狂犬病病毒强、弱毒株糖蛋白调节Ⅰ型干扰素作用的差异分析

【目的】狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种高致死性人兽共患传染病。Ⅰ型干扰素(IFN-I)通路在抵抗RABV感染中发挥重要作用。RABV可通过磷蛋白及核蛋白的功能逃逸IFN-I的抗病毒作用,本研究旨在探讨对RABV的致病性有重要影响的糖蛋白(Glycoprotein,G)在调节IFN-I通路方面扮演怎样的角色。【方法】将RABV弱毒株Hep-Flury的G基因替换成致病株CVS-11的G基因,拯救得到重组病毒HepG,分析Hep-Flury、CVS-11和HepG这3种毒株在体内和体外感染对IFN-I通路激活和调控的差别,比较它们在神经细胞中对抗IFN-I抗病毒作用的差异性。【结果】替换了CVS-11的G基因后,重组病毒HepG致病力增强,能够100%致死小鼠,在鼠脑中的增殖水平显著高于亲本株Hep-Flury。在感染鼠脑早期及体外神经细胞时,弱毒株Hep-Flury能够较快地激活IFN-I通路相关基因的表达,重组病毒HepG的激活能力介于HepFlury和CVS-11之间。利用Poly(I:C)激活神经细胞的IFN-I通路后,Hep-Flury的增殖被显著抑制,CVS-11和HepG的复制几乎不受影响,表现出一定的抵抗能力。【结论】RABV的G蛋白在调节和抵抗IFN-I通路方面发挥重要功能,为进一步探究RABV致病毒株的G蛋白如何协助病毒在中枢神经系统中逃逸IFN-I提供了线索和依据。

兽医微生物学与免疫学实验综合教学体系的构建

设计性和开放式的实验教学模式是各农业高校在建立独立的实验教学体系改革中的一种探索。为了满足高素质兽医人才的培养需求,本文在整合和优化兽医微生物学与免疫学实验内容的基础上,对如何改变验证性的传统教学模式,构建研究设计性综合实验教学体系进行了探讨。

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因重组鸭瘟病毒载体的构建

为了构建含有Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒,将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBlueSK-TK-EGFP)进行改造,在其绿色荧光表达盒内插入Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因,将重组后的转移载体(pBlueSK-TK-EGFP-VP1)转染已感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞.原始病毒液在鸭胚成纤维细胞上盲传3代后仍能观察到绿色荧光;以Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清对pBlueSK-TK-EGFP-VP1转染的细胞样品作Westen-blot检测,出现特异条带,且相对分子质量约为54 000.结果表明该研究已成功构建携带Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体,其能够在真核细胞中正确表达.

猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究

【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株。【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的gE/gI缺失重组转移质粒pMD-LA-RA及携带EGFP标记基因的重组转移质粒pMD-LA-EGFP-RA,将pMDLA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH进行同源重组,利用EGFP为筛选标记,获得携带EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–/EGFP^+,以此毒株与pMD-LA-RA进行第2次同源重组,筛选去除EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–,并通过生长曲线、易感细胞连续传代和动物免疫评价其增殖能力、遗传稳定性及免疫原性。【结果】通过2次同源重组,结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,成功获得了PRV AH gE~–/gI~–,经PCR鉴定、荧光观察及测序鉴定,证实该毒株g E和g I基因被成功缺失,且不携带EGFP标记基因。生物学特性研究结果表明,该毒株增殖能力与亲本毒株相当,遗传稳定性及免疫原性良好。【结论】采用同源重组技术成功构建了免疫原性良好的猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI基因缺失突变株,为研制针对流行毒株的基因缺失疫苗奠定了一定的基础。

PCR衍生技术快速检测副溶血弧菌的研究进展

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是引发食物中毒的重要病原菌,因此,快速、准确地对食品中副溶血弧菌进行检测是预防该菌引起食物中毒的关键。综述了近年来国内外利用PCR衍生技术快速检测该菌的研究进展,为该菌检测方法的应用与开发提供一定的参考和理论依据。

