;

探讨抗γ公共链单抗诱导移植免疫耐受的作用机制

目的探讨抗γ公共链单抗在诱导移植免疫耐受中的作用机制。方法将实验动物分为2组,每组20只。实验组:在Balb/c裸小鼠(H-2d)体内用CFSE标记的Balb/c小鼠(H-2d)T细胞(3×107个)重建其免疫系统,同时给予经丝裂霉素C处理的供者C57BL/6小鼠(H-2b)脾细胞(5×106个)静脉输注,24h后实验组受鼠经腹腔注射抗γc单克隆抗体(4G3,3E12,TUGm2,各0.5mg)和抗白细胞介素2受体(IL-2R)β链单克隆抗体(TM-β1,0.5mg)混合液;对照组:以IgG2a2.0mg作为同型对照代替抗体腹腔注射,余处理与实验组相同。经上述处理后12h和48h后处死受鼠,取其脾细胞及外周血,利用流式细胞技术检测T细胞的增殖及凋亡。结果经抗体处理12h和48h后,实验组T细胞未发生明显增殖;而对照组两时间点均可观察到CFSE标记细胞荧光强度明显地减低,表明T细胞发生了分裂增殖。同时AnnexinV法可见,实验组标记有CD3-PE单抗的T细胞12h发生了明显的凋亡,但48h却几乎无明显的凋亡细胞;而对照组两时间点则均未检测到明显的细胞凋亡。两组间12h结果差异有统计学意义(P<0.01),但48h差异无统计学意义(P>0.05)。结论移植术前给予抗γ公共链单抗联合供者细胞特异性输注,通过有效抑制针对供者抗原发生效应的T细胞增殖,可进一步促使其发生凋亡而被有效清除,从而最终实现免疫耐受,且此种耐受具有抗原特异性。

猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的免疫学及病理学变化

目的观察猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应时的免疫学及病理学变化。方法采用猪到猕猴腹腔内异位心脏移植模型,检测发生超急性排斥反应者的血液中补体、天然抗体及T淋巴细胞亚群的变化,并对移植心脏进行免疫组化(测定C3、C4、C5b9、IgG及IgM的沉积)及病理学分析。结果发生超急性排斥反应时,血清补体C3、C4的含量、总补体活性及抗猪内皮细胞天然抗体均有一定程度的下降;CD4+/CD8+T淋巴细胞的比率也有所下降;移植心脏中均有补体C3、C4、C5b9的沉积,IgG及IgM也均有沉积,但IgG和IgM沉积强度的差异无统计学意义;病理学改变主要为心肌间质弥漫性出血、水肿,毛细血管内普遍淤血。结论补体通过经典途径激活参与猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应;超急性排斥反应时受者血中天然抗体水平明显下降;CD4+T淋巴细胞可能参与异种移植超急性排斥反应过程并有所消耗;发生超急性排斥反应的移植物突出病理表现为间质出血。

术前使用FTY720诱导小鼠对同种异体心脏移植物的耐受

目的 观察术前使用FTY72 0对小鼠同种异体心脏移植物存活时间的影响。方法 以小鼠颈部异位心脏移植为模型 ,供者为BALB/c小鼠 ,受者为C57BL/ 6小鼠。受鼠分为 4组 :A组为空白对照组 ;B组术前 3d至术后 1 1d每日管饲FTY72 0 ;C组手术当天至术后 1 4d每日管饲FTY72 0 ;D组仅在术前 3d至手术当天每日管饲FTY72 0。FTY72 0的剂量都为 3mg·kg- 1 ·d- 1 。结果 A组移植物中位存活时间 (MST)为 8d ;B组所有移植物存活时间均超过 2 7d ,有半数 (6/ 1 1 )移植物存活超过1 0 0d ;C组移植物存活时间显著延长 (MST =1 6d) ;D组移植物中位存活时间为 1 4d ,并有 1只超过1 0 0d。结论 术前使用FTY72 0可以延长同种异体心脏移植物的存活时间 。

