抑制C-myc、整合素β_1对侵袭性垂体腺瘤侵袭力影响的研究

目的：研究c-myc基因、整合素β_1(integrinβ_1，INTβ_1)在侵袭性垂体瘤中的作用和意义，以探讨垂体腺瘤侵袭性可能的病理机制。方法：选取手术切除的新鲜垂体瘤标本12例。进行原代细胞培养，利用Boyden小室侵袭模型，分别加入c-myc抗体、INTβ_1民抗体联合抑制c-myc、INTβ_1活性，观察干预后垂体瘤细胞侵袭能力的变化。用免疫组化法和原位杂交方法，观察干预后C-myc和c-mycmRNA、INTβ_1和INTβ_1 mRNA表达的变化。结果：在加入c-myc、INTβ_1抗体后，C-myc和c-mycmRNA、INTβ_1和INTβ_1 mRNA表达水平均明显降低(各 P＜0．05)；同时伴随细胞侵袭率的显著下降(P＜0．01)。结论：INTβ_1、c-myc与肿瘤细胞的侵袭行为密切相关，抑制其表达，有助于阻止垂体瘤细胞的侵袭性生长。

垂体特异转录因子pit-1在垂体瘤中的表达及意义的实验研究

目的检测垂体特异转录因子pit-1在垂体腺瘤中的表达,研究Pit-1与激素水平、肿瘤侵袭性的关系,以探讨Pit-1在垂体瘤发病机制中的作用。方法根据术前激素水平、临床表现及术后病理诊断确定腺瘤类型,依影像学表现、术中所见及硬膜病检结果判断对肿瘤侵袭性分级,用免疫组化和RT-PCR分别测定Pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达。结果Pit-1在GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤中均有表达,与对照组相比,中、高度表达者占此3种腺瘤的78.8%(26/33),无功能腺瘤及ACTH腺瘤中无Pit-1蛋白的表达。pit-1mRNA在全部的GH腺瘤、PRL腺瘤、GH/PRL混合腺瘤和50%(5/10)的无功能腺瘤中有表达,在ACTH腺瘤组中无表达。GH、PRL、GH/PRL混合腺瘤组间pit-1mRNA的表达量差异无显著性,此3组均显著高于无功能腺瘤组(P<0.05)。GH、PRL腺瘤组中pit-1mRNA的表达量与其各自术前的激素水平呈显著正相关。在表达pit-1mRNA的腺瘤中,侵袭性组高于非侵袭性组。结论Pit-1的表达与垂体腺瘤的表型、功能有关,与某些激素(GH、PRL)水平、肿瘤的侵袭性呈正相关,在某些类型(GH、PRL、GH/PRL)的垂体瘤发病机制中起重要作用。

抑制pit-1基因表达对垂体生长激素腺瘤生物学行为影响的实验研究

目的:研究垂体特异转录因子-1(pit-1)反义寡核苷酸(ASODN)对垂体生长激素(GH)腺瘤细胞增殖和细胞凋亡的影响,为以pit-1为靶点治疗GH腺瘤提供理论和实验依据。方法:设计合成硫代磷酸化反义寡核苷酸(PS-ASODN),经脂质体(lipofectin)包裹转染瘤细胞,每隔24h取样。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ASODN对细胞生长增殖的影响;用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡和周期分布的改变,用免疫组化SABC法、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定经ASODN作用后,pit-1蛋白和pit-1mRNA表达的变化。结果:ASODN组与正义组(SODN)及对照组相比较,48h、72h后细胞生长增殖受抑制(P<0.05),96h、120h时,差异有非常显著性(P<0.01);ASODN组对细胞凋亡有显著的促进作用,细胞多阻滞于G2/M期。其作用具有序列选择的特异性,在一定的时间范围内,呈时间依赖性。ASODN显著地抑制pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达(均P<0.05)。结论:pit-1反义寡核苷酸能够有效地抑制GH腺瘤细胞的生长而促进其凋亡,具有较好的临床应用前景。

