吉富罗非鱼IRF9基因克隆及表达特征分析

【目的】明确吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)干扰素调节因子9基因(OnIRF9)的结构特征和组织表达模式,以及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的免疫应答情况,为揭示IRF9在罗非鱼免疫应答中的作用机制提供理论依据,进而丰富鱼类的IRF免疫学知识。【方法】通过RACE扩增OnIRF9基因cDNA序列,通过ExPASy、SMART、SignalP-5.0、TMHMM-2.0和Euk-mPLoc 2.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼组织中的表达特征及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的表达变化。【结果】OnIRF9基因cDNA序列全长1828 bp,包含50 bp的5'端非编码区(5'-UTR)、485 bp的3'端非编码区(3'-UTR)和1293 bp的开放阅读框(ORF),共编码430个氨基酸残基。OnIRF9蛋白分子量为48.42 kD,理论等电点(pI)为6.23,含有IRF典型的DBD结构域和IAD结构域,不含信号肽和跨膜结构域。OnIRF9氨基酸序列与其他硬骨鱼类IRF9氨基酸序列的相似性为56.2%~95.7%,其中与美妊丽鱼IRF9氨基酸序列的相似性最高(95.7%);基于IRF9氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示,吉富罗非鱼与其他参考鱼类聚为一簇,尤其与美妊丽鱼的亲缘关系最近。OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼脑、血液、肌肉、肝脏、皮肤、心脏、脾脏、头肾、肠道和鳃组织中均有表达,以脑组织中的相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05),而鳃组织中的相对表达量最低。经无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后,OnIRF9基因在吉富罗非脾脏、头肾和脑组织中的相对表达量在6 h内均极显著上升(P<0.01),但其相对表达量达到峰值的时间并不一致,提示OnIRF9基因在各组织中响应免疫应答时可能具有互补协调性。【结论】OnIRF9具有IRF典型的结构域(DBD和IAD),尤其是DBD结构域的功能在脊椎动物中较保守;OnIRF9基因在中枢神经系统中发挥重要作用,且参与吉富罗非鱼抵御病原体入侵的免疫应答反应。

乌原鲤源致病性维氏气单胞菌分离鉴定及其毒力基因分析

【目的】明确引起乌原鲤(Procypris merus)发病死亡的病原菌,分析其毒力基因,为乌原鲤养殖中的病害诊断及有效防治提供理论依据。【方法】从患病乌原鲤肝脏和肾脏中分离病原菌,采用形态学观察、生理生化特性鉴定及16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定,通过人工回归感染试验确定分离菌株的致病性,使用纸片扩散法进行药敏试验,并对18种毒力基因进行PCR检测。【结果】从患病乌原鲤肝脏和肾脏中分离纯化到1株革兰氏阴性短杆菌(命名为19042401),经形态学观察、生理生化特性鉴定和16S rDNA序列分析,确定菌株19042401为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii);人工回归感染试验结果表明该菌株对乌原鲤具有较强的致病性,半数致死量(LD50)为5.75×107 CFU/kg;药敏试验结果表明,在19种常见抗生素中,菌株19042401对卡那霉素、阿奇霉素、多西环素等6种药物敏感,对链霉素、罗红霉素、庆大霉素等7种药物中度敏感,对青霉素、恩诺沙星、阿莫西林等6种药物耐药;毒力基因PCR检测结果表明,菌株19042401携带Act、Aer、GcaT、Acg、OmpAI、Alt、Fla、Exu、Ser和AhyB共10种毒力基因。【结论】维氏气单胞菌是引起此次乌原鲤发病的致病菌,携带10种毒力基因,对乌原鲤具有较强的致病性,仅对少数药物敏感,对多种常用抗生素具有不同程度的耐药性,养殖生产中可选用多西环素进行治疗。

