致敏小鼠骨髓间充质干细胞体外培养及多向分化功能的测定

目的:评价异基因脾细胞输注致敏的小鼠骨髓源性间充质干细胞(MSCs)的体外培养生长能力及其多向分化功能。方法:应用贴壁培养法体外培养间充质干细胞,流式检测其表面标志以及检测其成骨、成脂和成肌多向分化状况;结果:致敏小鼠骨髓源性MSCs与非致敏小鼠骨髓源性MSCs比较,形态学无差异且均表达CD29+、CD105+、CD44+和Sca-1+;CD34-、CD11b-;同时在相应的诱导条件下具有向成骨、成脂、成肌多向分化的能力。结论:异基因脾细胞输注致敏的小鼠,其骨髓源性MSCs的形态学和功能与正常小鼠的MSCs比较评估未见异常。

骨髓间充质干细胞在致敏小鼠体内的示踪归巢实验

【目的】了解骨髓间充质干细胞在以异基因脾细胞输注致敏小鼠体内的归巢情况。【方法】正常同种异基因小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及鉴定后,体外予羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯荧光染料标志,经尾静脉注射到致敏组和非致敏组小鼠体内(每组10只),在6 h、24 h和48 h处死动物,分别应用冰冻切片和流式检测方法了解骨髓间充质干细胞在各个脏器的分布情况。【结果】冰冻切片和流式检测结果均表明骨髓间充质干细胞在致敏小鼠体内迅速和持久在脾、肝脏聚集,而非致敏动物却没有明显聚集到肝脾等脏器,而是最终归巢到了骨髓。其中流式细胞仪定量结果表明:6 h时致敏小鼠脾脏荧光阳性细胞为(3.78±0.66)%,与同期正常小鼠脾脏结果比较P<0.05,有统计学意义;而在48 h时致敏小鼠骨髓荧光阳性细胞为(0.43±0.35)%,同期正常小鼠骨髓为(5.40±1.58)%,两者比较P<0.05,有统计学意义。【结论】应用异基因脾细胞致敏的小鼠体内肝脾等免疫脏器明显受到致敏影响,其对骨髓间充质干细胞体内归巢的定位具有很高的趋化吸附作用,中止了骨髓间充质干细胞正常状态下向骨髓的归巢。

骨髓间充质干细胞对致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入的影响

目的:前期的研究已经证实致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入失败率高。本研究拟通过骨髓间充质干细胞(MSCs)进行干预,观察能否提高造血干、祖细胞移植的植入率。方法:应用贴壁培养法体外培养正常小鼠骨髓MSCs,并分为6个实验组,包括实验组1:d11 MSCs干预的致敏组;实验组2:d0 MSCs干预的致敏组;实验组3:d11和d0 2次MSCs干预的致敏组;实验组4:无MSCs干预的致敏小鼠对照组;实验组5:无MSCs干预的正常小鼠(非致敏小鼠)移植对照组;实验组6:无MSCs干预的正常小鼠不移植对照组。观察指标包括生存分析、移植效果分析(血象改变、骨髓细胞恢复及嵌合分析等)和移植物抗宿主病(GVHD)检测,最终评估MSCs干预对各实验组异基因造血干/祖细胞移植植入率的影响效果。结果:与对照组(实验组4、5、6)比较,MSCs干预(实验组1、2、3)在2次异基因脾细胞注射法致敏的动物模型进行异基因造血干/祖细胞移植时,未能促进骨髓造血干/祖细胞移植的植入,也未能延长致敏动物移植后的生存时间。结论:体内应用1×106MSCs干预,未能促进2次异基因1×106C57BL/6小鼠脾细胞输注法建立的重度致敏模型异基因造血干/祖细胞移植的植入。

