RNA干扰下调不同肿瘤细胞表皮生长因子受体表达及其意义

背景与目的:表皮生长因子受体在多种上皮源性肿瘤中过表达,与肿瘤的发生、发展密切相关,是肿瘤治疗的重要靶点。本研究采用针对EGFR的小干扰RNA(siRNA),探讨其在不同类型肿瘤细胞A431、HeLa、SPC-A-1中的RNA干扰效应。方法:化学合成针对EGFR的siRNA,转染A431、HeLa、SPC-A-1细胞,通过定量RT-PCR、免疫荧光染色和流式细胞仪检测EGFR表达;通过集落形成实验观察细胞集落形成能力,分析不同类型肿瘤细胞的RNA干扰效应。结果:转染siRNA-EGFR后,3种肿瘤细胞的EGFR表达均明显下调。在A431细胞,其mRNA水平下调73.9%,蛋白水平下调77.0%。在HeLa和SPC-A-1细胞,mRNA水平的下调分别为44.6%和57.7%,蛋白水平下调61.3%和65.2%。EGFR下调后细胞集落形成能力均出现抑制,A431、HeLa和SPC-A-1的集落形成抑制率分别为27.2%、53.9%和59.1%。结论:siRNA-EGFR可在不同类型肿瘤细胞中产生RNA干扰效应,抑制细胞集落形成能力。RNA干扰技术在开发广谱抗肿瘤靶向治疗药物中具有应用价值。

靶向EGFR基因的siRNA表达载体构建及其生物学效应的研究

目的构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体(pSi-EGFR),并观察其抑制人肺腺癌细胞株A549中EGFR基因表达的效果及生物学效应。方法利用Lipofectamine2000将构建的pSi-EGFR载体转入A549细胞中,应用实时定量荧光PCR、免疫荧光和流式细胞仪检测EGFR基因mRNA和蛋白水平的表达,并采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTT)、集落形成实验观察细胞生长变化。结果pSi-EGFR可显著抑制A549细胞中EGFR基因的表达;转染pSi-EGFR细胞生长抑制率为67.8%,集落形成抑制率为59·4%。结论pSi-EGFR载体能够在A549细胞中引发RNA干扰(RNAi)效应下调EGFR基因表达来抑制细胞增殖。

靶向EGFR基因的短发夹RNA对A549细胞生长及药物敏感性的影响

背景与目的:已证实非小细胞肺癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的过度表达和活化与肿瘤分期、放化疗敏感度下降密切相关。许多阻滞和下调EGFR的方法被用来抑制肿瘤增殖以改善预后,EGFR目前成为公认的肿瘤基因治疗的重要靶点。本研究采用靶向EGFR的短发夹RNA(short hairpinRNA,shRNA)表达重组质粒,观察能否在人肺腺癌细胞株A549细胞中引发RNA干扰(RNAi)效应及其对A549细胞生长及药物敏感性的影响。方法:构建靶向EGFR的shRNA重组质粒(pShEGFR)和非特异性的shRNA重组质粒(pShNEG),阳离子脂质体将其转染至肺腺癌A549细胞分别命名为A549/pShEGFR、A549/pShNEG和对照组A549,免疫荧光和Western blot法检测转染后细胞中EGFR表达变化;克隆形成实验观察细胞生长变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;MTT法检测细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性。结果:与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR可显著抑制A549细胞中EGFR表达,转染后第6天抑制率达74.1%(P<0.01);A549/pShEGFR组细胞克隆形成抑制率为62.8%。与对照组A549细胞和A549/pShNEG相比,A549/pShEGFR组细胞阻滞在G0/G1期(63.2±1.1,64.5±1.4vs.74.2±0.8;P<0.01),凋亡细胞比例显著增加(5.8±1.4,7.7±1.2vs.25.6±1.2;P<0.01);与A549组相比,A549/pShEGFR可将A549细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的敏感性分别提高6.7、5.5、6.6倍。结论:瞬时转染靶向EGFR基因的shRNA表达重组质粒能够通过下调EGFR蛋白水平抑制肺腺癌A549细胞生长,并提高细胞对不同化疗药物的敏感性。

