抗绿脓杆菌毒素A单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

本文采用绿脓杆菌外毒素A免疫BALB/c小鼠取脾细胞与Sp2/0细胞融合,建立了6株分泌单克隆抗体的杂交瘤,分别命名为14F10,23B9,23F1,23C12,,24A6及24B5。其中,23F1及24A6在传代培养中逐渐丧失了分泌抗体的能力,其余4株可稳定地分泌抗体。它们的Ig亚类鉴定;14F10为IgM,23B9为IgC1,23C12为JgG2b,24B5为JgG1。注射入同系小鼠腹腔,可产生高滴度抗体,在夹心ELISA试验中己证实均为抗绿脓杆菌外毒素A特异性的。此外,文中还讨论了在间接ELISA初次筛选中出现的假阴性及假阳性的原因及其排除方法。

单克隆抗体亲和层析纯化绿脓杆菌外毒素A

本文用间接ELISA法测定了本室研制的4株绿脓杆菌外毒素A单克隆抗体的相对亲和力。结果表明,它们的相对亲和力可排列为23B9>14F10>24B5>23C12。选用23B9制备免疫吸附柱,用于亲和层析纯化绿脓杆菌外毒素A。洗脱液用pH11.5,0.05 mol的二乙胺溶液,回收率为上柱样品的72.4％。所获纯化毒素对BALB/c小鼠的LD50为137ng,在SDS聚丙烯酰胺凝胶电冰中为一条带,保持有良好的毒性及免疫学活性。

微空间测定法在普氏立克次体物质转运研究中的应用

本文通过微空间测定法（ＭｉｃｒｏｓｐａｃｅＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）利用Ｐ３２标记的ＵＭＰ，ＵＴＰ，ＧＭＰ，ＧＴＰ，１４Ｃ—蔗糖及３Ｈ２Ｏ来测定普氏立克次体是否转运下述四种核糖核苷酸。实验结果表明，ＵＭＰ，ＵＴＰ及ＧＴＰ在立克次体内的微空间体积（Ｖｉ）分别为自由通过胞浆膜的３Ｈ２ＯＶｉ值的３．３２１，２．４６０及４．９４５倍，说明立克次体可以逆浓度差主动转运这三种核苷酸。该法测到ＧＭＰ的Ｖｉ值与用３Ｈ２Ｏ测到的Ｖｉ值之比接近１，表明ＧＭＰ在立克次体内是有空间体积的，但对ＧＭＰ转运的方式尚难肯定。本文资料证实立克次体确可从其外部生境中转运核糖核苷酸供其合成核酸之需。

LVA钙通道的克隆鉴定及一级结构特征

目的从大鼠胰腺β细胞中，克隆ＬＶＡ钙通道（即Ｔ－型钙通道）基因，并鉴定其一级结构的特征。方法用ＲＴ－ＰＣＲ，３’－ＲＡＣＥ及５’－ＲＡＣＥ法，从总ＲＮＡ中克隆Ｔ－型钙通道全长基因；用ＤＮＡ序列测定与ＤＮＡ步移实验，分析基因一级结构及外显子剪接。结果克隆了Ｔ－型钙通道的全长结构基因，命名为α１Ｇ－ＩＮＳ。该基因由６８６４个碱基组成，编码２２８８个氨基酸，与从神经组织中克隆的钙通道α１Ｇ相比较：在氨基酸水平上有９６．３％的同源性，在４个结构域的跨膜区内的氨基酸及Ⅰ、Ⅱ结构域间的胞内环链部分的氨基酸具有高度保守性；两者间具有３个明显不同的结构区段，基因组ＤＮＡ步移法分析表明，这种差异是由于ｍＲＮＡ前体的不同剪接所致。此外，尚有１０个氨基酸替代散在于分子内其它区域，这种替代是由于基因突变造成的。结论成功地从大鼠胰腺β细胞中，克隆到ＬＶＡ钙通道基因中的１个新亚型（ｉｓｏｆｏｒｍ）α１Ｇ－ＩＮＳ，对深入研究钙离子所涉及的许多重要的基本生命过程有着重要的意义。

抗绿脓杆菌外毒素A单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立(简报)

本文采用绿脓杆菌国际标准产毒株PA-103株，纯化绿脓杆菌外毒素A，免疫BALB／c小鼠。免疫鼠血清效价经ELISA法检测达1：80万。取脾脏混悬细胞10^8与10^7Sp2／0细胞，用50%oPEG(MW4，000)融合。取有克隆生长孔上清液用ELISA法筛选分泌抗体阳性孔。

