缺血性脑卒中新型标志物的研究现状与临床应用

缺血性卒中(ischemic stroke,IS)是一种多因素、异质性的神经系统疾病,病死率和复发率高,严重威胁人类生命健康。目前IS确诊主要依赖于影像学检查,缺乏有效用于临床实践的生物学标志物,早期预防、诊断和有效治疗仍然是IS诊治面临的主要挑战。随着蛋白质组学、代谢组学及表观遗传学研究的深入,目前已发现多种血清标志物、蛋白质、代谢相关分子、非编码RNA、DNA甲基化分子等具有IS早期诊断和预后评估的潜能。该文旨在总结和分析近年来新发现的IS新型诊疗标志物的研究现状及检测技术进展,以期促进具有临床应用价值的IS新型标志物的应用研究,推动IS的精准诊疗。

水环境治理河长制实施机制探讨

河长制作为一项水环境治理制度业已定型。为进一步推动河长制从“有名”到“有实”,必须深入机制层面,强化河长制的实施机制,包括以属地负责制和目标责任制为主体的核心机制,以及以统筹协调、考核激励、公众参与、司法协作等为辅助的配套机制,实现其从制度到机制的转化。具体而言,应当进一步压实党政领导治水责任以贯彻属地负责制,科学设定治水目标并加强督察考核以落实目标责任制。同时,应充分发挥河长统筹协调的作用,全力整合“条”“块”资源,强化考核激励效用,加强公众参与同政府主导的有效联结,将司法协作升级为多元主体立体式网状协作。

标准化赋能环保设施向公众开放

环保设施和城市污水垃圾处理设施是改善环境质量的重要民生工程。2017年,环境保护部(现生态环境部)、住房城乡建设部启动了环保设施和城市污水垃圾处理设施向公众开放工作,并陆续发布指导意见和工作指南。2022年,环保设施向公众开放小程序上线,增加了线上预约和用户参与的功能。七年来,环保设施向公众开放工作取得了长足进步,截至目前,全国已有2101家企业(单位)向公众开放,形成了宝贵的经验。

高低塔斜拉桥钢混结合段现场散拼工艺研究

钢混结合段是混凝土主梁过渡到钢箱梁的重要部位,其重量大,整体尺寸大,整体运输和吊装往往会受到周边环境的限制。本文以汉巴南铁路嘉陵江特大桥钢混结合段安装为研究对象,采用在桥位搭设钢管支架,在支架上制作胎架,将钢混结合段板单元运输到桥位,采用塔吊进行吊装,现场散拼施工工艺。该工艺完成的钢混结合段,各项指标满足规范和设计要求,具有较好的推广价值。

紫外线辐照聚苯乙烯微孔板用于酶免疫测定的研究与表征

以重组人钙调素 (rhCaM )、亲环素 (rhCyP)、心磷脂和双链DNA (dsDNA)为包被抗原 ,建立了检测针对上述 4种抗原自身抗体的间接ELISA方法 ,并对聚苯乙烯微孔板 (PS)紫外线 (UV)辐照前后进行了对比研究 .结果发现 :PS板经UV 辐照后 ,可显著改善酶免疫分析的测定效果 ,自身抗体的测定敏感度和重复性均有显著提高 .原子力学显微镜 (AFM)表征结果则提供了改善酶免疫分析的直接证据 ,抗原分子均匀平铺于UV 辐照的PS基底表面 ,而未经辐照的PS板则抗原分子的吸附率低 ,且分布不均并有成团聚集现象 .X射线光电子能谱 (XPS)分析表明 ,PS板经UV 辐照后 ,基底表面发生了氧化并引入了含氧的活性基团 ,O/C元素比较辐照前提高了 6 9倍 ,改善了对抗原生物分子的亲水和化学反应性能 ,此亦即UV