金鲳鱼和南美白对虾混合养殖试验

近年来,由于沿海海域水环境污染加剧、异常气候频发、种苗质量退化等因素,土塘养殖南美白对虾(Litopenaeus Vannamei)(以下简称白对虾)成功率逐年下降,尤其是在6—8月份高温期间,还面临着水浓倒藻、肠炎白便、肝脏萎缩、生长速度慢及偷死等一系列问题。有些养殖户主动寻求转变,改土塘精养为土塘混养,其中以土塘金鲳鱼与白对虾混养模式最有代表性。现开展金鲳鱼和南美白对虾混合养殖试验。1材料与方法1.1时间与地点2023年4月8日—7月15日。试验地位于广西壮族自治区防城港市防城区茅岭镇包屋村。

禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立禽呼肠孤病毒（ARV）实时荧光定量RT-PCR检测方法，将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定、SalⅠ单酶切，得到线性化转录模板DNA，将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板，用于标准曲线的制定。根据S1基因σC结构蛋白基因保守区域序列设计了1对特异性引物，以体外转录的RNA作为标准品，应用SYBRGreenI染料法建立了检测ARV的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。特异性、敏感性和重复性试验结果表明，制作的标准曲线定量浓度范围宽，比常规的RT-PCR敏感1×10^3倍，可检测到5．2×10^2个拷贝的标准品RNA，与NDV、IBDV、MG均不反应；从攻毒鸡的关节组织中可以检测到病毒，病毒含量为1×10^5～1×10^7个拷贝／μL.表明，建立的实时荧光定量RT-PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可用于ARV的检测。

黄沙鳖温和气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

从患病黄沙鳖的肝脏组织中分离到一株菌株（NN090617）,经人工感染试验证实其具有较强的致病性。对分离菌进行了形态特征、理化特性鉴定,该菌的形态和生理生化表现为：革兰氏阴性、两端钝圆的杆菌,葡萄糖产酸,氧化酶、触酶、V-P阳性,鸟氨酸脱羧酶、脲酶、七叶苷阴性。采用BioFosun微生物鉴定系统对该菌进行鉴定,将适当浊度的细菌悬液接种GN48板条培养16~24 h后读出结果,将结果输入BioFosun-Ⅰ软件分析鉴定为温和气单胞菌（Aeromonas sobria）,概率达99%,相似指数和距离指数分别为0.858、2.000,鉴定结果良好,结合形态和生理生化特点将其鉴定为温和气单胞菌。纸片琼脂扩散法药敏试验结果表明,该菌对供试的15种抗菌药物中的头孢拉定、头孢哌酮、氧氟沙星等6种药物敏感,对苯唑青霉素、庆大霉素、克拉霉素等9种药物均存在不同程度的耐药性。

斑点叉尾鮰套肠症的病原鉴定及其药敏特性

从患败血症并出现肠套叠的斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus肝脏、肾脏及脑组织中分离到一株细菌(TE090214),经人工感染试验证实,该菌为斑点叉尾鮰病鱼的病原且具有高度致死性。对分离菌进行了形态特征、理化特性等较系统的表观分类学特征鉴定。结果表明:该菌经革兰氏染色为阴性,形状为两端钝圆的短杆菌,无荚膜及芽孢,氧化酶阳性,鸟氨酸脱羧酶阴性;能发酵葡萄糖产气,能利用甘露醇、蔗糖、阿拉伯糖和水杨苷产酸,能水解七叶苷等。对该菌的16S rDNA进行PCR扩增、克隆测序,得到1条长度为1 537 bp的核苷酸序列(GenBank登录号GQ184148);在以该菌16S rDNA序列和GenBank数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,菌株TE090214与嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophi-la聚在一簇,结合形态及生理生化特点,可将该菌株鉴定为嗜水气单胞菌。药敏试验结果显示:在供试的15种抗菌药物中,菌株TE090214对头孢哌酮、卡那霉素、氧氟沙星、恩诺沙星、诺氟沙星敏感,对链霉素、阿米卡星、复方新诺明中度敏感,对氨苄青霉素等7种药物存在不同程度的耐药性。

