降解多种真菌毒素的芽孢杆菌的筛选鉴定及其发酵饲料应用

粮食作物在生长及其收获储存过程中,极易被有害真菌感染导致存在黄曲霉毒素(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)这3种真菌毒素污染,严重危害人和动物的健康。研究旨在筛选一种可以同时降解饲料原料中这3种真菌毒素的菌株,首次使用亚甲基蓝褪色作为降解真菌毒素筛选方法,再以过氧化物酶复筛最终获得一株蜡样芽孢杆菌BL-17,该菌株对AFB1、ZEN、DON 3种毒素同时存在的降解率分别达74.38%、98.31%和39.66%。后续将BL-17与两株乳酸菌混合对饲料原料进行发酵,在有氧条件下大幅度降解了饲料中这3种有毒物质,对AFB1、ZEN和DON的降解率分别高达86.72%、100%和43.19%。菌株BL-17不仅提高了发酵饲料的安全性,同时也可增加对非常规饲料原料的利用,具有很好的应用前景。

一株产L-苹果酸黑曲霉菌株的诱变筛选及发酵培养基优化

为筛选一株产L-苹果酸能力强的黑曲霉菌株,通过紫外诱变与高浓度放线菌酮迭代诱变的方法,将野生型菌株诱变为一株产L-苹果酸能力强的黑曲霉菌株,并对其种子或发酵培养基成分进行优化。结果表明,诱变所得一株产L-苹果酸能力强的黑曲霉CGMCC NO.40550菌株,其摇瓶发酵时种子培养基最适葡萄糖浓度为60 g/L、最适氮源为(NH_4)_2SO_4 4.95 g/L,黑曲霉菌球形成最优转速220 r/min;发酵培养基最适葡萄糖和最适(NH_4)_2SO_4浓度分别为180 g/L和4.95 g/L,Cu SO_4·5H_2O为其生产苹果酸最佳微量元素,最适添加量为0.065 g/L。通过单因素实验的优化,优化后的培养基更有利于L-苹果酸的合成,发酵96 h时L-苹果酸产酸量达到18.15 g/L,显著提高了245%,L-苹果酸占总酸的百分比达到71.69%。本研究为L-苹果酸的工业化生产奠定基础。

一种有效的黑曲霉启动子捕获探针的构建及其应用

启动子对基因的表达起着关键的作用,为获得黑曲霉强启动子,该文以柠檬酸生产菌株黑曲霉(Aspergillus niger)CGMCC 10142为出发菌株,运用启动子捕获探针和基因重组技术筛选菌株高强度启动子,并确定其核心启动区域。结果显示:以红色荧光蛋白基因(Rfp)为报告基因,潮霉素抗性基因(HygR)为筛选标记,构建黑曲霉启动子捕获探针质粒pN3,借助T-DNA随机整合到黑曲霉基因组,筛选具有高潮霉素抗性和强红色荧光表型的突变株,进而通过交错热不对称链式聚合酶反应(thermal asymmetric interlaced polymerase chain reaction,Tail-PCR)获得整合位点上游核苷酸序列,测序确定该序列为糖苷水解酶基因启动子区(Pgh),通过分析其具有多个转录因子结合元件。对Pgh启动子进行5'端缺失分析,获得6个不同长度5'端缺失的启动子序列,并与强启动子PglaA对比,根据报告基因Rfp表达情况确定启动子Pgh的-1 066~-766 bp为其核心区域。

过表达kojR高产曲酸米曲霉的转录组差异分析

曲酸是一种真菌次生代谢产物,在化妆品、食品和制药工业中有多种用途。为揭示米曲霉发酵生产曲酸的生物合成机制,该研究利用基因工程的手段获得一株kojR过表达菌株T58号,摇瓶发酵曲酸产量最高达到29.54 g/L,较原始米曲霉菌株3.042的10.12 g/L提升191.9%。将发酵过程中获得的菌株T58与3.042菌丝体进行转录组分析,发现两者之间存在2450个显著差异表达基因,其中1203个基因表达上调,1247个基因表达下调。菌株T58差异性表达量最高的前20个基因中,上调基因主要为不同类别的氧化还原酶,与氮源利用相关基因的转录水平显著下调。基因本体数据库分析显示,与转运活性相关的差异基因数量最多。

