细胞因子诱导的杀伤细胞体外逆转K562/ADR细胞株多药耐药性观察

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外逆转K562/ADR细胞株多药耐药(MDR)的可行性。方法:在含细胞因子(人重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、人重组白细胞介素-1、人重组白细胞介素-4和人重组肿瘤坏死因子-α)的RPMI1640完全培养液中诱导K562细胞株、K562/ADR耐药细胞株分化成树突状细胞(DC)。正常人外周血单个核细胞(PBMC)在上述细胞因子诱导下培养成CIK,与成熟的DC共培养成CIK+K562/ADR-DC。应用流式细胞术检测CIK及CIK+K562/ADR-DC的细胞表型。MTT法测定CIK和K562/ADR-DC对K562/ADR的细胞毒作用,流式细胞仪检测CIK组和CIK+K562/ADR-DC组细胞中糖蛋白(P-gp)、阿霉素(ADR)的含量,RT-PCR检测mdr-1基因表达。结果:CIK、CIK+K562/ADR-DC细胞经流式细胞仪检测,均具有自己独特的表型。PBMC诱导培养4d后,CIK开始增殖,第7～9天细胞数量明显增多。K562/ADR来源的DC和CIK共培养后,细胞增殖速度明显加快,9d以后与CIK相比2组细胞的增殖速度呈现明显差异。CIK+K562/ADR-DC细胞对K562/ADR的细胞毒作用在效靶比20:1范围内明显高于CIK细胞(P<0.05)。CIK组和CIK+K562/ADR-DC组细胞的P-gp和Mdr-1与对照组相比显著降低(P<0.05),ADR表达明显升高。结论:CIK+K562/ADR-DC对高表达P-gp的K562/ADR耐药细胞株表现出了特异性细胞毒作用,有效提高了细胞内ADR的含量,下调了P-gp蛋白和mdr-1基因的表达,从而使免疫效应细胞体外逆转MDR的效果得以显现。

CIK细胞体外逆转多药耐药性的研究

目的:研究CIK细胞体外逆转多药耐药(multidrug resistance,MDR)可行性。方法:用人外周血分离出的单个核细胞,在不同细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)及树突状细胞(DC),然后将其与成熟DC进行共培养,作为效应细胞,以K562敏感株与耐药细胞株为靶细胞进行体外逆转研究。流式细胞术检测靶细胞的P-gp表达及细胞内的ADR相对含量,MTT法测定其细胞毒作用,RT-PCR检测mdr-1基因耐药性逆转表达状况。结果:K562/ADR耐药细胞株ADR含量经效应细胞细胞作用后,细胞内的ADR含量分别提高了13.80%、39.50%,(P<0.01);,P-gp分别降低12.00%、42.69%,(P<0.01),mdr-1基因表达呈下调趋势,效应细胞对靶细胞的细胞毒作用分别达45.8%、78.9%,(P<0.01)。结论:CIK+K562/ADR-DC对P-gp高表达K562/ADR耐药细胞株具有特异性的细胞毒作用,有效提高了细胞内的ADR含量,下调了P-gp、mdr-1表达,使免疫效应细胞体外逆转多药耐药的效果得以显现。

DNA合成抑制实验检测烹调油烟对人羊膜成纤维细胞WISH的致突变性研究

目的与方法 :本文应用DNA合成抑制 (DSI)实验对居民家庭烹调油烟进行了致突变性研究。结果 :实验结果表明 ,不同浓度的烹调油烟凝聚物均可见到DNA合成抑制 ,具有明显的剂量—效应关系。结论 :实验证实 。

细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的研究

目的:探讨细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的可能性及其机制。方法:以人外周血分离单个核细胞后进行体外诱导、扩增作为效应细胞,联合不同浓度的阿霉素与其耐药靶细胞K562/ADR进行共培养,经四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞仪检测细胞内阿霉素相对含量和P糖蛋白表达水平;RT-PCR检测mdr-1基因mRNA表达。结果:未经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理时,阿霉素对K562和K562/ADR的IC50分别为(0.68±0.04)μmol/L和(66.23±4.38)μmol/L;K562/ADR对阿霉素的耐药倍数为97.43倍;经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理48 h(效靶比1∶5、阿霉素1.1μmol/L)后,IC50为(32.15±0.79)μmol/L,联合逆转倍数为2.06倍,细胞内的阿霉素相对含量增加1.83倍;P糖蛋白表达下调36.7%,mdr-1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。结论:细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素可提高耐药细胞K562/ADR胞内的阿霉素浓度,下调mdr-1基因及P糖蛋白的表达,提高阿霉素对耐药细胞K562/ADR的敏感性,使细胞因子诱导杀伤联合阿霉素对多药耐药的逆转效果得以显现。