大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。

建立猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型

目的 评价改进后的猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型的效果。方法 建立21例猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型，其中采用传统手术方法11例，改进方法10例。改进方法为缩短供心缺血时间，调整了手术顺序，先游离受者供吻合的腹主动脉及下腔静脉段后，再行供心切取，并且改进了切取供心的方法。比较2种手术方法的热缺血时间、移植心功能恢复情况及术后并发症。结果 采用传统手术方法时，移植心准备时间为20～30min，热缺血时间为3～5min，总缺血时间为80～90min，再灌注后均未恢复正常的全心搏动，仅见右心收缩，移植后发生并发症较多（包括出血、吻合口血栓形成、肠道并发症及静脉回流不畅等）。改进手术方法后，移植心准备时间为5～10min，热缺血时间〈1min，总缺血时间为35～40min，再灌注后有6例恢复全心搏动，发生并发症较少。结论 改进后的猪心脏移植到猕猴腹腔内的异位心脏移植模型，其手术方法明显优于传统方法。

FTY720对小鼠外周血淋巴细胞及T细胞亚群的影响

目的 观察FTY72 0对近交系小鼠淋巴细胞及T细胞亚群变化的影响以指导临床用药。 方法 选用雄性C5 7/bl近交系小鼠。FTY72 0 3mg·kg-1·d-1,连续口服 14d。在各所选时间点计算淋巴细胞百分比 ,流式细胞术分析T细胞亚群变化。 结果 服用FTY72 0后 ,小鼠外周血淋巴细胞迅速下降 ,并于 4h降至最低值 ,之后保持稳定。停用FTY72 0后小鼠外周血淋巴细胞仍在低水平徘徊 2周 ,第 3周开始出现明显回升 ,停药后第 6周恢复至服药前水平。T细胞在服用FTY72 0后的变化与淋巴细胞相似。CD-8T细胞对FTY72 0相对较敏感。 结论 FTY72 0对外周血淋巴细胞的作用起效迅速 ,安全稳定 ,特异性强 ,可逆。对T细胞及其亚群的作用基本符合以上特点 ,CD-8T细胞对FTY72 0相对较敏感。

供者特异性抗原静脉输注联合抗γ链单克隆抗体诱导小鼠皮肤移植物免疫耐受

目的 探讨静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体(IL 2R)γ链单克隆抗体诱导移植免疫耐受的可行性。方法 在C57BL/6小鼠建立H Y皮肤移植模型,术前7 d给予5×106个供者脾细胞静脉输注,并分别于术前6 d和4 d给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体(4G3、3E12及TUGm2各0.5 mg)和抗IL 2Rβ单克隆抗体(TM β1,0.5 mg)混合液2.0 mg腹腔注射,以单纯行H Y皮肤移植模型和静脉输注供者特异性抗原的H Y皮肤移植模型为对照,观察皮肤移植物的存活时间。结果 联合给予抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体和供者特异性抗原输注组的皮肤移植物存活时间均超过100 d,显著长于单纯H Y皮肤移植组的33.42 d(P<0.01)及仅输注供者特异性抗原H Y皮肤移植组的14.71 d(P<0.01)。结论 在H Y皮肤移植模型中,静脉输注供者特异性抗原联合抗白细胞介素2受体γ链单克隆抗体可以成功地诱导受者对皮肤移植物的免疫耐受。

重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig转染延长同种大鼠心脏移植存活时间

目的研究重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig(rAAV-CTLA4Ig)全身转染对大鼠同种心脏移植的影响.方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型.实验分为两组.对照组:供、受者不给予任何处理;转染组:受者于心脏移植前30d,通过尾静脉全身注射1×109斑点形成单位(PFU)的rAAV-CTLA4Ig.观察移植心存活时间;ELISA法检测血清CTLA4Ig、干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;免疫组织化学法(SABC法)检测移植心组织中CD4+和CD8+T细胞的浸润.对移植心存活时间明显延长的受者,用其脾细胞与供者脾细胞进行混合淋巴细胞培养,观察受者对供者的免疫反应状态.结果转染组移植心存活时间较对照组明显延长(P＜0.05);转染组血清CTLA4Ig蛋白一直维持在26.67～35.47 mg/L,移植后转染组血清IFN-γ水平下调,血清IL-4水平上调(P＜0.05);对照组出现典型的急性排斥反应表现,转染组心肌组织基本正常,间质内无炎性细胞浸润或血管外周及心肌间质内有局灶性炎性细胞浸润,未见坏死:对照组移植心组织中浸润的CD4+和CD8+T细胞数量明显高于转染组(P＜0.01);转染组受者对供者的脾细胞增殖反应明显低于对照组(P＜0.05).结论重组腺相关病毒载体可以介导CTLA4Ig基因的持续表达,通过全身途径转染受者可以明显延长同种移植心的存活时间,降低受者对供者的免疫反应性.