苦参抗寄生虫的研究进展

苦参在抗寄生虫方面有很大的功效,其不同成分分别对蠕虫类、原虫类寄生虫及疥螨等有明显的防治作用。

微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体检测ELISA方法的建立

为建立快捷的含病毒隐孢子虫的检测方法,本研究利用已构建的微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白重组表达质粒表达并纯化重组蛋白,建立以该重组衣壳蛋白为包被抗原检测抗体的间接ELISA检测方法。经优化后间接ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为0.25μg/孔,被检血清稀释度为1∶200,酶标二抗稀释度为1∶2000,封闭液为含5%脱脂奶粉的PBST溶液。该方法检测安氏隐孢子虫阳性血清,柔嫩艾美尔球虫阳性血清,蓝氏贾第虫阳性血清,弓形虫阳性血清与微小隐孢子虫阳性结果均为阴性。该方法灵敏度为1∶1600,特异性较强且具可重复性,可用于含病毒隐孢子虫的抗体检测及流行病学调查。

微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21的原核表达及鉴定

本研究旨在克隆微小隐孢子虫黏附相关蛋白基因CP21开放阅读框,构建其原核表达质粒,并对获得的融合蛋白进行鉴定。从含CP21基因的噬菌体中提取模板DNA,PCR扩增基因片段,构建pET-28a-CP21原核表达质粒,转化至埃希氏大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。用原核表达蛋白免疫小鼠,制备抗重组蛋白多抗,对蛋白进行定位。结果表明成功扩增出CP21基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量为25 ku的融合蛋白,Western blotting证明表达的CP21融合蛋白能与抗C.parvum多克隆抗体产生特异性反应。免疫荧光结果表明:CP21基因在子孢子和卵囊期均表达,且表达产物位于子孢子表膜和卵囊壁表面。CP21是一种与侵入机制有关的黏附相关蛋白。研究结果为微小隐孢子虫的免疫学诊断及疫苗研制奠定了基础。

微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定

目的对微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白S-dsRNA基因进行克隆、表达和反应原性分析。方法以微小隐孢子虫总RNA逆转录的cDNA为模板,克隆S-dsRNA基因,并转化至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET-28a(+)-S,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白与鼠抗微小隐孢子虫阳性血清的反应原性。结果 PCR和双酶切鉴定表明,重组质粒pET-28a(+)-S构建成功。SDS-PAGE结果显示,37℃下经1mmol/L IPTG诱导4h,重组蛋白表达量最大。重组蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为37000,与预期大小一致,重组蛋白约占蛋白总量的72.6%。Western blotting分析结果表明,重组蛋白能识别抗微小隐孢子虫阳性鼠血清。结论微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白S-dsRNA基因表达成功,重组蛋白具有反应原性。

五株隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析

设计Nested PCR引物扩增牛源微小隐孢子虫Cryptospordium parvum、羊源微小隐孢子虫C. parvum、牛源安氏隐孢子虫C. andersoni、鸡源贝氏隐孢子虫C. baileyi及猪源隐孢子虫C. suis 18S rRNA基因突变区,PCR产物经克隆测序,其片段大小分别为212、213、213、213和210 bp.将测得的序列用DNAStar软件分析并与NCBI数据库中相同与相近种株序列进行相似性比较, 进行相似性分析并用TREECON软件绘制系统发育进化树.结果表明测得的5株隐孢子虫与各自相同种相似性为98.1%～100%,与其他种相似性为90.1%～98.6%.分析显示在此突变区设置特异酶切位点能区分开C. parvum, C. andersoni, C. baileyi与C. suis,位点分别是TaqI、BstUI、MseI.本研究为我国隐孢子虫分类、分子流行病学研究提供了新的方法.

