细胞壁缺陷结核分枝杆菌耐药性的基因研究

目的检测与分析细胞壁缺陷结核分枝杆菌的耐药性相关基因,探讨细胞壁缺陷结核分枝杆菌耐药性的基因基础。方法分别分离16株自发形成和用利福平、异烟肼、乙胺丁醇诱导形成的结核分枝杆菌的染色体DNA,PCR扩增IS986序列以及rpoB、katG和embB基因后进行凝胶电泳和序列分析。结果自发形成及抗结核药物诱导形成的结核分枝杆菌稳定L型可在含利福平(4μg/ml)、异烟肼(0.2μg/ml)、乙胺丁醇(7.5μg/ml)的培养基内生长与传代培养。基因检测与分析显示,结核分枝杆菌稳定L型仍然保留IS986基因,rpoB、katG、embB基因也未见突变。结论结核分枝杆菌稳定L型可自发形成,也可被利福平、异烟肼和乙胺丁醇诱导形成。结核分枝杆菌稳定L型对利福平、异烟肼、乙胺丁醇形成耐药性,但其染色体上耐药相关基因并没有发生突变。除染色体耐药相关基因突变可造成结核分枝杆菌形成耐药性外,细胞壁缺陷也是造成结核分枝杆菌形成耐药性的一个重要机制。

慢性前列腺炎患者前列腺抗生素活性的检测

检测以口服、肌肉注射或静脉注射给药治疗前后慢性前列腺炎患者前列腺液内微生物的性质与数量、抗菌药物活性及观察患者症状的变化,判断抗菌药物对慢性前列腺炎前列腺组织的透过性,探讨常规途径与方法给药治疗慢性前列腺炎的可行性。结果表明,185例慢性前列腺炎患者的前列腺液内都可检出细菌、支原体、真菌或衣原体,其中以革兰阳性细菌最多见。根据药物敏感试验结果选用抗菌药物,不论以口服、肌肉注射或是静脉注射给药治疗后,前列腺内的敏感微生物均可完全消失,患者的症状也随之消失或显著缓解。给药30分钟后即可在前列腺液内检出抗菌药物的活性,某些抗菌药物在前列腺液内的抗菌活性可持续存在36小时以上。提示绝大多数种类的抗菌药物在以常规途径与方法给药时均能够透入慢性前列腺炎患者的前列腺组织内,达到杀灭前列腺内病原体的浓度并且有效治愈慢性前列腺炎。正确的病原学检查与合理用药是治愈慢性前列腺炎的关键,而与抗菌药物的种类、给药途径与方法无显著关系。

大鼠慢性细菌性前列腺炎模型的制备及其阿米卡星透过性研究

目的:制备大鼠慢性细菌性前列腺炎模型,了解大鼠慢性前列腺炎前列腺的阿米卡星透过性。方法:健康成年雄性大鼠180只,随机分为正常对照组(NC,n=48),慢性细菌性前列腺炎组(CBP,n=84)及慢性细菌性前列腺炎治疗组(CBPT,n=48)。用消痔灵及大肠埃希菌的阿米卡星敏感株与耐药株分别注射大鼠前列腺,制备CBP模型。NC及CBP组大鼠肌肉注射阿米卡星(28mg/kg),给药后1min～150min取各组大鼠的血清和前列腺,分别检测其抗菌药物活性以及前列腺组织的细菌数量与病理学改变,分析阿米卡星透过性及其治疗效果;CBPT组大鼠进行阿米卡星治疗7d;于3、5、8、10、13、15、17、21、18d取NC、CBP、CBT组大鼠前列腺,分离鉴定细菌及病理学检查。结果:CBP及CBPT组前列腺的组织病理学检查可见明显的炎症细胞浸润、纤维组织增生等慢性炎症病理学改变,分离培养可检出大肠埃希菌。NC组大鼠前列腺的组织病理学检查未发现明显病理改变,血清及前列腺组织始终不能检出抗菌活性以及细菌。CBP大鼠前列腺的大肠埃希菌数量随时间延长而逐渐减少,感染28d后每毫克前列腺的细菌数量减少为30个菌落形成单位(30CFU/mg)。CBPT大鼠前列腺的大肠埃希菌数量随治疗时间延长而迅速减少,阿米卡星敏感细菌感染的大鼠治疗10d后已不能检出任何细菌(0CFU/mg)。给药后2～150min,NC及CBP大鼠血清及前列腺组织内均可检出明显的抗生素活性,不同时间前列腺组织的抗生素活性分别可低于、等于或高于同期血清的抗生素活性。CBPT大鼠前列腺的慢性炎性组织病理现象,随给药时间延长以及前列腺细菌数量减少或消失可明显缓解。结论:采用前列腺直接注射消痔灵和细菌的方法,可获得具有明显慢性炎性组织病理学改变的细菌性前列腺炎大鼠模型。肌肉注射的阿米卡星能够进入大鼠慢性炎症前列腺组织内并且达到等于或高于血清的抗生素活性水平。进入前列腺组织的阿米卡星能够有效地杀灭敏感细菌,有利于前列腺组织炎性病理损害的缓解以及损伤组织的修复。

