基于数据建模的浙江省稀有血型信息共享系统构建与应用

目的建立省级稀有血型库信息化管理平台,实现稀有血型的种类、献血者资料、血液库存等信息的互联互通和共享,提升稀有血型血液保障能力。方法采用鱼骨图,分析我省稀有血型管理在血站内部各业务环节以及血站间存在的信息壁垒。基于全省统一的采供血业务系统和血液云平台,引入数据建模技术,通过需求分析和模型设计,构建稀有血型献血者、稀有血型血液数据库视图,并开发统一的查询平台,实现稀有血型信息的共享。结果系统对稀有血型信息进行了集成、检索和展示,实现在血站内部各业务环节、血站间信息的互联互通。截止目前,除RhD阴性血型外,已入库的红细胞稀有血型种类8种,覆盖7个血型系统,稀有血型献血者289人,稀有血液血液实体冻存红细胞216单位。结论基于数据建模开发的信息系统,提高了系统整体效率和协同性,同时也降低了系统开发运维的工作量,为数据的标准化管理和应用发展提供技术借鉴,也为建立健全全国性的稀有血型信息网络提供模式参考和示范应用。

红细胞血型抗原拓展匹配适用范围中国专家共识

红细胞同种抗体会增加交叉配血的难度,导致患者红细胞输注延迟,甚至发生输注无效或急性溶血反应。红细胞同种抗体的产生概率大约在0.38%~2.38%,一些需要长期输血的患者(包括血液病等)抗体产生概率则更高,极大地增加了筛选到相合血液的难度及检测成本。如何有效预防红细胞同种抗体的产生,实现快速选择相合血液成分且能同时兼顾输注疗效与安全,一直是困扰临床输血工作者的难点问题之一。红细胞血型抗原拓展匹配是减少红细胞同种免疫机率的有效策略。本共识经国内输血医学和血液病学领域167位专家共同深入探讨后完成,旨在进一步规范红细胞输注时血型抗原拓展匹配的适用范围,为实现红细胞精准输注,提高输注疗效和安全提供技术支撑。

中山地区血小板抗体及特异性分布调查

目的了解广东中山地区无偿献血者及患者血小板抗体发生频率,研究血小板抗体特异性和交叉配型。方法利用固相免疫吸附法(SPIA)对献血者及患者血小板抗体进行筛查,流式细胞术(FCM)进行复查,Pak-Plus酶免法进行抗体特异性鉴定,并采用SPIA模拟血小板交叉配型。结果共检测献血者标本1049份,患者标本598份,SPIA筛查阳性分别为6(0.57%)份vs 49(8.19%)份(P<0.05);SPIA检测阳性标本中,献血者FCM、酶免法复查阳性符合率100%,患者FCM复查阳性符合率95%,酶免法阳性符合率88%;献血者初筛阳性标本中,5份为抗-HLAⅠ占83%,1份为抗-CD36占17%(人群发生率为0.10%)。14份酶免阳性患者标本中,2份抗-GPⅡb/Ⅲa,1份抗-GPⅠa/Ⅱa,8份抗-HLAⅠ,3份为混合抗体(HLAⅠ和GPⅡb/Ⅲa、GPⅠa/Ⅱa),按抗体种类计算,HLAⅠ抗体最多,占65%(11/17),其次为与HPA相关的抗-GP占35%(6/17)。血小板抗体阳性配型率低于30%的患者占多数,为71.4%(10/14)。结论中山地区患者血小板抗体阳性率明显高于无偿献血者,多为抗-HLAⅠ、抗-GP,抗-CD36发生率极低,因此应建立已知血小板抗原供者库,同时应开展患者血小板抗体检测及其配型,有助于解决临床血小板输注无效的问题。

数字化血小板基因配型系统应用及效果分析

目的 设计、构建浙江省数字化血小板基因配型系统。方法 通过优化业务流程和精准匹配,明确了系统功能与操作流程,在分析系统利益相关者及操作需求基础上,绘制系统职责及流程图。结果 实现了全省血小板基因分型数据的收集,并开发了血小板基因配型业务交互模块,系统运行效果良好。数字化配型方法的平均等待时间为3.9天,与手工配型相比,效率提升了27.78%。结论 数字化血小板基因配型系统显著提升了血小板配型效率,缩短了患者等待时间,有效促进了血站间的资源调配与共享。

1例p血型白血病患儿的用血管理

目的分析1例p血型白血病患儿的免疫血清学特点、p血型分子基础及用血管理和治疗,为罕见血型白血病患儿临床治疗提供参考。方法采用血清学方法检测p表型和抗-PP1Pk(-Tj^(a))抗体,并联合测序分析。结果该患儿为p血型,血清中含有抗-Tj^(a)。A 4GALT基因检测结果发现该例患儿为c.343 A>T(AAA>TAA)纯合突变,多态性位点c.903 C>G(CCC>CCG)纯合突变。调整常规化疗方案后,配合红细胞输注,治疗过程顺利。结论该白血病患儿为罕见p血型,为配合用血管理,需要合理调整临床治疗方案。对于拥有罕见血型的血液系统疾病患者,需要得到更加精细化的用血管理,并调整常规化疗方案。