狂犬病病毒G蛋白的过表达及对病毒的抑制

【目的】探究G蛋白在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制中的作用,以揭示携带双G基因的重组RABV的Hep-dG与亲代毒株rHep-Flury在神经母细胞瘤(NA)细胞中滴度差异的原因,为RABV致病机制的研究奠定基础。【方法】通过病毒吸附、入侵、荧光定量PCR、Western-blot以及中和抗体阻断等试验,检测G蛋白过表达对IFN-β以及相关因子转录的影响。【结果】Hep-dG感染能显著上调NA细胞中IFN-βmRNA的表达,激活了下游因子STAT1的表达与磷酸化,在较低的感染复数(MOI=0.01)下,Hep-dG感染后24 h即可显著促进IFN-β基因的表达,36 h达到最高水平(P<0.001)。该病毒进入细胞后,产生了更多的病毒Leader RNA和RIG-I mRNA,且与IFN-βmRNA的表达高度一致。抗体阻断IFN-β后,Hep-dG在NA细胞中的病毒滴度显著上升(P<0.01),约为阻断前的7.9倍,且与亲代毒株rHep-Flury无显著差异。与阴性对照比较,5μg的pH-G质粒转染能刺激IFN-β的转录(P<0.05),表明真核表达RABV G蛋白能在一定程度上刺激IFN-β的转录。【结论】本研究初步揭示了G蛋白激活先天性免疫应答的原因和作用。RABV G蛋白的过表达,通过促进病毒Leader RNA的转录,激活了RIG-I介导的IFN-β通路,进而抑制了Hep-dG在NA细胞的繁殖。G蛋白的过表达也对干扰素通路起到一定的作用。

猪源狂犬病病毒N和G基因的序列分析

通过对新分离的猪源狂犬病病毒GD-SH01株N基因和G基因进行序列分析,解析它们与其他狂犬病病毒N和G基因的差异.提取猪源狂犬病病毒GD-SH01株的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增N基因和G基因,并与T载体连接,克隆至大肠埃希菌DH5α.测序后与国内外部分毒株的N基因和G基因进行核苷酸序列和氨基酸序列比对.与其他毒株相比,N基因核苷酸相似性为84.3%～98.0%;氨基酸相似性为92.5%～99.3%.G基因核苷酸相似性为80.4%～98.2%;氨基酸相似性为87.8%～99.6%.

编码鳜传染性脾肾坏死病毒结构蛋白新基因ORF90.5L的鉴定分析

鳜传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)全基因组序列于2001年完成测定,全基因组为111362bp,含有124个推测的开放阅读框(ORF)。2007年,Eaton等对12株已完成序列测定的虹彩病毒代表株进行分析比较,除了已经推测的ORF外,认为ISKNV基因组中还存在一个的核心基因(Core gene)ORF90.5L。本研究以ISKNV的cDNA为模板,根据Eaton等报道中推测的上下游位点设计引物扩增出一段963bp的PCR产物。该序列编码一个320个氨基酸的蛋白质,推测分子量为35kD,含有预测的跨膜区,与虹彩病毒属(Iridovirus)其他成员编码的肉豆蔻基膜蛋白有较高的同源性。将该片段克隆到原核表达载体pET32a(+)中,纯化表达的重组蛋白pET90.5L免疫昆明鼠获得高效价多克隆抗体。利用抗pET90.5L抗体与纯化病毒进行免疫印迹,结果表明,抗pET90.5L的多抗可以特异性识别病毒粒子中大小约为35kD的蛋白条带,ORF90.5L编码的蛋白应为病毒的结构蛋白。本研究旨在为ISKNV基因工程疫苗的研发和病源侵染机制研究提供基础参考。

