人乳头瘤病毒L1基因分型国家参考品的升级换代研制

目的 对人乳头瘤病毒(HPV)L1基因分型国家参考品升级换代,以提高基于L1检测靶区的HPV核酸(分型)试剂的质量。方法 研制包含了34种不同型别HPV L1的质粒样品。经商业化核酸检测试剂复核验证,分装组成国家参考品。采用荧光PCR法进行量值标定,并溯源至WHO第一代HPV16 DNA国际参考品。结合不同实验室的协作标定研究和适用性验证结果,确定参考品的质量标准,并进一步考察参考品的稳定性。结果 国家参考品包括34种不同型别HPV样本和5种HPV阴性病原体,型别上囊括了HPV68a和HPV68b亚型。34种不同型别HPV DNA含量为6.26~7.08 Log10 IU/mL,并要求各试剂准确性应能检出其检测范围内的所有型别且分型正确,其检出限应不高于104 IU/反应。结论 成功建立了新一代HPV L1基因分型国家参考品,用于评价L1检测靶区的HPV核酸检测试剂的质量。

非对称区域折射型多焦点人工晶状体与可调节型人工晶状体的临床效果研究

目的对比植入非对称区域折射型多焦点人工晶状体(multifocal intraocular lens,MIOL;SBL-3)与可调节型IOL(accommodating IOL,AIOL;Tetraflex HD)后的视觉质量。方法前瞻性队列研究。选取在我院诊断为单纯性白内障,并行白内障超声乳化联合IOL植入术的患者26例(38眼)为研究对象,其中植入SBL-3 MIOL者18眼为MIOL组,植入Tetraflex HD AIOL者20眼为AIOL组。术后1个月、3个月分别检查患者裸眼远、近视力,最佳矫正远、近视力及远视力矫正下近视力,3个月时使用视觉质量分析系统评估患者斯特列尔比率、调制传递函数截止频率(MTFcutoff)值及客观调节幅度。采用SPSS 18.0分析数据。结果术后3个月时两组患者间裸眼远视力及最佳矫正远、近视力差异均无统计学意义(均为P>0.05);MIOL组裸眼近视力及远视力矫正下近视力分别为(0.245±0.079)log MAR、(0.279±0.074)log MAR,均优于AIOL组的(0.303±0.094)log MAR和(0.339±0.077)log MAR,差异均有统计学意义(均为P<0.05);术后3个月时,视觉质量分析系统测得MIOL组和AIOL组斯特列尔比率值分别为0.19±0.29和0.15±0.05,客观调节幅度分别为(2.72±0.49)D和(2.19±0.49)D,两组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论非对称区域折射型MIOL与AIOL在视觉质量方面具有差异性。

第二代人乳头瘤病毒全基因组分型国家参考品的研制

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一个小的环状双链-DNA病毒,属于乳头瘤病毒家族。主要感染皮肤、生殖器和上呼吸道的表皮细胞。目前,大约200多种HPV型别被鉴定发现[1]。HPV的基因组长约为8000 bp,主要分为三个区:早期基因、晚期基因和长调控区。早期基因编码6个早期蛋白,包括E1、E2、E4、E5、E6和E7,主要负责病毒的转录和复制。其中,E6和E7基因编码与细胞癌变转化相关的蛋白。晚期基因L1和L2主要负责编码衣壳蛋白[2]。根据其与癌症的相关性,分为高危型HPV(HR-HPV)和低危型HPV(LR-HPV)。目前,将14种HPV型别(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)定为HR-HPV,4种HPV型别(26、53、73、82)列为潜在HR-HPV。HR-HPV的持续性感染是造成宫颈癌及多种生殖道癌症的主要病原体。在中国,69.1%的宫颈癌病例为HPV16和HPV18感染,14.7%为HPV31、33、52、58和59。HPV39、45和56占宫颈癌的4.5%,剩余的病例是比较少见的其他型别,如HPV66[3]。

人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒国家监督抽检质量分析

目的:评价国内不同使用环节的人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的质量现状。方法:依据企业产品技术要求,对准确性、特异性、检测限、精密度4个项目进行检验。同时,以国家参考品和细胞质控品为样品,进行探索性研究。结果:本次国家监督抽检共抽检15批次产品,其中13批次的准确性、特异性、检测限和精密度检测结果均符合要求,2批次结果因质量控制不符合要求判定为不合格,抽检合格率为87%。探索性研究结果显示,以国家参考品为样品进行评价,6批次试剂盒未能满足检测限要求;以9种不同型别的高、低浓度细胞质控品为样品进行评价,各试剂检测高浓度样品符合率较高,检测低浓度样品符合率较低。结论:企业需进一步规范和完善产品技术要求,改进和完善企业参考品和产品的设计,建议采用国家参考品优化检测限标准。