抗心磷脂抗体与反复自然流产关系的探讨

应用间接ＥＬＩＳＡ法检测１０５例反复自然流产（ＲＳＡ）患者血清中的抗心磷脂抗体（ＡＣＡ），同时对ＡＮＡ、抗ｄｓ－ＤＮＡ、抗－Ｓｍ、抗－ＲＮＰ、ＲＦ进行了测定。结果表明：ＲＳＡ组ＡＣＡ阳性率为２８．６％，明显高于其他自身抗体及对照组（Ｐ＜０．０１），ＡＣＡ与ＲＳＡ患者的孕龄及流产次数无相关性（Ｐ＞０．０５），三种类别Ｉｇ中，以ＩｇＧ、ＩｇＭ型ＡＣＡ检出率较高，中等或高水平的阳性结果占３３．３％（１０／３０），其余均为低水平。我们还对ＲＳＡ患者血清抗总磷脂抗体（ＡＰＡ）进行了研究，结果显示与ＡＣＡ具有显著的关联性（Ｐ＜０．００１）。

蛋白质与抗体微阵列及其在生物医学研究中的应用

随着人类基因组测序的顺利完成及其他相关领域如机械制造、微电子加工技术及生物信息学方面所取得的进展 ,以蛋白质为研究对象的蛋白质组学愈显重要 ,高通量的蛋白质与抗体阵列芯片分析技术正日益为人们关注 .对蛋白质分析策略及以阵列为基础的蛋白质芯片分析原理、相关的制备方法与检测技术及其在生物学研究、医学与实验诊断应用方面进行了阐述 。

类风湿关节炎新血清学指标研究与临床初步应用

目的建立并完善类风湿关节炎(RA)血清学实验诊断体系,寻找新的RA标志性自身抗体,探讨其在RA疾病发生、发展中的诊断价值。方法采用肽酰精氨酸脱亚氨基酶(PAD)分别对人纤维蛋白原(hFib)和牛Ⅱ型胶原(bCⅡ)瓜氨酸化(cit-rullination,Cit),以环瓜氨酸肽(CCP)作对照,并选择CⅡ短肽(CⅡ260-272),建立检测3种抗原自身抗体的ELISA法,进行临床标本检测及与其他实验室指标进行相关分析,评价其对RA的诊断价值。结果抗Cit-hFib和抗Cit-bCⅡ抗体在RA患者血清中的检出率分别为59.4%和56.3%,均显著高于其他疾病和健康对照组(P均<0.01)。诊断RA的敏感性和特异性均较抗hFib和抗bCⅡ抗体有明显提高。抗CⅡ短肽抗体对RA的诊断效能与抗CCP抗体接近,对RA的诊断敏感性分别为67.2%和68.8%;特异性分别为95.3%和97.8%;阳性预测值分别为76.8%和88.0%;阴性预测值分别为92.6%和93.1%;阳性似然比分别为14.3和31.3;阴性似然比分别为0.34和0.32;Youden指数分别为0.625和0.666。在13例早期RA患者中,抗CⅡ短肽抗体和抗CCP抗体阳性率均为76.9%。抗CCP抗体对RA诊断的ROC曲线下面积(AUC)值为0.946,抗CⅡ短肽抗体为0.924。联合应用抗CⅡ短肽与抗CCP抗体、或抗CⅡ短肽与RF,均可进一步提高对RA的有效诊断水平。相关分析和一致性检验结果显示,各自身抗体均与抗CCP抗体显著相关,仅有抗Cit-hFib抗体、抗Cit-bCⅡ抗体与抗CCP抗体检出结果表现出较好的同步性(0.4<Kappa<0.75),检出符合率分别为84.4%(54/64)和78.1%(50/64)。各自身抗体水平均与C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)呈高度正相关(P均<0.01),提示与RA疾病活动程度密切相关;抗CⅡ短肽抗体水平有随RA临床症状改善而明显下降趋势。结论瓜氨酸化蛋白及其自身抗体在RA疾病发生、发展过程中起重要作用。抗CⅡ短肽抗体及抗CCP、抗Cit-hFib和抗Cit-bCⅡ抗体均与RA疾病活动性密切相关,这些抗体可能发展成为RA新的血清学监测和诊断指标。

