低氧对人肺腺癌A549细胞HIF-1α、P53和CyclinD1表达的影响

背景与目的:研究表明低氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α)是低氧诱导细胞周期阻滞的必需元件,但其具体作用机理及对细胞周期阻滞的影响程度目前尚不清楚。本研究旨在探讨低氧导致肿瘤细胞周期阻滞的作用及机制。材料与方法:将人肺腺癌细胞A549分成3组:低氧12h组、低氧24h组及对照组。低氧组分别在低氧条件下(37℃,5%CO2、2.0%O2饱和度)培养12h和24h,对照组置于正常氧浓度条件下(37℃,5%CO2、21%O2饱和度)培养24h。流式细胞仪分别测定3组细胞周期分布及cyclinD1表达,免疫组织化学SP法分别测定3组细胞HIF-1α及P53蛋白表达。结果:(1)低氧12h组、低氧24h组的G0/G1期细胞比例分别为(70.20±3.33)%、(82.85±1.75)%,对照组为(50.36±4.09)%,其差异有显著性(F=202.34,P<0.01);(2)低氧12h组、低氧24h组、对照组cyclinD1表达分别为(80.22±1.55)%、(73.65±2.10)%、(90.35±2.68)%,三组间的差异有显著性(F=100.45,P<0.01);(3)低氧12h组、24h组HIF-1α表达为0.16±0.02、0.26±0.05,对照组HIF-1α表达为0.01±0.00,其差异有显著性(F=105.28,P<0.01);(4)低氧组cyclinD1表达与G0/G1阻滞呈显著性负相关(r=0.91,P<0.01),低氧组HIF-1α表达与P53表达呈显著性正相关(r=-0.84,P<0.01)。

中晚期胃癌术后序贯放化疗36例

目的:评价术后序贯放化疗对中晚期胃癌的生存影响和不良反应.方法:收集我院2003-01/2005-12胃癌根治术后行序贯放化疗患者36例及对照单纯化疗患者32例,分析两组的1年和3年生存率,同时评价放化疗期间出现的血液学,肝肾功能及胃肠道等不良反应.结果:术后序贯放化疗组和单纯化疗组1年生存率分别为77%和61%,3年生存率分别为47%和25%(P=0.041),中位生存时间分别为40.0 mo和24.5 mo(P=0.038),治疗期间两组出现Ⅲ-Ⅳ级白细胞减少分别为11.1%和6.3%,Ⅲ-Ⅳ级恶心呕吐分别为8.3%和3.1%,但差异无统计学意义.结论:胃癌患者术后序贯放化疗较单纯化疗可提高1年和3年生存率,延长中位生存时间,不良反应可耐受.

RNA干扰HIF-1α对人子宫颈癌裸鼠移植瘤多药耐药相关蛋白表达的影响

目的通过RNA干扰技术沉默人子宫颈癌HeLa细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,在细胞及移植瘤水平研究低氧对子宫颈癌HeLa细胞多药耐药的影响。方法①将人子宫颈癌HeLa细胞株(记为H0细胞)、转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞株(记为H1细胞)及转染HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞株(记为H2细胞)分别行不同时间低氧培养,应用免疫印迹法分析每组HeLa细胞中HIF-1α及多药耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)在蛋白水平的表达情况。②应用免疫组织化学法检测HIF-1α及P-gp在上述3种HeLa细胞裸鼠移植瘤模型组织水平的表达情况。结果①免疫印迹法检测发现H0和H1组低氧24h后HIF-1α、P-gp呈强阳性表达,常氧状态下H0、H1和H2组及低氧24h后H2组未见HIF-1α表达,P-gp呈弱阳性表达。②H0、H1、H2组移植瘤中HIF-1α的平均吸光度值分别为(0.5508±0.0771)、(0.5731±0.0538)、(0.1701±0.0884),P-gp的平均吸光度值分别为(0.6976±0.1140)、(0.6964±0.1072)、(0.2138±0.0351)。结论RNA干扰技术沉默人子宫颈癌HeLa细胞低氧诱导因子HIF-1α,可显著降低人子宫颈癌HeLa细胞中HIF-1α及P-gp表达,且二者有明显的相关性。

