干扰和过表达端粒酶卡哈尔体蛋白1小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性对比

背景:随着年龄的增长,骨髓间充质干细胞的功能逐渐降低,延缓骨髓间充质干细胞自身衰老成为一项重要课题。目的:通过改变端粒酶卡哈尔体蛋白1(telomerase cajal body protein 1,TCAB1)基因的表达,探讨延缓骨髓间充质干细胞衰老的途径。方法:细胞贴壁法培养小鼠骨髓间充质干细胞,应用重组慢病毒技术过表达或干扰骨髓间充质干细胞中的TCAB1基因,采用qPCR检测衰老相关基因P16、P21、P53、P27的表达,qPCR检测Telomere的表达判断端粒的相对长度;Western blot检测衰老蛋白P16、P21、P53、P27的表达;CCK-8法检测细胞增殖情况;Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。结果与结论:过表达TCAB1基因骨髓间充质干细胞中衰老相关基因及蛋白的表达量下降,端粒相对长度增加,细胞增殖能力较强,细胞凋亡数量较少,细胞呈现年轻状态;干扰TCAB1基因骨髓间充质干细胞中衰老相关基因及蛋白的表达量上升,端粒相对长度缩短,细胞增殖能力较弱,细胞凋亡数量较多,细胞呈现衰老状态。以上结果表明,在适当范围内增加TCAB1的表达量,可以延缓细胞衰老的速度。

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P<0.01),红白髓界线清晰,生发中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P<0.001),衰老蛋白分子p21和p53表达下调(P<0.001),增殖相关分子Ki67和PCNA表达上调(P<0.001,P<0.05),自噬相关分子Beclin1和APG5L/ATG5表达上调(P<0.001),活性氧含量降低(P<0.001),CD3^(+)T细胞比例增加(P<0.05),衰老相关分泌表型中白细胞介素1β分泌水平降低(P<0.001),转化生长因子β1分泌水平无显著差异(P>0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

年轻和老年小鼠脂肪来源干细胞生物学特性对比

背景:脂肪来源干细胞具有抗衰老的作用,但来自不同年龄供者的脂肪来源干细胞是否有区别,还需深入研究。目的:对比老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的生物学特性。方法:分别从8周龄、14周龄C57BL小鼠脂肪组织中提取脂肪来源干细胞,对比分析老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞的细胞周期、凋亡、增殖能力的差异,定量PCR和Western blot检测老年和年轻小鼠脂肪来源干细胞衰老相关P21、P27基因和蛋白的表达。结果与结论:与老年小鼠脂肪来源干细胞相比,年轻小鼠脂肪来源干细胞更有活力,形态更规则,凋亡更少,增殖更快,衰老相关P21、P27基因和蛋白表达量更低,说明年轻小鼠脂肪来源干细胞具有更好的抗衰老作用。

黑素细胞及黑素的生成与调节

本文概述了：（１）黑素细胞的来源，黑素细胞的数量、形态、分布特点及其与角朊细胞等周围组织和细胞的关系；（２）黑素生物合成的基本过程；（３）酪氨酸酶、黑素合成相关基因、黑素细胞刺激素。

成体干细胞的分化潜能及在修复重建中的应用前景

目的 探讨成体干细胞 (AS细胞 )的分化潜能性及在临床修复重建中应用的可能。方法 检索医学和生物医学文献数据库中关于 AS细胞研究的相关报道 ,并对 AS细胞的最新研究进展作简要总结。结果 AS细胞存在于成体的各种组织中 ,具有自我更新能力和分化潜能性 ;部分成体干细胞 ,如骨髓、皮肤、肝及脂肪等组织中的 AS细胞 ,具有多向分化潜能 ,可向无关组织类型的成熟细胞横向分化 ;AS细胞是组织更新与修复的起源细胞 ,且与肿瘤的发生和衰老密切相关。结论 AS细胞具有多向分化潜能 。

猴脑血管缺血模型复制及骨髓间充质干细胞移植治疗

目的建立猕猴局灶性血管缺血性脑损伤模型,评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤的疗效及临床治疗可行性。方法用导管介入法从股动脉将栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发局灶性缺血性脑损伤,经CT扫描确认脑损伤及部位和行为学观察符合脑损伤要求。分离扩增自体骨髓间充质干细胞至第4代,于脑血管栓塞后30d,在CT引导下将4×108细胞/kg骨髓间充质干细胞移植到脑损伤部位,每月1次连续观察脑损伤面积及行为学变化。结果脑血管栓塞前造影明显可见左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,随后连续CT扫描见额颞叶区明显梗死灶,行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍。间充质干细胞移植后3个月可见脑损伤面积明显缩小,脑神经功能明显改善,半年后脑损伤面积进一步缩小,脑神经功能基本恢复正常。结论自体骨髓间充质干细胞移植有助于缺血性脑损伤结构修复和功能恢复。

肝干细胞与肝再生、肝癌的关系

肝干细胞是存在于肝脏组织中的一类具有自我更新和向前分化为成熟肝细胞、胆管细胞等的不成熟细胞,这类细胞是生理性肝细胞更新和病理性肝损伤修复的起源细胞.肝癌是人类常见的恶性肿瘤,传统认为肝癌起源于肝细胞突变和异常增生,新近研究提示,肝癌起源于肝干细胞的异常分化和增生.肝癌干细胞学说为肝癌发生机制研究和肝癌防治开辟了全新的思路.