基于免疫金银染色的蛋白质与抗原分子微阵列技术

目的 研制适于自身抗体检测的蛋白质与抗原分子微阵列。方法 利用氧化型琼脂糖凝胶膜结合戊二醛分子衍生的活性表面 ,制作蛋白质与抗原分子微阵列 ,建立了检测血清自身抗体的胶体金免疫金银染色方法 (IGSS)。结果 在未经选择的风湿病患者中 (包括SLE ,RA和MCTD) ,检出多种自身抗体阳性 ,其中又以子宫内膜抗体 (EmAb)、抗ssDNA抗体、抗TG抗体、抗TPO抗体和RF等的检出频率较高 ;但心磷脂抗体 (ACA)、抗LSP和抗精子抗体 (AsAb)均为阴性。经初步方法学对比考证 ,实验结果与ELISA有较好的一致性 (达 90 % )。结论 本法具有方法敏感 ,结果直观和实验条件易于控制等特点 ,为发展可视化阵列芯片提供了一种很好的模式。

两种不同示踪剂用于蛋白质与抗原分子微阵列信号检测的对比研究

以氧化型琼脂糖凝胶膜为基片 ,制作蛋白质与抗原分子微阵列 ,建立了检测固相人IgG、游离IgG和自身抗体分子的免疫学测定模式 ,分别以辣根过氧化物酶二氨基联苯胺双氧水 (HRP DAB H2 O2 )和胶体金硝酸银对苯二酚 2种示踪系统作为蛋白质与抗原分子微阵列信号显示剂 ,并对其作用的原理与特点进行讨论 .检测结果发现基于胶体金的免疫金银染色法 (IGSS)比固相酶免疫测定法(EIA)敏感 .2种示踪系统对固相人IgG的最低检出量分别为 0 .0 5ng和 0 .5ng;而对血清游离IgG的最低检出量IGSS法比EIA法至少高出 1 0倍 .两法用于自身抗体的测定亦表现出较好的重复性 ,在 1 4例HCV感染者中 ,自身抗体的总体检出率分别为 3 8.6%和 3 1 .4% ,结果具有显著的同步性 .故同时辅以 2种示踪剂并用于阵列芯片的联合测试 。

氧化型琼脂糖凝胶基片结合酶免疫反应的蛋白质分子微阵列

目的 研制适于常规免疫学检验的蛋白质分子微阵列。方法 利用分子组装技术 ,以琼脂糖凝胶为基质 ,于玻片表面制成自组装膜 ,经过碘酸钠氧化后再与戊二醛分子偶联 ,而成为具有双功能分子层的薄膜。基片表面衍生的醛基可与各类抗原 (如重组多肽、磷脂和DNA)、辣根过氧化物酶及抗体分子中的氨基形成Schiff′s碱共价连接。结果 基于上述原理 ,制作生物分子微阵列 ,优选出IgG分子的最佳点样浓度为 10 0 μg/ml,点样量以 5 0nl为宜。通过不同的实验模式 ,成功地在基片表面建立了酶免疫检测体系 ,可敏感特异地检出抗原、抗体分子及酶与底物之间的相互作用。结论 该法最突出的优点在于减少了样本和试剂用量 ,可对多种自身抗体实施高通量的平行分析 ,以酶 底物 (HRP DAB H2 O2 )作为芯片信号显示系统 ,结果较为直观 。

端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究

目的 :建立端粒重复序列扩增 (TRAP) -银染色技术 ,探讨端粒酶活性检测在肿瘤诊断中的意义。 方法 :用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板 ,在特异引物作用下进行 PCR扩增 ,所得产物用氯仿∶异戊醇 (2 4∶ 1)处理浓缩 ,作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳 ,经硝酸银染色分析端粒酶活性。 结果 :TRAP-银染色法能准确特异地检测小鼠骨髓瘤细胞 (SP2 / 0 )的端粒酶活性 ,灵敏度可达 1× 10 2个细胞。端粒酶阳性率在 2 3例各种恶性肿瘤组织中为 86 .9% (2 0 / 2 3) ,而在 19例炎性包块与良性增生组织为 5 .3% (1/ 19) ,5例正常组织中未发现有端粒酶活性。 结论 :TRAP-银染色法简便快速、具有较好的测定敏感度与重复性 ,对临床恶性肿瘤疾病的诊断具有良好的应用前景。

