溶藻弧菌TssJ基因的原核表达及多克隆抗体制备

Tss J是溶藻弧菌Ⅵ型分泌系统(T6SS)的一个重要基因.为了制备Tss J基因的多克隆抗体,以溶藻弧菌HN08155菌株的DNA为模板,扩增Tss J基因后利用表达载体PET-32a(+)和大肠杆菌BL21(DE3)原核表达,分离纯化后免疫大鼠获得Tss J基因的多克隆抗体.结果显示,37℃、IPTG终浓度1 mmol·L^(-1)是较适宜的表达诱导条件,表达的融合蛋白是存在于细胞内的包涵体,与预期的分子量42 k D一致,并且免疫大鼠后血清的多克隆抗体效价很高,为1∶32 768.制备的溶藻弧菌Tss J高效价多克隆抗体有助于进一步开展Tss J的定位和功能研究.

华南地区海水养殖鱼类主要弧菌病原的分离与鉴定

对海南、广东、广西等华南地区的主要海水养殖系统的斜带石斑鱼、红鳍笛鲷、褐点石斑鱼和珍珠龙胆(棕点石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂)等多种海水鱼类的弧菌病开展了流行病学调查,从病鱼体内共分离获得弧菌63株,人工感染试验结果表明,其中4株为强毒株,17株为弱毒株,42株为无毒株.经鉴定,哈维氏弧菌有43株(19株毒力株)、溶藻弧菌7株(1株毒力株)、副溶血弧菌5株、轮虫弧菌2株(1株毒力株)、需钠弧菌1株、无法确定的弧菌属其他细菌5株.

应用于半导体激光器的双反馈可调频电流源的设计

本文通过借鉴传统的LD供电恒流源的设计方法,设计一种频率可调的电流源,独创性的通过电流反馈和光功率反馈两种反馈模式以达到恒定光功率输出的目的。经测试,本装置的输出光功率有较高的稳定度,实验结果证明通过光功率反馈模式得到的光功率输出稳定性要好于电流反馈模式。

企鹅珍珠贝游离有核珍珠培育技术

2007~2011年,借鉴马氏珠母贝游离有核珍珠植核方法,根据企鹅珍珠贝生理机能特性以及植核部位的组织构造特点,摸索出企鹅珍珠贝术前处理、栓口、植核施术、术后休养和育珠期管养等系统性的植核育珠技术。5年间,共植核企鹅珍珠贝245710个,植核贝经过60 d的休养,成活率为91.3%~96.0%,平均休养期成活率为94.0%;植核贝再经过16~22个月的育珠期后,成活率为90.3%~96.3%,平均育珠期成活率为94.3%;共收获游离有核珍珠69 158颗,成珠率为27.5%~33.8%,平均成珠率为30.7%,其中共收获商品珠54 825颗,商品珠率为68.5%~83.8%,平均商品珠率为79.3%。

基于波导多层存储的PMT输出信号的处理

波导多层存储是一种基于新原理的三维光存储新技术,它利用波导缺陷的光散射效应读出数据,实验采用光电倍增管(PMT)接收光盘信息坑的散射光强,因此如何对PMT的输出信号进行处理是波导多层存储须解决的关键技术之一。本文介绍了用来处理PMT输出信号的实验装置。实验结果表明该装置能够很好地对PMT的输出信号进行处理,利用该装置可以检测出有无信息坑时信号的变化及单个信息坑的散射光强,为波导多层存储的进一步研究打下了基础。

结核病疫苗研究进展及挑战

卡介苗是目前唯一应用于预防人类结核病的疫苗,但其保护效果备受争议,研究新型高效的结核病疫苗尤为重要。从安全性、经济成本及保护效果等方面考虑,多阶段抗原亚单位疫苗或多表位疫苗具有较好的应用前景。随着对结核分枝杆菌致病机制的深入了解以及疫苗研发技术的不断更新,结核病疫苗会有重大突破。本文论述结核病疫苗的类型及其特性,并针对结核病新型疫苗研究中抗原选择、动物模型选择、疫苗效果评价指标及人群特异性存在的问题和挑战进行讨论,旨在为新型结核病疫苗的研究提供参考。