猪伪狂犬病病毒新流行株主要糖蛋白的分子特征分析

【目的】进一步了解猪伪狂犬病毒新流行株的遗传特征。【方法】对从安徽某猪场分离的1株猪伪狂犬病病毒(PRV)AH株进行遗传进化分析及主要糖蛋白gB、gC、gD、gE的序列分析。【结果】PRV AH株与国内2011年以来的流行毒株非常相似,但与Bartha株及其他国外毒株遗传关系较远;国内流行毒株与Bartha株及其他国外毒株相比,其主要糖蛋白均存在明显的连续氨基酸的缺失和插入,且部分突变位点位于这些糖蛋白的重要功能区。【结论】从分子水平上解析了PRV新流行株与疫苗株Bartha株的遗传差异,为进一步深入研究Bartha株疫苗免疫失败的原因提供了理论依据。

上转换发光纳米技术检测食品中磺胺类药物含量

本文基于上转换发光纳米技术建立了一种灵敏、稳定的检测食品中含五元杂环磺胺类药物的方法。利用上转换发光纳米材料作为能量供体,金纳米颗粒作为能量受体,构建荧光共振能量转移体系,通过荧光量的恢复量来定量游离抗原以达到快速检测含五元杂环磺胺类药物。结果表明,与抗体相偶联的上转换发光纳米材料和包被抗原的金纳米颗粒能够很好地结合在一起,具有良好的灵敏度和特异度。荧光的恢复量与磺胺类抗原浓度(范围在0.08~100ng/mL)呈现出良好的线性关系,相关系数为0.99371,可以检测到磺胺类药物的最低检出限为0.08 ng/mL。同时,该方法成功应用于牛奶中,能够识别出含五元杂环磺胺类的药物,且操作简单、特异性好。基于上转换发光纳米技术构建荧光共振能量转移体系检测含五元杂环磺胺类药物残留的方法可为食品中兽药残留的检测提供新思路。

上转换发光纳米粒子表面修饰及应用研究进展

由于上转换发光纳米技术能够快速、准确、高效的检测食品中的危害因素,因此成为了食品安全检测技术研究的热点。上转换发光纳米粒子的合成与表面修饰是上转换发光纳米技术在食品安全检测中运用的关键。因此介绍上转换发光纳米粒子的合成方法和表面修饰,以及在食品安全检测中上转换发光纳米材料表面修饰的应用情况。

单克隆抗体技术在抗生素类兽药残留检测中的应用研究进展

单克隆抗体技术是一种免疫学技术,具有特异性、多样性和定向性等特点,是现代生命科学研究和诊断的重要工具。文章介绍了单克隆抗体制备技术及其近年来在快速检测动物源性食品中抗生素类兽药残留的应用研究进展,以期为抗生素类兽药免疫学检测方法的应用与开发提供参考。

基于荧光共振能量转移快速检测食品中的四环素类药物

基于上转换发光纳米技术构建荧光共振能量转移体系,快速检测食品中四环素类药物。通过将上转换发光纳米材料作为能量供体,金纳米粒子作为能量受体,建立基于荧光共振能量转移的四环素类药物的检测方法。结果表明,通过荧光量的恢复量来定量游离抗原,得到体系中荧光的恢复量与四环素类抗原浓度(范围在1 ng/mL~100 ng/mL)呈良好的线性关系,可以检测到四环素类药物的最低检出限为0.1 ng/mL。同时,该方法可用于牛奶中四环素药物的检测。通过建立能够检测四环素类药物的上转换发光纳米技术,为四环素类药物食品安全检测提供了一种快速、灵敏、稳定的方法,也为上转换发光纳米技术运用于检测食品中更多的有害物质提供了良好的基础。

高性能纤维的性能与应用

科技的发展对材料性能的要求不断提高,且高性能纤维材料也在人民生活和军事等各个领域得到了广泛应用。论述超高分子量聚乙烯纤维、芳香族聚酰胺纤维、PBO纤维、PAN基碳纤维等几种高性能纤维的性能与应用。