趋势面分析法在瓦斯涌出量预测中的应用

趋势面分析法预测矿井瓦斯而出量是用数学方法研究地质变量的空间分布与瓦斯变量变化规律间相互关系的一种多元统计分析方法。主要用于有一定开采史的生产矿井未采区的瓦斯涌出量预测。本文主要介绍生产矿井以往瓦斯资料的总结、整理和还原方法；趋势面分析的多元数学建模；趋势面图的计算机绘图方法；用趋势面图预测瓦斯涌出生的方法以及该法在实践中的检验情况。

第三方物流道德风险分析

由于委托代理理论中信息的不对称性客观存在,第三方物流道德风险客观存在,并且严重影响到我国第三方物流行业的发展。本文分析了第三方物流道德风险的成因和治理难题,结合实际提出了防范风险的几项措施,能有效地减小第三方物流企业的道德风险。

绿化工程反季节种植存活率分析

考虑到园林绿化工程的建设时间不同,有些特殊非栽植最佳期必须要提高绿化面积时,可以采取反季节栽植技术,同样也可以保障绿化植物的成活率,从而达到该城市预期的城市景观建设目标,因此反季节栽植技术在各地的绿化工程项目中都关得键到词了:很好的应用。基于此,文章简要介绍了反季节种植技术,探讨了其在园林绿化景观实践工程中的应用。

基于QIIME 2平台对先天性巨结肠患儿与正常儿童肠道菌群的比较分析

目的 比较先天性巨结肠患儿与正常儿童肠道菌群差异,阐明先天性巨结肠对肠道菌群组成的影响。方法 收集2019年4月至2020年12月来河北省儿童医院就诊的先天性巨结肠患儿与体检的正常儿童粪便样本。10例先天性巨结肠患儿纳入先天性巨结肠患儿组(HDB_Nor组),其中男7例,女3例;年龄为(1.22±0.65)岁;14例正常儿童纳入对照组,即正常儿童组(Normal组),其中男8例,女6例;年龄为(1.67±0.84)岁。利用细菌16S rRNA基因序列测序,通过QIIME 2平台对测序数据进行统计分析并绘图,对比分析两组肠道菌群组成、多样性、菌群差异、菌群物种间相关性以及菌群与疾病之间联系。结果 在肠道菌群组成、Beta多样性方面先天性巨结肠患儿与正常儿童肠道菌群差异有统计学意义;LEfSe差异分析结果显示假小链双歧杆菌、两歧双歧杆菌、瘤胃菌属等在先天性巨结肠患儿组中物种显著增加;放线菌属、粘滑罗斯菌属及弗氏柠檬酸杆菌等三个细菌种属在先天性巨结肠患儿组中显著减少。通过肠道菌群与先天性巨结肠相关性分析发现AKK菌属、大肠埃希-志贺氏菌属、肠球菌属和伯克霍尔德菌属等四个种属与疾病关联性影响较大。结论 先天性巨结肠患儿与正常儿童肠道菌群组成及多样性方面存在显著差异,先天性巨结肠影响肠道菌群的组成和多样性,尤其是对AKK菌属和大肠埃希-志贺氏菌属两个菌属的影响更显著。

员工的信息隐私感知和感情承诺:集体主义认同度和性别差异的交互调节

本文的目的是探究员工的信息隐私感知对其工作组织感情承诺的影响,以及集体主义认同度和性别差异对这种影响的调节作用。通过调查320名中国员工后发现,信息隐私感知中,信息处理控制感知与感情承诺正相关。此外,对于女性员工而言,集体主义认度同高,信息处理控制感知和感情承诺之间的关系则弱,集体主义认度同低,信息处理控制感知和感情承诺之间的关系则强。而对于男性员工而言,信息处理控制感知和感情承诺之间的关系强度不会随集体主义认同度的高低变化而变化。

伊氏锥虫与路氏锥虫二重PCR鉴别检测方法的建立

目的建立伊氏锥虫和路氏锥虫二重PCR鉴别检测方法。方法根据路氏锥虫18S rRNA基因和伊氏锥虫RoTat 1.2VSG基因特异序列设计两对引物,通过优化PCR反应体系与反应条件,建立种特异二重PCR鉴别检测方法。结果用建立的二重PCR鉴别检测方法能特异扩增路氏锥虫和伊氏锥虫目的片段,大小分别为261bp和482bp;路氏锥虫和伊氏锥虫的最低检出量分别均达1个虫体,检测日本血吸虫、杜氏利氏曼原虫与瑟氏泰勒虫等其他血液寄生虫均为阴性。结论建立的二重PCR检测体系灵敏度高、特异性强,适用于路氏锥虫和伊氏锥虫的感染检测及流行病学调查。