抗-B淋巴细胞刺激因子自身抗体酶联免疫吸附法的建立和临床初步应用

目的:研究B淋巴细胞刺激因子抗体(BlyS-Ab)在临床相关疾病患者中的检出水平,探讨其在自身免疫性疾病中的作用。方法:优化实验反应条件,建立检测BlyS-Ab的酶联免疫吸附法(ELISA),并进行方法学考核和临床应用检测,研究血清BlyS-Ab水平与抗核抗体及其他自身抗体的关系。结果:BlyS-Ab精密度平均变异系数(CV值)为7.8%,特异阻断抑制试验最高抑制率达77.3%。临床研究结果显示,在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)和重症肌无力患者中均有显著增高的BlyS-Ab阳性检出率,而在过敏性紫癜及慢性肾炎和肾病患者中亦发现有较高水平的BlyS-Ab存在,血清BlyS-Ab水平与抗核抗体(ANA)滴度呈高度正相关关系。在所测63例BlyS-Ab阳性患者中,ANA同时阳性者有59例,而64例BlyS-Ab阴性患者中,ANA阴性者为30例,两者检测结果具有显著的关联和中等程度的一致性(χ2=26.387,Kappa=0.404,P<0.001)。经与其他单特异性自身抗体对比研究发现,BlyS-Ab与抗双股脱氧核糖核酸(dsDNA)、抗干燥综合征A(SSA)、抗干燥综合征B(SSB)及抗核糖核蛋白(RNP)抗体亦存在一定程度的相关性(P<0.01或P<0.05)。结论:成功建立了人血清BlyS-Ab的ELISA测定方法,实验结果敏感、特异、可靠。血清BlyS-Ab检测可能有助于自身免疫性疾病的诊断。

C3d及荷C3d免疫复合物的测定与意义

目的：探讨Ｃ３ｄ与Ｃ３ｄ－ＩＣ的测定方法及其与临床疾病的关系。方法：用抗人Ｃ３和抗人ＩｇＧγ－球蛋白组份作为固相反应物，建立了检测Ｃ３ｄ及Ｃ３ｄ－ＩＣ的ＥＬＩＳＡ法，并对临床各类疾病患者血清Ｃ３ｄ与Ｃ３ｄ－ＩＣ的水平进行了测定。结果：发现慢性肾炎、全身性红斑狼疮（ＳＬＥ）、慢性乙型肝炎及肺炎患者血清中Ｃ３ｄ总体水平均较对照组显著增高，分别有５８．５％～７２．２％的患者Ｃ３ｄ含量高于正常上限（Ｐ＜０．０１），且该类患者亦有较高的Ｃ３ｄ－ＩＣ阳性检出率（肺炎患者除外）。本研究表明，Ｃ３ｄ－ＩＣ阳性者，其血清Ｃ３ｄ含量均高于正常水平，二者具有显著的相关性。结论：Ｃ３ｄ－ＩＣ与补体的起始激活有直接关系，因而Ｃ３ｄ－ＩＣ与Ｃ３ｄ可以看作是疾病或组织损伤及补体活化反应的重要参考指标。

南京地区过敏性疾病患者特异性变应原检测结果报告

目的探讨引起南京地区居民过敏性疾病患者变应原的流行分布状况。方法采用免疫印迹法对420例过敏性疾病患者进行食物和吸入性变应原特异性IgE(sIgE)检测,同时对其血清总IgE水平进行检测和结果分析。结果在所测384例食物组样本中,特异性变应原以水果组合阳性率最高(为19.5%),紧随其后者依次为海鲜组合17.7%、虾9.8%、鲑鱼8.9%、花生8.6%等。而在327例吸入组样本中,特异性变应原以猫狗阳性率最高(为25.4%)、其下依次为蚕丝22.6%、粉尘螨(粮尘为主)13.5%、屋尘螨(床尘为主)12.8%等。在血清总IgE升高者中,发现有76.2%(64/84)的患者可检出1种或1种以上sIgE。统计分析结果表明,南京地区最常见的过敏性疾病发生时段多在夏秋季的6-10月和冬季的11-12月份。结论各种变应原中,水果组合、海鲜组合、虾、鲑鱼、花生、猫狗、蚕丝、粉尘螨、屋尘螨为南京地区过敏性疾病的主要致敏原。