多菌株混合发酵豆粕的研究

利用枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸杆菌对豆粕进行生料混菌发酵,制备生物活性饲料。通过单因素和响应面分析试验,以三氯乙酸可溶性氮(TCA-NSI)为优化指标对其发酵工艺条件进行研究,得出最佳发酵条件为:枯草芽孢杆菌与乳酸菌之比为2.2∶1、发酵温度30℃、外加水量46.5%、总接种量15 ml(在豆粕72 g、麸皮8 g的发酵基质中)、拌料水pH值自然。在此条件下发酵84 h,测得三氯乙酸可溶性氮含量为12.78%。

解淀粉芽孢杆菌BI_2的鉴定及其对黄曲霉的抑制作用

菌株BI2是从青贮玉米秸秆饲料中分离得到的一株革兰氏阳性芽孢杆菌.经16S rDNA序列分析,发现该菌株与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens(NC_009725)的相似性达到99.6%;进一步结合Biolog及生理生化分析,将该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以番茄叶霉病菌、黄瓜枯萎病菌等12种植物病原菌及部分霉菌、酵母、食品乳酸菌和人类致病细菌为指示菌进行抑菌实验.结果表明:BI2主要抑制丝状真菌,而对细菌无拮抗作用;BI2菌株生长36 h的上清液能明显抑制黄曲霉孢子萌发及其菌丝生长,抑制率分别达到67.4%和74.8%;而且该上清液经120℃高温处理20 min后对黄曲霉的抑制效果基本没有影响.

雅致枝霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

根据真菌Δ6-脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RT-PCR,得到雅致枝霉(Thamnidium elegans)As3.2806Δ6-脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE)向两端延伸得到1504bp的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比对,具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表达载体pYES2.0中,构建表达载体pYTED6,并在酿酒酵母INVSc1中异源表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱/质谱(GC-MS)分析表明,该序列在酿酒酵母中获得表达,产生γ-亚麻酸(GLA)的含量占酵母总脂肪酸的7.5%。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ-亚麻酸,是一个新的有功能的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(GenBank,AY941161)。

芽孢杆菌BI1的鉴定及其抑菌性研究

目的对本实验室分离得到芽孢杆菌BI1进行鉴定。方法将该菌株的16S rDNA基因序列与GeneBank中已鉴定的16S rDNA序列对比,并结合生理生化实验综合分析。结果菌株BI1与枯草芽孢杆菌亲缘关系最为接近,16S rDNA基因相似性达到99.6%,生理生化实验结果与标准枯草芽孢杆菌一致。结论将芽孢杆菌BI1鉴定为枯草芽孢杆菌。

利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列

用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As3.2806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应,获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb,初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。

磁场处理对螺旋藻多糖生产影响的初步研究

一定磁场强度（0～0．6T）处理下培养的螺旋藻生长加快，于物质积累增多，由072mp／Inl增加到0．80mg／ml；多糖含量提高，由4．2％增加到5．1％．磁场处理使培养液电导率随磁场强度增加而降低，使含量随磁场强度增加而增加，有利于细胞吸收和新陈代谢。

荔枝护色干制的工艺研究

果皮褐变是荔枝贮藏和加工过程中的常见问题.在探讨了荔枝果皮中引起褐变的主要酶--多酚氧化酶(PPO)特性的基础上着重研究了荔枝干制中的护色工艺.结果表明,荔枝果皮多酚氧化酶的最适温度范围为30～70℃之间;PPO在pH=5.5和pH=7.0左右活性最大.荔枝经90℃,0.2%的柠檬酸溶液中热烫3 min并强制冷却后,用0.2 mol·L-1抗坏血酸+0.2 mol·L-1柠檬酸+0.1 mol·L-1植酸+0.1 mol·L-1氯化钠+0.2 mol·L-1亚硫酸氢钠混合液护色处理10 min经脱水干燥制成天然红皮荔枝干.