端粒酶反义寡核苷酸治疗脑胶质瘤实验研究

目的研究端粒酶反义寡核苷酸对胶质瘤细胞端粒酶活性、细胞增殖和细胞凋亡的影响,为以端粒酶为靶点治疗脑胶质瘤提供理论和实验依据。方法以端粒酶催化亚单位基因(hTERT)为靶点设计合成硫代磷酸化反义寡核苷酸(PS-ASODN),经脂质体(lipofectin)包裹转染胶质瘤细胞,每隔24h取样。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测PS-ASODN对细胞生长增殖的影响;用端粒重复序列扩增-聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(TRAP-PCR-ELISA)法检测端粒酶活性的变化;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的改变。结果PS-ASODN实验组与正义组、错义组及空白对照组相比较,48h后细胞生长增殖受抑制,端粒酶活性降低(P<0.05),72h时,差异有高度显著性(P<0.01);实验组对细胞凋亡有显著的促进作用,细胞多阻滞于G2/M期。其作用具有序列选择的特异性,在一定的时间范围内,呈时间依赖性。结论端粒酶反义寡核苷酸能够有效地抑制胶质瘤细胞的生长而促进其凋亡,具有较好的临床应用前景。

整合素β_1表达在侵袭性垂体腺瘤中的生物学意义

目的研究整合素β1(integrinβ1,INTβ1)在侵袭性垂体腺瘤中的作用和意义,探讨垂体腺瘤侵袭性可能的病理机制。方法选取手术切除的新鲜垂体瘤标本12例,进行原代细胞培养,利用Boyden小室侵袭模型,分别加入INTβ1抗体以抑制INTβ1活性,观察干预后垂体瘤细胞侵袭能力的变化。用免疫组化法和原位杂交方法,观察干预后INTβ1和INTβ1mRNA表达的变化。结果在加入INTβ1抗体后,INTβ1和INTβ1mRNA表达水平明显降低(P<0.05),同时伴随细胞侵袭率的显著下降(P<0.05)。结论INTβ1与肿瘤细胞的侵袭行为密切相关,抑制其表达,有助于阻止垂体瘤细胞的侵袭性生长。

过表达HMGA2对人垂体生长激素腺瘤细胞增殖及周期的影响

目的探讨过表达高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对人垂体生长激素腺瘤细胞增殖及周期的影响。方法 HMGA2过表达质粒转染原代培养人垂体生长激素腺瘤细胞(转染组)。蛋白免疫印迹法(Western blot)、细胞增殖实验(cell counting kit-8,CCK-8)、流式细胞仪术分别检测HMGA2过表达质粒转染垂体生长激素腺瘤细胞后对HMGA2蛋白表达、细胞增殖、细胞周期的影响。结果 24h后转染组垂体生长激素腺瘤细胞HMGA2蛋白表达水平高于空载体组(转染空质粒的细胞)(P<0.05);较空载体组在24、48、72、96h4个时间点OD值较大,差异均有统计学意义(P<0.05);转染组细胞增殖数量增加,与空载体组相比转染组细胞G1期所占比例减少,S期所占比例增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达HMGA2促进垂体腺瘤细胞增殖,促进细胞G1期进展。

低表达泛素连接酶CHIP对脑胶质瘤细胞U87迁移、侵袭及增殖的影响

目的探讨低表达泛素连接酶CHIP对脑胶质瘤细胞U87迁移、侵袭和增殖的影响。方法运用ControlsiRNA、CHIP siRNA分别转染脑胶质瘤细胞U87,Western blot检测CHIP蛋白表达情况,CCK-8细胞增殖实验检测CHIP siRNA对U87细胞增殖的影响,Transwell chamber细胞迁移、侵袭实验检测CHIP siRNA对U87细胞迁移、侵袭的影响。结果与Control siRNA组相比,CHIP siRNA组U87细胞CHIP蛋白表达量降低,CHIP siRNA组U87细胞增殖和迁移、侵袭数增加(P均<0.05)。结论 CHIP siRNA靶向干扰了泛素连接酶CHIP的表达,CHIP作为肿瘤抑癌因子抑制脑胶质瘤细胞U87的迁移、侵袭及增殖。