绿脓杆菌外毒素A单克隆抗体保护作用的实验研究

本文研究了本室建株并稳定传代的7株杂交瘤所分泌的绿脓杆菌外毒素A单克隆抗体在细胞培养或小鼠体内的保护活性。实验结果表明,在培养细胞或BA-LB/c小鼠体内,对于纯化毒素的攻击,4株单抗均显示了不同程度的保护作用。但当用活菌攻击时,在小鼠体内,各单抗单独便用,未见明显保护效果,而4株单抗混合使用,则可明显延长动物存活时间。文中还讨论了针对绿脓杆茵外毒素A的主、被动免疫在实际应用中的可能性及局限性。

绿脓杆菌外毒素A的结构与功能

本文扼要介绍绿脓杆菌外毒素A(PEA)的研究概况,然后重点评述近5年来有关PEA分子结构与功能的关系以及PEA特异性防治方面的最新研究进展。

走出一种思维误区

“微观”一词源出希腊文“Ｍｉｋｒｏｓ”，意为“小”的意思，现为英文中的前缀“Ｍｉｃｒｏ－”。物理学中指空间线度小于１０－７～１０－６厘米的粒子为“微观”粒子。“宏观”则与“微观”相对，源出于希腊文“Ｍａｋｒｏ”，意为“大”的意思。现为英文中的前缀“Ｍ...

铜绿假单胞菌噬菌体的分离鉴定及耐噬菌体突变频率测定

用铜绿假单胞菌为宿主菌自污水中分离到3株不同的铜绿假单胞菌噬菌体,命名为PaP1、PaP2及PaP3者均为DNA双链噬菌体,基因组大小分别约为47kb、34kb及24kb。3株噬菌体原液滴度（pfu）分别为109/mL、1011/mL和1011/mL。PaP1为裂菌性噬菌体,PaP2及PaP3为溶原性噬菌体。电镜观察,3株噬菌体头部均为多面体立体对称颗粒,直径分别约为70nm、55nm和65nm。PaP1属肌尾噬菌体科,PaP2和PaP3属短尾噬菌体科。研究中还发现了铜绿假单胞菌的耐噬菌体现象及耐受菌与敏感菌之间的“菌群交替”现象,经测定铜绿假单胞菌耐噬菌体的突变机率在1.4×10-7～7.9×10-7之间。

铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究

目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法 电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌 噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果 噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1～ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论 PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3

宏基因组研究高脂饮食诱导小鼠的肥胖易感性与肠道菌群的关系

目的考察高脂饮食喂养后小鼠肠道菌群在组成及功能上与肥胖易感的相关性。方法采用高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠构建高脂饮食诱导肥胖组(high-fat-diet-induced-obesity,HFDIO)和高脂饮食诱导肥胖抵抗组(high-fat-diet-induced-obesity-resistant,HFDIOR)模型,正常饲料组为对照组,搜集并提取3组小鼠粪便样本细菌基因组,DNA质检后挑取高质量样本(每组6个),采用Illumina公司的Hiseq2000进行细菌宏基因组测序及相关生物信息学与统计学分析。结果较之对照组,肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道厚壁菌门、变形菌门、脱铁杆菌门含量显著升高,拟杆菌门显著下降(P<0.05)。肥胖组和肥胖抵抗组小鼠肠道的特征菌种组成显著不同,且毛螺菌科中的Lachnospiraceae bacterium 10_1与Lachnospiraceae bacterium 28_4分别为肥胖及肥胖抵抗组小鼠的关键菌种;肥胖与肥胖抵抗小鼠肠道菌群的功能及代谢显著差异则主要集中在碳水化合物代谢、核酸代谢与锚定、膜转运活性及转移酶活性等方面。结论不同个体对于饮食诱导的肥胖的易感性差别可能与肠道菌群组成及功能变化相关,这有助于正确评价肠道菌群在肥胖发生中的作用。

铜绿假单胞菌噬菌体PaP1生物学特性的研究

目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法 对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;制备PaP1的单个噬斑,观察噬斑特点;按照感染复数(MOI)分别为0 0 0 0 1、0 0 0 1、0 0 1、0 1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,3 7℃160r/min培养3 5h后测定噬菌体滴度;加入噬菌体及宿主菌使MOI =10 ,3 7℃温育15min后进行一步生长实验,于0时刻和每隔10min取样5 0 μl测定上清中噬菌体滴度。结果 PaP1噬菌体头部呈多面体立体对称,直径约70nm ,无囊膜,有一个约60nm长的尾;PaP1噬斑直径约2mm ,圆形透明;当MOI为0 0 1时PaP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制出了一步生长曲线。结论 PaP1属于肌尾科裂菌性噬菌体,其基因组为双链DNA分子;最佳感染复数为0 0 1,感染宿主菌的潜伏期是2 0min ,爆发期是40min ,平均爆发量约为65。