脐带间充质干细胞临床研究的伦理与安全问题

脐带间充质干细胞（UCMSC）在临床上可用于各种涉及细胞变性、坏死或缺失的组织损伤、退变、自身免疫及炎症性疾病的治疗。由于UCMSC来源于新生儿脐带，属于废弃物，用于疾病治疗安全性较高，没有明显免疫排斥反应，伦理争论较少。

不同年龄人骨髓间充质干细胞体外生长特性分析

目的建立人骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MMSCs)体外分离培养和扩增方法,观察不同年龄人MMSCs在体外培养的生长特性,为MMSCs的临床应用提供技术方法和依据。方法采集10～60岁之间的人骨髓血,密度梯度法分离出单个核细胞,利用DMEM/F12培养基添加胎牛血清进行黏附培养和扩增MMSCs,分析第3代MMSCs生长情况和形态变化,细胞计数,用MTT法观察其增殖及生长特征,免疫组化法分析MMSCs的纯度。结果10～60岁人MMSCs均贴壁生长,呈典型MMSCs形态和生长特征,传代细胞的增殖速度比原代细胞快,但随着年龄的增长,原代及传代培养MMSCs的增殖能力下降,生长周期延长,其中CD105阳性细胞均大于95%,但老年人的CD105阳性细胞比率有所降低。结论密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度MMSCs,成人MMSCs在传代培养的增殖活性随年龄增加而降低。

干细胞与肝脏功能重建的研究现状与展望

肝细胞再生或替代是以肝细胞变性、坏死和慢性肝纤维化、肝硬化为代表的肝病治疗的根本出路.肝细胞本身有较强的再生修复能力,在残存肝细胞功能正常时可以快速分裂增生并修复损伤,但这一机制对临床常见的肝损伤修复难以达到理想目标.现有研究显示肝组织中存在干细胞并参与了肝细胞再生和肝损伤的修复,骨髓、胚胎等多种来源的干细胞也具有向肝细胞分化的潜能,这些结果显示了从干细胞的角度探讨肝细胞再生机制及再生肝脏功能的可行性和重要性.干细胞的研究将对肝脏的发育与再生、肝脏疾病的细胞治疗和人工肝组织工程等技术的发展起推动作用,最终将为临床肝病治疗提供全新的措施.本文对肝细胞和不同来源干细胞与肝细胞再生的关系作简要综述和分析.

胚胎干细胞的生物学特性及体外诱导分化

来源于早期胚胎的胚胎干细胞 (ES)和胎儿生殖脊干细胞 (EG)可在未分化状态下长期增殖培养 ,并保持其多向分化潜能 .体外培养ES细胞的条件已趋于稳定 ,国内外建立了来自人和多种动物早期胚胎的ES细胞系 .某些细胞因子和化学物质等可定向诱导ES细胞分化为各种不同类型的组织细胞 .ES细胞在胚胎发育、细胞分化、转基因动物、移植治疗、药物开发等领域具有广阔的应用前景 .

猴血管缺血性脑损伤模型的建立及评价

目的建立猕猴血管缺血性脑损伤模型,为干细胞移植治疗脑损伤的研究提供实验模型。方法用导管介入法将聚乙稀醇(PVA)栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发缺血性脑损伤,连续CT扫描观察脑损伤变化和血管栓塞对侧神经功能评定分析缺血性脑损伤后的神经功能变化。结果脑血管栓塞前造影明显可观察到左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,连续24hCT扫描发现栓塞后6h内可见脑细胞水肿,但无明显可见梗死灶。12h后见额颞叶区梗死灶,24h可见明显梗死灶,1个月后见梗死灶面积减小,此后1年内梗死面积未见明显变化。行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍,1个月内神经功能评分为3～4级,3个月后为3级。结论用大脑中动脉介入法注入PVA栓子,成功建立了血管缺血性脑损伤模型。

阻断糖皮质激素受体的雏鸡抵抗地塞米松诱导的免疫抑制作用

给予雏鸡地塞米松（Dex）10mg～75mg／kg后24h，诱导脾淋巴细胞产生IL－2和IFN诱生的活性，T、B细胞对Con-A的反应性，以及免疫器官（脾脏、胸腺及法氏囊）重量与体重比值均降低（p＜0．01）。用50mg／kg的RU486阻断GR后，对Dex诱导的免疫抑制无明显地逆转作用，表现为阻断GR后，给予（10～75）mg／kg的Dex24h，上述免疫参数仍明显低于正常雏鸡（P＜0．01），与只给予Dex的雏鸡相比较，无明显差异（P＞0．05）。用25mg／kg的RU486阻断GR，对Dex诱导的免疫抑制作用具有明显地逆转作用，阻断GR后再给予（10～75）mg／kg的Dex后24h，上述免疫参数明显高于只给予Dex的雏鸡（P＜0．01）。若给予10mg／kg或25mg／kg的Dex时，上述免疫参数接近正常水平，表明Dex对雏鸡的免疫抑制作用主要由GR所介导，给予适当量的RU486阻断GR的功能，有利于雏鸡抵抗糖皮质激素诱导的免疫抑制作用。