HIF-1α在乳腺癌组织中的表达及与HER-2、Survivin表达的相互关系

背景与目的:H IF-1α、HER-2和Survivin是乳腺癌的重要预后因子,但其是否存在内在的联系尚不清楚。本实验研究H IF-1α在乳腺癌组织中的表达,并探讨其与HER-2、Survivin表达的相互关系。方法:免疫组化法检测51例乳腺癌组织中H IF-1α、HER-2、Survivin的表达。结果:①本组51例中,28例H IF-1α呈阳性表达,阳性率为55%;Survivin阳性率为69%;HER-2强阳性表达率为22%。②在H IF-1α阳性表达的样本中与H IF-1α阴性表达的样本中,HER-2的强阳性表达差异有非常显著性(P<0.01);但Survivin的表达差异无显著性(P>0.05)。结论:H IF-1α在乳腺癌中的表达水平与HER-2强阳性表达相关,与Survivin表达无关。

RNA干扰HIF-1α增强宫颈癌BALB/c小鼠移植瘤放射敏感性

背景与目的:缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是一种重要的缺氧应答调控因子,在维持细胞能量代谢、肿瘤血管生成及转移、细胞增殖与凋亡等诸多方面起着重要作用。在子宫内膜癌、卵巢癌,食道癌等肿瘤中,国内外有大量研究报道,但均未有关于HIF-1α与宫颈癌移植瘤放疗敏感性关系的报道。本研究探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α增强宫颈癌BALB/c小鼠移植瘤放射敏感性的作用。方法:构建干扰HIF-1α质粒HIF-1α-shRNA,采用Westernblot方法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰HIF-1α蛋白的变化。将20只裸鼠分随机为两组,其中对照组接种含pGenesil-1空白质粒人宫颈癌HeLa细胞(命名为H0),实验组接种含HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞(命名为H1),待裸小鼠右后大腿外侧皮下移植瘤长至直径8.0mm时,在两组中各取5只进行照射,计算两组裸鼠移植瘤长至14.0mm时的生长延缓时间。结果:①Westernblot分析乏氧状态下对照组检测到HIF-1α蛋白质条带,常氧状态下实验组和对照组及乏氧状态下的实验组均未检测到HIF-1α蛋白质表达。②两组移植瘤从8.0mm生长到14.0mm时生长延缓时间分别为8d及14d(P<0.05)。结论:RNA干扰HIF-1α可增强BALB/c小鼠宫颈癌移植瘤的放射敏感性。

单次大剂量电子束照射治疗瘢痕的临床研究

目的 观察电子束术后单次大剂量照射治疗瘢痕的疗效及皮肤晚期反应。方法 1 998年 5月至 2 0 0 0年 5月我院收治的 1 0 8例术后瘢痕患者 ,随机分成两组。结果 (1 )研究组瘢痕复发率为 1 1 .1 %(6/5 4) ,对照组为 1 2 .9% (7/5 4) ,二者比较无统计学意义 ,P >0 .0 5。 (2 )皮肤晚期损伤 ,研究组 1级 4例 ,2级 1例 ;对照 1级 3例 ,2级 2例 ,二者比较均无统计学显著意义 ,P >0 .0 5。结论 电子束单次大剂量照射是治疗瘢痕的一种有效方法 ,耐受性良好 ,与传统的分次照射相比 ,有治疗周期短 ,花费低 ,剂量分布好等优点。

乏氧诱导因子-1α、环氧化酶-2、HER-2在非小细胞肺癌中的表达

应用免疫组织化学技术检测47例非小细胞肺癌(NSCLC)中乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧化酶-2(COX-2)、HER-2的表达。结果HIF-1α、COX-2和HER-2在NSCLC中的表达分别为57.45%、57.45%和46.81%;HIF-1α阳性表达与HIF-1α阴性表达的NSCLC标本中COX-2的阳性表达率有统计学意义,而HER-2的阳性表达率则无统计学意义。NSCLC中HIF-1α蛋白的表达与COX-2表达存在相关性。

人宫颈癌移植瘤乏氧动物模型的建立及鉴定

目的 建立人宫颈癌移植瘤乏氧动物模型并进行鉴定。方法 人宫颈癌Hela细胞接种于裸小鼠右后大腿外侧皮下 ,每鼠 0 .2ml。待肿瘤长至瘤体溃烂前 (1.7cm左右 ) ,用双通道组织氧分压传感针测定肿瘤及正常组织的氧分压 ,取肿瘤组织作常规病理检查 ,并用免疫组化方法检测肿瘤组织乏氧诱导因子 1α表达。结果 (1) 8只裸鼠 ,7只成活 ,其中 7只成瘤 ,成瘤率 87.5 % (7/ 8)。瘤体平均大小1.75 85± 0 .2 0 2 0cm。 (2 )移植瘤乏氧状况测定 ,瘤体平均氧分压为 3.785 7± 0 .6 6 94kPa,明显处于乏氧状况 ,而作为对照的正常后腿氧分压为 11.7714± 2 .2 787kPa (t=7.6 78,P <0 .0 1)。 (3) 7只小鼠移植瘤的病理检查均为上皮性癌 ,HIF 1α表达均为强阳性 (+++)。结论 人宫颈癌移植瘤瘤体大小生长至瘤体溃烂前 (1.7cm左右 ) ,是一种较好与临床实际情况相符 ,适合研究需要 。