提高旋挖钻一次成孔合格率分析

随着国家对基础设施的建设需求上升,其中投资不断加大的桥梁、铁路、市政等的建设占有较大比重。同时,国家对工程质量的要求也越来越高,如何在保证施工效率的同时提升工程的质量,对基建的发展极其重要。其中旋挖钻成孔桩在基建方面应用广泛,通过分析旋挖钻成孔的技术原理,结合其优缺点,研究影响其一次成孔的关键因素以及在施工过程中可能遇到的问题,来讨论如何提高旋挖钻一次成孔的合格率。

基于网络药理学及分子对接技术探讨血必净注射液治疗新型冠状病毒肺炎的潜在靶标及机制

目的采用网络药理学和分子对接的方法探讨血必净注射液治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在调控机制。方法借助中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得血必净注射液所有有效活性成分的干预靶点,并与GeneCards数据库、OMIM数据库、PharmGkb数据库、TTD数据库和DrugBank数据库中COVID-19基因相关靶标使用R编程语言取交集,从而获得血必净注射液治疗COVID-19的核心靶标;利用Cytoscape 3.7.2软件构建中药-化合物-靶标网络;通过STRING得到交集靶标的PPI网络;运用数据包进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测重叠靶点的作用机制。最后,应用分子对接技术,将关键有效活性成分和PPI中核心蛋白进行分子对接。结果GO功能富集分析包括1818个生物过程(biological process,BP),20种细胞组分(cel‐lular component,CC)以及89种分子功能(molecular function,MF)。前30条KEGG相关通路涉及炎症和免疫反应等,如类风湿性关节炎信号通路、IL-17信号通路、Th17细胞分化通路、缺氧诱导因子(HIF)-1信号通路、JAK-STAT信号通路、炎症性肠病信号通路、NF-κB信号通路等。槲皮素、隐丹参酮、木犀草素、β胡萝卜素可影响IL1B、STAT3、AKT1、VEGFA等重叠靶点,同时,槲皮素可能通过IL1B结合,发挥抗炎、抗病毒和免疫应答作用,治疗COVID-19。结论本研究揭示了血必净注射液中的化学成分通过与关键靶蛋白结合涉及多种生物学过程及通路治疗COVID-19。

蛋白质二硫键异构酶血栓疾病致病机制研究进展

蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)是蛋白质二硫键异构酶家族的原型成员,由P4HB(prolyl 4-hydroxylase subunit beta)基因编码,是脯氨酸-4-羟化酶P4H蛋白的β亚基,故又称P4HB。主要存在于内质网中,通过酶活性和分子伴侣功能帮助蛋白质正确折叠,在病理生理进程中发挥重要作用。国内外对PDI的相关研究诸如癌症、神经退行性疾病等疾病中的作用机制进行了探讨,除了在内质网中的关键作用外,细胞表面PDI在启动血栓形成过程中的作用尤为突出。PDI可以迅速从血管损伤部位的活化血小板和内皮细胞中分泌出来,促进血小板活化和纤维蛋白形成,同时也能介导凝血因子活化、释放和凝血通路激活。用抗体或小分子抑制剂抑制PDI会阻止血栓形成。鉴于细胞外PDI在血栓调控中的重要作用,因此了解蛋白质二硫键异构酶血栓疾病致病机制势在必行。目前正在努力确定PDI的细胞外底物,这些底物参与了蛋白质二硫键异构酶与血栓形成之间的网络途径。本文重点阐述目前对蛋白质二硫键异构酶介导血栓形成机制的理解,并讨论通过靶向PDI阻断血栓形成的研究进展,以期为进一步探讨该物质防治血栓性疾病的应用提供新的思路。