尖吻蝮蛇毒去纤酶制剂对家兔体内外凝血作用的影响

本文报导了尖吻蝮蛇毒去纤酶(defibrase)对家兔体内外凝血作用的影响。 体外实验表明,去纤酶和凝血酶具有相同的作用,它能将血浆纤维蛋白原变成纤维蛋白,后者是非交联性的,去纤酶能降解纤维蛋白原的α—链从而使血块进一步溶解,不致产生血管内凝血。 体内实验表明,去纤酶显著延长全血凝血时间,凝血酶时间和凝血酶原时间,注射去纤酶后,家兔血液中的血浆纤维蛋白原降低,优球蛋白溶解时间显著缩短,对因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、ⅩⅢ和血小板因子却无明显影响。 体内外实验表明,尖吻蝮蛇毒去纤酶制剂似乎具有纤溶和去纤两种性质。

烙铁头蛇毒血小板聚集素(TMVA)的生化性质

用DEAE A-50柱层析从湖南烙铁头(Trimeresurus mucrosquamtus)蛇毒中分离出一个能诱导血小板聚集的组分(ⅩⅢ峰),随后经Sephadex G-75,Bio-gel等柱层析纯化,得到湖南烙铁头蛇毒血小板聚集素,简称TMVA。经聚丙烯酰胺凝胶电泳,等电点,分子量,氨基酸组成,N—末端,含糖量以及几种酶活性测定,表明:TMVA是一个由两种不同分子量亚基组成的糖蛋白聚合体,含有1.8%的中性糖,0.5%的唾液酸及3.75%的己糖胺。其等电点为5.2,由562个氨基酸残基组成,N—末端氨基酸残基为门冬氨酸(Asp)分子量为68,000,两种亚基的分子量分别为13,700和12,000,纯化后的TMVA不具有粗毒中的何任酶活性。

一个筛选和评价血小板活化抑制药物的模式——烙铁头蛇毒血小板聚集素(TMVA)

本文报道一个新的筛选和评价血小板活化抑制药物的模式——TMVA。用兔子和人血小板实验结果表明,目前国内外临床治疗冠心病的抗血小板活化药物,凡能抑制TMVA诱导的血小板聚集的药物,均能对原有的血小板活化途径的ADP,花生四烯酸(AA)或胶原等多种诱导剂引起血小板聚集起抑制作用,因此该模型是目前筛选和评价血小板活化抑制药物较理想的模式。

冠心病和脑血管病变患者血小板聚集功能测定结果

本文报道了采用不同的血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷(ADP)、烙铁头蛇毒血小板聚集素(TMVA)、肾上腺素(Adr)、花生四烯酸(AA)和瑞斯托霉素(Ristocetin)测定了冠心病、脑血管病变患者的血小板聚集功能。结果见表。

某些恶性肿瘤患者血小板计数与聚集功能测定结果

恶性肿瘤转移与血小板数量密切相关,已为国内外学者所重视。Gasic发现将癌细胞静脉注射给血小板减少的动物,肺转移数目明显减少。James报道149例肺癌患者中,24%血小板增高,其中Ⅰ期患者中血小板计数增高占11%,Ⅱ期增高为28%,Ⅲ期为61%,因此他认为转移与血小板相关。刘祥贵等检查100例各种疾病患者的血小板功能,证明胃癌、肝癌和结肠癌患者的二磷酸腺苷(ADP)

烙铁头(Trimeresurus mucrosquamatus)蛇毒的研究[Ⅰ]柱层析分离及酶活性与生物活性测定

本文报导了用二乙氨基乙基葡聚糖凝胶A-50和氯化钠直线梯度洗脱方法,获得14个蛋白峰。测定了11种酶活性,含有精氨酸酯酶,蛋白水解酶,L-氨基酸氧化酶,5′-核苷酸酶,腺三磷酸酶,磷酸单酯酶,磷酸二酯酶,核苷焦磷酸酶,磷脂酶A9种,不含核糖核酸酶,胆碱酯酶。对每个蛋白峰的生物活性测定表明,出血毒主要分布在12峰,其次为10—14峰。致死活性表现在1,12—14峰。1峰具有较强溶解纤维蛋白的活性。8,10—14峰具有明显的凝血酶样作用,酶活性的分布及其对凝血系统的作用接近一致。11—13峰能使血小板聚集。烙铁头毒蛇在我国分布很广,成都生物所两栖爬行动物研究室1974年作过报导。蛇毒的研究已被许多学者所重视,Suzuki在Anthony.T.Tu.编著的Venoms Chemistry and Moleculor Biology(1977)报导了该蛇毒含磷酸单酯酶,磷酸二酯酶,5′-核苷酸酶及小分子活性多肽,1970年Ouyang报导含透明质酸酶,1963年Murata报导有蛋白水解酶活性。Ouyang等(1976—1978)分离纯化纤溶组分,并研究了该组分的理化性质。但对各组分的酶活性及生物活性测定尚未见报导。为充分利用这一丰富资源,我们对湖南产烙铁头蛇毒进行了柱层析分离和各组分的酶活性和生物活性测定,结果报导于下。