胆囊细菌L型

用非高渗透压培养基培养法从常规细菌学检查阴性的慢性胆囊炎胆囊组织、胆汁及胆石中分离细菌Ｌ型，获得了８６．０２～１００％的检出率。胆囊检出的细菌Ｌ型绝大多数是稳定Ｌ型，在常规细菌学培养基或Ｌ型高渗透压琼脂培养基上不能形成可见的生长现象。沸水浴１０分钟可杀死胆囊或胆结石中的细菌Ｌ型，多种抗生素能抑制胆囊细菌Ｌ型的生长。细菌稳定Ｌ型在胆囊中如此广泛存在，可能是慢性胆囊炎与胆囊结石的重要病因。

万古霉素对细菌性前列腺炎及良性前列腺增生合并细菌性前列腺炎大鼠的前列腺透过性及其治疗效果研究

目的:了解万古霉素对大鼠急性细菌性前列腺炎(BP)以及良性前列腺增生(BPH)合并BP的前列腺透过性与治疗效果。方法:采用每天由尾静脉注射1次万古霉素(100 mg/kg体重)共5 d的方法,分别对正常前列腺(NP,n=42)、BP(n=73)以及BPH合并BP(n=43)的SD雄性大鼠给药。注射后10 m in^24 h分离动物血清和前列腺,分别以琼脂扩散法及最低抑菌浓度(M IC)法检测血清抗生素活性,同时对前列腺进行病原菌的分离培养与计数;治疗结束后1~5周,分离BP治疗组动物的前列腺,进行病理学检查。结果:正常大鼠的前列腺组织内始终不能检出任何病原菌,未注射万古霉素的BP组大鼠前列腺组织至感染后的28 d仍可检出不同数量的病原菌。各BP治疗组动物的前列腺组织内病原菌的数量随给药时间延长而逐渐明显减少,在给药第5 d后91.7%的动物的前列腺组织已不能检出病原菌。各组大鼠给药后10~150 m in期间,其血清及前列腺组织内均可检出明显的抗生素活性,前列腺组织的M IC为0.05~0.005 g/m l,分别低于、等于或高于同期的血清抗生素活性。在给药6 h和24 h后,各组大鼠的血清与前列腺组织内已不能检出抗生素活性。组织病理学检查可见BP组大鼠的前列腺组织表现出明显的渗出、白细胞浸润,BPH组大鼠的前列腺具有明显的腺组织增生。随给药时间延长以及前列腺病原菌数量的减少或消失,BP组大鼠前列腺的组织炎性病理学改变可明显缓解。结论:静脉注射的万古霉素能够进入大鼠急性细菌性炎症前列腺以及BPH合并细菌性炎症前列腺的组织内,并且达到等于或高于血清抗生素浓度的水平,从而能够有效地杀灭前列腺组织内的敏感细菌,以促进前列腺组织的炎症反应缓解及其损伤组织的修复。

