检测STR多态位点作为非性别依赖胎儿标记的探讨

本研究探讨检测孕妇血浆中游离胎儿DNA短串联重复序列(short tandem repeat,STR)多态位点作为内对照进行遗传病产前基因诊断的可行性。用QIAamp DNA Kit抽提孕妇血浆DNA,应用AmpFlSTR profiler试剂盒扩增9个(D3S1358,VWA,FGA,D5S818,D13S317,D7S820,D8S1179,D21S11,D18S51)具有高度多态性的STR位点,以多重荧光PCR方法对不同孕期的36份孕妇血浆标本中胎儿DNA进行STR等位基因扩增,同时扩增孕妇及丈夫外周血来源DNA的STR位点。PCR产物经ABI Prism 377序列分析仪电泳后,用基因扫描软件进行分析,以在孕妇血浆中胎儿DNA检出父源性STR等位基因来确认胎儿DNA存在。结果表明:其中孕早期4份(4/6)、孕中期19份(19/20)、孕晚期9份(9/10)样本中检出胎儿父源性等位基因,即胎儿DNA。4份样本未检到胎儿DNA。结论:应用多重荧光PCR方法对孕妇血浆中胎儿DNA进行STR多态位点的复合扩增,可获得男性及女性胎儿性别DNA信息,作为非性别依赖胎儿标记,从而用于无创伤性产前诊断。

单管PCR扩增鉴定ABO血型基因型

本研究目的是建立单管PCR扩增鉴定ABO血型基因型的方法。采用盐析法抽提DNA,应用单管PCR扩增结合基因扫描技术对ABO血型的基因型进行鉴定。结果表明:用本方法鉴定出的132例样本的ABO基因型结果与其血清学结果完全符合,A、B、O基因频率分别为0.205、0.159、0.636,其中AA基因型8例(6.1%),AO基因型31例(23.5%),AB基因型7例(5.3%),BB基因型6例(4.5%),BO基因型23例(17.4%),OO基因型57例(43.2%)。结论:单管PCR扩增结合基因扫描技术能鉴定ABO血型基因型。

不同麻醉方法对宫颈癌根治手术病人机体免疫功能的影响

妇科肿瘤是我国和我区肿瘤的常见病和多发病,其手术难度高,创伤大,耗时长。手术的创伤和术后疼痛均可导致＂全身应激反应＂,过度的应激反应会抑制病人机体免疫系统。选择适宜的麻醉方法和及时有效的术后疼痛,能够有效降低病人机体的应激反应,减轻围术期免疫功能抑制。

应用双通道Taqman-MGB探针技术进行Kidd血型基因分型

目的Kidd血型系统是人类红细胞血型系统之一,具有重要的临床意义,其抗体可引起新生儿溶血病和溶血性输血反应。Jk抗原由SLC14A1基因的2个共显性等位基因Jka和Jkb编码,它们在人群中呈现多态性。Kidd血型的鉴定有血清学方法和基因分型方法。血清学方法具有简单易行特点,在大多数情况下可以有效鉴定血型抗原,但是血清学方法也存在一定的局限,因此在某些情况下需要采用基因分型方法。我们探讨利用双通道Taqman-MGB探针检测Kidd血型系统JKa、JKb等位基因的可行性。

人脐血成体干细胞体外向肝细胞的诱导分化

本研究探讨肝细胞生长因子(HGF)、干细胞生长因子(SCF)与白血病抑制因子(LIF)三者联合诱导人脐血成体干细胞(adultstem cells,ASCs)体外分化为肝细胞的可行性,为肝组织工程提供新的种子细胞来源。采用密度梯度离心法和免疫磁珠分选系统,富集人脐血CD34+细胞进行体外诱导分化。实验分为诱导组Ⅰ:DMEM+HGF(10ng/ml)+SCF(10ng/ml)+LIF(10ng/ml);诱导组Ⅱ:DMEM+SCF(10ng/ml)+LIF(10ng/ml);阴性对照组:DMEM。在培养第21天,用荧光倒置相差显微镜观察细胞形态;以逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、免疫组织化学和免疫荧光分析检测白蛋白(albumin,Alb),人肝细胞型细胞角蛋白(cytokeratin-18,CK18)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的基因和蛋白表达;用放射免疫分析法测定第7、14、21、23、25天细胞培养上清液中人Alb的含量。研究结果表明:在诱导组Ⅰ中,富集的成体干细胞出现明显的细胞形态、体积和数量变化;细胞变圆,多呈肝细胞样细胞。RT-PCR检测表明,培养第21天诱导组Ⅰ出现较强的白蛋白基因表达,AFP表达较弱,与正常肝细胞相似,诱导组Ⅱ和阴性对照组中均无表达。免疫荧光和免疫细胞化学分别检测Alb、人肝细胞型CK18显示,培养第21天诱导组ⅠAlb和人肝细胞型CK18呈阳性;诱导组Ⅱ和阴性对照组中均未见表达。诱导组Ⅰ细胞培养上清液中Alb含量在第21天达到峰值,第21天后明显下降,与阴性对照相比差异有显著性。结论:人脐血成体干细胞在一定的诱导条件下具有向肝细胞分化的潜能。HGF在诱导脐血成体干细胞分化成肝细胞过程中起主要作用。