南充地区市场贩售蟾蜍体内曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染情况调查

目的：了解南充地区市场贩售蟾蜍感染曼氏迭宫绦虫裂头蚴的情况.方法：于2013年7月从南充市场采购蟾蜍,经编号和称重后,检查和分离寄生于蟾蜍体内的裂头蚴,并记录虫体寄生部位和虫体数.结果：共采购蟾蜍112只,其中阳性13只,阳性率为11.61%;共检获裂头蚴38条,多数虫体（73.69%）寄生于后腿肌肉;阳性蟾蜍平均感染数为2.92条,其中以85.1~95 g这一体重段感染率最高,达18.52%,平均感染数为5.2条.结论：南充地区市场贩售蟾蜍体内存在曼氏迭宫绦虫裂头蚴感染,对人群有潜在致病威胁。

RNAi抑制水通道蛋白5表达及其对细胞株黏蛋白合成及分泌的影响

目的观察瞬时及稳定转染的RNA干扰法对水通道蛋白5（AQP5）的抑制效果,并观察AQP5抑制后细胞株黏蛋白合成、分泌的变化。方法用化学合成siRNA和质粒介导的shRNA分别转染SPC-A1细胞,并在转染后7d内的不同时点收集细胞,检测AQP5 mRNA和蛋白的变化。用G418筛选稳定转染细胞株,用Western blot法检测稳转株AQP5蛋白的抑制情况。用ELISA法检测AQP5抑制后各时点及稳定转染细胞株MUC5AC表达量的变化。结果siAQP5及shAQP5转染24h对AQP5 mRNA的抑制率分别为65%、79%。对蛋白的抑制在转染后第7d最明显,分别为93%,98%。稳转株（5株）对AQP5蛋白的抑制率为45%～64%。ELISA显示瞬转第5d,MUC5AC的合成和分泌分别增加57.9%、85.3%。在5株稳定转染细胞中（shAQP5-G1,G2,G3,A1,A5）MUC5AC的合成和分泌分别增加59%～156%及33%～166%。结论化学合成及质粒介导的RNA干扰法均能有效抑制SPC-A1细胞AQP5的表达,后者较前者更经济,抑制效应更优。与瞬时转染比较,稳定转染可长时间抑制特定基因的表达。AQP5抑制后,细胞株黏蛋白的合成、分泌增高。

肺癌组织神经生长导向因子Slit2蛋白表达及其临床意义的研究

目的:研究肺癌组织中神经迁移导向因子Slit2蛋白的表达及其临床意义。方法:免疫组织化学法检测56例肺癌组织中Slit2蛋白的表达及微血管密度(microvessal density,MVD)。结果:56例肺癌标本中,Slit2阳性率为76.8%,且其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织分化程度及临床TNM分期密切相关,P<0.01;而与患者性别和病理类型无关,P>0.05。Slit2蛋白表达与肺癌组织中MVD呈显著正相关,r=0.732,P<0.001。结论:肺癌组织中Slit2表达在肺癌生长和血管生成中起重要作用,其有可能成为反映肺癌进展的指标和抗肿瘤治疗的重要靶点。

端粒酶永生化原始乳腺癌组织来源细胞及其意义

背景与目的：乳腺癌细胞系大部分来源于乳腺癌转移所致的胸水或非原始乳腺癌组织来源，与真正的乳腺癌的生物学性状有很大差异。而仅部分细胞系直接由乳腺癌原代细胞在体外培养条件下成为永生化的细胞系，过表达人端粒酶逆转录酶（hTERT）可使正常人上皮细胞永生化。本研究将通过hTERT转染人原始乳腺癌组织来源的细胞建立永生化乳腺癌细胞系，并研究过表达hTERT对其他基因表达的影响。方法：通过重组逆转录病毒pBABE-hTERT-puro将hTERT基因导人原始乳腺癌组织来源的细胞，建立稳定表达hTERT的永生乳腺癌细胞。再利用微阵列技术检测乳腺癌细胞中hTERT诱导的基因表达改变。结果：Real-TimeRT-PCR证实hTERT转染后的乳腺癌细胞中hTERT过度并稳定表达，为转染前表达量的1400倍以上，并使得被转染的细胞永生化，可以传40～50代以上。微阵列结果进一步证实hTERT在转染后的细胞中过表达，另外，有22个基因在转染后的乳腺癌细胞中上调，未观察到所有细胞株中均下调的基因。结论：过表达hTERT可导致乳腺癌原代细胞的永生化，并对部分基因有上调作用。

吲达帕胺致过敏反应1例

1 临床资料 患者,女,72岁.2001年子宫肌瘤术后静脉给药(药名不详)出现过敏反应,停药后消失.患有高血压2年.口服阿替洛尔,因该药购买困难而改用吲达帕胺片(寿比山)2.5mg,1/d.