小干扰垂体特异性转录因子-1对大鼠垂体生长激素肿瘤细胞侵袭行为的影响

目的:研究垂体特异性转录因子-1(pituitary-specific transcription factor-1,pit-1)siRNA转染大鼠GH3型垂体瘤细胞后对其生物学特性的影响。方法:设计合成pit-1 siRNA,经脂质体(lipofectin)转染大鼠垂体瘤细胞后,通过RT-PCR检测瘤细胞内pit-1 mRNA表达的变化;制备Boyden小室测定pit-1 siRNA对肿瘤细胞侵袭力和趋化作用的影响。结果:pit-1 siRNA转染大鼠GH3细胞24 h后,pit-1 mRNA和pit-1蛋白的表达明显低于阴性对照组(P<0.05)。透过基质凝胶多孔滤膜的大鼠GH3细胞瘤细胞的数量都显著低于阴性对照组(P<0.05)。结论:pit-1对大鼠垂体瘤细胞的侵袭性呈正相关,在生长激素腺瘤的发病机制中起重要作用。

垂体泌乳素腺瘤垂体特异转录因子表达的实验研究

目的研究垂体特异转录因子pit-1与PRL水平、肿瘤侵袭性的关系,探讨Pit-1在垂体瘤发病机制中的作用。方法免疫组化和RT-PCR分别测定Pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达,分析Pit-1与肿瘤侵袭性的关系。结果与对照组相比,Pit-1在PRL腺瘤中均有高表达,Pit-1、pit-1 mRNA表达与PRL水平呈正相关并与肿瘤侵袭性相关。结论Pit-1及pit-1mRNA的表达在垂体PRL腺瘤发病机制中发挥一定作用。

HIF-lαasODN转染的树突状细胞对胶质瘤细胞生长的影响

目的研究缺氧诱导因子-1a（HIF-1a）反义寡核苷酸（asODN）转染的树突状细胞（DC）与U251胶质瘤细胞融合后的抗胶质瘤活性。方法将HIF-1a asODN利用脂质体包裹转染DC，采用PEG化学融合方法将DC与U251胶质瘤细胞融合，通过MTT法及流式细胞仪检测胶质瘤细胞凋亡率。结果HIF-1a asODN转染DC组与各对照组相比细胞增殖下降，凋亡增加（P〈0．01）。结论HIF-1a asODN转染DC后，再与U251胶质瘤细胞融合能够比单纯使用HIF-1a asODN转染U251细胞或单纯使用DC细胞取得更好的抑制胶质瘤细胞生长及促进其凋亡的效果。

中枢神经系统海绵状血管瘤的显微手术治疗

目的探讨中枢神经系统(centralnervoussystem,CNS)海绵状血管瘤(CA)的影像学特征和显微手术治疗的手术体会及效果评价。方法回顾分析5年间23例经病理学证实的CNS海绵状血管瘤,脑内16例(幕上11例,幕下5例),脑外5例,椎管内2例。23例全部行CT检查,21例同时行MRI检查,18例行DSA检查。全部病例均行显微手术治疗,21例行镜下全切除(91.3%),2例行次全切除(8.7%)。结果23例患者中,19例痊愈(82.6%),4例好转(17.4%),术后随访6个月～4年,无死亡及术后神经功能症状加重病例。结论CNS海绵状血管瘤在CT及MRI上有特征性的表现,MRI对CA的敏感性优于CT。DSA检查为阴性,但对于鉴别诊断很有帮助。显微手术是治疗CNS海绵状血管瘤的首选方法,合理的手术入路、熟练掌握显微操作技术及显微解剖知识是手术成功的关键。