结核分枝杆菌Rv2941蛋白抗原表位集中区免疫原性研究

目的分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p,诱导表达并纯化Rv2941p。将其与免疫佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和PolyI:C乳化后,皮下免疫BALB/c小鼠3次,每次免疫间隔10 d,末次免疫1周后处死小鼠,进行免疫效果评价。采用ELISA法检测免疫后小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度以及免疫后小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-4、IL-2、IL-6和IFN-γ的水平。同时,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞增殖情况以及胞内细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-4)表达水平。结果Rv2941p可溶性表达,并获得高纯度的蛋白。Rv2941p诱导产生了高水平的特异性抗体IgG,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。另外,Rv2941p提高了IgG2a/IgG1的比值。细胞因子检测结果显示,Rv2941p提高了IFN-γ和IL-6的分泌,与Ag85B组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。同时,Rv2941p可以促进CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的增殖分化,以及提高胞内IFN-γ和TNF-α的表达。结论Rv2941p可以刺激小鼠产生较高的体液和细胞免疫,尤其Th-1类细胞免疫,可以作为结核病疫苗候选抗原,为结核病新型疫苗的开发奠定了基础。

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白免疫小鼠效果初步评价

目的融合表达和纯化结核分枝杆菌(MTB)CFP10-ESAT6(CE),初步评价免疫效果。方法构建pET32a(+)-CE重组质粒,E.coli BL21(DE3)中融合表达,Ni-NTA层析纯化。用CE加铝佐剂,50μg CE/只/次,分3次免疫BALB/c小鼠。ELISA测定血清IgG抗体;ELISpot与Luminex检测细胞因子,进行MTB体外生长抑制试验。卡介苗(BCG)为阳性对照。结果CE免疫小鼠,能诱导产生高效价的IgG、IgG1和IgG2a,且IgG1(t=19.1,P<0.0001)和IgG2a(t=8.7,P<0.0001)抗体水平均高于BCG组。CE组与BCG组诱导产生的分泌IFN-γ的斑点形成细胞(SFC)数量差异无统计学意义(t=0.4,P>0.05),但诱导分泌IL-4的SFC数量高于BCG组(t=8.0,P<0.0001)。CE组诱导分泌GM-CSF(t=8.4,P<0.05)、IL-6(t=8.3,P<0.05)、IL-10(t=2.5,P<0.05)和IL-4(t=7.0,P<0.05)均高于BCG组,而CE组诱导分泌IFN-γ(t=1.4,P>0.05)、TNF-α(t=1.8,P>0.05)、IL-2(t=2.0,P>0.05)、IL-12(t=0.9,P>0.05)和IL-17(t=1.3,P>0.05)均与BCG组相似,差异无统计学意义。CE组小鼠脾细胞的MTB体外生长抑制结果与BCG组相似(t=0.8,P>0.05)。结论CE免疫小鼠可诱导较强的Th1与Th2混合型免疫反应,且有较强的体外抑制MTB生长的能力,表明CE具有良好的结核疫苗研制应用价值。

危重症患者行连续性血液净化的护理干预措施及实施效果研讨

研究危重症患者采取针对性护理干预时的价值。方法 2017年9月~2022年9月,选在我院接收的危重症患者80例,随机分为观察、对照组。观察组实行针对性护理干预,对照组采用一般护理,比较两组病患护理满意度、生存质量及临床指征状况。结果 观察组护理满意度优于对照组,对比有差异(P<0.05)。观察对照组护理前生活质量指标、临床指征差异不大(P>0.05),护理后对比差异明显,有统计学意义(P<0.05)。结论 相较于一般护理,对危重症患者实施针对性护理干预,患者认可程度较高,护理后临床指征象对平稳,有利于提升患者后续生活质量水平,值得临床推广应用。

论透析血管通路护理干预在维持血液净化肾衰竭患者中的应用效果

观察透析血管通路护理干预在维持血液净化肾衰竭患者临床中的应用。方法 选择200肾衰竭患者研究,均实施维持血液净化,研究时间2021年10月-2023年10月,随机分组,实验组经透析血管通路护理,对照组实施常规护理,比较自我效能感、护理满意度、置管使用时间、内瘘使用时间、血流量、并发症发生率。结果 自我效能指标两组比较无统计学意义,P>0.05;并发症指标、满意度指标、血液净化指标以及护理后的自我效能分数实验组优于对照组,组间对比有差异,统计学有意义,P<0.05。结论 为维持血液净化患者实施血管通路护理可减少并发症的发生,保证患者透析安全性,对于血流量增加以及置管时间延长具有良好的促进作用,同时提升患者的自我效能感。