辽西地区剪纸艺术文化价值的趋向研究

辽西地区剪纸艺术是民间哺育的艺术,它是辽西地区人民在游牧文化、山林文化、海洋文化、农耕文化的民俗生活的反映,也是内心精神生活的升华。辽西地区剪纸艺术是朴实的辽西人在生活中对美的追求以及对善的向往的映像,这种映像表达了民众的善良愿望,是辽西人创造的审美记录。辽西剪纸中的吉祥文化意象是辽西人一双双巧手创造出的和谐美满生活图景,凝聚着辽西人善良真诚的意愿。

浅析克里姆特绘画中的装饰语言艺术

本文以绘画的装饰艺术研究克里姆特绘画的装饰语言,从而探析装饰语言在绘画中的特点及其艺术形式。

高职院校建筑工程专业课模块化教学改革研究

传统的高职院校建筑工程专业课程授课具有一定的弊端，教师的教学功利性较强且缺乏创新，严重阻碍了学生对专业课程的学习，这一现象已经引起相关学者的研究与关注。现阶段，高职院校建筑工程教学的首要任务就是对专业课模块化教学进行深入研究，提出相关的改革措施。文章针对目前高职院校建筑工程专业课模块化教学过程中的问题进行细致的探讨与解决。

从政府角度浅析内蒙古绿色就业的发展

"绿色就业"是在能源衰竭、环境恶化、传统产业就业困难的背景下提出的一个新兴概念。"绿色就业"指各行业从事有利于维护环境保护的工作,并提高使用效率。本文分析了内蒙古绿色就业的现状,列举出政府推进相关行业的法律和规范,并提出促进绿色就业的相关建议。

浅淡“兴趣”在思想政治工作中的作用

人皆有趣。兴趣有积极和消极之分。积极的兴趣,能够催人奋起。兴趣在思想政治工作中的意义重大。在分析兴趣的客观性、兴趣的多样性、兴趣的激励性的基础上,积极发挥"兴趣"在思想政治工作中的作用,"引之以趣",这是思想政治工作者的基本要求。

体艺档案管理工作存在的问题探讨

艺术档案作为珍贵的艺术历史资料是文化传承过程中的重要佐证。然而,随着市场经济的迅速发展,艺术档案的管理并没有引起高校的关注,反而常常被埋没在角落里。因此,正确认识艺术档案的重要性,找出其中存在的问题并采取有效措施解决是当前很多艺术类院校面临的重要问题。本文就从艺术档案管理的重要性出发,探讨其存在的问题并提出合理化建议。

面对入世冲击的中国新兴商业银行及其发展

加入WTO后 ,银行业的开放将导致中国新兴商业银行的生存发展环境发生深刻的变化 ,这既为新兴商业银行提供了更加广阔的发展空间 ,又使其发展面临严峻的挑战。新兴商业银行需尽力发挥现有优势 ,不断创新 ,追求特色 ,建立新的发展支撑点 ,努力提高抵御风险和迎接挑战的能力 ,以实力求得发展。同时 ,国家也有必要提供相应的政策支持。

上市后药品不良事件自发性报告的数据管理

随着国民经济水平的不断提升，民众的健康需求被广泛重视。各大制药企业纷纷投身新药研究和开发的大潮中，新药的研制成功，既可以满足治疗疾患之需，同时又为制药工业带来了新的发展动力和机遇。但是，药物的安全性，尤其是新药的安全问题，特别需要受到关注和重视，它不仅关系到药物的市场开发和销售前景，更关系到民众的用药安全。

84例肺结节病临床特征分析

目的:探讨肺结节病的临床特点及诊治方法。方法:分析84例肺结节病患音的临床资料。结果:本组病例有以下临床特征:(1)以中老年女性患者为主,平均年龄48.26岁;(2)症状多样性。胸部X线检查是早期诊断的重要手段,支气管肺泡灌洗液细胞分类对诊断有帮助;(3)确诊依赖组织病理学。经纤支镜粘膜活检及经纵隔镜淋巴结活检诊断阳性率较高。结论:肺结节病临床表现多样,糖皮质激素治疗有一定疗效,但应采取个体化疗法,必要时加用其它免疫抑制剂。