猕猴自体骨髓干细胞移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的探讨自体骨髓干细胞肝门静脉移植对猕猴急性肝损伤的治疗作用和为人类肝损伤治疗提供依据和方法。方法猕猴10只,随机分为实验组和对照组,每日皮下注射40%CCL40.8ml/kg,连续注射4d,经肝功能生化指标检测及肝穿组织病理学观察确认肝损伤后,分离实验组猴的自体骨髓单个核细胞,按3×108细胞/kg将骨髓细胞植入肝门静脉,植入后60d进行肝功能相关指标检测及组织病理学观察。结果连续注射CCL44d后,血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLOB)(P<0.001),而总蛋白(TP)和白蛋白含量无变化(P>0.05),肝组织结构紊乱,大量肝细胞坏死,部分细胞变性,水肿,汇管区及周围有大量炎性细胞浸润。骨髓细胞肝门静脉移植后60d,血清AST、ALT活性和GLOB、BIL含量显著低于对照组(P<0.05),而TP、ALB、LDL含量高于对照组(P<0.05),病理组织学观察结构清楚,而对照组有纤维增生和肝细胞有脂肪变性。结论自体骨髓细胞肝门静脉移植能对猕猴急性肝损伤有明显治疗作用,可改善急性肝损伤猕猴的肝功能及组织结构,提示该方法可能对人类急性肝损伤有一定治疗意义。

成体干细胞的生物学特点及应用前景

成体干细胞存在于人和哺乳动物组织中,具有自我更新和一定的分化潜能。现已从骨髓、软骨、血液、神经、肌肉、脂肪、皮肤、角膜缘、肝脏、胰腺等许多组织中获得成体干细胞,发现部分组织成体干细胞具有多向分化潜能。成体干细胞的研究在再生医学中有十分广阔的应用前景。

应激对动物免疫功能影响的研究

应激是机体为应付威胁自身平衡和稳定的各种刺激因素所作出的非特异性防御反应,可产生广泛而复杂的生物学效应。适当的应激反应对机体适应各种刺激因素的作用、维护自身平衡和稳定是有益的,但过强或长期的应激则会给机体带来严重危害。例如严重应激时糖皮质激素分泌过多可引起机体免疫功能严重抑制致使机体抗病能力下降,诱发各类传染病,导致疫苗免疫失败等。一、应激对免疫功能的作用机制Style 认为应激是一种全身性适应反应,主要通过垂体-肾上腺系统的反应来实现。新近研究结果表明,参与应激反应的途径远不止垂体-肾上腺系统。

水动力对生物膜净化性能影响的研究进展

在水处理领域中,生物膜起到了吸附、降解水体污染物的作用,可表征水体净化能力。研究水动力对水体生物膜净化功能的影响机制,可为提高生物膜净化性能、改善水体自净能力提供重要依据。从生物膜群落、形态结构及其传质能力等3个方面综述了近年来国内外对水动力影响水体生物膜净化性能方面的研究进展,并在此基础上提出了生物膜研究领域今后可开展的研究方向。

淋巴细胞糖皮质激素受体与免疫的相互关系

糖皮质激素受体（ＧＲ） 介导信号是免疫细胞发育分化、克隆选择、生存与死亡平衡调节的主要机制之一，对免疫功能既有抑制作用又有促进作用， 其免疫调节作用具有组织或细胞特异性和浓度依赖性。免疫功能异常影响ＧＲ 表达，ＧＲ 异常也引起免疫功能改变，ＧＲ 结构或功能异常是某些疾病发生的直接或间接原因。

造血干细胞移植供受者HLA-C分子结构分析

目的 观察造血干细胞移植 (HSCT)供受者HLA C分子结构差异 ,探讨免疫抑制信号系统在HSCT后GVHD中的作用。方法 利用DNA测序和蛋白质三维空间结构模拟分析方法回顾性观察HSCT后发生GVHD的供受者的HLA C分子结构差异。结果 HLA C分子在氨基酸序列、三维空间结构、电性分布和分子表面结构上有明显差异。结论 HSCT供受者间HLA C分子结构差异导致HLA C分子不能被供者免疫细胞的杀伤细胞抑制性受体识别 。

成体干细胞治疗老年退行性疾病的可行性研究

衰老是生命发展的自然规律和现象．是由于身体细胞群长期受到体内外环境因素的冲击和伤害，引起身体各个组织器官结构与功能逐渐退化，并导致组织或器官功能减退的一种慢性综合性征[1]。老年退行性疾病是指那些与年龄相关的组织细胞老化导致的组织器官结构与功能减退．表现为器官功能障碍，身体抵抗力衰弱，协同功能丧失。