艾地骨化醇治疗绝经后骨质疏松症中国专家建议

艾地骨化醇是一种新型活性维生素D类似物,在1,25(OH)_(2)D_(3)基础上于2β位引入3-羟基丙氧基结构,与其他活性维生素D及类似物相比,具有更强的抑制骨吸收作用。临床证据显示艾地骨化醇治疗骨质疏松症具有良好的疗效和安全性。艾地骨化醇可增加骨质疏松症患者的骨密度,降低骨质疏松性椎体骨折和部分非椎体骨折风险,并且耐受性良好。艾地骨化醇在我国获批不久,临床经验仍需积累,中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会组织编写艾地骨化醇治疗绝经后骨质疏松症中国专家建议,以期为我国医务工作者合理使用艾地骨化醇提供帮助。

脂联素对人成骨细胞增殖作用的研究

目的观察脂联素受体1和2mRNA和蛋白在体外培养的人成骨细胞的表达及其对人成骨细胞的增殖作用,探讨脂联素对成骨细胞的作用机制。方法分别用RTPCR和Westernblot方法检测脂联素受体1和2mRNA及蛋白的表达,3HTdR和细胞计数检测脂联素对人成骨细胞增殖的作用。结果人成骨细胞表达脂联素受体1和2的mRNA,但只检测到脂联素受体1蛋白的表达,脂联素能够促进人成骨细胞增殖,并呈剂量依赖性。结论脂联素对成骨细胞可能起旁分泌或内分泌作用。

维生素D缺乏的管理

维持血清25羟维生素D(25 hydroxyvitamin D,25OHD)在充足水平对机体健康具有重要的意义。本文从防治维生素D缺乏的目标、维生素D缺乏的防治措施等角度探讨维生素D缺乏的管理。

他汀类药物与骨代谢的研究进展

他汀类药物具有调节血脂的功能 ,主要用于高脂血症的治疗。研究表明 ,他汀类药物对骨重建过程有明显的影响 ,其作用主要通过诱导骨形成蛋白 2表达促进骨形成 ,抑制甲羟戊酸途径降低骨吸收来实现。他汀类药物对骨量具有正向调节效应 ,为骨质疏松等骨代谢疾病的防治提供了新的药物选择。

血管平滑肌细胞表达牛磺酸转运体

牛磺酸是一种条件必须氨基酸,是细胞内高丰度的一种自由氨基酸。牛磺酸主要通过牛磺酸转运体(Taurine transporter,TAUT)摄入细胞。本研究探讨牛磺酸转运体在血管平滑肌细胞内的表达。通过RT-PCR,测定TAUT基因在血管平滑肌细胞mRNA的表达,利用Westemn blot和免疫组织化学方法检测TAUT在血管平滑肌细胞蛋白的表达。体外培养的大鼠血管平滑肌细胞和大鼠主动脉组织切片中血管平滑肌细胞均可表达TAUT。血管平滑肌细胞可转录及翻译TAUT。

中华医学会第七次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议纪要

中华医学会第七次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议于2013年9月10日至13日在山西太原晋祠宾馆隆重举行,本次会议得到山西省医学会和山西医科大学附属第一医院的大力支持和承办,来自全国各地600余位代表参加本次会议.国内从事骨质疏松和代谢性骨病临床工作与研究的十余位专家分别作了精彩的专题报告.会议收到412篇研究报告,其中15篇为大会发言,10篇获得优秀壁报奖.本次会议秉承了历届大会以学术为向导的办会宗旨,重点讨论了重大临床实际问题,同时结合了基础研究新进展.会议形式多样,讨论热烈,内容新颖.概括性、前瞻性和向导性是本次大会的主要特点.大会报告、特邀报告、会见教授、热点讨论、专题报告和疑难病例分析等精彩内容,充分展示了我国代谢性骨病学术界近年所取得的进展和成就,为广大从事骨质疏松和骨代谢临床与基础研究的学者提供了一个交流和切磋的平台.本次大会共有10余家企业参展并赞助,共举行6场卫星会,专家们的精彩演讲及热点讨论,无疑是对主会议的有益补充.现就本次会议的主要内容简介如下.