鼻咽癌受损颅神经功能恢复与病程的关系

目的观察鼻咽癌受损颅神经功能恢复与病程的关系。方法 37例鼻咽癌患者共有 6 8条受损颅神经 ,均接受 6 MV - X线放疗 ,鼻咽及颅底 DT70 - 84 Gy,中位 DT74 Gy。结果 6 8条受损颅神经功能完全缓解 5 1.5 % (35 / 6 8) ,颅神经受损 <4个月的患者放疗后功能完全缓解 82 .5 % (33/ 4 0 ) ,而 >4个月完全缓解 7.14 % (2 / 2 8) ,两者比较差异有显著性 (P<0 .0 1)。结论鼻咽癌受损颅神经放疗后其功能大部分可以恢复 ,颅神经受损 <4个月其功能恢复的可能性大 ,而 >4个月其功能恢复的可能性较小。

缺氧对人肺腺癌细胞A549细胞周期阻滞和HIF-1α表达的影响

目的 探讨缺氧导致肿瘤细胞周期阻滞的作用及机制。方法 人肺腺癌细胞A5 4 9分成 3组 :缺氧 12h组、缺氧 2 4h组及对照组。缺氧组分别在缺氧条件下 (37℃ ,5 %CO2 、 2 0 %O2 饱和度 )培养 12h和 2 4h ,对照组置于正常氧浓度条件下 (37℃ ,5 %CO2 、 2 1%O2 饱和度 )培养 2 4h。流式细胞仪分别测定 3组细胞周期分布 ,免疫组织化学S P法分别测定 3组细胞缺氧诱导因子 1α (HIF 1α)表达。结果 ①缺氧 12h组、缺氧 2 4h组的G0 /G1期比例 (70 2 0± 3 33) %、 (82 85± 1 75 ) %显著高于对照组 (5 0 36± 4 0 9) % ,差异有显著性意义 ,F =2 0 2 34,P <0 0 1。②缺氧 12h组、 2 4h组及对照组HIF 1α表达为 0 16 4± 0 0 18、 0 2 5 6± 0 0 5 3、 0 0 12± 0 0 0 3,其差异有显著性意义 (F =10 5 2 8,P <0 0 1)。③缺氧组HIF 1α表达与G0 /G1期比例呈明显正相关性 (r =0 815 ,P <0 0 1)。结论 缺氧使人肺腺癌细胞A5 4 9发生G0 /G1期阻滞 ,HIF 1α在缺氧导致的人肺腺癌细胞A5 4 9G0 /G1期阻滞中可能起重要作用。

鼻咽脊索瘤7例临床分析

目的 探讨鼻咽脊索瘤的诊断方法及治疗方案。方法 回顾性分析 7例鼻咽脊索瘤的临床特征、误诊情况、治疗方法及随访结果。结果 ( 1 ) 7例中 6例被 CT及临床医师误诊为鼻咽癌 ;误诊率均为 87.1 % ( 6/7)。 ( 2 )全组 5年生存率 71 % ( 5/7) ,5年无瘤生存率 57% ( 4 /7)。结论 ( 1 )鼻咽脊索瘤易误诊为鼻咽癌。 ( 2 )

放疗并用胞必佳治疗肺癌29例疗效观察

29例肺癌行放疗联合红色诺卡氏菌细胞壁骨架 (胞必佳 )治疗 ,另外 2 9例行单纯放疗。胞必佳组获完全缓解 (CR) 7例、部分缓解 (PR) 17例 ,有效率 82 .7% ;对照组获 CR3例、 PR14例 ,有效率 5 8.6 %。两组有效率统计学比较有差异 (P<0 .0 5 )。胞必佳组发热发生率 34.5 % ,皮肤反应发生率 5 5 .1% ,二者均以 度为主。认为胞必佳可提高肺癌单纯放疗的近期疗效 。

15例脊髓空洞症放射治疗疗效分析

[目的]探讨放射治疗对脊髓空洞症的治疗作用。[方法]回顾性分析1993年3月至2001年3月该院共收治的15例脊髓空洞症患者的疗效 ,采用钴60或6MVX线或电子束照射 ,剂量21.6Gy,分次量为1.2Gy/次 ,每周5次。[结果]完全恢复 (CR)2例 ,好转(PR)8例 ,有效率66.7% ,稳定 (SD)3例 ,进展 (PD)2例。全组均无明显放疗反应。[结论]放射治疗是脊髓空洞症的一种重要的治疗方法 。