循环肿瘤细胞检测试剂的研究进展

循环肿瘤细胞是原发肿瘤脱落后进入外周血中的肿瘤细胞。大量研究证明:其与肿瘤的进展有着密切的关系。通过检测和分析循环肿瘤细胞的特征、数量及变化,可用于肿瘤的诊断、治疗监测和预后评估。由于其微创、非侵入的获得方式,同时能够实时地评价肿瘤的动态,作为液态活检的一种方法备受关注。目前,市场上循环肿瘤细胞检测系统众多,主要包括分离富集和检测鉴定两部分。基于不同的原理,循环肿瘤细胞的检测结果差异较大。本文将简要介绍几种循环肿瘤细胞检测系统的原理和应用。

细菌感染多重核酸检测试剂参考品的建立

目的建立细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,为相关产品的质量评价提供依据。方法选择34种可导致中枢神经系统、血液、呼吸道、肠道以及生殖道感染的致病性细菌或真菌,培养富集后应用全自动细菌鉴定及药物敏感分析系统VITEK2进行鉴定。鉴定正确的菌株,应用梯度稀释法测定浓度后进行分组混合成高浓度样本。应用全基因组第二代测序技术验证混合样本的组成情况和特异性。选择基于不同原理的多重核酸检测试剂进行协作标定,根据标定结果确定参考品的质量标准,并对参考品的稳定性进行考察。结果本参考品由28种细菌和6种真菌混合成7支混合参考品,编号为M1~M7,其中细菌的终浓度约为1×10~8~1×10~9 CFU/ml,真菌的终浓度约为1×10~6~1×10~7 CFU/ml。经全基因组第二代测序技术验证,参考品的组成正确且无交叉污染情况。分别应用基于PCR-熔解曲线、等温扩增以及靶向扩增第二代测序技术的多重核酸检测试剂对参考品进行检测,结果显示本参考品经过适当稀释后能够对试剂的准确性、特异性、重复性以及最低检出限等性能指标进行评价,且参考品各混合菌株间无交叉反应。稳定性研究结果表明反复冻融3次不影响本参考品的稳定性。结论本研究建立了细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,能够应用于相关参考品的质量评价。

人细小病毒B19 IgG抗体检测试剂国家参考品的建立及应用

目的建立人细小病毒B19 IgG抗体检测试剂国家参考品并对试剂质量进行评价。方法收集并筛选B19 IgG抗体阳性和阴性样本,建立人细小病毒B19 IgG抗体检测试剂国家参考品,包括:阳性参考品10份、阴性参考品10份、重复性参考品1份和最低检测限参考品5份,以WHO第二代B19抗体(IgG)参考品进行溯源和标定,并进行稳定性考察。使用建立的参考品对人细小病毒B19 IgG抗体检测试剂盒进行质量评价。结果重复性参考品的标定结果为16 IU/m L,最低检测限参考品(S1~S4)的标定结果分别为29、14、7、4 IU/m L,S5为阴性基质血浆;室温(25℃)放置3d、4℃放置5d及反复冻融5次均不影响参考品的稳定性;试剂质量评价结果显示,阴性符合率1家为9/10,其余均为10/10,阳性符合率均为10/10,重复性均符合要求,最低检测限结果 1家为14 IU/m L、2家为7 IU/m L、3家为4 IU/m L。结论建立的参考品能够用于人细小病毒B19 IgG抗体检测试剂盒的质量控制。

金属离子对蒙古口蘑菌体及胞外多糖的影响

研究了5种金属离子Fe2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Mg2+对蒙古口蘑的菌体生长及胞外多糖的影响。结果表明,在培养基中添加5种金属离子Fe2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+和Cu2+,对菌体的生长都有一定的抑制作用,但却都能提高胞外多糖的产量,促进作用依次为Zn2+>Fe2+>Ca2+>Cu2+>Mg2+,最大比对照分别提高了280.3%、160.5%、83.6%、52.6%和19.2%。

表面活性剂对蒙古口蘑深层培养菌丝体胞外多糖的影响

研究了非离子表面活性剂Tween 80、离子表面活性剂十二烷基二甲基苄基溴化铵(BG)对蒙古口蘑的深层培养菌丝体生长及胞外多糖的影响。结果表明:添加0.05%的非离子表面活性剂Tween 80对菌体的生长有促进作用,比对照提高了25.4%;而不同浓度的BG均对菌丝体生长表现出抑制作用。Tween 80和BG都能提高胞外多糖的产量,但BG促进作用更强,添加浓度为0.05%时,比对照提高了94.7%。