活性雾离子对分枝杆菌的消毒效果评价

目的评价活性雾离子智能空气消毒机对分枝杆菌的灭菌效果,为分枝杆菌感染的有效控制提供新的技术。方法依据《消毒技术规范》(2002版)进行活性雾离子消毒效果评价试验。采用分枝杆菌评价代表菌株龟分枝杆菌脓肿亚种ATCC93326株,常规培养,制备108 cfu/mL的菌液,取10μL菌液滴加在布片及不锈钢片两种载体上,经活性雾离子智能空气消毒机喷雾消毒2、6、12、24 h后洗脱,洗脱液倍比稀释后,取100μL涂布于7H10+10%油酸–牛血清白蛋白–葡萄糖–过氧化氢酶(OADC)平板,培养4 d,菌落计数,计算杀灭率及杀灭对数值。结果消毒作用6 h时,活性雾离子对分枝杆菌的杀灭率达97.95%;延长消毒时间至12及24 h,杀灭率>99.99%,杀灭对数值>3.0。不同材质的载体效果有差异,对钢片上结核菌的杀灭效果略好于布片。结论人机共存型活性雾离子能有效杀灭分枝杆菌,活性雾离子智能空气消毒机适用于分枝杆菌的空气及物表消毒,有效控制分枝杆菌感染。

模拟表位型EB病毒感染诊断抗原的制备

目的利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒（epstein—Barr virus，EBV）感染的早期诊断，并初步评价其抗原性。方法将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3C2多肽序列用特定连接臂串联，密码子优化后全基因合成；将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中，在大肠埃希菌中进行表达，并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白；利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定，并建立EBV—IgM抗体检测捕获法ELISA技术，初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。结果所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2．8mg／ml，纯度为99．01％；Western blot实验发现，以anti-Trx单克隆抗体或EBV—IgM阳性血清作为第一抗体，在NC膜约26×10^3处都可以发现特异条带（与预期一致）；对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出，阳性血清样本OD值1．352（95％CI：1．233～1．489）与阴性血清样本OD值0．135（95％CI：0．113～0．159）分布区组明显（P〈0．05），其中灵敏度为98．0％，特异性为96．0％，一致性检验kappa值为0．940，一致性优异。结论原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原，偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中。

两种常见非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌基因同源抗原、B细胞抗原表位和抗体交叉反应研究

目的探讨我国常见两种非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌蛋白抗原的交叉免疫反应状况,为以非结核分枝杆菌研制新型结核疫苗提供参考依据。方法平均核酸一致性计算器计算胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和结核分枝杆菌的基因组同源性,OrthorFinder软件分析3种菌的同源基因,与结核分枝杆菌B细胞抗原表位编码基因进行比对。分别制备3种菌的灭活菌体抗原和全菌蛋白抗原,对新西兰大白兔进行皮下注射免疫。采用间接酶联免疫吸附试验技术,分别检测3种免疫兔血清抗体Ig G水平及交叉免疫的血清抗体Ig G水平。结果脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌与结核分枝杆菌同源基因分别为2350个和2740个,其同源基因中分别有479个和521个富含B细胞抗原表位。结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和脓肿分枝杆菌的蛋白抗原均能刺激兔产生较高水平的抗体滴度,分别达到1∶320000、1∶160000和1∶80000。胞内分枝杆菌和脓肿分枝杆菌免疫兔血清均可与结核分枝杆菌抗原产生高水平的交叉反应,抗体滴度分别达到1∶40000和1∶80000。结论胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌与结核分枝杆菌之间均存在高水平的抗体交叉免疫反应,提示上述非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌具有较多共同抗原,具有研制新型结核疫苗较好的潜在应用价值。