人红白血病细胞来源的DC对细胞因子诱导的杀伤细胞逆转多药耐药的影响

目的:探讨人红白血病细胞(K562/ADR)来源的DC与CIK细胞体外共培养后对多药耐药逆转影响。方法:K562敏感株和K562/ADR耐药细胞株,在含细胞因子GM-CSF(1000u/mL)、IL-4(500u/mL)和TNF-α(100ng/mL)的RPMI1640完全培养液中诱导分化成DC。同时将PBMC在细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),与成熟DC进行共培养。采用MTT法测定免疫效应细胞对靶细胞杀伤率、耐药性逆转。流式细胞术检测靶细胞的Pgp表达及细胞内的ADR浓度,RT-PCR检测MDR1基因表达状况。结果:K562/ADR来源的DC与CIK细胞共培养后,细胞增殖速度明显加快,17d以后两者的增殖倍数呈现明显差异。效应细胞对靶细胞的生长抑制率高达78.9%,与单纯CIK细胞相比较显示出高特异免疫杀伤作用。结论:CIK+K562/ADR-DC对P-gp高表达K562/ADR耐药细胞株具有特异性的细胞毒作用,有效提高了细胞内的ADR含量,下调了P-gp、mdr-1表达,从而使免疫效应细胞体外逆转多药耐药的效果得以显现。

恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr-1基因表达在原发耐药与继发耐药中的作用研究

目的 :mdr 1基因是肿瘤多药耐药现象中的主要表型 ,探讨mdr 1基因原发耐药与继发耐药表达状况 ,预期指导临床个体化疗。方法 :应用RT PCR方法对 5 1例恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞mdr 1基因进行定量体外诱导后检测其表达水平。结果 :5 1例外周血淋巴细胞中原发性阴性表达 34例占 6 6 % ,继发性阴性表达仅 5例占 9.8% ,外周血中的原发mdr 1阴性表达与继发性表达比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。在低阳性组 ,原发性表达 11例占 2 1% ,继发性表达 31例占 6 0 .7% (P <0 .0 1)。高阳性组原发性表达 6例占 11.8% ,继发性表达 15例占 2 9% (P <0 .0 1)。继发性表达率明显高于原发性。 结论 :RT PCR检测人外周血淋巴细胞mdr 1基因表达取材方便 ,结果可靠 ,提示不同程度的mdr 1基因表达水平可以客观地反映不同个体的药物耐受情况 .

腹腔镜、传统开腹和小切口胆囊切除术的效果比较

【目的】比较腹腔镜胆囊切除术(LC)、传统开腹胆囊切除术(OC)和小切口胆囊切除术(MC)的手术效果。【方法】1 276例患者接受胆囊切除,其中接受LC者952例,OC者210例,MC者114例。分析三种不同手术方法的手术时间,住院时间,术后并发症发生率以及住院费用情况。【结果】LC组中有37例患者(3.9%)需要中转为OC;并发症发生情况为:LC组36例,1例死亡;OC组8例;MC组1例。OC组和LC组(3.8%)的并发症发生率相近(P>0.05),但是在MC组中并发症发生率较低(0.8%;P<0.001)。MC组的平均手术时间(从切开皮肤至关腹)明显短于LC组[(48.2±10.6)min vs(68.0±6.3)min,P<0.001]。LC组的术后住院时间短于MC组[(3.6±1.6)d vs(3.8±1.8)d],但是没有显著性差异(P>0.05)。OC组的术后住院时间为6.2±2.4d,明显长于LC和MC组[(3.6±1.6)d和(3.8±1.8)d,P<0.05]。LC组的手术费用明显高于OC组和MC组(P<0.05);OC组平均住院时间和病房住院费用明显高于MC组(P<0.05)。【结论】MC术式有着与LC相近的优势,并且费用较低,技术设备要求低,更适合广泛推广。

