创新研究群体:宁宜宝 王琴 赵耘 宋立 沈青春 王在时 李慧姣 支海兵 蒋玉文 谷红 黄耀凌 研究方向:重大猪病的监测与防制

研究群体的构成 1.研究方向 中国兽医药品监察所在重大猪病研究方面已有近50年的历史,先后在猪瘟、猪喘气病、猪丹毒、猪肺疫、仔猪副伤寒、猪大肠杆菌病、猪细小病毒病和猪布氏杆菌病等方面都取得了重大成果。特别是在猪瘟和猪喘气病的研究方面一直处于国际领先水平。

卷球鼠妇的生物学特性及防治

卷球鼠妇Armadillidium vulgare(Latreille),属甲壳纲Crustacea,等足目Isopoda,鼠妇科Armadillidiidae,是我国新发生的一种有害动物。在温室内严重为害黄瓜、番茄等蔬菜幼苗。经饲养观察,两年发生1代,以成体和幼体在土下越冬,每年4～5月是繁殖为害盛期,7月以后陆续入土越冬。用2.5％溴氰菊酯乳油或20％氰戊菊酯乳油0.4～0.8ml/m^2;50％敌敌畏乳油或25％辛硫磷微胶囊2～4ml/m^2,混合田土(0.4kg/m^2)撒布地面均有良好的防治效果。

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅰ、培养基配方的选择、产毒素试验及疫苗的制备和检验

研制出一种适用于羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）和肠毒血症灭活疫苗生产的复合培养基。该培养基配方简单，配制方便，省时省力，不需要肝和肉，原材料来源广泛，若用该培养基替代现用的培养基，可大大地降低这类疫苗的生产成本。经过产毒素试验和最适培养条件的试验，证明该培养基替代现用培养基生产疫苗是可行的。用该培养基在实验室制备的疫苗，经效力和安全性检验，均达到了《规程》的标准。

霍乱毒素B亚单位基因的克隆及其核苷酸序列分析

利用 PCR技术从含有霍乱毒素 B亚单位 ( CTB)基因的质粒 p UCT1中扩增出不包括信号肽的 3 0 9bp的 CTB全基因 ,并通过点突变技术消除了 CTB阅读框内的终止密码子 ( TAA→GAA) ,以便于在 CTB基因的下游融合其他的外源基因。用限制性内切酶 Bam H 和 Eco R 对 PCR产物进行双酶切 ,以 T4DNA连接酶将其定向连接于经同样酶切处理的质粒 p ET-2 8b( +)的多克隆位点上 ,构建成重组质粒 p ECTB,转化至BL2 1 ( DE3 )中。经 Bam H 和 Eco R 双酶切分析和 PCR扩增检测 ,证明重组质粒 p ECTB中含有 CTB基因。核苷酸序列分析表明 ,克隆的

美洲斑潜蝇幼虫空间分布型和田间抽样技术

通过田间调查和计算，明确了美洲斑潜蝇幼虫呈聚集分布，且以负二项分布为主，理论抽样数当t＝1．00，D＝0．2时，n＝26．08／X＋16．12，如果防治指标定为10头／株，则最大抽样数为19株，序贯抽样的累积幼虫数量界限为．田间随机取样以平行线和Z字形为最佳。

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅲ、复合培养基制的疫苗保存期试验

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅲ、复合培养基制的疫苗保存期试验蒋玉文，屠伟英，赵代民（中国兽药监察所）疫苗的保存期是质量的重要指标之一，我国目前生产使用的羊块疫、猝狙（或羔羊痢疾）、肠毒血症灭活疫苗（简称三联或四防苗）的保...

CTB-CPA融合基因构建、表达及其产物的免疫原性

构建成含有编码霍乱毒素B亚单位 (CTB)和产气荚膜梭菌α毒素 (CPA)第 70～ 370位氨基酸的融合基因CTB CPA ,并在大肠杆菌中获得表达。经限制性内切酶鉴定和核苷酸序列分析表明 ,CPA基因在重组质粒中与CTB基因的连接向位是正确的 ,位于CTB基因的下游并与CTB基因处于同一阅读框架。重组菌株BL2 1(DE3) (pECTB CPA)经IPTG诱导后 ,其表达产物经SDS PAGE和Western blot检测表明 ,重组菌株可以表达CTB CPA融合蛋白。表达的产物以包涵体的形式存在 ,可分别被抗CT和A型产气荚膜梭菌抗毒素识别 ,表达量占菌体总蛋白的 2 2 7%。用表达产物免疫小鼠后 ,所产生的对A型产气荚膜梭菌毒素攻击的免疫保护力高于用单独的A型产气荚膜梭菌类毒素免疫的小鼠所产生的免疫力 ,证明所表达的融合蛋白中CTB起到免疫佐剂的作用 。

抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的研制和部分特性鉴定

小鼠SP2/0骨髓瘤细胞和用产气荚膜梭菌ε类毒素免疫BALB/C鼠的脾细胞,以PEG为融合剂进行融合,伙得分泌抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株13株。经鉴定,杂交瘤所分泌的单克隆抗体在ELISA中均特异地与产气荚膜梭菌ε毒素反应,而不与α和β毒素反应。13株单克隆抗体均为IgG_1亚类,经毒素抗毒素中和试验 测定,13株单克隆抗体中,12株具有中和ε毒素的活性。

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅱ、复合培养基制的疫苗免疫期试验

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅱ、复合培养基制的疫苗免疫期试验蒋玉文，屠伟英，赵代民（中国兽药监察所）陈宝柱，许燕辉（内蒙古自治区兽医站）用复合培养基制备的三联或四防苗，免疫动物后其免疫持续期能否达到原菌苗的水平，这是确定...

产气荚膜梭菌α毒素研究进展

α毒素是产气荚膜梭菌的主要毒素和致病因子之一。本文综述了产气荚膜梭菌 α毒素的检测、基因的克隆、表达和调控以及毒素的结构与功能等方面的研究进展。

兽用病毒性基因重组疫苗的研究进展

1796年,EdwardJenner用感染牛痘病毒的母牛病料组织第一个制备了天花疫苗,但直到19世纪40年代中期,Negri发明了在牛和绵羊皮肤上制造天花疫苗的技术之后,疫苗才逐步推广。在20世纪50年代中期,采用鸡胚和组织培养细胞来生产病毒疫苗,直到70年代,重组DNA技术的发展对疫苗生...

应用杂交瘤技术研制产气荚膜梭菌ε抗毒素国际标准参考品的初步试验

测定了分泌抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ε２－７在体内产生抗体的稳定性，并用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠小批量地制备了三批抗ε毒素单克隆抗体的腹水制剂。用经国际标准ε抗毒素标定的ε毒素分别以Ｌ＋、Ｌ＋／５和Ｌ＋／１０法测定了这三批腹水抗体制剂所含的抗毒素国际单位。由于腹水抗体效价太低，Ｌ＋法未能测出结果。Ｌ＋／５法测定的每毫升腹水抗体所含国际单位分别为Ｎｏｌ２．９－３．３ＩＵ，Ｎｏ２３．３－６．７ＩＵ，Ｎｏ３３．３－４．０ＩＵ，Ｌ＋／ｌ０法测定的每毫升腹水抗体所含的国际单位分别为Ｎｏｌ７．１４－１０ＩＵ，Ｎｏ２５－８．３ＩＵ，Ｎｏ３８．３－１．２５ＩＵ。其中Ｎｏｌ和Ｎｏ３批腹水以Ｌ＋／５测定的结果较为稳定，但也是一个范围值，能否作为国际标准品的试用品有待进一步的试验。

霍乱毒素B亚单位免疫佐剂的研究进展

研究表明霍乱毒素B亚单位 (CTB)是一种良好的蛋白抗原载体 ,具有较强的免疫佐剂活性。本文对纯化CTB、重组CTB和CTB与特异性抗原融合蛋白中的CTB的佐剂活性的研究进展以及不同的CTB使用剂量、使用方式和不同免疫途径对其佐剂活性的影响进行了综述 。

大型集中式光伏电站效率测试及提效对策研究

随着光伏电站的投产运行,光伏发电量的大小直接影响电站效益,如何科学的对光伏电站效率进行测试、分析与评价,提高电站发电效率,显得尤为重要。通过调研200 MW集中式光伏电站运行情况,研究光伏电站系统能效测试技术,制定电站测试项目、测试要求、抽样原则,开展光伏电站现场测试,并对电站系统效率、组件串联失配率、组串并联失配率、逆变器转换效率、组件衰减率、洁净度对光伏板功率影响度、倾角与辐照度测试结果进行分析,从减少弃光率、组件清洗、组件倾角调整以及运维管理水平等方面,提出针对性的提效对策,在提高电站系统效率的同时,进一步提升电站效益。

