小分子双链RNA对人类细胞中抑癌基因p21表达的上调作用

目的筛选更多的对小分子双链RNA(dsP21-322)介导抑癌基因p21WAF1/CIP1激活起效应的人类细胞系,并初步研究该过程是否依赖p53的表达。方法选择4种表达不同类型p53蛋白的人类细胞系,p53野生型(p53wild type)的人骨肉瘤细胞系U2-OS、人肾上皮细胞系293T,p53突变型(p53mutant type)的人宫颈癌细胞系HeLa及p53缺失(p53null)的人肺腺癌细胞系NCI-H1299,转染dsControl(阴性对照)或dsP21-322至以上细胞,RT-qPCR和Westernblot分别检测p21、p53mRNA和蛋白表达的变化。结果 dsP21-322的转染未明显影响上述细胞系p53的表达;而在U2-OS、HeLa和293T细胞系中均能激活p21的表达,相比dsControl,分别上调p21mRNA的表达3.97倍、4.94倍和4.64倍,Western blot进一步证明在这3种细胞系中p21蛋白表达水平的增加与p21mRNA水平的上调相一致,且与dsControl组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。但是在p53缺失的NCI-H1299细胞系中,dsP21-322则不能上调p21的表达。结论 dsP21-322介导p21激活现象存在于人类细胞,而其未能上调p53缺失细胞系中p21的表达是否提示该过程可能依赖p53的表达尚有待进一步研究。

saRNA在转录水平激活人膀胱癌细胞p21^(WAF1/CIP1)的表达研究

目的探讨小激活RNA-dsP21-322上调人膀胱癌细胞系T24中抑癌基因p21WAF1/CIP1(p21)表达的效应。进一步分析dsP21-322是否还可上调p21前体mRNA的表达,以及增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。方法合成靶向p21启动子区的小激活RNA序列dsP21-322及阴性对照(dsControl),并分别转染至T24细胞,RT-qPCR和WesternBlot分别检测p21mRNA、前体mRNA和蛋白表达的变化。ChIP检测RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子富集的改变。结果 RT-qPCR和WesternBlot结果显示,dsP21-322可以明显上调T24细胞系中p21成熟mRNA、前体mRNA及p21蛋白的表达,且与dsControl相比,差异均有统计学意义(P<0.001)。此外,dsP21-322的转染可以明显增强RNA聚合酶Ⅱ蛋白与dsP21-322靶向的p21启动子区的联系。结论 dsP21-322上调抑癌基因p21表达是发生在转录水平的基因调控过程,这一特征的发现为后续RNA激活机制的研究提供了部分理论依据。

1例肾脓肿合并肾盂肿瘤病例分析

肾盂癌是临床上较少见的恶性肿瘤,约占全部肾恶性肿瘤的8%。肾盂癌起源于尿路上皮组织,多数为移行细胞癌,合并感染时,其体征及辅助检查均缺乏特异性,术前确诊较困难,而早期诊断和治疗是提高其长期生存的关键。现回顾性分析我院2015年12月收治的肾脓肿合并肾盂肿瘤患者1例,总结其临床资料和诊治过程,以期提高对此类疾病诊断的准确性,减少误诊率。

T_2N_1前列腺癌的治疗

前列腺癌是威胁男性健康的常见肿瘤之一，近30年来，针对前列腺癌涌现出多种治疗方法，如根治性前列腺切除术、放射治疗及内分泌治疗等。一般认为局限前列腺癌以根治性手术和放射治疗为主，而晚期前列腺癌则以内分泌治疗为主。