骨髓间充质干细胞对致敏小鼠淋巴细胞增殖的影响及其作用方式

本研究探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)在体外对致敏小鼠淋巴细胞增殖的影响及其作用方式,以便进一步了解MSC对致敏小鼠影响的可能机制。建立致敏模型后,将应用贴壁培养法体外培养的正常小鼠骨髓MSC或其培养上清液作为免疫细胞或免疫因子,致敏小鼠的淋巴细胞作为效应细胞,用植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激淋巴细胞增殖,在体外应用MTT法检测两者的混合淋巴细胞增殖反应。结果表明,正常小鼠骨髓MSC在体外能很好地抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖,同时在MSC培养上清液也能观察到类似现象,而且随着两者细胞比例或浓度比的增大,抑制作用有所加大,当两者比例为1∶1时抑制作用最大(有明显的统计学意义)。结论:MSC能在体外明显抑制致敏小鼠脾淋巴细胞增殖,该作用可以通过细胞与细胞(MSC和淋巴细胞)直接接触抑制,也可通过细胞与细胞的间接作用(如MSC的培养上清液与淋巴细胞)方式发挥作用。

FAK基因沉默诱导白血病细胞凋亡

目的:本研究靶向黏着斑激酶(FAK)基因,构建FAK-shRNA慢病毒载体,并研究FAK基因沉默对白血病细胞生长的影响。方法:化学合成人FAK基因的shRNA序列,应用分子生物学方法将该FAK shRNA序列插入含荧光素GFP慢病毒质粒。该FAK shRNA慢病毒载体在体外包装、浓缩,然后转染至人白血病细胞株。应用逆转录聚合酶链反应及蛋白质印迹方法检测FAK基因表达水平,予Annexin V标记检测细胞凋亡的情况。结果:经核苷酸序列分析提示FAK shRNA正确插入慢病毒质粒,该病毒载体在白血病细胞株的转染率为10%-25%。与对照组相比(无FAK shRNA的慢病毒载体),FAK shRNA慢病毒载体在细胞FAK mRNA及蛋白水平的抑制率分别为40%和70%。凋亡实验表明,对照组与FAK shRNA慢病毒载体组的Annexin V阳性率分别为(4.19±0.36)%和(8.48±0.58)%,两者差异明显(P<0.05)。结论:我们成功构建FAK shRNA慢病毒载体,该载体能抑制FAK基因表达并诱导白血病细胞凋亡。

脑卒中患者医院感染危险因素分析

目的探讨脑卒中患者医院感染危险因素及特点,以便采取有效的控制措施。方法对住院时间≥24h的270例脑卒中患者进行医院感染危险因素分析。结果脑卒中患者医院感染发生率7.0%,其中出血性脑卒中患者医院感染发生率19.7%,高于缺血性脑卒中的2.5%,差异有统计学意义(P=0.000);呼吸道感染最多,占50.0%;其次口腔感染,占40.9%。病原主要为真菌。意识障碍重、侵入性操作、住院天数长及预防性应用抗生素等是主要危险因素。结论脑卒中患者为医院感染的高危人群,特别是出血性脑卒中患者;我们应积极控制相关的危险因素,预防医院感染的发生。

脾细胞输注致敏对异基因骨髓细胞损伤的机制

【目的】探讨脾细胞输注致敏对异基因供者骨髓细胞损伤的作用机制。【方法】应用异基因脾细胞输注的BALB/c小鼠作为致敏模型,未致敏(正常)BALB/c小鼠作为对照,异基因供者骨髓细胞来源于C57BL/6小鼠。通过补体依赖细胞毒性反应(CDC)、细胞毒性免疫细胞杀伤作用、抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)、粒-单核细胞集落培养(CFU-GM)等实验研究致敏血清及致敏免疫细胞对异基因骨髓细胞的影响。【结果】与补体孵育30min或1hr后,致敏血清组死亡细胞百分比明显高于正常血清组,其差异有统计学意义(P<0.001);细胞毒性免疫细胞杀伤作用及ADCC实验中致敏组的细胞毒性指数均高于正常组,其差异亦有统计学意义(P<0.05);致敏血清与骨髓细胞孵育组的CFU-GM数量比单纯骨髓细胞组有所减少,但两者差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】致敏受者通过体液免疫及细胞免疫途径损伤异基因骨髓细胞。