RNA干扰HIF-1α降低宫颈癌细胞基质金属蛋白酶-2的表达

背景与目的:缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)是普遍存在于实体瘤组织中的缺氧应答调控因子,在维持细胞能量代谢、肿瘤血管生成及转移、细胞增殖与凋亡等诸多方面起着重要作用。本研究探讨RNA干扰HIF-1α对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在宫颈癌HeLa细胞中表达的影响,初步探讨其机理。方法:①将15只裸鼠随机分为3组,分别用HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞和HIF-1α-HeLa细胞接种。②用免疫组化法检测各组移植瘤组织中HIF-1α、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、钙紧张素(β-catenin)和MMP-2的表达。③将HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞,HIF-1α-HeLa细胞分别在乏氧(1%O2)及常氧条件下培养48h,用Western blot检测各组细胞中HIF-1α、E-cadherin、β-catenin和MMP-2的表达。结果:①免疫组化法检测结果显示,接种HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞和HIF-1α-HeLa细胞的裸鼠移植瘤组织中HIF-1α的表达分别为(69.0±12.1)%、(62.8±12.3)%、(17.4±8.8)%,E-cadherin的表达分别为1.00±0.07、1.00±0.10、3.21±0.25,β-catenin的表达分别为4.21±0.92、4.31±0.87、1.29±0.72,MMP-2的表达分别为4.84±0.67、4.50±0.71、1.00±0.83。②HIF-1α和MMP-2的表达呈正相关(r=0.521,P=0.035)。③Western blot分析结果显示,在抑制HIF-1α表达的HIF-1α-HeLa细胞中,乏氧与常氧条件下HIF-1α、β-catenin和MMP-2蛋白低表达,E-cadherin蛋白高表达;而在HeLa细胞和pGenesil-1-HeLa细胞中得到相反的结果。结论:在人宫颈癌HeLa细胞中干扰HIF-1α后MMP-2的表达下降。

磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基N末端24个氨基酸对肝癌细胞增殖的抑制

目的观察磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的调节亚单位——p55PIKN端24个氨基酸抑制肝癌细胞增殖的作用。方法以含有p55PIK-N端24个氨基酸(N24)的腺病毒载体Ad-N24-GFP及对照病毒Ad-GFP,感染肝癌HepG2细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU掺入的方法检测其对细胞DNA合成的影响,Western blot分析细胞内高表达N24多肽后相关蛋白的表达水平。结果N24能有效阻滞HepG2细胞周期进程于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,Ad-N24-GFP组各期细胞分布为:G0/G1期(56.3±3.0)%,S期(30.1±2.9)%,G2/M期(13.6±4.1)%,而对照组腺病毒各期细胞分布为:G0/G1期(40.6±2.1)%,S期(42.7±3.3)%,G2/M期(16.7±2.8)%;BrdU阳性细胞比例显示:Ad-N24-GFP组R2为(31.8±5.2)%,Ad-GFP组R2为(48.5±3.7)%,提示N24能有效抑制HepG2细胞的DNA合成;Western blot检测显示高表达N24对细胞内的AKT磷酸化水平没有显著影响。结论在HepG2细胞中过表达N24能有效阻滞肝癌细胞周期进程,抑制细胞DNA合成。p55PIK为肿瘤的基因治疗提供了一个新的分子靶点。

吉西他滨增敏对宫颈癌放疗微血管密度及细胞凋亡的影响

目的 分析吉西他滨增敏对局部中晚期宫颈癌放疗微血管密度及细胞凋亡的影响。方法 将 4 7例中晚期宫颈癌患者 (Ⅱb期 ,Ⅲb期 ,Ⅳa期 )分成 2组 :A组 2 2例为放疗 +吉西他滨 (商品名 :健择 )组 ;B组 2 5例 ,行单纯放疗。每个病例在放疗前及放疗 (10Gy)后的 2 4h各取材 1次。免疫组化SP法测定微血管密度 (MVD) ,TUNEL法检测癌组织凋亡标记指数 (A LI) ,计算肿瘤消退 5 0 %所需时间 (T0 5 )。结果 ①A组MVD表达降低的程度 (16 0 0根 /mm2 )明显高于B组 (2 0 0根 /mm2 ) ,P <0 0 1;②A组诱导A LI增加 (0 5 7% )明显高于B组(0 2 4 % ) ,P <0 0 5 ;③A组T0 5 (9 0d)显著短于B组 (15 0d) ,P <0 0 5 ;④A组MVD表达降低程度与T0 5呈负相关 (r =- 0 6 2 8)。结论 吉西他滨增敏使宫颈癌放疗早期血管生成减少 ,细胞凋亡增加 ,局部肿瘤体积缩小的速度加快。