一水草酸钙晶体介导巨噬细胞炎症反应的体外研究

目的研究一水草酸钙晶体(calcium oxalate monohydrate,COM)引起的不同表型巨噬细胞的炎症反应。方法在大鼠草酸钙结石模型中研究肾脏巨噬细胞的浸润情况,明确是否存在肾脏炎症。体外分离培养小鼠骨髓源巨噬细胞,流式细胞仪鉴定其细胞表面标志。将巨噬细胞体外分化为M1和M2,Real-time PCR鉴定细胞标志。Real-time PCR检测COM及损伤标志分子ATP对巨噬细胞IL-1β表达的影响,ELISA法检测其IL-1β的分泌。结果在大鼠草酸钙结石模型肾脏切片中,可见大量巨噬细胞浸润,显著多于对照大鼠。体外分离小鼠巨噬细胞,流式细胞仪鉴定表面标志符合巨噬细胞表型,Real-time PCR鉴定M1和M2的标志也符合其相应表型。M1高表达IL-1β、CCL2,低表达MR、ARG;M2高表达MR、ARG,低表达IL-1β、CCL2。COM及其损伤分子ATP均可使M1高表达IL-1β。结论在草酸钙大鼠模型中,巨噬细胞浸润明显,COM和ATP可加重巨噬细胞炎症,并可加重M1的促炎症作用。

宋朝市马三题

所谓马政,是指我国历代封建王朝对于官用马匹的牧养,采购等业务的一种行政管理制度。宋朝的马政分为养马与市马两大部分。养马又分官牧与民牧,官牧即由国家圈占土地,设置养马场(牧监)养马,这主要施行于北宋熙宁、南宋乾道以前;民牧即由老百姓牧养官马,施行于北宋熙宁、元丰以后。由于种种原因,宋朝养马业成效甚微,根本保证不了战马的供应,如“河南、北十二监,自熙宁二年(1069年)至五年,岁出马千六百四十匹,可给骑兵者二百六十四匹,余止堪给马铺”。“兵之所恃在马,而能蕃息之者,牧监也。……

机器人时代肾部分切除术手术适应证的优化选择(附单术者85例报告)

目的:总结机器人辅助腹腔镜肾部分切除术的手术经验,探讨机器人辅助腹腔镜手术的效果和优势。方法:回顾分析单术者2015年2月~2016年6月应用机器人辅助腹腔镜行肾部分切除术的85例患者临床资料。结果:85例患者均完成腹腔镜下肾部分切除术,无改变手术方式病例;肿瘤大小1.0cm×2.0cm^9.0cm×10.0cm。手术时间(不包括机械臂准备时间)65~128min,肾动脉阻断时间9~33min,术中出血10~450ml;术后3~5d下床活动,4~5d拔除引流管,术后住院时间5~10d。透明细胞癌70例,血管平滑肌脂肪瘤7例,乳头状肾细胞癌4例,嫌色细胞瘤2例,嗜酸性细胞瘤1例,肾孤立性纤维瘤1例,无切缘阳性病例。术后1例因出血行介入栓塞术。随访3~16个月,无局部复发及远处转移,患者肾功能均保持正常水平。结论:机器人辅助腹腔镜肾部分切除术手术操作精细便利,手术操作熟练术者实行此术式明显优于传统腹腔镜手术,尤其适合于较大占位、多发占位或复杂位置占位等特殊类型肾部分切除术。

高危局限晚期前列腺癌内分泌治疗后病理上皮内瘤变转化:1例报道并前列腺癌新辅助治疗意义再探

目的报道1例高危局限晚期前列腺癌经新辅助内分泌治疗后的组织病理改变特点,探讨新辅助治疗对此类患者的临床意义。方法 1例高危局限晚期前列腺癌患者(T4N0M0),MRI检查提示前列腺占位,大小约65mm×85mm×68 mm,伴盆腔周围器官侵犯;前列腺靶向穿刺结果提示前列腺腺癌(Gleason 5+4);行新辅助内分泌治疗(最大限度雄激素阻断)6个月后接受机器人前列腺癌根治术并盆腔淋巴清扫。术后随访16个月。结果患者经最大限度雄激素阻断内分泌治疗6个月后,前列腺MRI平扫+PWI+DWI提示肿块未见;术后病理提示:全组织制片,镜下见前列腺组织增生伴局灶性高级别上皮内瘤变,所有切片未见癌组织,各切缘及淋巴结均阴性。术后6周患者复查总PSA<0.008ng/ml。术后接受雄激素剥夺治疗16个月,总PSA均低于0.02ng/ml。结论高危局限晚期前列腺癌经内分泌治疗后其病理可能出现上皮内瘤变样的逆转,新辅助治疗后可改善此类高危患者前列腺癌根治手术效果。