男性泌尿生殖道感染患者奈瑟菌属菌种的基因检测

目的:检测从男性泌尿生殖道感染患者分离的奈瑟菌属菌种的基因并探讨非淋病奈瑟菌的致病性以及奈瑟菌属菌种感染的实验室诊断方法。方法:用聚合酶链反应及核苷酸序列测定方法,检测男性泌尿生殖道感染患者泌尿生殖道分离的奈瑟菌属菌种的淋病奈瑟菌核酸扩增荧光检测试剂的反应及其染色体上16SrRNA基因、淋病奈瑟菌DNA甲基转移酶基因orf1、隐蔽性质粒基因cppB及外膜蛋白基因nspA。结果:男性泌尿生殖道感染患者泌尿生殖道分离的14株奈瑟菌属菌种经16SrRNA基因检测鉴定为淋病奈瑟菌2株、粘液奈瑟菌3株、灰色奈瑟菌3株、干燥奈瑟菌2株、微黄奈瑟菌2株、嗜乳糖奈瑟菌1株、多糖奈瑟菌1株,其中淋病奈瑟菌核酸扩增荧光检测试剂阳性反应的9株、cppB阳性反应1株、orf1阳性反应5株、nspA阳性反应3株。16SrRNA基因检测与常规细菌学方法鉴定结果比较,两者的符合率85.7%。结论:引起男性泌尿生殖道感染的非淋病奈瑟菌缺乏cppB,大多数菌株缺乏淋病奈瑟菌毒力相关的orf1与nspA并且可在淋病奈瑟菌核酸扩增荧光检测试剂检测中显示阳性反应,从而造成淋病奈瑟菌鉴定与淋病诊断的误诊以及其他奈瑟菌感染的漏诊。在疑似奈瑟菌属菌种感染的实验室检查中联合使用常规细菌学方法与基因检测方法,可有助于提高奈瑟菌属菌种鉴定及其感染诊断的准确率。

大鼠前列腺的锥虫蓝透过性实验研究

目的 :了解大鼠正常前列腺、炎症前列腺以及良性增生前列腺的锥虫蓝透过性。 方法 :取 6 0只SD雄性大鼠 ,随机分为正常组 (NP ,n =15 )、细菌性前列腺炎组 (BP ,n =15 )、良性前列腺增生组 (BPH ,n =15 )、良性增生合并细菌性前列腺炎组 (BPH BP ,n =15 ) ,各组随机抽取 5只作为不注射锥虫蓝的对照组 (NC ,n =5× 4 ) ,其余 10只分别由尾静脉注射 2ml1%锥虫蓝溶液。 2h后麻醉处死动物和分离前列腺 ,肉眼直接观察各组大鼠的前列腺被锥虫蓝染色情况 ,并用比色法检测前列腺组织的锥虫蓝浓度。 结果 :注射锥虫蓝的各组大鼠除脑组织和脊髓组织外 ,前列腺的表面及内部组织与肌肉、肝脏、肠道等组织同样被染成相似的蓝色。BP组和BPH BP组前列腺的锥虫蓝含量明显高于BPH组及NP组前列腺的锥虫蓝含量 (P <0 .0 5 )。 结论 :大鼠的正常前列腺、良性增生前列腺以及炎症前列腺都容易被具有较高分子量和离子化性质的锥虫蓝透过 ,但炎性前列腺具有更加明显增高的锥虫蓝透过性。

209株临床分离的不同基因型白假丝酵母菌和丝状真菌的抗真菌药物敏感性及其耐药性趋势研究

目的了解常见致病性真菌的药物敏感性及其耐药性趋势。方法检测临床分离白假丝酵母菌和丝状菌的抗真菌药物敏感性。结果176株白假丝酵母菌A型（55．1％）、B型（29．O％）和c型（15．9％）的FC和AP敏感率较高（88．7％-100％），FL、IT及VR敏感率较低（小于26％）。各基因型菌株在FC、AP、FL、IT、VR敏感性无明显差异（P〉0．05），在FC与AP、FL、IT、VR，AP与FL、IT、VR之间存在显著的敏感率差异（P〈0．001）。33株丝状菌的MIC值，9株（27．3％）AP≥3μg／mL，7株（21．2％）FC≥3μg/mL，32株（97％）FL〉256μg／mL。各菌株的FC、AP、FL、IT、CS敏感率有差异，AP与FL、CS，IT与FL、CS，FC与FL、CS，FL与CS之间的敏感率差异显著（p=0．001）。结论白假丝酵母菌基因A型、B型和C型对所测试抗真菌药物的敏感性无明显差异。白假丝酵母菌和丝状菌多数菌株表现出较高的耐药率和明显的耐药性发展趋势。

先天愚型的产前筛查

减少残疾儿的出生是提高人口素质的一个重要方面。防止患病胎儿出生,可针对遗传病或先天畸形作产前诊断,但这需要大量人力物力,常常事倍功半。要在总体上减少残疾儿出生比例,国际上通常采用经济、简便、无创伤及安全的生化检测进行产前筛查,在我国还要基层医院可操作性强?..