抗CD20单抗在致敏受者造血干细胞移植中应用的实验研究

目的:寻找促进异基因造血干细胞在致敏受者植入的策略研究,探讨抗CD20单抗在致敏受者造血干细胞移植的作用。方法:分别于移植前第14d及第7d予BALB/c小鼠输注C57BL/6小鼠的脾细胞建立致敏模型。实验组于移植前第11d经尾静脉输注抗CD20单抗(美罗华)2mg/mouse,对照组于移植前第11d予输注RPMI-1640培养液0.2mL/mouse。于第0d(移植当天)取部分小鼠分离得血清及脾细胞,并检测供者反应性抗体及CD19+B细胞;部分小鼠予[^(60)Co]致死量照射,4h后予1×107C57BL/6小鼠骨髓细胞进行移植,观察生存情况及血常规恢复情况。结果:实验组与对照组血清细胞毒性指数分别为(37.00±3.46)%和(51.80±3.49)%,差异显著(P<0.01);2组的脾细胞CD19+B细胞百分比分别为(17.32±3.02)%和(34.26±2.87)%,差异显著(P<0.01)。照射移植后2组受者均于14d左右全部死亡,生存中位数分别为第13d及第11d,Log-rank检验2组间的差别无显著(P>0.05)。濒死动物血常规结果示三系减少,提示受者死于造血衰竭。结论:抗CD20单抗能杀伤受者B细胞,降低致敏程度,但实验中该单抗并不能有效促进异基因造血干细胞在致敏受者的植入。

间充质干细胞在致敏受者造血干细胞移植中的作用

【目的】本实验拟研究骨髓间充质干细胞(MSC)在致敏受者造血干细胞移植中的作用。【方法】体外分离BALB/c小鼠骨髓细胞,通过贴壁培养方法获得MSC,应用流式细胞仪检测细胞表面分子标记。通过异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型;绿色荧光染料标记骨髓MSC,分别移植到非致敏及致敏受者体内,并于移植后不同时间点检测MSC的归巢情况。致敏BALB/c小鼠经照射预处理,联合应用同基因MSC与异基因骨髓细胞移植,每日观察小鼠的生存情况。【结果】体外培养第4代MSC表现为长梭形,阴性表达造血细胞表面分子而阳性表达粘附分子。动物体内实验发现移植后第48小时,MSC在非致敏受者体内主要归巢于骨髓,而在致敏受者体内主要归巢于脾脏。造血干细胞移植实验中,致敏小鼠接受同基因骨髓MSC与异基因骨髓细胞移植,结果发现致敏小鼠在移植后第12～16天全部死亡,生存中位数时间是14 d。【结论】成功培养小鼠骨髓MSC;移植后MSC在致敏受者体内主要归巢于脾脏组织;联合应用MSC移植并不能有效促进异基因造血干/祖细胞在致敏受者体内植入。

海带中碘的检验和应用

检验海带中的碘元素,是各个教材中均有涉及的内容。该实验改变传统的灼烧法、浸泡法,直接采用浓硫酸氧化法,使实验时间从20 min以上缩短为2 min左右,避免了室内空气污染,减少酒精的浪费,另外实验操作简单,现象直观,对于课堂一线教学时效性强,并融入指纹实验,激发学生学习热情,提高课堂的趣味性,也开拓了学生的视野。

人教版“物质的分类——胶体的性质”教学设计

“胶体”的知识与学生以往所学的知识有所不同,它研究的不是某种物质所特有的性质,而是物质的聚集状态的变化表现出的特有性质,本文以实验演示、模型建设以及逻辑推论等教学手段让学生体会宏观与微观之间的联系,领悟知识的形成与实验中呈现的感性观察与想象。