p53表达下调对saRNA介导p21基因激活的影响研究

目的研究抑制p53基因的表达是否影响小双链RNA(dsRNA)分子dsP21-322对p21基因表达的激活效应。方法体外培养人肾癌ACHN细胞(p53野生型)和膀胱癌5637细胞(p53突变型)。采用RT-PCR方法筛选具有抑制p53基因表达的干扰RNA分子dsP53-3。人工合成具有激活效应的dsRNA分子dsP21-322,以及与人体已知RNA序列无同源性的阴性对照小dsRNA分子dsCon。将上述dsRNA分子转染到两种肿瘤细胞中,每种细胞均分为5组,即:1空白组;2阴性对照组;3dsP21-322单转染组;4dsP53单转染组;5dsP21-322与dsP53共转染组。通过荧光染色检测转染效率,采用Real-time PCR和Western-blot技术检测各组细胞中p53和p21转录和翻译水平上的表达差异。结果 1在单转染组中,dsP21-322能够激活ACHN细胞、5637细胞中p21基因表达;2dsP53-3能够抑制ACHN细胞、5637细胞中p53基因表达;3在共转染组中ACHN细胞、5637细胞中p53基因下调,而dsP21-322依然能够激活p21基因表达。结论外源合成的saRNA分子dsP21-322能激活ACHN细胞、5637细胞中p21基因表达,该激活效应不受p53蛋白表达量的影响。

输尿管结石致梗阻合并屎肠球菌感染的诊疗分析（附12例报告）

近年来肠球菌引起的院内尿路感染明显增多［1-2］，其中尿路结石合并屎肠球菌感染导致患者病情重，易发生尿源性脓毒血症，临床治疗较困难［3］。为进一步认识和掌握对该类疾病的诊治，我们分析12例输尿管结石致梗阻合并屎肠球菌感染病例的诊疗经过，总结临床经验。

虚拟膀胱镜技术在非肌层浸润性膀胱癌手术分型中的初步应用

目的浅探基于超薄磁共振灌注成像三维重建的虚拟膀胱镜检查在非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)患者手术分型中应用的可行性。方法回顾性分析2020年7月至8月收治的3例NMIBC患者的资料。术前均行超薄磁共振灌注成像,在获得患者知情同意后采集检查数据,使用3D交互式医学影像控制系统Mimics对影像进行三维重建构建高精度的虚拟膀胱镜模型,在术前用于激光切除术的手术规划。结果3例手术均顺利完成,手术时间分别为20、55、60 min。术后病理报告切缘均为阴性,围手术期3例患者均无Clavien-DindoⅡ级及以上的并发症。术后2~7d恢复出院,其中1例为高级别尿路上皮癌,术后1个月定期行卡介苗灌注治疗,另外2例均为低危NMIBC,术后定期行吉西他滨或沙培林维持灌注,定期随访至今,3例患者均无复发。结论基于超薄磁共振灌注成像的高精度虚拟膀胱镜技术对于NMIBC患者的激光切除术前预分割、减少手术时间有临床辅助意义,同时有待未来进行前瞻性队列研究来明确术前虚拟膀胱镜技术的应用是否有助于降低NMIBC患者的术后复发率。

p21基因的saRNA表达质粒的构建及功能研究

目的构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究。方法人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA(dsRNA)表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNAp21-pGenesil-1)和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNACon-pGenesil-1)。采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1(实验组)、dsRNACon-pGenesil-1(随机对照组)及空白质粒pGenesil-1(空白对照组)转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异。结果成功构建目的表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化。结论本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究的激活效应提供有效工具。

