KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C亚型表达的关系

目的探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的关系。方法(1)用Westernblotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布;(2)流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果(1)PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高,而PKCβ、ε无显著变化,PKCγ、ζ则未测出表达;(2)流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高,PKCβ、ε则无显著差别。结论PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中,PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。

乳腺癌mdr1基因表达调控的探讨

目的探讨肿瘤多药抗性（ｍｄｒ１）的基因调控及其特异的凋亡机制。方法在建立的ｍｄｒ１肿瘤裸鼠的瘤组织中，采用ＡＢＣ免疫组化法，检测Ｐ－１７０、ｃ－ｍｙｃ、野生型ｐ５３、ｐ１６、Ｆａｓ和Ｂｃ１－２等蛋白的表达。结果发现ｍｄｒ１肿瘤细胞的ｃ－ｍｙｃ表达增强；经抗ｍｄｒ１－ｒｉｂｏｚｙｍｅ部分逆转ＭＤＲ表型后，ｍｄｒ１肿瘤细胞的ｐ５３表达有所升高。结论ｃ－ｍｙｃ、ｐ５３可能参与了对ｍｄｒ１基因表达的调控，其中ｃ－ｍｙｃ可能起着激活ｍｄｒ１基因转录的作用。实验还发现ｍｄｒ１肿瘤细胞的Ｆａｓ蛋白缺失、Ｂｃ１－２表达升高，提示ｍｄｒ１肿瘤可能拥有自己特异的凋亡调节机制。

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C表达上调的关系(英文)

目的研究KBV200多药耐药细胞蛋白激酶C(PKC)的表达,探讨PKC的表达上调与肿瘤多药耐药的关系。方法KBV200细胞分对照组和佛波酯(PMA)组,PMA组应用200nmol/L的PMA预孵育细胞,而对照组不用。32P掺入法测定多药耐药KBV200细胞株的PKC活性,通过Westernblotting检测PKC各亚型表达和亚细胞分布。用MTT法检测细胞耐药性。结果PMA预孵育可提高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性,降低浆组分PKC活性(P<0.01)。PMA预孵育使膜组分PKCα表达增加,浆组分PKCα表达降低,膜组分PKCβ无明显变化,浆组分PKCβ的表达稍增强。PMA可升高长春新碱、阿霉素对KBV200细胞的IC50值(P<0.01)。结论PMA使KBV200细胞耐药性增加,可能与PKC表达上调有关。

抗肿瘤多药抗性核酶转录质粒的构建及其体外切割研究

目的 探讨体外核酶对肿瘤多药抗性相关基因mdr1靶RNA分子的切割作用及其影响因素。方法 利用计算机软件设计能特异切割mdr1 mRNA的锤头状核酶（ribozyme），并构建抗mdr1-ribozyme和靶分子的体外转录质粒，进行体外切割实验。结果 发现抗mdr1-ribozyme能较好地切割mdr1 mRNA。 结论 抗肿瘤多药抗性核酶的体外研究为其体内应用提供了参考，ribozyme有可能成为逆转肿瘤多药抗性的新药物。

多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/Adr中体外转录的小分子干扰RNA(siRNA)对mdr1基因的干扰作用

目的探讨多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/Adr中体外转录的小分子干扰RNA(siRNA)对mdr1基因的干扰作用。方法将siRNA转染多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/Adr后,采用共聚焦荧光显微镜、Northernblot和Westernblot分析siRNA在蛋白和mRNA水平对mdr1基因的静止作用;并用MTT法测定siRNA处理后阿霉素对MCF-7/Adr细胞的杀伤作用。结果特异性siRNA能明显抑制P170蛋白表达及其mRNA,并能明显提高阿霉素对MCF-7/Adr细胞的杀伤作用。结论siRNA能逆转细胞耐药性,可能将为肿瘤耐药的治疗提供又一新技术。

肿瘤多药抗性产生的哲学思考

肿瘤多药抗性产生的哲学思考第一军医大学第二附属医院肿瘤科（广州５１０２８２）袁亚维一、肿瘤多药抗性现象矛盾观所谓肿瘤多药抗性，是指患者接受化疗药物治疗后，原来对药物敏感而变得不敏感，并且对其它无关的药物也不敏感，从而出现临床疗效的降低或无效的现象。药...