一个承载分子的设计与肽抗生素hPAB-β的高效表达

目的 通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素hPAB β ,为大量制备hPAB β奠定基础。 方法 根据肽抗生素的特性 ,确立 4条设计原则 ,并据此设计一 489bp的承载蛋白编码序列 ,用化学合成法获得该序列并将之克隆到pQE 3 2中构建成表达载体 ,进一步将肽抗生素hPAB β基因插入上述表达载体 ,肽抗生素基因位于承载蛋白编码序列 3’ 端 ,两者构成融合基因。将含融合基因的表达载体转化大肠杆菌JM10 9,筛选阳性重组子 ,并用阳性重组子表达融合蛋白。结果 设计的承载蛋白为 163个氨基酸 ,分子量 17668.80 ,等电点 5 .62 1。用承载分子与肽抗生素hPAB β构建的融合蛋白表达载体转化细菌后 ,筛选到 4个阳性重组子 ,均能高效表达肽抗生素融合蛋白 ,融合蛋白的产量占细菌总蛋白的 40 %～ 45 %。结论 设计的承载蛋白分子能够实现肽抗生素的高效表达。

嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株异源二聚体β-半乳糖苷酶的克隆表达

嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)的异源二聚体β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶2家族,由两个部分重叠、协同翻译的基因编码(lacL和lacM)。【目的】克隆表达该酶并测定其酶学特性。【方法】参照已全基因组测序的嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,以嗜酸乳酸杆菌ATCC4356菌株基因组为模板,将lacL的RBS到lacM的终止子之间的序列(2834bp)克隆到pQE31质粒上,并电转化JM109菌株。以下列步骤纯化表达产物:硫酸铵分级沉淀、阴离子交换、亲和层析和凝胶排阻层析。以凝胶排阻层析测定纯化酶的天然分子量,以邻硝基苯基半乳糖为底物测定其酶学特性。【结果】实现了该酶在JM109菌株中的可溶性表达。其氨基酸序列有一处不同于嗜酸乳酸杆菌NCFM菌株,即其大亚基(LacL)的第512位氨基酸不是组氨酸而是精氨酸。纯化酶比活力为226U/mg蛋白,天然分子量为96.3±4.6kDa,最适pH为7,最适温度为49℃,Km和Vmax值分别是:2.18±0.12mmol/L,273±5U/mg蛋白。

嗜酸乳杆菌3-磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化

目的分离纯化嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)ATCC 4356的3-磷酸甘油醛脱氢酶。方法利用硫酸铵分级沉淀法、亲和层析、阴离子交换和分子筛层析对嗜酸乳杆菌GAPDH进行了分离纯化。通过N端测序鉴定了纯化产物;并用分子筛测定了嗜酸乳杆菌GAPDH的相对分子质量(Mr)。结果纯化产物在SDS-PAGE胶上呈现Mr为3.7×104的单一条带,产量为0.9 mg/L(嗜酸乳杆菌培养物)。N端测序结果证明纯化产物为嗜酸乳杆菌GAPDH。分子筛测定的GAPDH的Mr为7.08×104,表明嗜酸乳杆菌GAPDH是二聚体。结论通过该纯化方案,可大量获得电泳纯的嗜酸乳杆菌GAPDH,为进一步研究其免疫功能以及开发为免疫促进剂打下了基础。

肉苁蓉提取物对人体抗衰老作用研究

ThispaperreportsthattheLPOinhumanbodieswereclearedeffectivelywiththeextractsfromCistanchedeserticola.Thesignsofsenilityofthebodieswereremoveddistinctlywiththeextracts.

铜绿假单胞菌噬菌体PaP3生物学特性的研究

目的测定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的最佳感染复数、一步生长曲线和吸附K值及交叉吸附K值等基本生物学特性。方法按照感染复数(MOI)分别为0·0001、0·001、0·01、0·1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,充分裂解细菌后,测定噬菌体滴度;以MOI=10的比例加入噬菌体及宿主菌,进行一步生长实验;纯化PaP3颗粒,免疫家兔,获得抗血清,通过中和反应实验测定PaP3和其抗血清之间的吸附反应常数K值。同时,利用抗血清交叉中和试验确定本室分离的三株噬菌体之间的血清学关系。结果当MOI=0·001时PaP3感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制一步生长曲线;通过血清交叉中和反应得出不同的吸附常数。结论PaP3最佳感染复数为0·001,感染宿主菌的潜伏期是20min,爆发期是60min,平均爆发量约为31,其抗血清反应的吸附常数K值为262。