原发性骨质疏松症干预的疗效监测与评估专家意见

原发性骨质疏松症是一种＂静悄悄的流行病＂,大部分患者早期并没有特异性症状,直至出现脆性骨折,最终给家庭和社会带来沉重的医疗和经济负担。诊治骨质疏松症的目的主要是为了预防初次骨折的发生或降低再次骨折的风险[1-2]。

RANKL诱导小鼠单核细胞RAW264．7分化成成熟破骨细胞

目的观察小鼠的单核／巨噬细胞RAW264．7的一般生物学特征及在RANKL诱导下形成成熟破骨细胞的特征。方法 RANKL诱导RAW264．7细胞6d后,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) 染色法观察TRAP阳性多核细胞,吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)观察多核细胞形态;诱导RAW264．7细胞9d后,RT-PCR检测RAW264．7细胞的破骨细胞表型和功能基因表达及其 RANKL诱导后变化;诱导RAW264．7细胞12d后,钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板观察破骨细胞的骨吸收功能。结果 RAW264．7细胞TRAP染色阴性,单核或2个核,能表达破骨细胞表型和功能基因,无骨吸收功能。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成TRAP阳性成熟的多核破骨细胞, 上调CathepsinK、CAⅡ、integrinβ3等基因。mRNA的表达。结论 RAW264．7具有破骨细胞特征性基因表达谱,是一种较好的破骨前体细胞模型。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成成熟破骨细胞。

肌少症的评估方法

肌少症（sarcopenia）是一种近来备受关注的老年综合征,其定义最初由Irwin Rosenberg在1989年提出,泛指随着年龄的增长,出现肌量减少和肌力下降等改变[1]。肌少症的特点是骨骼肌量减低,肌肉内脂肪堆积,导致肌肉力量减低和肌肉功能下降,进而导致躯体残疾、生活质量降低,甚至死亡等[2-3]。肌肉减少是指肌量的绝对或相对减少[4]。任何病因引起的肌量减少或分布异常均可导致肌力下降和骨折风险增加[5]。

脂联素通过MAPK途径诱导人成骨细胞分化的研究

目的本研究观察脂联素(adiponectin)对成骨细胞分化作用。方法分化指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测;并观测Adiponectin对矿化的影响。细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导阻断剂U0126,SB203580和SP600125干预,观察Adiponectin对成骨细胞分化作用的变化。p-JNK,JNK,p-p38,p38,p-ERK1/2,ERK1/2用Western Blot检测。结果Adiponectin可提高ALP活性,并促进矿化结节形成。Adiponectin作用于成骨细胞诱导p38和JNK磷酸化,而p38抑制剂SB203580可减轻Adiponectin对成骨细胞ALP活性的影响。结论Adiponectin通过P38信号转导途径诱导人成骨细胞分化。

Apelin抑制人成骨细胞的凋亡

目的研究apelin对人成骨细胞凋亡的作用。方法用茜素红染色观察原代培养的人成骨细胞矿化结节的形成。碱性磷酸酶（ALP）用ELISA检测；骨钙素（OC）用放射免疫测定法测定；I型胶原用ELISA法检测。用ELISA法检测细胞凋亡。Bcl-2，Bax，caspase-3，cytochromeC，p-Akt，Akt用Westernblot检测。P13．Kp850r用免疫沉淀法检测。用小分子RNA干扰技术（siRNAs）抑制APJ表达，联合P13-K信号转导阻断剂LY294002及Akt信号转导阻断剂HIMO干预，以观察Apelin对成骨细胞凋亡的作用及信号转导。结果Apelin能抑制无血清诱导的人成骨细胞凋亡，siRNAs转染阻断APJ表达可消除此效应。Apelin干预可诱导人成骨细胞Bcl-2蛋白质表达，抑制Bax蛋白质表达和CytochromeC的分泌及caspase一3的裂解活化。Apelin可诱导人成骨细胞P13．K及Akt磷酸化；siRNAs转染沉默APJ可消除此效应；P13-K信号转导阻断剂LY294002或Akt阻断剂HIMO能消除Apelin对人成骨细胞Akt的活化作用；LY294002或HIMO也能阻断Apelin对人成骨细胞抑制凋亡作用。结论Apelin可抑制人成骨细胞的凋亡；Apelin通过APJ／P13-K／Akt信号通路介导参与对成骨细胞凋亡的调节。