悬浮培养乳腺癌干细胞放疗抵抗与G2期阻滞相关

目的悬浮培养富集MCF-7细胞系中乳腺癌干细胞,探讨其细胞周期与放疗抵抗关系。方法无血清悬浮培养体系富集MCF-7细胞系中肿瘤干细胞,体内成瘤实验验证其干细胞特性,克隆形成检测其辐射敏感性;进一步流式细胞仪分析放疗前后其细胞周期变化,蛋白印记法测定放疗前后pCDC25C(ser216)蛋白含量。结果无血清悬浮培养富集的乳腺癌干细胞体内成瘤能力明显强于贴壁培养细胞;乳腺癌干细胞和贴壁培养细胞SF2Gy分别为0.856±0.061和0.783±0.097(P<0.05);乳腺癌干细胞放疗前后G2期细胞含量分别为22.03%±2.12%和45.83%±2.25%(P<0.01),G2期相关蛋白pCDC25C(ser216)放疗后表达明显增高,而贴壁培养放疗前后细胞周期及周期相关蛋白均无明显差异。结论 MCF-7细胞系中乳腺癌干细胞放疗后出现的G2期阻滞可能与其放疗抵抗特性相关。

放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响

目的探讨放射敏感性、X线辐射剂量对鼻咽癌细胞miR-7表达的影响。方法以低放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1、高放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-2为研究对象,采用析因设计的方法,分别给予CNE-1、CNE-2假照(0Gy)、低剂量照射(2Gy)、高剂量照射(8Gy)。Trizol法提取总RNA,设计特异性茎环引物逆转录miR-7,随机六引物逆转录18srRNA,所得cDNA进行染料法荧光定量PCR,以0Gy照射的CNE-1细胞为参照样本,ΔΔCt法计算各组细胞miR-7的相对表达值,SPSS13.0行析因设计资料方差分析。结果 CNE-1和CNE-2的miR-7表达量有显著差异(F=135.483,P<0.001),CNE-1的miR-7表达量(χ=4.49±3.62)高于CNE-2(χ=1.29±1.10),不同剂量照射后,鼻咽癌细胞株miR-7表达量也有显著性差异(F=39.565,P<0.001),CNE-1接受2GyX线照射后miR-7表达最高,8Gy照射组次之,0Gy照射组最低。CNE-2接受2GyX线照射后miR-7表达最低,8Gy照射组次之,0Gy照射组最高。结论放射敏感性不同导致细胞受X线辐射后,miR-7表达调整方向不同,即低放射敏感细胞上调,而高放射敏感性细胞下调;X线辐射剂量将影响miR-7的表达调整幅度,即低剂量照射后miR-7调整幅度大,高剂量照射后调整幅度小。抑制miR-7表达可能会提高鼻咽癌细胞的放射敏感性。

shRNAmir慢病毒载体沉默环氧合酶-2对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响

目的探讨COX-2基因沉默对鼻咽癌C666-1细胞放射敏感性的影响。方法以稳定沉默COX-2基因表达的鼻咽癌Anti-COX-2 C666-1细胞和对照细胞Anti-GL-2 C666-1为研究对象,采用克隆形成实验及曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数和放射增敏比;采用流式细胞仪检测辐射后细胞周期的变化;采用体内荷瘤裸鼠动物模型检测放疗后皮高下,放移射植增瘤敏的比生为长曲1.4线01,4并;C计O算X抑-2瘤沉率默。后结降果低了An辐ti-射CO诱X导-2的C6G662-/1M细期胞阻S滞F2、,D并0增、D加q值辐较射对后照荷组瘤均裸明鼠显的偏抑低瘤,α率/β。显结著增论COX-2基因稳定沉默后可改变鼻咽癌C666-1的放射生物学参数,并降低辐射引起的G2/M期阻滞,增大抑瘤率,能够起到放疗增敏的作用。

鼻咽癌放射敏感性与MDR1基因多态性的相关性

目的探讨鼻咽癌放射敏感性差异与多药耐药基因(MDR1)多态性的相关性。方法选择48例行根治性放疗的鼻咽癌患者,根据放疗疗效分为抵抗组和敏感组,针对MDR1基因多态性(21外显子G2677T和26外显子C3435T)行PCR扩增、基因测序分型及构建G2677T-C3435T单体型。结果 G2677T TT基因型放射敏感性显著低于GG和GT基因型(P=0.017),C3435T TT基因型放射敏感性显著低于CC和CT基因型(P=0.022),携带2677T-3435T单体型的患者放射敏感性显著低于其他单体型携带者(P=0.013)。结论 MDR1 G2677T和C3435T多态性可能提示鼻咽癌根治性放疗的疗效。