胸部放线菌病3例

1临床资料胸部放线菌病是一种罕见病,临床易误诊,我院呼吸内科于2006-2007年期间收录了三例胸部放线菌病患者。现报道如下。

用胰蛋白酶和糜蛋白酶急救药盒救治毒蛇咬伤256例

目的：研究能随身携带自救、互救和局部注射治疗毒蛇咬伤的新方法——胰蛋白酶和糜蛋白酶急救药盒在救治毒蛇咬伤的应用效果。方法：使用配置有胰蛋白酶、糜蛋白酶及抗过敏、抗炎等药物的“急救药盒”。在蛇伤处阻止静脉回流，并切开挤压排毒，取胰蛋白酶２０００Ｕ～４０００Ｕ或糜蛋白酶１５ｍｇ～３０ｍｇ，用０．５％～１．０％普鲁卡因１０ｍｌ～２０ｍｌ稀释后，在蛇伤周围做环形封闭；然后行吸吮排毒。重者隔日封闭２次～３次。结果：２５６例毒蛇咬伤患者全部治愈，治愈率达１００％。结论：用胰蛋白酶和糜蛋白酶急救药盒治疗毒蛇咬伤使用方法简便，易于保存和携带。急救药盒具有高效、速效、广谱及安全可靠的特点，为毒蛇咬伤的治疗开辟了一条新途径。

眼镜蛇毒高活性抗补体因子的体外溶血活性研究

目的 了解云南孟加拉眼镜蛇毒高活性抗补体因子的体外溶血活性。方法 采用由豚鼠血清、豚鼠红细胞和该抗补体因子组成的体外溶血体系 ,对其溶血活性、溶血活性稳定性以及多种二价金属离子、EDTA对其溶血活性的影响进行研究。结果 该抗补体因子溶血活性的比活力为 1 391KU·g- 1 ,其溶血活性对温度、酸碱表现出较好的稳定性 ,1、2、5mmol·L- 1 的Ca2 + 、Mg2 + 、Mn2 + 能促进抗补体因子的溶血活性 ,1、2mmol·L- 1 的Zn2 + 、Co2 + 能促进抗补体因子的溶血活性 ,而 5mmol·L- 1 的Zn2 + 、Co2 + 则抑制抗补体因子的溶血活性 ,Cu2 + 在 1、2、5mmol·L- 1 时则强烈抑制抗补体因子的溶血活性 ,EDTA能强烈抑制抗补体因子的溶血活性。结论 云南孟加拉眼镜蛇毒高活性抗补体因子具有一定的溶血活性 ,并且具有较好的温度耐受性及酸碱稳定性。

蛇毒因子消耗补体对大鼠同种心脏移植急性排斥反应的影响

目的探讨蛇毒因子(CVF)消耗补体对大鼠同种心脏移植急性排斥反应的影响。方法建立Wistar至SD大鼠同种异位心脏移植模型,实验组经静脉注射CVF以消耗受体血清中补体,观察移植心存活时间,并从实验组和对照组中分别抽取5只大鼠于术后1、3、5、6、7 d定时活杀,对比观察移植心急性排斥反应程度,血清补体活性以及CD4+、CD8+T细胞浸润程度。结果使用CVF的实验组,其移植心存活时间显著延长,平均达(32.39±23.82)d,部分移植心甚至达到长期存活,而对照组为(6.60±0.65)d(P<0.01),病理检查及免疫组化证实实验组急性排斥反应程度、组织内C3沉积情况和CD4+、CD8+T细胞浸润程度均较同期对照组明显减轻。结论CVF清除补体可抑制大鼠同种心脏移植急性排斥反应,显著延长移植心存活时间。