水胶体敷料治疗婴幼儿湿疹的临床效果及护理方法总结

目的探究婴幼儿湿疹使用水胶体敷料联合护理措施治疗临床效果。方法资料随机选取本院2016年1月～2017年12月收入88例婴幼儿湿疹作为本次观察对象,按照随机数字表法分为观察组和对照组,各44例,对照组予以呋锌软膏治疗联合常规护理,观察组予以水胶体敷料联合护理干预,对两组湿疹消除时间以及护理满意度进行比较。结果观察组湿疹消退时间、治愈时间、住院时间均少于对照组,两组差异有统计学意义(P <0.05),观察组护理总满意度为95.5%,对照组为86.4%,两组差差异有统计学意义(P <0.05)。结论针对临床上存在婴幼儿湿疹患儿,针对性予以水胶体敷料治疗联合护理措施干预,能够有效提高临床效果,缩短住院时间,提高临床护理满意度,值得推广。

PCL-PVP生物医用缝合线的制备与性能研究

研究了聚己内酯(PCL)-聚乙烯吡咯烷酮(PVP)共混材料的性能,以及PCL-PVP生物医用缝合线的纺丝工艺,讨论了一次牵伸倍数、二次牵伸温度与倍数、热定形温度对缝合线的直拉强度、打结强度、断裂伸长率和声速取向因子的影响,得出生产PCL-PVP缝合线的最佳纺丝工艺:干法纺丝后,在室温条件下进行5倍一次牵伸,50℃下进行1.2倍二次牵伸,再于50℃氮气保护下定长热定形10 h。

重组人干扰素α-2b喷雾剂辅助治疗带状疱疹的效果评价

目的观察重组人干扰素α-2b喷雾剂辅助治疗带状疱疹的临床疗效。方法选取我院皮肤科门诊2016年8月至2017年8月收治的带状疱疹患者198例为观察对象,按照随机数表法分为对照组(n=98)与观察组(n=100)。对照组患者接受单纯阿昔洛韦片口服治疗,观察组接受重组人干扰素α-2b喷雾剂联合阿昔洛韦片治疗。比较两组疗效、水疱消退结痂时间、疼痛缓解时间及不良反应发生率。结果观察组治疗有效率92.0%,明显高于对照组有效率80.6%,P<0.05。观察组水疱消退、结痂时间及疼痛缓解时间分别为(9.45±1.89)天,(10.34±2.11)天,(11.26±2.98)天,明显低于对照组,P<0.05。两组患者不良反应发生率无明显统计学差异,P>0.05。结论外用重组人干扰素α-2b喷雾剂辅助阿昔洛韦片治疗带状疱疹有较好的临床效果,可有效缩短水疱消退、结痂时间及疼痛缓解时间,未增加不良反应发生率,可临床推广应用。

类人胶原蛋白敷料治疗婴幼儿湿疹效果观察

目的:探究类人胶原蛋白敷料治疗婴幼儿湿疹效果。方法:选取2017年6月-2019年6月本院收治湿疹婴幼儿240例,按随机数表法分为观察组及对照组,各120例。对照组给予丁酸氢化可的松乳膏+维儿康洗液治疗,观察组在对照组基础上给予类人胶原蛋白敷料治疗。比较治疗2周后两组患儿的治疗效果,分析治疗前及治疗后两组患儿的症状(红斑、丘疹、糜烂)评分差异,观察治疗2周内两组患儿不良反应发生情况。结果:观察组治疗有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗2周后,两组患儿红斑、丘疹、糜烂等症状评分较治疗前显著降低,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗2周内,观察组不良反应发生率略低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:类人胶原蛋白敷料与其他治疗湿疹药物对婴幼儿湿疹有较好的疗效,可显著缓解患儿红斑、丘疹、糜烂等皮肤症状。

浅谈生态纺织品与生态纺织品标签

主要介绍了生态纺织品的含义,以及国内外常见的生态纺织品标签。

《纺织品 纤维含量的标识》新标准特点及使用建议

介绍了GB/T 29862—2013《纺织品纤维含量的标识》新国家标准的技术内容特点,提出了新标准在使用过程中应注意的事项及其修改建议,以便有关部门对新标准的理解和运用。