CD63在戊型肝炎病毒感染中的作用机制

本研究旨在寻找戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)衣壳蛋白ORF2的相互作用蛋白,探讨其在HEV感染中的作用。采用酵母双杂交方法从人肝细胞文库中筛选与HEV ORF2相互作用的蛋白,结果显示CD63与HEV ORF2相互作用。Pull-down实验提示原核表达的ORF2与CD63结合较弱,而免疫共沉淀实验提示真核表达的ORF2能与CD63结合。流式细胞术检测结果显示,HEV易感细胞PLC/PRF/5细胞膜表面的CD63表达水平普遍低于HEV非易感细胞。过表达CD63抑制PLC/PRF/5细胞的HEV感染,而小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CD63表达则促进HEV感染。结果提示,CD63能与HEV ORF2相互作用,可能抑制HEV感染肝细胞。

心悸宁汤辅治痰火扰心型心悸临床观察

目的:观察心悸宁汤辅治痰火扰心型心悸的疗效。方法:106例随机分为常规组和实验组各53例,两组均用常规西药治疗,实验组加用心悸宁汤治疗。结果:总有效率实验组高于常规组(P<0.05),心悸、胸闷气短、失眠多梦、乏力及烦躁易怒积分实验组均低于常规组(P<0.05),实验组LVEF、6MWT水平高于常规组而Holter异位搏动次数、LVEDD、LVESD、NF-κB、Hs-CRP、NT-proBNP水平低于常规组(P<0.05)。结论:心悸宁汤辅治痰火扰心型心悸疗效较好。

冠心爽合剂治疗冠心病心绞痛的临床观察

目的评价冠心爽合剂治疗冠心病心绞痛的有效性和安全性。方法选取医院2015年1月-2017年12月总病例数为100例冠心病心绞痛患者,随机分为两组,对照组和观察组各50例,其中对照组给予西医常规治疗,观察组在西医基础上给予冠心爽合剂,观察两组用药前后心绞痛发作情况及中医症状积分变化,并记录两组不良反应发生情况。结果治疗后两组的中医证候积分均下降(P <0. 05),观察组治疗前后积分差值明显大于对照组(P <0. 05)。观察组治疗后发作次数、持续时间值均低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。观察组总有效率高于对照组(χ~2=4. 336,P=0. 037)。结论冠心爽合剂具有滋肾通阳活血功效,能明显改善冠心病心绞痛患者临床症状,副作用小,值得推荐。

中医综合疗法治疗胸痹患者45例临床观察

目的探讨中医综合疗法对胸痹的临床治疗效果。方法选取我院于2016年2月—2017年1月期间收治的90例胸痹患者,分成研究组(45例)和对照组(45例),对照组给予常规中药治疗,研究组给予中医综合疗法。对比两组治疗后的临床疗效。结果两组胸痹患者均顺利完成相应4个疗程临床治疗,经对比可知研究组临床疗效优于对照组,其中研究组总有效率为91.11%、对照组为71.11%,数据对比P<0.05。结论应用中医综合疗法治疗胸痹可获得更为理想的临床疗效,有利于保障患者生活质量、生命安全。

芪参通痹汤辅治冠心病心绞痛临床观察

目的:观察芪参通痹汤辅治冠心病心绞痛的效果。方法:80例随机分为观察组和对照组各40例。两组均予以西药治疗,观察组加用芪参通痹汤治疗。结果:总有效率观察组高于对照组(P<0.05),治疗后C反应蛋白(CRP)指标观察组低于对照组(P<0.05),观察组治疗后TC、LDL-C、TG指标均低于对照组、HDL-C高于对照组(P<0.05)。结论:芪参通痹汤辅治冠心病心绞痛能有效降低CRP指标,改善血脂代谢水平。

水痘带状疱疹病毒IgG抗体检测试剂国家参考品的研制

目的制备水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)IgG抗体检测试剂的国家参考品。方法利用国内外5个厂家ELISA试剂和膜抗原免疫荧光抗体检测(fluorescent-antibody-to-membrane-antibody,FAMA)试验,对候选样本进行筛选,确定水痘检测试剂国家参考盘;利用VZV WHO免疫球蛋白标准品对检测限参考品进行标定,通过不同厂家的协作标定最终确定国家参考品的质量标准,并对其稳定性和均匀性进行考察。结果参考品由8支阴性参考品、10支阳性参考品、1份重复性参考品和6支检测限参考品组成。质量标准为:阴性参考品符合率至少为7/8;阳性参考品符合率至少为9/10;检测限的浓度不高于127 mIU/ml;重复检测重复性参考品10次,其A值的变异系数不高于15.0%。该参考盘存放于不同条件下,相对稳定且均一性较好。结论成功建立了1套用于评价VZV IgG抗体检测试剂盒国家参考品。