应用双通道Taqman-MGB探针技术进行Kidd血型基因分型

目的探讨利用双通道Taqman-MGB探针检测Kidd血型系统JKa、JKb等位基因的可行性。方法基于JKa、JKb等位基因在SLC14A1基因838G>A的差异,设计引物和Taqman-MGB探针建立JKa、JKb等位基因分型方法,并将基因分型与血清学分型结果进行比较。结果双通道TaqMan-MGB探针实时荧光PCR方法能有效检测JKa、JKb等位基因。在198例随机样本中,JKa等位基因频率为0.427,JKb为0.573,基因分型结果与血清学分型结果完全一致。结论建立了同步检测JKa、JKb等位基因的双通道实时荧光PCR方法。

外伤性膈疝的麻醉处理

外伤性膈疝的麻醉处理秦斐王瑛和喜格（内蒙古医学院第一附属医院麻醉科）关键词麻醉；全身；疝；横膈；损伤性中图法分类Ｒ６１４．２我院于１９７４～１９９６年施行外伤性膈疝手术麻醉５３例，现总结如下。１临床资料男３７例，女１６例，年龄２～６５岁。其中４３例为...

GM-CSF对脐血CD34^+巨核祖细胞体外扩增及分化的影响

本实验旨在研究GMCSF对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,在含有TPO+IL3+SCF并添加了不同浓度(5、20、100ng/ml)的GMCSF的无血清培养基中进行培养。培养6、10、14天后计数单个核细胞(MNC),检测CD41+细胞比例和CFUMK。结果表明,培养14天后3种不同浓度GMCSF对MNC均有明显的扩增作用,其中以20和100ng/mlGMCSF的扩增效果较好。3种不同浓度的GMCSF均使CD41+细胞比例增加,20和100ng/ml与5ng/mlGMCSF相比更能提高CD41+细胞的比例。5和20ng/ml的GMCSF能促进CFUMK的形成,但100ng/ml的GMCSF却抑制CFUMK的形成。结论:在TPO+IL3+SCF细胞因子组合中添加GMCSF有利于促进脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞。

超声辅助溶剂提取苦荞总黄酮及其体外模拟消化抗氧化活性研究

以苦荞种子为原料,在不同的超声温度下提取苦荞总黄酮,并研究苦荞总黄酮的抗氧化活性。结果表明:超声辅助溶剂提取总黄酮在60℃时含量达到最大值228.5 mg/100mL,是溶剂提取的1.5倍。通过体外模拟消化试验发现,超声辅助溶剂提取有利于消化过程中总黄酮的释放,且在胃肠消化过程中胃蛋白酶和肠蛋白酶有利于总黄酮的释放,均在120 min时达到最大。通过体外模拟消化抗氧化活性测定可知,苦荞总黄酮胃肠消化产物对DPPH·、·OH及·O-2均有一定的清除能力。

3种血细胞分离机采集外周血造血干细胞的安全性与有效性研究

目的初步探讨3种血细胞分离机在采集外周血造血干细胞中的应用,并分析影响其安全性与有效性的相关因素。方法总结2005年10月～2012年1月,浙江省血液中心与浙江大学附属第一医院自/异体外周血造血干细胞采集129例,比较并探讨CS-3000 Plus、COM.TEC与COBE Spectra MNC3种血细胞分离机的采集效率与影响因素,评估3种仪器对供者血小板与血红蛋白的影响。结果 129例供者中,CS-3000 Plus血细胞分离机采集47例,共70次;COM.TEC血细胞分离机采集22例,共33次;COBE Spectra MNC血细胞分离机采集60例,共89次。每位供者平均采集1.5次。3种仪器采集的产品CD34+细胞总数无显著性差异,COBE Spectra MNC组体外总循环量与采集产品容量最低,对供者的血小板影响程度最低(P<0.005);COM.TEC组对供者血红蛋白的影响最小(P<0.005);采集产品中CD34+细胞总数与采集前供者MNC计数和处理血量均呈正相关关系(r=0.771 4,0.397 1,P<0.001)。结论根据不同供者的循环血量、动员情况、血色素、血细胞计数、患者经济状况等因素选择合适的单采仪器与方法,经过1～2次的单采都可以安全地采集到高浓度的、能满足临床需要的外周血造血干细胞。相比之下,COM.TEC血细胞分离机采集外周血造血干细胞产品容量大,对供者血小板影响也大。

IL-6和IL-11对脐血CD34^+细胞诱导分化为巨核细胞的影响

目的:探讨白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-11(IL-11)对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞及其产生血小板的影响。方法:采用免疫磁珠法(MACS)分选8例健康产妇足月顺产的胎儿脐血中CD34+细胞,以含血小板生成素(TPO 50μg/L)、白细胞介素-3(IL-3 10μg/L)、干细胞因子(SCF 50μg/L)的无血清培养基作为对照组,分别添加10μg/L IL-6、IL-11、IL-6+IL-11作为实验组,培养14 d后观察结果。利用细胞计数仪检测单个核细胞数;流式细胞仪计数培养体系中的CD41+细胞和血小板;用倒置显微镜观察培养体系中的细胞生长情况;用显微镜和流式细胞仪观察凝血酶诱导后的血小板凝集情况。结果:各实验组单个核细胞数与对照组无明显区别(P>0.05),而CD41+细胞和血小板数量明显多于对照组(P<0.05)。培养第14 d后倒置显微镜下可见实验组中血小板样颗粒物明显多于对照组,而且经凝血酶诱导后有明显血小板凝集。结论:IL-6和IL-11可诱导脐血中CD34+细胞分化为巨核细胞并产生功能性血小板。