聚苯乙烯微孔板的表面修饰对酶免疫结果的影响

目的对聚苯乙烯板(PS)进行适当的修饰处理,以改善酶免疫分析的测定效果。方法以辣根过氧化物酶(HRP)为固相分子,用以观察酶与特异性底物之间的相互作用;用重组人增强肝脏再生因子(rhALR)、双链DNA(dsDNA)、心磷脂为包被抗原,以未氧化型与氧化型抗ALR为包被抗体,分别固定于不同修饰的PS板表面进行酶免疫分析,并与未经修饰处理的PS板作对比研究。结果生物分子的固定效果除与固相表面特征不同有关外,还与其本身的性质、所处的物理状态(包括分子的种类、结构、分子量大小和表面电荷等)密切相关。其中APTES与PLL修饰表面可显著改善rhALR、dsDNA、心磷脂抗原及氧化型抗体分子的固相化效果,提高酶免疫分析的吸光度值和测定敏感度。UV辐照PS板用于抗ALR和抗dsDNA抗体,醛基化表面(GA修饰)用于抗心磷脂抗体的测定亦可获得较高的特异信号显示与低背景噪音。AFM表征结果显示:疏水物理吸附的生物分子分布是随机和不规则的,且为聚集成团分布;而电荷引力与共价结合模式固定的生物分子空间取向与分布较为均一,可提高固定生物分子的数量和功能化保留程度。结论PS板经修饰处理后可改善对免疫分子的吸附能力,基于共价键和电荷引力结合模式可获得较为满意的酶免疫测试效果。

CyP A三类Ig自身抗体测定方法的建立与临床应用

利用基因重组技术，大肠杆菌表达人环胞菌素Ａ结合蛋白（ｒｈＣｙＰＡ），建立测定抗ＣｙＰＡ自身抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），探讨抗ＣｙＰＡ抗体与临床疾病的关系。重组菌可溶性蛋白经饱和硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ柱层析，获取ｒｈＣｙＰＡ蛋白，用该纯化物作为抗原，方阵滴定，建立ＥＬＩＳＡ技术，对各类自身免疫病进行评估测定。ｒｈＣｙＰＡ经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，分子量为１８ｋＤ。在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者中，发现有４０．３％的病人检出有抗ＣｙＰＡ自身抗体（５８／１４４），三类Ｉｇ中，又以ＩｇＧ类抗体检出率最为突出，为２８％（４０／１４４）；而其他自身免疫病病人抗ＣｙＰＡ抗体总体检出率为０％～１８．１％。

抗Ⅱ型胶原短肽(260-272)抗体ELISA测定方法的建立与初步应用

目的了解类风湿关节炎(RA),其他自身免疫病和健康对照组血清抗Ⅱ型胶原短肽,即CⅡ(260-272)抗体水平,探讨其在RA疾病诊断和病情监测中的价值。方法将合成的CⅡ(260-272)短肽与牛血清白蛋白(BSA)耦联得CⅡ(260-272)-BSA复合物,用其作为抗原包被建立抗CⅡ(260-272)抗体的ELISA测定方法,经方法学考核后,对临床病例标本检测结果进行评价。结果建立的抗CⅡ(260-272)抗体的ELISA法实验结果具有较好的稳定性和特异性,其批内和批间变异系数分别为8.4%和9.6%,特异阻断抑制率最高达76.3%。临床检测结果发现抗CⅡ(260-272)抗体在RA中的阳性率为75.0%(30/40),显著高于其他自身免疫病和健康对照组(P<0.01)。以测定吸光度(A)0.213为临界值时,抗CⅡ260-272抗体对RA诊断特异性91.0%,阳性预测值63.8%,阴性预测值94.5%,阳性似然比8.33,阴性似然比0.275,Youden指数0.66。ROC曲线分析结果显示该抗体对RA诊断准确度为中等偏上水平(AUCROC值=0.890)。未发现抗CⅡ(260-272)抗体与类风湿因子(RF)水平相关(在13例RF阴性RA患者中,该抗体阳性10例,阳性率76.9%),但抗CⅡ(260-272)抗体与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体显著相关(P<0.01),且该抗体水平随患者临床症状的改善有逐渐降低趋势。结论成功建立抗CⅡ(260-272)抗体ELISA测定方法,用其检测抗CⅡ(260-272)抗体水平可作为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。