人乳头状瘤病毒核酸分型检测试剂的研究进展

高危型人乳头状瘤病毒（HPV）的持续性感染是引起宫颈癌的主要原因。分子生物学检测HPV核酸DNA或RNA，可用于HPV的流行病学调查、疫苗的效力评价和宫颈癌的筛查。许多商业化的HPV核酸（分型）检测试剂盒基于不同的方法学和检测系统，从原理上主要包括两大类，即信号放大法和靶向扩增法，大多数以PCR扩增为主，不同检测试剂的性能存在一定的差异。目前，基于二代测序和定量HPV核酸检测试剂也在不断研究中，只有少量试剂在临床上进行了验证，大量的试剂亟需进行临床适用性验证，从而发挥更大的临床价值。

戊型肝炎病毒ORF2蛋白的研究进展

戊型肝炎的病原体为戊型肝炎病毒（hepatitis Evirus，HEV），主要经粪一口途径传播，临床症状类似于甲肝，为急性、自限性肝炎，但器官移植和免疫抑制患者感染HEV后可发展为慢性感染。HEV主要流行于卫生条件差的发展中国家，发达国家中有散发病例。

人乳头瘤病毒疫苗效力评价用核酸检测试剂的讨论及思考

宫颈癌是影响女性健康的第二常见的癌症,每年约有50多万女性罹患宫颈癌,死亡约20多万例,严重影响女性健康。宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持续性感染密切相关。目前,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)国际癌症研究中心将12种HPV型别(HPV16、18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59)定为高危型HPV(High-risk HPV,HR-HPV),HPV66、68、73型别列为潜在高危风险型别[1].

两种不同人乳头瘤病毒核酸检测试剂的性能比较

目的评价Cobas4800和INNO-LiPA两种人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)核酸检测试剂检测宫颈脱落细胞样本中14种高危型HPV(high-risk HPV,HR-HPV)的一致性。方法采用Cobas4800和INNO-LiPA两种HPV核酸检测试剂,分别对收集的489份宫颈脱落细胞样本进行一对一检测。通过计算κ值和配对χ~2检验比较2种试剂检测14种HR-HPV的特异性、灵敏度和一致率。结果Cobas4800和INNO-LiPA两种核酸检测试剂,检测HPV16和HPV18的一致性较好,总符合率为94.4%和97.3%(κ>0.8,P>0.1);检测其他12种HR-HPV的一致性为83.44%(κ=0.670,P<0.001)。进一步分析检测结果不一致样本,发现INNO-LiPA试剂比Cobas4800试剂检出更多的HR-HPV型别(HPV52、HPV58和HPV68)。结论Cobas4800和INNO-LiPA两种HPV核酸检测试剂,检测HPV16和HPV18的一致性较高。在检测其他12种HR-HPV型别上,INNO-LiPA的灵敏度优于Cobas4800。

肠道病毒71型核酸检测试剂国家参考品的建立

目的建立肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)核酸检测试剂国家参考品,用于该类试剂的质量评价。方法收集培养多株EV株,包括不同亚型的EV71及不同型别的柯萨奇病毒(Coxsackievirus)株。经测序分析确证,再经商业化核酸检测试剂筛选验证后,分装、冻干组成国家参考品盘。利用数字PCR法(droplet digital PCR,ddPCR)对EV71代表性病毒株C4亚型进行核酸定量,作为最低检测限参考品。采用不同企业的试剂对参考品进行协作标定,分析标定后结果,最终确定参考品的质量标准,并考察其稳定性。结果EV71核酸检测试剂国家参考品由6支阳性参考品、8支阴性参考品、1份精密度参考品和1支检测限参考品组成。其质量标准为:阳性参考品符合率应为6/6;阴性参考品符合率应为8/8;检测限应不高于3.6×10^3 copies/mL;重复检测精密度参考品10次,要求10次结果均为阳性,且对于荧光PCR法,要求其Ct值的CV<5.0%。阳性参考品各样品在室温放置1 d和反复冻融3次条件下相对比较稳定。结论成功建立了评价EV71核酸检测试剂质量的国家参考品。