腹腔镜辅助远端胃切除胃癌根治术的临床研究

【目的】探讨腹腔镜辅助远端胃切除胃癌根治术的安全可行性及肿瘤根治性。【方法】2004年12月至2007年12月行腹腔镜辅助远端胃切除胃癌根治术38例。通过手术相关指标、病理诊断及术后恢复指标对手术结果进行评价分析。【结果】38例除1例因术中发现肿瘤侵犯胰腺头部而中转开腹外,余37例均顺利完成腹腔镜辅助远端胃切除胃癌根治手术,术中平均手术时间(295.39±50.38)min,手术切口平均长度(5.6±0.72)cm,术中平均出血量(148.55±96.45)mL;术后胃肠道功能恢复时间平均(3.68±1.21)d,术后平均(3.82±1.43)d开始进食流质。【结论】腹腔镜胃癌根治术是安全可行的,能达到肿瘤根治的要求,具有创伤小、出血少、术后恢复快等优点,可应用于早期胃癌及部分病灶局限、无远处转移的进展期胃癌的手术治疗。

CMV感染监测在同种异基因造血干细胞移植中的应用

目的探讨不同方法CMV监测在同种异基因造血干细胞移植中应用的可行性。方法应用荧光定量PCR(FQ-PCR)和酶联免疫(ELISA)试剂盒分别检测13名allo-HSCT受者、170份标本的血浆DNA负荷量和血清IgM抗体。同时应用流式细胞术(FCM)检测94份标本白细胞pp65抗原。结果FQ-PCR、FCM、ELISA检出率分别为:35.51%、30.85%、13.08%。FQ-PCR与FCM方法对CMV感染的阳性检出率差别无统计学意义(P>0.05),ELISA的阳性检出率明显低于FQ-PCR和FCM,其差别具有统计学意义(P<0.05)。结论FCM检测pp65抗原和FQ-PCR检测DNA负荷量可用于allo-HSCT后CMV感染的早期诊断。

公立医院应姓公

漫漫公立医院路，公益紧相随。医院一词，始见《汉书》：“民疾疫者，舍空邸第，为置医院”。意指为公益救治民疾，舍空官府贵宅也要置建医院。可见，坚持公益性，把维护人民群众健康权放在第一位，是公立医院悬壶济世的本质属性和神圣使命，也是治国安邦的最大民生工程。2009年底，我国有公立医院14086家，其医卫人员346万人，年供医疗服务17．9亿人次，占全国的71％、91％、90％，成为群众看病就医的核心战场和医改的领军旗舰，其公益性关系缓解群众“看病难、看病贵”问题的整体进程和历史走向，决定我国医改的生死存亡。全面落实党的十七大提出“坚持公立医院的公益性质”战略目标，重在把准“三公”。

人同种异体脾LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤52例临床观察

本文在人胎脾细胞ＬＡＫ活性诱导，增殖反应能力的基础上，探讨了人胎脾ＬＡＫ细胞制备，质量控制及临床应用的安全性、可靠性及疗效。共治疗５２例晚期恶性肿瘤病人。结果显示：全部病人都有不同程度地改善了一般症状和体征，提高了生活质量，对减轻癌性疼痛和消除癌性胸腹水效果明显。５２例患者中，完全缓解６例（１１％），部分缓解１４例（２７％）．作者认为：该疗法与国内同类方法相比，以人胎脾细胞作为ＬＡＫ前体细胞，取代了传统的自体或异体外周血淋巴细胞，ＬＡＫ细胞获取量大，治疗效果肯定，副作用轻，具有一定的应用价值。

人同种异体脾LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床研究

在人胎脾细胞ＬＡＫ活性诱导，增殖反应能力的基础上，探讨了人胎脾ＬＡＫ细胞制备，质量控制及临床应用的安全性，可靠性及疗效。共治疗５２例晚期恶性肿瘤病人。结果显示：全部病人都有不同程度地改善了一般症状和体征，提高了生活质量，对减轻癌性疼痛和消除癌性胸腹水效果明显。５２例患者中，ＣＲ６例（１１％），ＰＲ１４例（２７％）。以人胎脾细胞作为ＬＡＫ前体细胞，取代了传统的自体或异体外周血淋巴细胞，ＬＡＫ细胞获取量大，治疗效果肯定，副作用轻，具有一定的应用价值。