新生儿与婴幼儿眼部菌群的调查

本文用分离培养法或聚合酶链反应（ＰＣＲ）检查了３６４例出生０—５岁的正常或患眼炎的新生儿及婴幼儿眼部菌群的种类、分布、来源、药物敏感性及其同眼炎的关系。结果表明新生儿出生２４小时内眼部大多无菌或仅可检出革兰氏阴性细菌，检出率为３３．３％；出生２天后可检出多种微生物，检出率达９４．２％；分离培养法检查的２２０例新生儿与婴幼儿中，眼部带菌者１９９例，感染率为９０．５％。共检出微生物２６２株，包括细菌２５５株，其中革兰氏阳性细菌１８７株，占７０．８％；革兰氏阴性细菌６８株，占２５．８％；真菌３株均为念珠菌，占１．１％；支原体２株均为脲原体，占０．８％；沙眼衣原体２株，占０．８％。ＰＣＲ法检查的１４４例新生儿中，沙眼衣原体阳性者２例，未检出脲原体。分离培养法检查的新生儿中，眼炎患者２２例，发病率为１０．０％。眼炎患者眼部检出的微生物均为细菌，包括葡萄球菌１７株，占６３．０％；肠道杆菌６株，占２２．２％；其他细菌４株，占１４．８％。新生儿或婴幼儿眼部检出的细菌对多种抗菌药物耐药，但对先锋霉素５和利福平的敏感性较高。真菌对制霉菌素的敏感性高于两性霉素Ｂ。认为新生儿眼部微生物的来源主要是出生后接触感染，这些微生物大多为暂?

孕早期绒毛高雪氏病产前诊断法

目的:采用荧光酶学手段,建立一种测定绒毛β-葡萄糖苷酶活性的方法。方法:分析β-葡萄糖苷酶的酶动力学特性,并检测36例正常胎盘绒毛组织及高雪氏病胎儿绒毛酶活性。结果:正常胎盘绒毛组织酶活性均数为776.3,标准差为190.5;高雪氏病胎儿绒毛酶活性为0。结论:该法可成为孕早期高雪氏病产前诊断的简单。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型外膜蛋白和染色体DNA酶切研究

非高渗培养基传代培养的伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型丧失了主要外膜蛋白、特异性表面抗原和染色体DNA部分片段,保留了沙门氏菌共同的内部抗原和形成L型独特的表面抗原。提示伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型多种特性的丧失同其基因或主要外膜蛋白的缺失有关。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定L型返祖性研究

细菌细胞壁的合成受到抑制或完整性被破坏而成为细胞壁缺陷型后,可有两种类型:不稳定 L 型(unstable L—form)和稳定 L 型(stable L—form)。不稳定 L 型未涉及基因型的改变,因此在无诱导剂的环境中可重新合成细胞壁而返祖。不稳定 L 型在自然界及人或动物体内广泛存在,同某些疾病的慢性过程或反复发作以及传染病非流行期病原体的保存有关。稳定 L 型在无诱导剂的环境中不能自发返祖。研究表明,稳定 L 型的染色体 DNA 片段缺失,系染色体畸变。稳定 L 型可丧失其亲代细菌型具有的多种性状和表达某些特殊性质,如细胞膜含类固醇。

用营养琼脂培养细菌L型的研究

我们前文报道了用不含血清的非高渗透性液体培养基培养细菌 L 型的结果。现将沙门氏菌、白喉棒状杆菌和葡萄球菌的 L 型接种于细菌学常规的营养琼脂培养基传代培养,以及对其生物学、病原性等特性进行的研究报道如下。

高龄妇女孕期遗传咨询及检查

预产期年满35岁及以上的孕妇通常称为高龄孕妇。随着年龄的增长，妇女的生理、心理与生殖功能较年轻妇女均有一些变化，且对胎儿的生长发育可能存在影响，高龄妇女怀孕其后代的健康问题更应受到重视与关注。这里结合我们自己的经验，介绍一下高龄妇女孕期遗传咨询与相关检查的选择，为同行们提供一点参考。