女性骨密度的地区差异及多中心参考数据库对诊断骨质疏松的影响

目的了解我国大陆女性骨密度(bone mineral density,BMD)的地区差异及多中心融合参考数据库对诊断骨质疏松的影响。方法女性参考人群10 343名,年龄范围20~89岁,分别来自长沙、北京、南京、上海、嘉兴、广州和成都地区。除长沙地区1 157名外,其他资料均由通用电气医疗集团(GE Health care)公司提供。受试者均采用GE-Lunar系列DXA骨密度仪测量腰椎和股骨颈BMD。结果 8种不同回归模型分析显示,BMD随年龄变化均采用3次回归模型拟合优度最佳,拟合曲线的决定系数(R^2)为0. 149~0. 546(P均=0. 000)。腰椎BMD随年龄变化的最佳拟合曲线,北京与成都女性之间的差异最大[(12. 9±4. 9)%],北京与南京女性之间的差异最小[(3. 0±3. 4)%];各地区女性之间,股骨颈BMD拟合曲线的差异相对较小。与多中心融合BMD参考数据库比较,北京地区数据库对腰椎骨质疏松的检出率显著升高(17. 5%vs 12. 2%,P=0. 028),嘉兴(23. 9%vs 30. 3%,P=0. 001)、长沙(30. 4%vs 35. 9%,P=0. 037)和成都(34. 8%vs 41. 0%,P=0. 032)地区数据库对骨质疏松的检出率显著降低。结论我国大陆女性BMD存在地区差异,特别是腰椎BMD。提示我国需要建立多个区域性BMD参考数据库。

miR-125b介导胰岛素促进血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化

目的探讨miR-125b是否介导胰岛素促进血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化,为治疗糖尿病患者动脉钙化提供实验性依据。方法采用real-time PCR检测胰岛素对血管平滑肌细胞miR-125b表达的影响。采用脂质体2000将miR-125b mimics转染至血管平滑肌细胞,然后给予胰岛素干预,检测碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌。结果胰岛素可呈时间和剂量依赖性抑制miR-125b的表达,在血管平滑肌细胞过表达miR-125b可逆转胰岛素的促进血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的作用。结论胰岛素通过抑制miR-125b的表达,进而促进血管平滑肌细胞向成骨细胞分化。

左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖和凋亡的影响

目的观察左旋肉毒碱（L-carnitine，L-C）对人成骨细胞增殖和凋亡的作用。方法以^3H掺人法（^3H—TdR）测定左旋肉毒碱对人成骨细胞增殖的影响；以吖啶橙，溴化乙啶染色和细胞凋亡ELISA（酶联免疫吸附法）试剂盒测定左旋肉毒碱对人成骨细胞凋亡的影响；以免疫印记法检测左旋肉毒碱干预前后活化型Caspase-3、-9蛋白质表达水平的改变。结果10～100mmol／L左旋肉毒碱能促进人成骨细胞增殖。吖啶橙，溴乙啶染色法示100mmol／L左旋肉毒碱干预使人成骨细胞凋亡细胞明显减少。ELISA结果示10～100mmol／L左旋肉毒碱干预可显著抑制人成骨细胞凋亡。10～100mmol／L左旋肉毒碱干预可抑制无血清饥饿诱导的人成骨细胞caspase-3、9活化增加。结论左旋肉毒碱促进人成骨细胞增殖，并通过下调Caspase-3、-9的活化抑制人成骨细胞凋亡。