辐射与悬浮球培养联合纯化乳腺癌干细胞

目的:利用悬浮球培养联合不同辐射模式,高度纯化人乳腺癌MCF-7细胞中辐射抵抗的CD44+/CD24-/low乳腺癌干细胞。方法:利用含细胞因子的无血清培养体系培养MCF-7细胞,将培养形成的球囊细胞连续传代,选择第2代球囊细胞分别行2Gy×4次及单次8Gy照射。利用滤网收集存活细胞生成的微球囊,流式细胞仪检测纯化后微球囊中CD44+/CD24-/low细胞的含量,克隆形成检测及单击多靶模型曲线拟合分析纯化后微球囊细胞的辐射敏感性。结果:单纯悬浮球培养与联合X线照射组之间CD44+/CD24-/low细胞的含量差异存在显著性(P﹤0.05),联合组高度纯化CD44+/CD24-/low细胞;多次分割及单次大剂量照射对CD44+/CD24-/low细胞的富集作用差异无显著性(P=0.303)。纯化细胞照射后存活分数显著高于贴壁MCF-7细胞。结论:辐射联合悬浮球培养进一步纯化辐射抵抗的CD44+/CD24-/low乳腺癌干细胞的方法是可行的。

早期营养支持对提高宫颈癌患者同期放化疗耐受性的作用

目的探讨早期营养支持对宫颈癌盆腔放疗患者同期化疗的耐受性及放射损伤的影响。方法回顾性分析78例宫颈癌住院患者,其中46例普通饮食患者进入对照组,32例予早期肠内营养(EN)+肠外营养(PN)支持的患者进入营养组,对两组患者治疗前后的一般情况、血生化指标及急性放射性损伤程度进行评价。结果对照组患者的体质指数(BMI)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(Alb)、前白蛋白(PA)、外周血淋巴细胞数目(LYM)均较放疗前有明显下降(P<0.05,P<0.01)。而营养组患者除BMI较放疗前明显下降外(P<0.01),其余指标较放疗前差异均无统计学意义。营养组患者放疗期间同期化疗次数明显多于对照组患者(P=0.034),其放疗结束后一般状况评价指标中,BMI(P<0.05)、PA(P<0.01)及LYM(P<0.05)明显高于对照组,而下消化道等盆腔的急性放射性损伤明显轻于对照组(P=0.046)。对照组患者在放疗前后KPS评分明显下降(P<0.01),而营养组在放疗前后KPS评分差异无统计学意义。结论对宫颈癌同期放化疗患者早期给予EN+PN方式的营养支持,可明显提高患者同期放化疗耐受性,并减轻放射损伤。

人参皂甙Rg1对NOS的调控在海马神经元放射性损伤防护中的意义

目的研究人参皂甙Rg1对原代培养大鼠海马神经元放射性损伤的保护作用及机制,为放射性脑损伤的预防提供理论依据及新的方法。方法 30Gy的X射线单次照射培养至12d的海马神经元,用DAPI染核方法检测海马神经元凋亡情况,用NOS测定试剂盒测定细胞培养液NOS活性。结果 30Gy组在照射后24h核固缩百分数为(25.3±3.57)%,较0Gy组(1.95%±0.78%)有显著性差异(P<0.01);30Gy+人参皂甙Rg120mol/L组在照射后24h核固缩百分数为(7.43±1.51)%,较30Gy组(P<0.01)及0Gy组(P<0.01)均有显著性差异。30Gy组在照射后24h细胞培养液NOS活性为(6.46±0.95)U/ml,较0Gy组[(3.20±0.70)U/ml]有显著性差异(P<0.01),30Gy+人参皂甙Rg120mol/L组在照射后24h NOS活性为(3.85±0.69)U/ml,较30Gy组(P<0.01)及0Gy组(P<0.05)均有显著性差异。结论应用人参皂甙可以通过降低X线照射后NOS活性而显著减少神经元的凋亡。

鼻咽癌根治性调强放疗后晚期耳损伤的临床研究

目的:观察鼻咽癌根治性调强放疗后耳损伤听力学的改变,探讨其病变部位及影响其发生的因素。方法:采用调强放疗模式对早期鼻咽癌患者(T1～2N0～1M0)行根治性放疗Dt(66～70Gy/6～7w)。分别于放疗前及放疗后1个月、6个月、1年及2年后行纯音测听、听性脑干反应和畸变产物耳声发射检查,并对包括就诊时年龄、患者性别、TNM分期、内耳剂量以及同步化疗在内的因素进行多因素分析。结果:鼻咽癌患者放疗后6个月后听阈升高>15dB者占61.8%(47/76),2年后达76.3%(58/76)。放疗后所有患者ABR检查与放疗前比较无显著差异。发生感音神经性耳聋的患者DPOAE幅值较放疗前明显下降,差异有显著性(P<0.05)。多因素分析显示患者确诊时年龄以及同步顺铂化疗有统计学意义(P<0.05)。结论:鼻咽癌放疗后晚期耳听力损伤发生率高,主要为感音神经性耳聋的发生;耳损伤主要部位在内耳耳蜗,而听神经传导通路功能变化不明显;确诊时患者年龄以及放疗过程中合并同步化疗可能影响放疗晚期SNHL的发生。