BIOLOG自动微生物鉴定系统在水产动物病原菌检测中的应用

[目的]了解BIOLOG自动微生物鉴定系统对水产动物病原菌鉴定结果的可靠性,为水产动物细菌性疾病的诊断提供参考。[方法]选用BIOLOG自动微生物鉴定系统对9株分离自发病水产动物的病原菌进行鉴定,同时采用16S rDNA序列分析对其中的4株进行鉴定,比较2种鉴定结果的符合率。[结果]采用自动微生物鉴定系统对9株病原菌进行鉴定均取得良好结果,采用16S rDNA序列分析对4株病原菌进行鉴定的结果与应用自动微生物鉴定系统所得结果完全一致,二者符合率为100%。[结论]应用BIOLOG自动微生物鉴定系统对水产动物病原菌进行鉴定具有操作简便、快速、准确等特点,是实验室鉴定水产动物病原菌的一种可行方法。

鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据鸡传染性贫血病毒基因组保守区域设计1对扩增片段为164 bp的特异性引物,应用SYBR GreenⅠ染料建立了鸡传染性贫血病毒(CIAV)荧光定量PCR检测方法。以本室构建的阳性重组质粒作为模板,制定标准曲线,对CIAV阳性样品进行了敏感性、特异性和重复性、稳定性试验,并应用于临床检测。结果表明引物最佳终浓度为0.2μmol/L,制作的标准曲线定量浓度范围宽,最低可检测到每个反应相当于10个拷贝的标准品DNA;与IBDV、ARV、MG都不反应;重复性、稳定性试验的变异系数都较小。对保存的25份疑似CIAV样品进行荧光定量PCR检测,结果检出9份阳性。本研究建立的荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床上鸡感染CIAV的检测。

广西凡纳滨对虾源创伤弧菌耐药基因检测

该试验通过PCR方法检测27株广西凡纳滨对虾源创伤弧菌中耐药基因ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM的携带情况。结果表明,27株创伤弧菌中,ant(3”)-I、aac(3)-II、sul1、tet(A)、tet(C)和TEM基因的检出率分别为0%(0/27)、0%(0/27)、55.6%(15/27)、70.4%(19/27)、81.5%(22/27)和51.9%(14/27);共包含7种耐药基因型,其中优势耐药基因型为ant(3”)-I^(-)aac(3)-II^(-)sul1^(+)tet(A)^(+)tet(C)^(+)TEM^(+)。

山瑞鳖嗜水气单胞菌感染的诊断及防治

从患病山瑞鳖的肝脏、肺脏分离到1株细菌,对该菌的形态特征、生理生化进行分析,初步鉴定为嗜水气单胞菌。采用BioFosun-Ⅰ微生物鉴定系统对该菌进一步鉴定,结果显示为嗜水气单胞菌,可能性概率(PROB)为99%,相似性指数(SIM)和位距指数(DIS)分别为0.989和0.099。综合形态特征、生理生化特点及微生物鉴定系统鉴定结果,可将从发病山瑞鳖分离到的病原鉴定为嗜水气单胞菌。人工感染试验表明,该嗜水气单胞菌是引起山瑞鳖发病的病原且具有高度致死性;药敏试验结果则表明,该菌对头孢哌酮、阿米卡星、氧氟沙星、恩诺沙星4种药物敏感;选用头孢哌酮和恩诺沙星对病鳖进行治疗,可获得较好的治疗和控制效果,为今后山瑞鳖养殖生产中更有效地防制由该菌引起的疾病提供参考。

计算机管理在手术室的应用

手术室作为医院信息系统的一个小系统，通过计算机管理，使其在手术安排、术前访视、巡回记录、术后护理小结、物品清领、护士排班、手术费用结算的全面运转，以及科室教学、科研、管理等方面。

计算机管理在手术室的应用

由我院参加研制的POPHIS医院信息系统（PopularHospitalInformationSystem）目前已在我院全面运行。通过计算机实施对手术过程中所有信息、数据进行全程管理，可按要求随时进行手术通知输入和反馈，手术科室可及时了解手术室手术安排及准备情况，手术室可以经网络查询手术患者的各类信息，并自动完成手术室质控管理的数据统计、科研教学、物品管理、工作量统计等。系统在手术室的运行中充分体现了优越性，与传统的管理模式相比更具有科学性，不但可以减轻医护人员的劳动强度，方便患者，而且大大提高了手术室的管理质量。为培养护土超前意识、减轻护士工作量提供了良好的条件。