竹叶青蛇毒凝血酶样酶氨基酸序列报道

蛇毒凝血酶样酶可作为蛋白酶结构与功能研究的良好模型，并已广泛用于各种血栓疾病的诊断和治疗，因而测定其一级结构具有重要意义．利用逆转录与聚合酶链反应相结合的ＲＴ－ＰＣＲ法，扩增出竹叶青蛇毒凝血酶样酶（ＴＳＶ－ＴＥＬ１）的ｃＤＮＡ；将扩增的ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，经末端终止法测定核苷酸序列，推导出竹叶青蛇毒凝血酶样酶的全序列．竹叶青蛇毒凝血酶样酶由２３４个氨基酸组成并含有１个位于Ａｓｎ２０的Ｎ－型糖基结合位点．竹叶青蛇毒凝血酶样酶序列与其它蛇种来源凝血酶样酶具有较大相似性，其与黄绿烙铁头蛇毒凝血酶样酶序列相似度为８４％，与美洲矛头蝮蛇毒凝血酶样酶序列相似度为６８％，而与牛凝血酶Ｂ链序列相似度仅为２５％．

烙铁头Trimeresurus Mucrosquamatus蛇毒对血小板的活化作用

烙铁头Trimeresurus Mucrosquamatus蛇毒(TMV)可引起人和多种动物(狗、家兔、豚鼠)血小板的活化,发生聚集。血小板聚集强度与加入TMV的量有关。豚鼠血小板对TMV最为敏感,TMV引起豚鼠、家兔、狗和人的血小板聚集的最低剂量分别为0.6、12.5、2.0、2.0μg/ml。EDTA抑制而肝素不影响TMV对血小板的聚集作用。TMV的血小板聚集反应伴有5羟色胺的释放,引起家兔血小板5羟色胺最大释放(72%)的TMV剂量为100μg/ml。TMV还可以诱导血小板血栓恶烷A_(2)的形成。阿斯匹林能阻断TMV诱导的血栓恶烷A_(2)的生成,但并不抑制TMV引起的血小板聚集反应,提示TMV可能通过不依赖于血栓恶烷A_(2)的途径活化。初步结果表明TMV是研究血小板生理机制的有用工具。

四个烙铁头蛇毒凝集素样蛋白基因的克隆与序列分析

从烙铁头蛇 (Trimeresurusmucrosquamatus)的毒腺中提取mRNA ,利用RT -PCR进行体外扩增 ,获得凝集素样蛋白基因 ,克隆至PMD18-T载体中 ,筛选出 4种凝集素样蛋白基因 (命名为TML 1、TML 2、TML 3和TML 4 )。由基因序列推导出的氨基酸序列表明 :TML 1,2 ,3,4序列中均有CRD结构。序列同源性比较和Cys位点分析推测 :TML 1和TML 2可能分别是类似于flavocetin A的蛇毒凝集素样蛋白的α亚基和 β亚基 ;TML 3可能类似于GPIb bp的蛇毒凝集素样蛋白的α亚基 ,TML 4则可能是类似于Ⅸ /Ⅹ bp的蛇毒凝集素样蛋白的

用尖吻蝮蛇毒、蝗蛇毒及抗蛇毒血清处理小鼠S_(180)、EAC腹水癌的初步观察

本文报道了尖吻蝮蛇毒、蝮蛇毒及抗蛇毒血清能使接种S_(180)、EAC腹水癌的小鼠明显延长存活时间、降低接种率,但不能完全阻止痛细胞生长。体外具有较明显的导致,菡细胞肿胀、膜破裂,核纤维化,坏死等。从腹水酶活力测定及抗血清初步研究结果表明,癌细胞病变中产生的某些抗原物质可能与蛇毒中的酶和毒蛋白相近。因此注射蛇毒后可在体内产生相关抗体,中和癌细胞产生的毒素以达到治疗目的。

猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制

目的 :探讨猪 猕猴延迟性异种移植排斥反应 (DXR)的发生机制。方法 :建立湖北白猪 云南猕猴的腹腔异位心脏移植模型 ,应用中华眼镜蛇毒因子 (Y CVF)完全清除受者体内补体 ,并应用环孢素A(CsA)、环磷酰胺 (CTX)和甲泼尼龙 (M .P)三联免疫抑制治疗。检测血清C3、C4、抗猪内皮细胞天然抗体 ,免疫组化方法染色检测移植物中C3、C5b 9、IgG、IgM、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、单核巨噬细胞 (CD6 8)、NK细胞 (CD5 7)、CD4 +T细胞和CD8+T细胞的表达。结果 :移植心存活时间分别为 8、10、13和 13天 ,血清C3和补体总活性均下降为 0 ,抗猪内皮细胞天然抗体水平在移植后则有一个更为明显的下降 ,在移植心失功前 2～ 4天开始天然抗体稍有回升 ,但较术前正常时仍明显偏低。移植心有程度不等的C3、C4、C5b 9、IgG及IgM沉积 ,大量的单核细胞 (5 0 % ) ,少量的NK细胞 (8%～ 10 % )、CD4 +T细胞 (15 % )和CD8+T细胞(2 5 % )。移植物血管内皮细胞表面出现ICAM 1的表达上调 ,移植物间质中出现TNF α的表达增加。结论 :体液免疫和细胞免疫参与猪 猕猴DXR排斥反应的发生。