异基因造血干细胞移植后微小残留病灶的动态监测

目的 探讨bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病 (CML)治疗效果及微小残留病灶监测方面的价值。方法 应用RT -nested -PCR方法定期检测异基因造血干细胞移植 (allo -HSCT)治疗慢性粒细胞性白血病患者前后融合基因表达情况。结果 异基因造血干细胞移植患者在移植后 1个月到 2个月bcr/abl融合基因转阴率为 76 % ,10 0天转阴率达 88%。结论 RT -nestedPCR方法检测bcr/abl融合基因可以作为临床诊断、判定预后的指标 。

应用FACS检测CIK的抗肿瘤活性

目的探讨体外CIK细胞(cytokine-induced killer)对肿瘤细胞的细胞毒作用。方法从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFNγ、CD3McAb、IL-2诱导、培养,获得CIK细胞。FACS检测CIK细胞的表型;用CFSE标记靶细胞以区分效应细胞,再以PI染色,FACS检测靶细胞的死亡率。结果CIK细胞高度表达CD3+、CD8+、CD3+CD8+、CD3+CD56+,依次为89.33%、46.26%、58.98%、30.83%。CIK对NK敏感的K562及不敏感HL60、Hela均表现出较强杀伤活性。结论细胞因子IFNγ、CD3McAb、IL-2体外诱导的单核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性及非MHC限制性。

公立医院应姓“公”

坚持公益性．把维护人民群众健康权放在第一位，是公立医院悬壶济世的本质属性和神圣使命．也是治国安邦的最大民生工程。2009年底，我国有公医14086家，其医卫人员346万人．年供医疗服务I79亿人次．占全国的7I％、91％、90％．成为群众看病就医的核心战场和医改的领军旗舰．其公益性关系缓解群众“看病难、看病贵”问题的整体进程，决定我国医改的成败。

参麦注射液对慢性缺氧大鼠膈肌细胞凋亡的影响

目的观察参麦注射液(SMI)对慢性缺氧大鼠膈肌超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondisldehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)水平及膈肌细胞凋亡的影响。方法将健康雄性Wistar大鼠18只随机分为3组各6只,正常对照组正常喂养,以制备慢性缺氧模型;慢性低氧组将大鼠置于有机玻璃低氧箱内喂养;参麦注射液治疗组采用同样方法制作模型,每天缺氧前腹腔注射参麦注射液,2 mL.d-1。7 d后采用分光光度法测定各组大鼠SOD、MDA和NO,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果慢性缺氧大鼠膈肌SOD水平下降,MDA与NO水平升高;同时慢性缺氧细胞凋亡百分数(凋亡指数)升高。参麦注射液能显著对抗缺氧时SOD水平下降、MDA和NO水平升高;同时可以抑制缺氧引起的凋亡指数增加。结论参麦注射液可能通过抑制自由基产生而对抗慢性缺氧时的细胞凋亡。

宫颈癌组织中Survivin和Caspase-3蛋白的表达

目的:探讨宫颈癌组织中Survivin、Caspase-3蛋白表达的变化。方法:用免疫组织化学SP法检测42例宫颈癌、13例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和8例正常宫颈组织中Survivin、Caspase-3蛋白的表达。结果:正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率依次增高(P<0.05),Caspase-3蛋白阳性表达率依次降低(P<0.05)。宫颈癌组织中Survivin的表达与病理分级及淋巴结转移有关,与临床分期及组织学类型无关。宫颈癌组织中Survivin的表达与Caspase-3相关(P=0.0197)。结论:Survivin可能通过阻抑Caspase-3的表达在宫颈癌发生过程中发挥重要作用。

宫颈癌组织中Survivin、Fas与FasL蛋白的表达

目的检测宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织中Survivin、Fas及FasL蛋白的表达。方法采用免疫组化法检测8例正常宫颈组织、13例不典型增生(CIN)组织和36例SCC组织中Survivin、Fas与FasL蛋白的表达。结果正常宫颈组织Survivin蛋白的阳性表达率为0.00%,CIN为53.64%,SCC为94.44%,3组间相比,差异均有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组织Fas蛋白的阳性表达率(87.50%)与CIN(46.15%)和SCC(44.44%)相比差异均有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组织FasL蛋白阳性表达率(25.00%)低于CIN(61.53%)和SCC(55.56%)组织(P<0.05)。结论在宫颈细胞的恶变和进展过程中,失控的Fas与FasL系统和与其相关的Survivin的表达对细胞逃逸凋亡起重要作用。