肾脏交织状血管瘤1例报告并文献复习

目的探讨肾脏交织状血管瘤的临床特点、诊断及治疗方法。方法回顾性分析1例肾脏交织状血管瘤的临床资料,结合相关文献复习,总结该病的诊断和治疗特点。结果术前误诊为恶性肿瘤,于全麻下行后腹腔镜右肾根治性切除术,术后病理提示肾脏交织状血管瘤。随访3个月,未见肿瘤复发。结论肾脏交织状血管瘤是一种罕见的变异的肾脏毛细血管良性肿瘤。临床及影像学表现无特异性,术前易误诊为恶性肿瘤,确诊有赖于病理,宜行保留肾单位肾部分切除术治疗。

骨转移性前列腺癌患者的生存分析和列线图的建立

目的分析骨转移性前列腺癌(PCa)患者生存时间的预测因素,并建立列线图。方法回顾性分析2000年1月—2014年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科住院的392例接受雄激素剥夺治疗(ADT)的骨转移性PCa患者临床资料。使用Cox比例风险模型分析干预前的人口学和疾病资料,考察患者总生存时间(OS)的预测因子。使用多变量Cox分析中有统计学意义的协变量建立预测患者OS的列线图。采用C-指数和校准图验证模型的分辨度和符合度。结果患者中位OS为40.3个月(95%CI:32.2-48.5)。多因素Cox回归分析显示,临床T期(HR, 95CI:1.52 (1.14-2.02), P=0.005)、初始前列腺特异性抗原(PSA)水平[HR, 95CI:1.22 (1.01-1.48), P=0.046]、Gleason分级系统评分(GS)[HR, 95CI:1.71 (1.11-2.65), P=0.029]和骨转移病灶数量[HR, 95CI:1.03 (1.01-1.04),P=0.001]是OS的独立预测因素。所构建的列线图对患者5年、3年和1年的OS的预测能力的C指数分别为0.73 [95%CI:(0.682-0.768)]、0.71[95%CI:(0.664-0.721)]和0.66[95%CI:(0.654-0.666)]。在校准图中观察到观测概率和预测概率具有较好的一致性。结论临床T期、初始PSA水平、GS和骨转移病灶数量等4个参数是患者OS的独立预测因子。基于这些变量开发的列线图可能是骨转移性PCa在干预前预测OS的有用工具。尚需要进一步的外部验证来提高本列线图的适用性。

机器人辅助与传统腹腔镜根治性膀胱切除术中盆腔淋巴结清扫的对比研究

目的:评价机器人辅助腹腔镜技术在根治性膀胱切除术盆腔淋巴结清扫过程中的可行性和潜在优势。方法:回顾性分析2016年1月至2019年10月期间,在我院接受机器人辅助腹腔镜根治性膀胱切除术(RARC)患者62例,腹腔镜根治性膀胱切除术(LRC)患者72例。对比两组患者在肿瘤临床分期、病理分级、手术时间、术中出血量、术后住院时间、淋巴结清扫数量、清扫淋巴结的阳性率和围手术期并发症等指标之间的差异。结果:RARC组相比LRC组患者术中出血量少[(210.0±170.0)ml vs.(515.7±401.5)ml,P<0.001]、手术时间短[(344.8±121.2)min vs.(466.2±119.5)min,P<0.001]、术中清扫的淋巴结数量多[(18.2±8.7)个vs.(12.3±6.2)个,P<0.001]。两组患者术后住院时间、淋巴结阳性率和围手术期并发症方面差异无统计学意义。结论:相比传统腹腔镜技术,机器人辅助腹腔镜手术清扫的淋巴结数量多、手术时间短、术中出血量少,具有一定的优势。

群舒史迹钩沉

西周春秋时期,群舒作为安徽古方国中荦荦大者,立国五六百年,对江淮地区早期文明开化,尤有不没之功。本文拟依据文献的零星记载,益以甲骨卜辞、金文等文物考古资料,对群舒的族源、迁徙、地望、军事诸问题,进行初步的考论。