逆转录酶抑制剂对恶性胶质瘤细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的研究逆转录酶抑制剂(AZT)对胶质瘤细胞端粒酶活性、细胞增殖和细胞周期的影响,为以端粒酶为靶点治疗脑胶质瘤提供理论和实验依据。方法采用MTT法检测AZT对细胞生长增殖的影响。用TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性的变化。用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果与对照组比较,12h后1.0molLAZT组的端粒酶活性降低(P<0.05),24h时0.5molLAZT组细胞生长增殖受抑制(P<0.05),1.0molLAZT组则呈现出显著性差异(P<0.01),在实验范围内,呈时间-剂量依赖性。实验组细胞周期中各时相的细胞分布发生改变,0.5molLAZT组细胞多阻滞于G2M期,而1.0molLAZT组细胞G1期增多,S期细胞数减少。结论逆转录酶抑制剂能够有效地抑制胶质瘤细胞的端粒酶活性,抑制细胞的增殖,参与了细胞周期及凋亡的调控,具有较好的应用前景。

CTA与DSA在颅内动脉瘤诊断及手术评估中的临床比较研究

目的探讨CTA与DSA在颅内动脉瘤诊治过程中各自的优势,为改进临床工作提供依据。方法回顾性分析54例颅内动脉瘤患者的CTA、DSA和手术资料,进行结果对比分析。所有病例均于术前行CTA和DSA两种检查,54例患者中,14例栓塞治疗,40例行开颅手术。结果将CTA、DSA检查诊断结果与最终确诊结果比较,CTA检出颅内动脉瘤的敏感度为96.3%,准确度为98.6%;DSA检出颅内动脉瘤的敏感度为98.1%,准确度为98.6%,CTA的敏感度略高于DSA,但无统计学意义。CTA、DSA在准确显示动脉瘤立体形态等方面占检出动脉瘤的百分比分别为77.9%与57.3%。结论 CTA与DSA在颅内动脉瘤检出率方面无显著差异,两种检查方法都因为各自既有某些长处可以互相补充检查信息,不应以一种方法作为绝对的"金标准"。CTA对于颅内动脉瘤立体形态的显示情况优于DSA,为选定治疗方案提供了重要依据,但对于颈内动脉海绵窦段动脉瘤应着重参考DSA,DSA在动脉瘤诊治过程中仍起重要作用。

自体血清培养人骨髓间充质干细胞及其向神经细胞分化

目的:目前多采用胎牛血清培养骨髓间充质干细胞,实验应用自体血清培养骨髓间充质干细胞并诱导其向神细胞分化,拟验证其可行性及并分析其可能的机制。方法:实验于2005-10/2006-08在同济医学院附属同济医院神经外科实验室完成。培养骨髓间充质干细胞所用骨髓来源为本院需行骨髓穿刺的健康成人(共3例,年龄26～44岁),本人及家属知情同意。梯度离心法分离成人骨髓间充质干细胞,并利用自体血清进行体外培养扩增。主要观察指标:采用相差显微镜观察细胞形态变化;透射电镜观察骨髓间充质干细胞的超微结构;流式细胞术鉴定细胞表面标记物;3～5代细胞利用生长因子和N2添加剂进行诱导分化,采用RT-PCR检测Netin和神经元特异性烯醇化酶mRNA在诱导前后的表达。结果:①细胞形态变化:利用自体血清培养的骨髓间充质干细胞主要呈长或宽扁的梭形,在体外传代扩增速度较快。②超微结构:电镜下细胞表面可见细胞核较大,不规则,核质比较小,胞质中有丰富的细胞器,可见缝隙连接。③细胞表面标记物鉴定:多数细胞为CD44、CD105阳性,CD34、CD45阴性。④Netin和神经元特异性烯醇化酶mRNA的表达:诱导后部分细胞呈神经元样改变,Nestin mRNA表达水平于3d达高峰,随后减少,神经元特异性烯醇化酶mRNA于5～7d达高峰,并可持续数日。结论:应用自体血清可成功培养骨髓间充质干细胞,并在体外条件下定向诱导分化为神经元样细胞。