结核分枝杆菌多组分蛋白候选疫苗EPDPA015f和EPDPA015m的免疫作用初步评价

目的初步评价新型结核融合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015f和混合型多组分蛋白候选疫苗EPDPA015m的免疫原性和有效性, 为研制结核疫苗提供新的抗原组合。方法将构建和表达的EPDPA015f和EPDPA015m蛋白与铝佐剂混合, 采用皮下多点的方式对6周龄BALB/c小鼠进行3次免疫, 间隔为10 d, 每次50 μg/只。末次免疫10 d后采集血液和脾脏样本。采用酶联免疫吸附试验、多重微球技术、酶联免疫斑点法检测血清抗体滴度、细胞因子分泌水平;采用体外结核分枝杆菌生长抑制试验检测小鼠脾细胞体外抑制结核分枝杆菌生长的能力。多组间比较采用单因素方差分析, 两组间比较采用t检验。结果 EPDPA015f和EPDPA015m均可诱导产生多种高水平的细胞因子和较高滴度的IgG抗体。与佐剂组相比, EPDPA015f组诱导产生Th1(IL-2、TNF-α、IFN-γ)、Th2(IL-4、IL-6、IL-10)、Th17(IL-17)型细胞因子及其他促炎细胞因子(GM-CSF、IL-12)的差异有统计学意义(P均<0.05);EPDPA015f组诱导产生的IgG抗体滴度高达1∶4×10^(6)。体外结核分枝杆菌生长抑制试验结果显示, PBS组、佐剂组、EPDPA015f组和EPDPA015m组的菌落数(lgCFU)分别为3.46±0.11、3.51±0.06、2.98±0.09和3.19±0.08;其中EPDPA015f组的菌落数最少, 与其他组比较差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001和P<0.01)。结论 EPDPA015f引起较为全面且高水平的细胞免疫和体液免疫应答, 并表现出较优的体外分枝杆菌抑制能力, 具有作为预防型疫苗或加强型疫苗的潜力。

结核多组分重组蛋白疫苗EPRHP014的免疫原性和保护效果的初步评价

目的初步评价自主构建的结核多组分重组蛋白疫苗EPRHP014免疫原性和保护效果, 为研制结核新疫苗、有效防控结核病提供科学基础。方法选择结核分枝杆菌全长蛋白抗原3种(EsxH、Rv2628和HspX)和经表位预测和优化的表位优势蛋白抗原2种(nPPE18和nPstS1), 共5种组分构建蛋白抗原组合物EPRHP014, 包括融合表达纯化的多组分蛋白抗原(EPRHP014f)和分别表达纯化单个蛋白构成多组分混合蛋白抗原(EPRHP014m)。EPRHP014f和EPRHP014m分别辅以铝佐剂制备多组分蛋白疫苗, 采用卡介苗(BCG)作对照。皮下注射免疫BALB/c小鼠后, 采用ELISA法检测血清特异性抗体效价, 采用ELISpot和Luminex技术检测多种细胞因子分泌情况, 采用结核分枝杆菌体外生长抑制试验观察其免疫保护作用。结果采用t检验或秩和检验进行统计分析。结果 EPRHP014m和EPRHP014f免疫小鼠后均能诱导产生高效价的IgG抗体及其亚型IgG1和IgG2a, 抗体效价与BCG免疫组小鼠差异无统计学意义(P>0.05)。EPRHP014f组诱导产生的分泌IFN-γ和IL-4的斑点形成细胞(SFC)数量均高于EPRHP014m组和BCG组(P<0.05), 而EPRHP014m组和BCG组的IFN-γ和IL-4的SFC数量差异无统计学意义(P>0.05)。EPRHP014m组诱导分泌的GM-CSF、IL-12p70均高于BCG组(P<0.05), 而IL-6和IL-10分泌水平与BCG组的差异无统计学意义(P>0.05);EPRHP014f组和BCG组的IL-6、IL-10、IL-12和GM-CSF分泌水平差异无统计学意义(P>0.05)。EPRHP014m组、EPRHP014f组和BCG组具有明显的体外抑菌作用, 差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EPRHP014f和EPRHP014m免疫后均能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答, 且有较强的体外抑制结核分枝杆菌生长的能力, 显示抗原组合物EPRHP014具有良好的结核疫苗研发和应用价值。