RNAi抑制Survivin基因表达对宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的影响

目的:通过RNA干扰技术抑制宫颈癌SiHa细胞中Survivin基因的表达,观察其对X线敏感性的变化。方法:构建Survivin短发卡RNA表达质粒pSurvivin-shRNA并转染入宫颈癌SiHa细胞,RT-PCR及Western印迹法分别检测Survivin mRNA及蛋白的表达情况,激酶活性检测法测定caspase-3活性变化,流式细胞仪法检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测转染细胞放射敏感性的变化。结果:与未转染细胞和转染阴性质粒细胞(SiHa/pNeg-shRNA细胞)相比,转染pSurvivin-shRNA质粒的SiHa细胞(SiHa/pSurvivin-shRNA细胞)中Survivin mRNA和蛋白表达明显下降;caspase-3活性明显增强,D405达1.34±0.05(P<0.05);8Gy的X线照射24h和48h后,SiHa/pSurvivin-shRNA细胞的凋亡率分别为(5.13±0.81)%和(11.27±1.89)%,明显高于SiHa/pNeg-shRNA细胞和未转染细胞(P<0.05);克隆形成实验结果显示SiHa/pSurvivin-shRNA细胞的成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加。结论:短发卡状RNA干扰技术阻抑宫颈癌SiHa细胞中Survivin基因的表达,增强caspase-3活性,可诱导细胞凋亡并促进SiHa细胞对X线的敏感性。

乏氧诱导的自噬与肺腺癌放射抵抗的相关性研究

目的研究乏氧诱导的自噬与肺腺癌放射抵抗之间的相关性。方法肺腺癌A549细胞行常氧和乏氧培养。构建靶向抑制乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)的shRNA表达质粒,转染乏氧A549细胞,筛选稳定表达的克隆细胞。克隆形成实验检测细胞放射敏感性。Western blot法检测各处理组细胞HIF-1α、beclin1蛋白的表达。结果乏氧细胞存活分数(SF2)为0.62,常氧细胞为0.43,提示乏氧A549细胞放射敏感性降低。常氧下A549细胞HIF-1α和beclin1蛋白低表达,乏氧12、24、48 h时间点HIF-1α和beclin1蛋白表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。相应时间点HIF-1α与be-clin1的表达呈正相关(r=0.75,P<0.05)。A549/HIF-1α-shRNA的SF2为0.45,放射增益比(SER)为0.72,明显低于阴性对照组,说明抑制HIF-1α表达明显提高乏氧A549细胞放射敏感性。乏氧条件下HIF-1α的表达被抑制后beclin1蛋白的表达明显降低(24 h:t=5.69,P=0.01;48 h:t=5.13,P=0.01)。结论乏氧诱导的自噬参与肺腺癌的放射抵抗。

Celecoxib在人癌裸鼠移植瘤抗癌与放射增敏的作用机制研究

目的探讨选择性环氧化酶2抑制剂celecoxib抗癌及放射增敏作用的可能机制。方法构建人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,celecoxib和/或移植瘤局部放射干预,检测移植瘤生长延缓、移植瘤组织中环氧化酶2与前列腺素E2含量的变化,并分析此变化与移植瘤生长延缓的关系。结果移植瘤最大径从8mm生长至10mm所需的时间,空白对照组为(4.42±0.78)d,单纯放射组为(6.25±0.70)d,celecoxib组为(7.14±1.06)d,celecoxib+放射联合组为(10.62±2.06)d;WesternBlot显示4组移植瘤组织中环氧化酶2水平无明显差异;前列腺素E2(pg/100mg)含量分别为空白对照组69.07±5.42,单纯放射组47.4±15.94,单纯celecoxib组28.62±4.48,celecoxib+放射联合组为43.2±11.73,与空白对照组比较差异均有显著性(P=0.009、0.005、0.026);但celecoxib+放射联合组与单纯放射组的前列腺素E2含量无显著差异(P=0.28);celecoxib引起的移植瘤生长延缓与前列腺素E2含量降低正相关(r=0.741)。结论Celecoxib及移植瘤局部放射均能延缓移植瘤生长,不影响环氧化酶2量的表达,但均能引起前列腺素E2含量的降低;celecoxib引起的移植瘤生长延缓可能与环氧化酶2活性被抑制后前列腺素E2含量的降低有关。