α-干扰素联合GM-CSF体外诱导培养脐血树突状细胞及其功能的测定

目的 探讨重组人α-干扰素 (rh IFN-α)联合重组人粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (rh GM- CSF)体外诱导培养脐血树突状细胞 (DCs)的实验方法。方法 人脐血贴壁单个核细胞加入 rh IFN- α及 rh GM- CSF诱导培养 ,镜下观察培养细胞形态 ;流式细胞术检测培养细胞 CD83、CD86的表达 ;MTT法检测诱导培养的 DCs体外刺激同种异体 T淋巴细胞增殖的活性。结果 人脐血贴壁单个核细胞经 rh IFN-α联合 rh GM- CSF共同培养后 ,第 7d镜下可见有表面呈树状突起的 DCs;细胞免疫表型检测结果示培养细胞有成熟 DCs特异性标记 CD83及共刺激分子CD86表达 ;rh IFN -α为 6 0 0 U / m l、rh GM- CSF为 2 0 0 0 U / ml时为脐血 DCs诱导培养的合适浓度 (培养细胞 CD83+CD86 + 细胞比率最高 ) ;以诱导培养 7d的脐血细胞 (含 DCs)作为刺激细胞与同种异体 T淋巴细胞 (反应细胞 )以不同比例混合培养时 ,DCs均可刺激其增殖 ,其中以反应细胞∶刺激细胞为 2 0∶ 1时最明显。结论 rh IFN- α联合rh GM- CSF细胞因子体外诱导人脐血贴壁单个核细胞 ,可生成具有典型形态及功能的成熟

儿童传染性单核细胞增多症332例临床分析

目的 分析儿童传染性单核细胞增多症 (简称传单 )的临床特点。方法 回顾性分析四川大学华西第二医院儿科 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 2年 9月诊治的儿童传单 332例临床资料。结果 传单临床表现多样 ,除发热、咽峡炎、颈淋巴结肿大常见外 ,肝肿大 (76 4 % )、双眼睑水肿 (2 0 5 5 % )、皮疹 (13 80 % ) ;传单肝功变化以酶学改变为主 ,其中以乳酸脱氨酶升高最常见 ;各年龄组传单患儿外周血变异淋巴细胞 (简称异淋 )均明显高于骨髓异淋 (P<0 0 0 1) ,年龄组间差异无显著性 ;早期检测EBV IgM总体阳性率为 5 3 5 7% ,各年龄组间差异无显著性 ;6例重症传单 (死亡 3例 )共同特点为起病急、进展快、临床有严重肝功能及多器官损害 ,其中 2例并发噬血细胞综合征。结论 传单是全身性疾病 ,临床表现多样 ,绝大多数患儿预后良好 ,但重症可致死 ;对于起病急、进展快、肝功损害重、多系统损害者 ,应注意EBV相关性噬血细胞综合征的可能。

水稻高产栽培技术和病虫害防治

东北水稻为一季水稻,生长周期长,品质高,口感佳,深受人们的喜欢。传统的粗放式水稻种植使得水稻的产量和品质得不到保证,使用先进的高产栽培技术和科学的病虫害防治技术能够促进水稻高产稳产,增加农户经济收益,满足人们对水稻的需求,减少对进口的依赖。

海带中碘的检验和应用

一、实验目的 碘是人体必需的微量元素，海带中富含碘元素，碘与人们的生活息息相关。在普通高中课程标准实验教科书人教版、苏教版和鲁科版中均编入了“从海带中提取碘”或“海带中碘元素的分离及检验”等实验。

辽宁鞍山大宁地区控制番茄萎蔫病方法简介

大宁办事处地区保护地种植面积300多亩,主要以番茄、黄瓜、芸豆、草莓等作物为主。由于多年的重茬种植,土传病害发生严重。尤其是2015年10月份正当番茄第一穗果快要成熟时,保护地番茄陆续出现萎蔫,茎秆中空,经田间调查诊断为番茄溃疡病、细菌性髓坏死及一部分施肥不当烧根、根系不好等原因造成的,针对不同的田间症状,采取以下几种方法进行防治,均收到了较好的防治效果。

垄鑫牌棉隆是土传病害的克星

土传病害是指由土传病原物侵染引起的植物病害,浸染病原包括真菌、细菌、线虫等。其中真菌为主,分为专性寄生与非专性寄生两类。专性寄生是植物维管束病原真菌,如枯萎病、黄萎病等造成萎蔫、枯死。

跨年装修的好处

跨年装修好不好？装吧，太折腾了。工人要提前返乡，时间匆忙，为了赶工程，可能做出来的效果比较粗糙；中间停工，工期被拖得太长；还有气温低，有些工艺达不到理想状态等。那么，跨年装修究竟有什么好处呢？时间更充裕 冬季的气候是白天相对比较干燥，春节前可先完成装修前期的水电改造和木工部分。