薄层扫描法测定寡核苷酸含量

建立了薄层扫描测定寡核苷酸含量的新方法.与传统方法相比,该方法具有简单、微量、样品间无交叉污染等优点,该方法的线性方程 Y=—155.7+0.1428X),相关系数(r=0.9989),线性范围(10—3000ng),平均回收率(97.33%)及平均变异系数(5.5%)均属优良.

登革热病毒反义寡核苷酸的合成及抗病毒活性

根据碱基互补原理 ,反义寡核苷酸可与特定病毒基因结合从而选择性地抑制该病毒的复制 ,这是病毒性疾病治疗的新途径 .基于上述原理设计并合成了D2 0 4RNA特异的 6个 5′末端脂肪链修饰的硫代反义寡核苷酸 .体外抗病毒活性评价显示互补于 5′端起始密码、 3′端重复序列和末端序列的

登革热病毒基因组末端cDNA的克隆及序列分析

采用磁性分离技术从登革热病毒 (D2 0 4株 )感染的C6/36细胞中分离了D2 0 4病毒RNA .以该RNA为模板进行RT PCR ,分别扩增了D2 0 4RNA 5′和 3′端cDNA片段 ,该cDNA片段分别克隆到 pGEM 3Z质粒多聚接头的HincⅡ位点得到含有 5′端 2 84bp及 3′端 52 5bpcDNA的重组质粒 .通过荧光标记引物及双脱氧核苷酸PCR方法测定了上述cDNA插入片段的序列 .同源性比较结果证明D2 0 4株与其他不同株间的同源性较高 ,可达 93%～ 98% ;不同型间的同源性较差 ,仅 80 %左右 ;

高效薄层色谱法纯化合成寡核苷酸及其衍生物

在分子生物学研究的许多领域均需要一定纯度的寡核苷酸.目前寡核苷酸的纯化方法主要有高效液相色谱法及电泳法两种.这两种方法不仅需要一定的仪器设备而且纯化周期长(2—3d)、回收率低(50%—80%).文中报道建立了一种高效薄层色谱纯化寡核苷酸及其衍生物的方法.该方法可在3—4h 内获得寡核苷酸纯品,平 均回收率可达97.7%.

高效薄层色谱法评价合成寡核苷酸的质量

由于各种因素的影响,DNA合成仪合成的每批寡核苷酸的质量难以得到绝对保证,低质量的产品将影响以后的分析结果,因此需要一个有效的方法来评价每批产品的质量。目前主要依靠聚丙烯酰胺凝胶电泳法来实现以上目的。高效液相色谱法及毛细管电泳法也偶见使用。但这些方法均有一定的不足,如需特殊的仪器设备、操作繁琐费时等。本文介绍一种操作简便、分析速度快、无需特殊仪器设备且分析结果可靠的方法——高效薄层色谱法(HPTLC)。

用磁性分离RNA直接进行逆转录PCR

逆转录PCR(RT-PCR)技术是将提取的IRNA先逆转录为cDNA,然后再对该cDNA进行PCR扩增。该技术不仅可用于各种内源及外源性正常及异常RNA的分析或检测,而且还常用于cDNA文库的构建及特定基因的制备。RT-PCR所用RNA模板一般是未经纯化的总RNA。

反义寡核苷酸的化学修饰

反义寡核苷酸的功能在很大程度上取决于其稳定性、生物利用度及与靶基因结合或反应的特性．通过特定的化学修饰可以改变这些物理、化学特性，从而增加其抗病毒、抗肿瘤及对其他特定基因的表达抑制活性．

基因芯片技术及应用研究进展

采用高速打印或光刻合成技术可在硅片、玻璃或尼龙膜上制造ＤＮＡ微阵列。样品ＤＮＡ／ＲＮＡ通过ＰＣＲ扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子，与微阵列杂交后通过荧光扫描仪器扫描及计算机分析即可获得样品中大量基因序列及表达的信息。该技术可应用于高通量基因表达平行分析、大规模基因发现及序列分析。

长臂生物素对硝基苯酯的合成

以羰基二咪唑为催化剂，生物素与６－氨基己酸甲酯反应生成生物素－６－氨基己酸甲酯，该化合物通过酸碱萃取与原料分离，皂化后生成生物素氨基己酸．生物素氨基己酸在吡啶存在下与三氟乙酸对硝基苯酯进行转酯反应即得生物素对硝基苯酯．最后经光谱、色谱及核酸杂交证实了长臂生物素对硝基苯酯的化学结构和生物学活性．

分子诊断技术在传染病病原体检测中的应用

传染病病原体的准确检测是传染病有效防控的前提,也是合理用药的基础。然而,传统的病原体分离、培养等诊断方法不能完全满足临床治疗和疾病控制的需要。新发展的传染病分子诊断技术可有效弥补传统方法的不足。本文就新一代测序、核酸扩增、生物芯片和生物传感等传染病分子诊断新技术及其应用研究进展进行综述。

试论“中药基因组学”与“中药化学组学”

中药对众多疾病的独特疗效已为人们广泛认可 ,但是由于历史的局限 ,其理论基础很难得到现代社会特别是国际社会公认 ,因此中药现代化势在必行。如何应用现代科学技术 ,给传统中药理论以现代科学理论解释是中药现代化的关键。本文基于现代基因组学特别是功能基因组学、现代分析化学及一些生物高技术手段的研究进展及发展趋势 ,从一个新的视角提出了开展“中药基因组学 (TCMGenomics)”和“中药化学组学 (TCMChemics)”研究的策略。这一研究体系的核心是将中药的作用机理或功能用能代表其功能的一组基因表达的影响来诠释 ;将中药作用的物质基础用能代表其功能的一组化学成分来诠释。本文试图从上述观点出发探讨建立现代中药理论体系和现代中药学的可能性。