小儿静脉走行穿刺法在手术中的应用

笔者通过对586例术前、术中静脉穿刺困难的小儿进行了静脉走行穿刺法的研究，取得了较为满意的效果，穿刺成功率在98%以上。现将般情况介绍如下。

硬脊膜外麻醉辅以耳穴压迫行剖腹手术

在硬脊膜外麻醉下行腹部手术时,常可见因内脏牵拉反应给患者造成的痛苦,影响手术正常进行。单纯通过加大局麻药剂量或使用杜冷丁、芬太尼。

浙江大力推进墙材产业转型升级

浙江省经信委5月5日在杭州召开全省墙改工作会议，总结了《浙江省发展新型墙体材料条例》贯彻落实情况，表彰了25个粘土砖瓦整治工作先进集体和46个先进个人．通报了新型墙体材料专项基金检查情况．部署了今后一段时期墙改工作任务。

浙江利用河道淤(污)泥生产烧结类新型墙材调研报告

浙江省委、省政府提出了“五水共治”（治污水、防洪水、排涝水、保供水、抓节水）的重大战略决策，如何处理“五水共治”中产生的淤泥、渣土，使其变身为绿色新型墙材，是我省墙改工作主动参、积极作为的一项重要工作。下面就如何利用河道淤泥开发绿色新型墙材提出建议。

黄喉拟水龟摩氏摩根菌的分离鉴定及系统发育分析

从广西某黄喉拟水龟（Mauremys muticaCantor）养殖场发病的黄喉拟水龟的肝、肺分离到一致病性的菌株（HX081027）,经人工感染实验证实其为该病的病原菌。对该菌的形态、生理生化进行分析,试验结果与报道的摩氏摩根菌一致,表现为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌,无荚膜及芽孢,葡萄糖产酸产气,接触酶、脲酶、苯丙氨酸脱氨酶和鸟氨酸脱羧酶阳性,氧化酶、脂酶、DNA酶和赖氨酸脱羧酶阴性,甲基红阳性,VP反应阴性,MR阳性等特征。采用扩增细菌16S rDNA的通用引物对该菌的16S rDNA基因进行PCR扩增、克隆测序,得到1条长度为1506bp的核苷酸序列（GenBank登录号为FJ858185）。以该菌16S rDNA序列和GenBank数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列进行同源性比对分析和构建系统发育树,结果显示分离菌HX081027与摩氏摩根菌属内相关菌株的同源性在98.8%~99.6%,且在系统发育树上与来源于鱼类的M.morganiiJCM1672聚为一支,结合形态及生理生化特点将其确定为摩氏摩根菌（Morganella morganii）。

黄喉拟水龟致病菌——松鼠葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

从患病的黄喉拟水龟Mauremys mutica肝、肾中分离得到一株革兰氏阳性菌株，经人工感染试验证实，该菌为致病菌。对该菌的生理生化指标进行了分析，结果表明：该菌具有氧化酶、触酶、葡萄糖呈阳性，凝固酶、鸟氨酸脱羧酶、密二糖呈阴性，M—R为阳性，VP反应为阴性等特征，与报道的松鼠葡萄球菌特征一致。采用BIOLOG自动微生物鉴定系统对该菌进行鉴定，将适当浊度的细菌悬液接种GP2板条培养16—24h后读出结果，并将结果输入计算机，经Biolog Microlog24．2软件分析鉴定，结果显示为松鼠葡萄球菌Staphylococcus sciuri，可能性为99％，相似性和位距分别为0．913和1．30。结合形态和生理生化特点，将其鉴定为松鼠葡萄球菌。纸片扩散法药敏试验结果表明，该菌仅对头孢拉定和阿米卡星敏感，对头孢哌酮中度敏感，对其他抗生素均存在不同程度的耐药性。