苯精制生产实训装置DCS方案与控制系统设计

以甲苯歧化单元生产工艺流程为背景,设计了一套苯精制生产流程实训装置的DCS控制方案及控制系统。其中控制方案包括对进塔物料量、预塔底排出量与回流量、冷凝水加入量与塔底温度的关系、碱液加入量、成品采出量、塔底残液排出量、塔釜温度、塔顶温度等参数的控制策略设计,DCS是以SunyTDCS9200为平台进行的实时数据库、算法编辑和人机界面等软件的设计。该实训装置DCS具有真实感强、安全灵活的特点,已广泛用于各石化企业、院校的操作技能培训与技能考核。

结核菌L型的形成及其分离与鉴定

目的探讨结核分枝杆茵L型的形成规律及其检测与鉴定方法。方法将结核分枝杆菌分别接种于苏通液体培养基以及含最低抑菌浓度(MIC)的利福平、异烟肼、乙胺丁醇的苏通液体培养基内培养,L型自发形成或被诱导形成后过滤和传代培养获得L型纯培养物。观察L型纯培养物的形态与生长特性以及用结核分枝杆茵特异性基因片段的引物对L型进行菌种的PCR检测与鉴定。结果结核分枝杆菌在非高渗透压培养基内培养3天后可自发形成L型,最低押菌浓度的利福平、异烟肼、乙胺丁醇能够迅速诱导结核分枝杆菌大量形成L型。培养物经0.22μm孔径滤菌器过滤后传代培养可获得L型纯培养物,结核分枝杆菌特异性基因片段的PCR反应能够检测结核分枝杆菌L型并且对L型进行菌种的快速鉴定。结论结核分枝杆菌能够自发形成和在抗结核药物的诱导下形成L型,从而导致病原学检查的漏诊或误诊以及影响治疗效果。采用非高渗培养法能够有效检出结核分枝杆菌L型,用结核分枝杆茵特异性基因片段的PCR反应能够对结核分枝杆菌稳定L型进行菌种快速鉴定。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的L型蛋白图谱

蛋白质是细菌细胞的主要有机构成,同细菌的生理活动、抗原性、致病性等特性密切相关。我们前文报道伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定 L 型丧失了其亲代经典细菌具有的多种特性,认为同 L 型细胞壁缺失或基因结构的改变有关。本文用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳法分析了伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定 L 型及其亲代经典细菌的菌体蛋白构成,研究其分子生物学方面的表现型特征。材料和方法一、菌株:营养琼脂培养基传代保存的伤寒杆菌 H_(?)(ST)和甲型副伤寒杆菌(SP)的稳定 L 型及其亲代经典细菌。二、菌体蛋白的制备:各菌株营养琼脂24小时培养物用灭菌蒸馏水洗三次。

老年人营养不良筛查和评估工具临床应用及存在的问题

21世纪是全球老龄化时代,营养不良是全球范围内老年人面临的主要健康问题之一,可导致诸多不良的临床后果。目前,营养不良标准的定义和统一的诊断标准尚未形成,临床上需要使用各种营养不良筛查和评估工具对患者进行识别诊断。营养筛查工具临床常见,快速、易于使用,常用于筛查营养不良或营养不良风险的人群,并可确定这一人群是否需要进一步营养评估和干预。营养评估工具是一类多维度、综合的评估工具,不同于营养筛查工具,需要由有资质的卫生专业人员实施,常用于诊断营养不良。鉴于住院老年患者使用不同的营养不良评估工具可能得出不同的营养不良患病率,以及临床上非营养专科的临床医生针对不同患者选择何种营养不良筛查和评估工具进行营养不良筛查和评估感觉困惑,本研究梳理了目前临床常用的营养筛查和评估工具的特点、适用范围及临床应用情况,总结出临床应用的问题,提出每种工具各有特点,每种工具针对不同环境中老年患者的效度验证也仍需大量的临床试验证实,以期引起临床医生对老年患者营养不良的重视,为临床诊断和改善营养不良提供循证依据。

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的L型抗原研究

本文对伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的L型抗原结构及其同亲代细菌型抗原的相互关系进行了研究,现报道如下。材料和方法一、L型菌株:按文献方法获得营养琼脂传代培养的伤寒杆菌H901L型(LST)和甲型副伤寒杆菌L型(LSP)。