乙型肝炎病毒细胞和动物模型研究进展

合适的细胞和动物模型不仅是研究病毒感染和致病机理的基础,同时也是筛选和评价抗病毒药物的前提。肝炎病毒,特别是乙型肝炎病毒(HBV)是严重威胁人类健康的大敌。在研究HBV药物和疫苗的过程中,已经建立了一些HBV感染和转基因细胞及动物模型,并在HBV感染机理和抗HBV药物的研究中发挥了重要作用。

反义寡核苷酸的化学修饰

反义寡核苷技术(antisense oligonucleotide technology.ASON)最初是指与单链RNA互补的一段寡核苷酸序列。随着研究的不断深入,发现寡核苷酸不仅可与单链RNA结合形成DNA-RNA杂合体,而且某些特殊序列还可与双链DNA结合形成三链核酸(triplex)。人们将前者称为反义(antisense),后者称为反基因(antigene)以示区别。此外。

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响

目的 :观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 ,为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理论和实验依据。方法 :采用 3.5Gy60Coγ射线全身 1次性照射 ,制备小鼠血虚证模型。利用双向电泳、图像分析、胶内酶切、质谱鉴定等蛋白质组学技术 ,结合生物信息学 ,分离、分析、鉴定蛋白质。结果 :四物汤可以逆转放射线致血虚证小鼠骨髓 10个上调和 5个下调的蛋白质。其中 8个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质 1、蛋白酶体2 6SATP酶亚组分 4、造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶、H ras、3 磷酸甘油醛脱氢酶、生长因子受体结合蛋白 14及Lgals12。结论 :四物汤能调节骨髓蛋白质表达 ,并可能由此促进造血细胞的生长和分化 ,发挥补血作用。

四物汤对辐射致血虚证小鼠血清蛋白质表达的影响

目的 :用蛋白质组技术考察四物汤对血虚证小鼠血清蛋白的影响 ,在分子水平上探讨四物汤补血的作用机理。方法 :6 0 Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型 ;二向电泳、图象分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证小鼠血清中有影响的蛋白。结果 :四物汤可使血虚证小鼠血清中 12个下调和 4个上调的蛋白质有所恢复 ,进一步质谱鉴定其中 4个蛋白质可能是DNA依赖蛋白激酶 (DNA dependentproteinkinasecatalyticsub unit,P973 13 ) ,肌细胞增强蛋白 (dystrophin ,P1153 1) ,马达蛋白 (KIF13A ,Q9EQW 7) ,肌动蛋白结合蛋白 (dys tonin ,Q9QX2 0 )。它们的功能是参与DNA双链损伤的修复 ,与AP 1结合将 6 磷酸甘露糖受体从高尔基体转运到胞浆膜上 ,将细胞骨架铆定在胞浆膜上等。结论 :四物汤可能通过对血虚证小鼠血清中蛋白的影响而促进骨髓造血、减轻辐射引起的损伤。

小分子阿特拉津和罂粟碱检测的免疫芯片技术研究

采用蛋白芯片竞争法对小分子半抗原的污染物进行检测。在获得特异性抗体的前提下,首先将阿特拉津半抗原进行了衍生化,然后将该衍生物和氨基罂粟碱分别与载体蛋白质卵清蛋白(OVA)进行偶联。实验证明新合成的完全抗原能够与其相应抗体发生特异性的结合。实验还对蛋白芯片检测阿特拉津进行了条件优化,其抗体固定化时间为2h,用卵清蛋白为封闭液的封闭时间为1h,样品稀释液pH值为8. 0。并对阿特拉津及罂粟碱进行了定性、定量实验,结果表明:荧光信号强度随待测物浓度的降低而增强,有一定的线性趋势,阿特拉津检出限为0. 001mg/L,罂粟碱检出限为0. 01mg/L。

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy60Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。

细胞色素P450CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢动力学的影响

目的研究细胞色素P450CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢动力学的影响。方法用基因芯片对137名健康志愿者进行CYP2C9基因多态性检测,将受试者分为CYP2C9野生型、杂合突变型和纯合突变型3组,用高效液相色谱法检测甲苯磺丁脲在受试者体内的药物代谢动力学参数,统计分析各组间药代动力学性质差异。结果在137名受试者中发现了9个CYP2C91/3杂合型突变体和1个CYP2C93/3纯合型突变体,其余为野生型个体。将9名CYP2C91/3,1名CYP2C93/3以及随机抽取的10名野生型个体分组,以甲苯磺丁脲为探药进行药物代谢动力学研究。结果在杂合型突变个体组以及纯合型突变个体组中,甲苯磺丁脲的代谢率显著低于对照的野生型个体组。结论CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢具有显著影响并呈基因剂量效应,检测突变型个体对指导临床合理用药和个体化医疗具有重要意义。

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

[目的]探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。[方法]γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响 ,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。[结果]四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用 ;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力 ;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子 (G -CSF ,GM -CSF ,PDGF -α)等 ,抑制造血抑制因子(M -CIP)的分泌。[结论]四物汤补血的物质基础可能是芍药苷 ,促进骨髓基质细胞分泌G -CSF ,GM -CSF ,PDGF -α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。