磁场处理对螺旋藻多糖生产影响的初步研究

一定磁场强度下培养的螺旋藻生长加快，干物质积累增多，多糖含量较高，磁场处理使培养液电导率降低，NO3－—N含量增加，有利于细胞吸收和新陈代谢。

氮离子注入和微波复合诱变选育高产柠檬酸的黑曲霉研究

利用低能离子注入及微波辐射对柠檬酸生产菌进行诱变选育。在30keV能量的氮离子注入以及间隔10s的微波电磁辐射后筛选得到2株产量提高到60%的诱变高产菌,多次传代实验表明菌株遗传稳定性良好,为柠檬酸发酵菌黑曲霉的进一步的育种工作提供了诱变参数和高产出发菌株。

荷叶蜂蜜保健饮料工艺研究

以荷叶、蜂蜜、甘草为主要原料制作保健饮料,通过正交试验对原料取汁及饮料配方进行优选,筛选出荷叶汁、甘草汁提取条件,得到淡黄色的荷叶蜂蜜保健饮料,入口甘甜,回味纯厚,具有独特的荷叶清香风味。

粉丝生产中提高绿豆淀粉收率的浸泡工艺研究

为了提高粉丝生产中豆类淀粉的收率,应用正交试验设计,研究不同浸泡剂在不同浸泡条件下对粉丝生产中绿豆淀粉分离、提取的影响,得到了提高淀粉收率的新方法和新工艺。研究表明浸泡温度是影响淀粉收率的主要因素,实际生产宜取20～30℃的温度进行浸泡;≤0.2%的HCl溶液浸泡与传统的水浸泡(酸浆沉淀法)没有显著差异;0.2%NaHSO3在30℃温度下浸泡48h,可使淀粉收率从83.7%提高到91.6%～96.3%;0.04%NaOH液在室温(20℃左右)下浸泡48h,可使淀粉收率提高到93.4%～98.3%;浸泡时间也是影响绿豆淀粉分离、提取的重要因素,以24～48h为宜,亦可根据浸泡温度(T)与浸泡时间(t)的关系式t=905T-1.12(10℃≤T≤30℃)控制浸泡温度和时间。

王德培:没有内在基础国际金融中心很难做下去

上海2020年要做届时与人民币国家地位相适应的国际金融中心，但在今年，上海经济暴露出一个很掉队的现象。在全国经济增长中，山西倒数第一，一季度负增长8．1，二季度负增长4。倒数第二位是上海，一季度负增长3．1，上半年增长5．6。全国最大、最发达的改革排头兵城市，

黑曲霉mAn-1产木聚糖酶液体发酵工艺的研究

对高产木聚糖酶黑曲霉mAn-1的液体发酵工艺进行优化,以提高其生产木聚糖酶的能力。采用单因素轮换试验分别优选出最适碳源种类和氮源种类,通过2水平正交试验设计对影响产酶的8个培养基组成成分进行效应评价,选择具有显著效应的2个因素,并确定出最适培养基组成:玉米芯粉25g/L,麸皮粉25g/L,NH4NO3 5g/L,KCl 0.5g/L,K2HPO4 1g/L,MgSO4.7H2O 0.5g/L,微量元素液10mL,吐温-80 10mL,CaCO3 20g;采用响应面中心组合设计试验对发酵条件进行优化,得出接种种龄、接种量和装液量的最佳值分别为49.3h、14.38mL、138mL。以优化后的工艺进行发酵,黑曲霉mAn-1的木聚糖酶活力可达8244U/mL。

创新教学管理,提高教学质量

培养创新人才、提高教育质量问题是大家共同关心的问题。本文提出,为保障教育质量,一是转变教育观念,加强对创新人才培养工作的领导;二是推进教学内容教学方法改革;三是强化实验实践教学;四是建设具有创新精神的教师队伍;五是建立有利于学生个性发展的教学管理制度;六是创造科学的教学质量保障体系。

干热处理对绿豆淀粉和豌豆淀粉化学组成的影响及其与粉丝品质的关系

在４０℃温度下连续干热处理绿豆淀粉和豌豆淀粉，结果发现：绿豆淀粉和豌豆淀粉中的不溶性直链淀粉含量，随处理时间的延长分别由２０．４％和１５．８％逐渐增加到２９．１％和２３．４％，而直链淀粉总量保持不变；不溶性直链淀粉含量的增加导致粉丝的糊化度下降，溶出率增加，从而导致粉丝食用品质下降，两者呈显著的相关性．

微生物发酵精饲料饲喂奶牛效果观察

奶牛精饲料经微生物发酵成熟后等量代替原精饲料饲喂奶牛,试验组较对照组每头牛的日产奶量提高了0.85kg(P<0.05),乳脂率提高了0.17%(P>0.05),乳蛋白含量提高了4.1%(P<0.05),全乳固体提高了0.4%(P<0.05),奶牛的健康状况有很大改善,饲喂效果良好,经济效益显著提高。