X射线照射后鼻咽癌细胞多药耐药基因的表达

目的通过检测射线照射前后鼻咽癌CNE1细胞多药耐药基因(mdr1基因)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)的表达和功能为临床鼻咽癌放化疗顺序提供参考。方法利用RT-PCR、Western blotting和流式细胞仪检测射线照射前后CNE1细胞的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素的外排功能。结果鼻咽癌CNE1细胞射线照射前mdr1基因、P-gp不表达;照射后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达;对柔红霉素的摄取较射线照射前低。结论鼻咽癌CNE1细胞射线照射后化疗敏感性降低,提示临床对于中晚期鼻咽癌的治疗应考虑先化疗再放疗即诱导化疗的治疗方案。

蛋白激酶C活性、亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药性的相关研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性、亚细胞分布与KBV200细胞株多药耐药(MDR)的关系。方法MTT法检测KB和KBV200细胞对细胞毒药物的耐药性,32P掺入法检测两株细胞的PKC活性。结果长春新碱(VCR)、阿霉素(ADR)对KBV200细胞的半数抑制浓度(IC50)值分别是KB细胞的65.03和19.8倍;KBV200细胞的膜组分、胞质组分的PKC活性均高于KB细胞(P<0.01),KBV200细胞PKC总活性是KB细胞的2.12倍;佛波酯可升高KBV200细胞总或膜组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值升高(P<0.01);十字孢碱可降低KBV200细胞两种组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值降低(P<0.01),对VCR、ADR的逆转倍数分别是5.46和1.96倍。结论PKC与KBV200细胞株的MDR表型关系密切,PKC可能介导了KBV200细胞的MDR。

维生素B_(12)混合溶液治疗放射性湿性皮炎

目的 运用维生素B12混合溶液治疗放射性湿性皮炎,观察其临床治疗效果。方法41例接受放射治疗,出现放射性湿性皮肤损伤的恶性肿瘤;23例放射性湿性皮炎运用维生素B12混合溶液处理,18例放射性湿性皮炎运用庆大霉素混合溶液处理作为对照组。结果 维生素B12混合溶液组23例患者全部治愈,治愈率100％;庆大霉素混合溶液组治愈8例,治愈率44.9％。两组治愈率经统计学处理,差异显著（P <0.05）。结论 运用维生素B12混合溶液治疗放射性湿性皮炎,效果满意。

TACE联合3DCRT治疗肝癌伴门静脉癌栓疗效分析

目的:分析肝动脉化疗栓塞(TACE)结合三维适形放射治疗对原发性肝癌(HCC)并门静脉癌栓(PVVT)的疗效。方法:2004年10月至2009年10月,共收治32例HCC合并PVVT患者,采用肝动脉化疗栓塞联合三维适形放射治疗,观察肿瘤及癌栓的近期疗效,用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用Cox比例风险模型作多因素分析。结果:原发灶肿瘤近期有效率71.9%,癌栓有效率为81.3%。平均生存时间为20.63±1.23个月,中位生存时间为19.0±1.02个月。多因素分析显示肿瘤分期、癌栓类型、肝功Child-Pugh分级、卡氏评分是影响预后的主要因素(P<0.05)。结论:TACE联合3DCRT治疗肝癌合并PVTT疗效好,损伤小,易耐受,是治疗HCC合并PVTT有效治疗方法。

鼻咽癌同期放化疗体质量下降规律及预测因素

目的研究鼻咽癌同期放化疗期间体质量下降规律及相关预测因素。方法回顾性收集广州医科大学附属肿瘤医院82例鼻咽癌同期放化疗患者,中位年龄45岁。运用配对t检验分析放化疗期间患者体质量下降情况,采用Spearman′s秩相关分析探讨高体质量下降(HWL)与临床因素的相关性。结果配对t检验分析发现,同期放化疗期间患者体质量呈每周连续下降(均P<0.05),其中在第4周下降数值最大。82例患者中32例判定为HWL(体质量下降>10%)。Spearman′s秩相关分析显示:HWL与年龄>40岁、女性、较高T分期和TNM分期、3D-CRT技术、较高鼻咽和颈淋巴放疗剂量、Ⅱ度以上白细胞下降、血红蛋白下降相关(均P<0.05)。结论鼻咽癌同期放化疗期间患者体质量持续下降,年龄、性别、T分期、TNM分期、放疗技术、鼻咽和颈部淋巴放疗剂量、白细胞下降程度、血红蛋白下降可能是鼻咽癌放化疗期间体质量下降程度的预测因素。