不同年龄女性血清可溶性模型基质金属蛋白酶1水平变化及对人成骨细胞凋亡的诱导

背景:前期研究表明膜型基质金属蛋白酶1在骨重建过程中可调节骨形成与骨吸收。目的:探讨女性血清可溶性膜型基质金属蛋白酶1水平年龄变化及膜型基质金属蛋白酶1与骨密度﹑骨转换生化指标的关系。设计、时间及地点:横断面调查,于2006-01/2007-10在中南大学湘雅二医院完成。对象:长沙地区304名20～80岁的女性志愿者,平均年龄(49.6±14.1)岁,体质量指数(23.3±3.4)kg/m2。方法:培养正常成人成骨细胞。留取受试者空腹静脉血,Westernblot、ELISA检测血清膜型基质金属蛋白酶1可溶性蛋白水平,ELISA检测血清Ⅰ型胶原N-末端交联肽﹑骨钙素水平。测量受试者腰椎及左侧股骨颈骨密度。用重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白干预人成骨细胞。主要观察指标:①人成骨细胞基质金属蛋白酶1蛋白表达。②人血清可溶性膜型基质金属蛋白酶1浓度与年龄、骨密度、骨钙素、Ⅰ型胶原N-末端交联肽的关系。③人成骨细胞鉴定。④细胞凋亡检测结果。⑤重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白诱导人成骨细胞凋亡的作用。⑥型胶原N-末端交联肽检测结果。⑧重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白对人成骨细胞黏附功能的影响。结果:Westernblot检测到血清含有丰富的可溶性膜型基质金属蛋白酶1,血清可溶性膜型基质金属蛋白酶1与骨密度﹑Ⅰ型胶原N-末端交联肽﹑骨钙素呈负相关。重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白促进细胞凋亡的作用呈剂量依赖性,且此作用可被乙二胺四乙酸阻断。重组可溶性活性膜型基质金属蛋白酶1蛋白抑制人成骨细胞在Ⅰ型胶原上的黏附。结论:女性血清可溶性活性膜型基质金属蛋白酶1与骨密度﹑Ⅰ型胶原N-末端交联肽﹑骨钙素有明显相关性。重组可溶性活性膜型基质金属蛋白酶1蛋白可通过降解骨基质蛋白,诱导人成骨细胞凋亡。

人类不脱钙骨组织的免疫组化与原位杂交

目的探讨在人类不脱钙骨组织切片上行免疫组化和原位杂交技术的可行性。方法采用Erben报道的改进的甲基丙稀酸甲酯低温塑料包埋方法包埋人类髂骨活检组织,制备不脱钙骨组织切片。切片行Goldners三色法及甲苯胺蓝染色观察骨组织的形态结构;采用免疫组化SP法和原位杂交技术检测骨组织中碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)蛋白和mRNA的表达。结果组织形态学上,两种染色法均示骨组织中成骨细胞、破骨细胞及骨细胞清晰可辨,钙化的骨基质与类骨质分界清楚。免疫组化和原位杂交示FGF2蛋白和mRNA表达于骨髓腔中一些单个核细胞及少许成骨细胞的胞浆中。此外,骨髓基质亦可见FGF2蛋白和mRNA的阳性表达。结论低温塑料包埋方法制备的人类不脱钙骨组织切片可同时进行免疫组化和原位杂交的检测观察。