卡式微柱凝胶法在猴血型鉴定中的应用

灵长类动物的ABO血型抗原都表达在组织器官内,而不是在红细胞上,这给灵长类动物血型的鉴定带来很大的困难。为找到更加简捷、准确鉴定灵长类动物类人ABO血型的方法,采用近年来临床上广泛应用的卡式微柱凝胶正、反定型法对34只猕猴和16只食蟹猴的血型进行了鉴定,并与肾组织免疫组化法的检测结果进行比较。结果显示:卡式微柱凝胶正定型法的检测结果中无一例为阳性结果;血浆中的纤维蛋白原和人-猴种属间非特异性抗体都会对卡式微柱凝胶反定型法的部分检测结果产生干扰;采用经正常人O型红细胞吸附处理后的清亮血清,卡式微柱凝胶反定型法的检测结果明确,与免疫组化法判定结果一致。由此得出:卡式微柱凝胶反定型法可以用于灵长类动物血型的鉴定,其主要干扰因素为血浆内的纤维蛋白原和人-猴种属间非特异性抗体,在采用清亮血清及经正常人O型红细胞吸附处理后能消除其干扰。

蛇毒产量与相关因素的测试观察

本文报道我国常见毒蛇的采毒量及不同月份的产量。探讨取毒时间,喂食与蛇毒产量、质量间的相互关系。研究结果表明,取毒时间以间隔20—30天取一次最好,不仅产量高而且活力较强,饥饿情况下蛇毒产量高、质量好,食物投放最好在取毒后,每月或20天投食1—2次,喂食频繁则对产量、质量均行影响。蛇毒毒性以3—4月、10—11月最佳,6—9月毒力低。

金环蛇毒心脏毒对S180,EAC腹水癌细胞的细胞毒性作用

目的 :探讨金环蛇毒心脏毒对 S180 ,EAC腹水癌细胞的细胞毒作用。方法 :采用小白鼠腹腔和皮下接种 S180 ,EAC腹水癌细胞造成小白鼠腹水模型后腹腔注射金环蛇毒心脏毒。结果 :腹腔注射金环蛇毒心脏毒 ,能抑制肿瘤细胞的生长 ,降低接种率。但不能完全控制腹水和癌细胞的生长。体外试验表明有明显的细胞毒作用。台酚蓝染色镜检可见死细胞显著增加 ,腹水图片检查 ,给药后细胞膜破裂 ,纤维化坏死明显。结论

眼镜蛇科蛇毒对S180,EAC腹水癌治疗作用研究

本文报道金环蛇、扁颈蛇、眼镜蛇、银环蛇蛇毒及其细胞毒对小鼠S180,EAC腹水癌的治疗作用。结果表明,蛇毒及其细胞毒在体外有明显杀灭癌细胞作用,体内有较明显的治疗作用,动物存活时间延长,接种率降低。肿瘤细胞呈现不同程度形态变化,主要为膜破裂,坏死等。治疗效应由强到弱为金环蛇毒,扁颈蛇毒,金环蛇细胞毒,眼镜蛇毒,眼镜蛇细胞毒。银环蛇毒无作用。

应用改良流式法检测猕猴和食蟹猴体内血型抗体水平的分布情况

绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人IgM或IgG二抗,对收集的实验用猕猴及食蟹猴的血清样本进行检测,以人类健康受试者的血清样本为对照,比较两者血型抗体水平的差异。结果显示:预先用人O型浓缩红细胞吸附猴血清中所含种属间非特异性抗体后,FCM法能够准确检测其血型抗体水平及分型,并且发现猴血清中天然血型抗体的水平明显低于健康人(P<0.05)。由此得出:通过预处理清除非特异性抗体的干扰后,FCM法同样适用于灵长类动物血清中血型抗体的检测,也为构建灵长类动物模拟人ABO血型不合器官移植模型提供了技术保障和实验数据。