东晋南朝安徽境内侨州郡县考略

东晋南朝时期,由于地处南北之交,安徽境内侨设的州郡县既多且杂,成为安徽地理沿革史中最混乱的一段时期。本文以《晋书·地理志》州、郡(国)的排列顺序,依据《晋志》、《宋志》、《齐志》、《魏志》、《隋志》的记载,旁蒐它籍,对安徽境内侨置郡县略加考述,为省篇幅,考证过程与所引上书材料,不加详述。

水刀在根治性前列腺切除术中保留勃起神经的应用初探

目的探讨水刀在根治性前列腺切除术中保留勃起神经的可行性及安全性。方法回顾性分析我院2014年至2018年期间收治的前列腺癌并接受根治性前列腺切除术患者的临床资料,从中筛选出采用经腹膜外腹腔镜根治性前列腺切除术并在术中使用水刀进行组织分离、保留神经血管束的患者8例作为水刀手术组;选取采用同种手术方式,但未采用水刀操作的患者10例作为标准手术组。分析上述患者的临床病理资料及围手术期资料。对比两组患者的术前PSA水平、临床TNM分期、前列腺体积、术中出血量、围手术期并发症和手术时间,以及手术前后国际勃起功能评分-5(IIEF-5)变化和术后尿控能力方面的差异。结果水刀手术组患者的年龄小于标准手术组患者(57岁vs 69岁,P=0.011),两者之间存在统计学差异。两组患者的术前PSA水平、术前cTNM分期、前列腺体积和术后pTNM分期等指标差异无统计学意义。水刀手术组患者在术中出血量(500ml vs 700ml,P=0.016)和手术前后IIEF-5变化值(1 vs 3,P=0.027)等指标上优于标准手术组,但两者在围手术期并发症的发生率(25% vs 40%,P=0.638)、手术时间(130min vs 140min,P=0.687)和术后尿垫使用数量(1 vs 1,P=0.094)等方面差异无统计学意义。结论腹腔镜根治性前列腺切除术中使用水刀分离神经血管束能有效保护患者的勃起功能,减少术中出血量,同时不明显增加手术时间和围手术期并发症的发生率。

腹腔镜根治性膀胱切除加回肠输出道标准化手术流程对术者学习曲线的影响

目的探讨标准化手术流程对腹腔镜根治性膀胱切除术(LRC)加回肠输出道手术术者学习曲线的影响。方法收集我院30例行LRC加回肠输出道手术患者的临床病理资料。按手术时间的先后顺序将所有患者分为A、B、C 3组,每组各10例。所有手术均由同一位主刀医生完成。在开始实施首例手术前,主刀医生对已制定的LRC加回肠输出道手术标准化流程进行学习,通过考核后即可开始独立进行手术。对比3组患者在手术时间、术中出血量、淋巴结清扫数量和术后并发症等方面的差异。结果所有患者均顺利完成手术,无中转开放或改变手术方式等情况。30例患者的平均手术时间为(388±96)min,术中平均出血量(443±206)ml,淋巴结清扫数量平均为(16±6)个。随着术者手术例数的不断增多,3组患者的手术时间相比逐渐缩短,术中出血量逐渐减少,术中淋巴结清扫数量则逐渐增多。上述指标的变化趋势与手术例数的增多呈线性相关。结论术者在独立完成A组的10例手术后,已能掌握LRC加回肠输出道手术的操作要点并独立完成手术。在完成B组的10例手术后,已熟练掌握该手术方式。在完成30例手术后术者的手术技术达到稳定状态。这说明通过建立标准化手术流程,能有效帮助术者缩短手术时间、减少术中出血量、降低患者术中和术后并发症的发生率,显著缩短了术者的学习曲线。

膀胱肿瘤内镜黏膜下剥离术专家共识

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,75%的患者初诊为非肌层浸润性膀胱癌,目前推荐的标准治疗方式是经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT),但术后复发率高。近年国内外专家推行“整块切除”的理念,并将膀胱肿瘤内镜黏膜下剥离术(BT-ESD)迅速应用至临床。为规范该技术,以实现治愈性切除目的,特邀请国内泌尿外科及病理科相关领域专家,基于国内外文献及国内专家经验,共同制定BT-ESD专家共识。