应用激光扫描共聚焦显微镜观察骨组织微损伤的实验研究

目的:建立一种可以用于激光扫描共聚焦显微镜观察的骨微破裂荧光染色方法。方法:取8月龄猪髂骨1块,锯成0.90cm×0.81cm×1.89cm的规则矩形,沿长轴方向进行压缩疲劳损伤(负载大小40N,负载频率2.33Hz,负载次数30万次,湿度60%,工作温度28℃),锯成0.2cm厚骨片0.5mmol/L茜素红、吖啶橙、钙黄绿素、二甲酚橙、碱性品红和10g/碱性品红染色。另取人股骨头1个锯出1.5cm×1.0cm×0.25cm大小骨片3块,分别应用0.5mmol/L钙黄绿素、茜素红和10g/L碱性品红溶液进行染色。所有骨片常规塑料包埋,磨片至40～100μm,在激光扫描共聚焦显微镜下观察。结果:在疲劳损伤后的猪髂骨和未经疲劳损伤的人股骨头骨小梁上均可以观察到微破裂。所有荧光染料中,以钙黄绿素染色后观察效果为佳,在波长为522nm的激光扫描下发出绿色荧光。茜素红在波长为605nm的激光扫描下发出红色荧光。结论:应用钙黄绿素和茜素红染色可以对骨微破裂进行荧光染色,在激光扫描共聚焦显微镜下能够观察到清晰的骨微破裂图像。

低体重指数的男性2型糖尿病患者并发骨质疏松的预防护理

目的：分析男性2型糖尿病患者体重指数（BMI）与骨密度的关系，对低体重指数的男性2型糖尿病并发骨质疏松的人群进行骨质疏松相关知识的健康宣教。方法：采用双能X线吸收法（DEXA）测定811例男性2型糖尿病患者腰椎正位1～4椎体（L1～4）、左侧髋部股骨颈（Neck）、大转子（Troch）、转子内区（Inter）、髋部总体（Total）和华氏三角（Ward’s）的骨密度。按年分为3个年龄段，每个年龄段内又按体重指数分为：BMI≤20kg／m^2为低体重组（A组），20kg／m^2〈BMI≤25kg／m2为正常体重组（B组），BMI〉25kg／m^2为超重组（C组），比较各部位骨密度的变化。结果：男性2型糖尿病患者各年龄段内各部位骨密度均为超重组〉正常体重组〉低体重组，而且大部分组间比较差异有统计学意义。各年龄段内体重和体重指数均与骨密度有相关性，而且与体重的相关性更强。结论：男性2型糖尿病患者各部位骨密度随体重指数增加而增加。体重对骨密度的影响更大。低体重指数的糖尿病患者易并发骨质疏松。因此，对低体重指数的糖尿病患者采取适当的措施防治骨质疏松具有重要意义。

女性血清FSH和LH与骨转换生化指标的关系

目的了解女性卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平的变化与各种骨转换生化指标之间的关系。方法健康女性694例,年龄20～82岁。放射免疫法测定血清FSH和LH,ELISA测定血清骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(OC)、骨Ⅰ型胶原N末端肽(sNTX)和C末端肽(sCTX)、尿骨Ⅰ型胶原N末端肽(uNTX)和C末端肽(uCTX)、尿骨Ⅰ型胶原交联脱氧吡啶酚(uDPD)。结果血清FSH和LH与BAP、OC、sCTX、uNTX和uDPD之间的关系,采用复合曲线模型拟合优度最佳,与sNTX和uCTX之间的关系采用线性模型拟合优度最佳,FSH和LH与BAP(R2=0.392和0.382,P=0.000)之间的决定系数最大,与uDPD(R2=0.027和0.017,P=0.002)之间的决定系数最小。多元线性回归分析显示,BAP43.0%、OC22.1%、uCTX11.8%、sNTX8.2%、uNTX8.2%、sCTX6.6%和uDPD1.9%的变化是由FSH决定的,LH只能解释0.7%～2.1%的变化,FSH对各种骨转换指标的决定性作用大约是LH的7～20倍。结论女性FSH和LH水平与骨转换速率有关,血清FSH和LH水平增加者骨转换增加,FSH对骨转换的作用远大于LH,对骨形成指标的作用远大于骨吸收指标。