新型大功率LED路灯设计与分析

随着大功率LED光源性能的不断提高,大功率LED路灯已经得到了广泛的应用。针对大功率LED路灯设计,提出适用于多芯片的新型二次光学系统,实现光学透镜模组化设计。利用微槽群阵列技术进行模组散热器设计,提高LED路灯的散热效率。通过测试配光曲线和温度等参数,分析LED路灯的性能。

经外侧裂-岛叶入路显微手术治疗高血压基底节区脑出血的临床研究

目的 探讨经外侧裂-岛叶入路显微手术治疗高血压基底节区脑出血的疗效.方法 对经外侧裂-岛叶入路显微手术治疗的36例高血压基底节区脑出血患者的临床资料进行回顾性分析.结果 术后24 h以内复查头颅cr,血肿清除≥90％者34例（94.44％,34/36）,血肿清除＜90％者2例（5.56％,2/36）.术后随访6个月,根据GOS评分：恢复良好12例,中残18例,重残4例,植物生存1例,死亡1例.结论 经外侧裂-岛叶入路显微手术是治疗基底节区脑出血安全有效的方法,具有对脑组织创伤小、血肿清除率高、神经功能恢复好的优点.

“交叉通讯”在人垂体生长激素腺瘤激素分泌中的调控作用研究

目的:探讨在人垂体生长激素腺瘤中,细胞内信号的交叉通讯对生长激素分泌的调控作用。方法:采用体外垂体生长激素(GH)腺瘤细胞培养方法,观察在生长激素释放激素(GHRH)和人工合成的GH释放肽(GHRP-6)刺激下,2种垂体腺瘤细胞内信号系统的交叉通讯在GH释放中的调控作用。结果:GHRH和GHRP-6对垂体腺瘤的GH分泌有协同刺激效应。cAMP、PKC在两种信号传导系统的交叉通讯中起着重要作用。结论:在垂体GH腺瘤的激素释放调控中,多种细胞内信号的“交叉通讯”有重要意义。

颅内动脉瘤破裂手术时机的探讨（附440例分析）

目的探讨颅内动脉瘤破裂的手术适宜时机。方法回顾性分析440例颅内动脉瘤破裂患者临床资料。按术前Hunt—Hess分级，分为A组（Hunt—HessⅠ～Ⅱ级，n=310）、B组（Hunt—HessⅢ级，n=74）和C组（Hunt—HessⅣ～Ⅴ级，n=56）；按手术时机分为早期手术组（≤3天，n=181）、间期手术组（4—10天，n=116）、晚期手术组（≥11天，n=143）。用格拉斯哥转归量表（GlasgowOutcomeScale，GOS）评价转归。结果A组和C组患者不同手术时机与预后转归比较无统计学差异，A组（x2=0．918，P=0．632），C组（x2=4．889，P=0．087）；B组患者早期手术良好率明显高于非早期手术（x2=6．161，P=0．046）。结论Hunt—HessⅠ～Ⅱ级患者各期手术均可以，Hunt—Hessm级患者宜早期手术，Hunt—HessⅣ～Ⅴ级患者虽总体预后不良仍应尽早手术。

岛叶病变的显微外科治疗

目的探讨显微手术切除岛叶病变的方法和效果。方法回顾性分析14例岛叶病变患者的临床资料。结果胶质瘤10例,海绵状血管瘤2例,上皮样囊肿1例,结核瘤1例。肿瘤全切除10例,近全切除3例,结核瘤1例予大部切除,无手术死亡。术后无失语,1例偏瘫。结论经翼点-岛叶入路应用显微外科技术是治疗岛叶病变的有效手段。