开采深度对低凹陷露天矿装载扬尘运移规律和质量浓度分布特征的影响分析

为减少低凹陷露天矿装载扬尘对作业人员职业健康和外部环境污染的不利影响,依据气-固两相流理论,采用Fluent数值模拟方法,对不同开采深度条件下的低凹陷露天矿采装工作面装载扬尘的运移规律和质量浓度分布特征进行研究。研究结果表明:开采深度对装载扬尘扩散方式和呼吸带高度处装载扬尘质量浓度的影响显著;当开采深度H=0 m时,受矿车的阻挡作用发生方柱扰流,装载扬尘颗粒逸出车厢后,沿X轴方向线性扩散,扩散距离随扩散时间延长而增大;当开采深度H>0 m时,采场风流在台阶处发生流动分离,形成与开采深度同高的风流漩涡,装载扬尘颗粒逸出车厢后,随着大结构漩涡向四周扩散;随着开采深度增加,装载扬尘颗粒沿X轴扩散距离逐渐减小,沿Z轴运移扩散距离增大,矿车下风向呼吸带高度处装载扬尘质量浓度超标影响范围减小,装载扬尘在呼吸带高度上的质量浓度随扩散时间增加而逐渐降低,并在t=100 s时降低至职业接触限值8 mg/m3以下。本文研究为合理确定装载扬尘的污染影响范围和制定有效的装载扬尘治理措施提供决策参考。

布氏杆菌病疫苗的应用和研究现状

布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种重要的人兽共患病。布氏杆菌具有宿主广泛、传染性强以及感染后根治困难等特点,对畜牧业和人类健康均构成严重威胁,疫苗免疫是预防和控制布氏杆菌病的主要措施。迄今国内外已有多个弱毒活疫苗在使用,但均存在一定的缺陷,因此研究更理想的疫苗一直是控制布氏杆菌病的重点。目前除了常规诱变筛选新的弱毒株外,人们正通过基因工程技术构建重组弱毒疫苗、DNA疫苗以及亚单位疫苗。本文简述了布氏杆菌病疫苗的应用及新型疫苗的研究现状。

布鲁氏菌S2 WboA基因缺失株的构建及免疫效果

【目的】WboA基因编码光滑型布鲁氏菌脂多糖(LPS)O-侧链合成必须的糖基转移酶,该基因的缺失或破坏会影响布鲁氏菌光滑型表型的形成。本研究拟构建WboA基因缺失的重组粗糙型布鲁氏菌,以使布鲁氏菌弱毒疫苗与野毒株布鲁氏菌感染相区分。【方法】以猪源光滑型布鲁氏菌S2株为研究对象,通过同源重组将氯霉素抗性基因(Cmr)完全替代S2株的WboA基因,获得重组粗糙型布鲁氏菌rS2-WboA株。【结果】rS2-WboA株在适宜的培养基(TSA)上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×107 CFU rS2-WboA免疫Balb/c小鼠和豚鼠,1个月后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×1011 CFU rS2-WboA菌攻毒Balb/c小鼠后,不会引起死亡,并且能抵抗200 CFU强毒M28的攻击。小鼠试验显示了rS2-WboA与原始株S2相似的保护性和更高的安全性,其保护性也略高于另一重组株rS2-WbkC。【结论】WboA可作为构建重组粗糙型布鲁氏菌疫苗株缺失的靶基因。

布鲁菌种属鉴定多重PCR方法的建立及初步应用

用BCSP31作为布鲁菌属特异性基因,以IS711基因拷贝数差异作为布鲁菌种间特异性标志,建立了布鲁菌种属特异性的多重PCR鉴定方法。用建立的多重PCR方法对11株(牛种A19,A544,A387;羊种M111,M28,M16;犬种RM6/66;绵羊种63/290;猪种S2,rS2,S1330)不同种来源的布鲁菌菌体和基因组进行鉴定,结果牛种菌能扩增大小分别为494,223,178bp3条带,羊种菌能扩增出大小分别为733,223,178bp3条带,犬种菌能扩增出大小分别为223,178bp2条带,绵羊种菌能扩增出大小分别为976,223,178bp3条带,猪种菌能扩增出大小分别为285,223,178bp3条带,均与预期一致;而作为对照的大肠杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、流产沙门菌和都柏林沙门菌,均未扩增出任何条带。结果表明,本研究所建立的方法具有良好的特异性,能够区分不同种源的布鲁菌,可用于布鲁菌种属的快速鉴定和流行病学调查。

带有氯霉素抗性基因标记的重组布氏杆菌S2的构建及其生物学特性

无法区分免疫接种和自然感染是限制布氏杆菌疫苗应用的主要原因。本研究通过基因同源重组技术,用氯霉素抗性基因(Cmr)替代布氏杆菌弱毒S2株的WbkC基因,筛选获得重组布氏杆菌rS2-WbkC株。试验发现,重组菌rS2-WbkC由原先的光滑型转变成粗糙型。rS2-WbkC在TSA培养基上传25代后仍能稳定表达氯霉素抗性蛋白。小鼠动物试验模型表明,rS2-WbkC与S2有相似的保护性,但rS2比S2具有更高的安全性。rS2-WbkC免疫小鼠后,其抗血清可通过平板凝集试验与S2免疫的血清相区分。本研究为布氏杆菌标记疫苗的研制提供了技术平台。