中国人罕见的cisAB变异型分子机制分析

为研究中国人群ABO血型系统中罕见的cisAB变异型的分子遗传背景,用血型血清学方法鉴定12例ABO血型疑难样本和116例随机无血缘关系样本,应用聚合酶链反应和DNA序列分析等方法对样本ABO基因酶活性编码区外显子6、7和侧翼内含子进行突变筛选和检测,并对不同基因型的扩增片段进行单倍体序列分析。血清学检测发现12个样本均为(A强B弱)或(A弱B强),PCR产物直接序列分析表明这些样本均为cisAB变异型,并存在4种基因型。通过单倍体序列分析,从中发现2种cisAB等位基因,其中cisAB01不仅存在外显子7的467C>T和803G>C变异,还在第6内含子存在未经报道的163T>C和179C>T变异;另一种等位基因是在B101基础上保留了A101的803G位点,编码一条176G、235S、266M和268G组合的多肽链。经检索,未发现该组合的ABO等位基因,该等位基因已被国际血型抗原基因突变数据库命名为cisAB05等位基因。文章系统研究了中国人群cisAB变异型分子机制,发现了一种新的cisAB05等位基因,同时根据内含子序列推测cisAB01等位基因可能是通过A101和B101等位基因间的同源交换而形成的。

cisAB亚型第6、7外显子及侧翼内含子序列分析

目的 研究汉族ABO血型系统cisAB亚型的分子遗传基础。方法 在标准血清学鉴定和PCR SSP基因分型的基础上 ,对汉族cisAB亚型进行第 6、7外显子及侧翼内含子DNA扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接序列分析。结果 血清学鉴定表明2例标本分别为A2 B3 和A3 B ,先证者的PCR SSP基因分型肯定了其中的B和O1基因。DNA序列分析表明 ,其第 6外显子有2 6 1G缺失 /不缺失杂合 ;第 7外显子与A1基因相比 ,有T4 6 7C杂合和C80 3G杂合 ,796位为正常C ,表明其血型为罕见的cisAB亚型。结论 4 6 7T、796C和 80 3C三处核苷酸的独特性决定了cisAB亚型的分子遗传基础。

基于序列的多重聚合酶链反应对献血者HLA/HPA基因分型

目的研究嘉兴地区献血者HLA-I类(A、B位点)和HPA基因表达情况,建立本地区血小板基因数据库。方法采用基于序列的多重聚合酶链反应(multiplex PCR-SBT)对嘉兴地区5,411例样本进行HLA-I类(A、B)基因测序,对其中199例单采血小板献血者样本进行HPA1-6、15、21w系统基因分型,统计分析HLA-I类和HPA1-6、15、21w基因频率分布情况。结果5,411例样本中共检出HLA-A、B位点等位基因53种,其中HLA-A位点等位基因15个,频率前5位为A*2(0.3040)、A*11(0.2384)、A*24(0.1771)、A*33(0.0893)、A*30(0.0493);HLA-B位点等位基因38个,频率前5位为B*46(0.1137)、B*60(0.1136)、B*13(0.0931)、B*62(0.0822)和B*58(0.0820)。HPA1~6、15、21w系统均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,具有恒定性,以HPA-3杂合度(a/b杂合子基因型)最高(0.482),其次为HPA-15(0.437),HPA-3、15系统中a、b抗原频率相近,HPA-3、15系统有b/b纯合子基因型,分别为0.196,0.266。其余5个系统均以a/a纯合子基因型为主,分别为0.995、0.8995、0.990、0.975、0.945,未见b/b基因型。结论HLA-A、B位点和HPA3、15系统基因具有多态性分布特点,建立献血者HLA/HPA基因数据库可有效解决血小板输注无效问题。

α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶等位基因467C>T和539G>C变异导致A_2亚型

为了研究中国汉族人群ABO血型系统中A2亚型的分子遗传背景,发现并鉴定新的ABO等位基因,采用血型血清学方法鉴定5例ABO血型疑难样本,PCR扩增ABO基因转录调控序列和全编码序列,PCR产物经割胶纯化后直接测序,并对含有变异位点的扩增片段进行单倍体序列分析。结果表明5例疑难样本分别鉴定为A2或A2B亚型;进一步研究发现,1例A2B和1例A2样本分别含有A201和A205等位基因,另3例A2B样本中发现一个新的A2等位基因。该等位基因与A101相比,差异在外显子7的467C>T和539G>C变异,导致多肽链P156L和R180P的替换。结论首次发现467C>T和539G>C组合的A2等位基因,中国汉族人群中A2亚型具有遗传多态性。

鉴定9个新的RHD基因mRNA可变剪接体

为了研究各种RHD基因mRNA可变剪接体的基因结构，应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测正常人脐血样本RHDmRNA，对RHDcDNA进行TA克隆和序列分析，对各可变剪接体的剪接位点进行DNA序列分析，并将RHDmRNA进行表达序列标签（ESTs）分析。结果在28个阳性克隆中，除全长RHDcDNA外，共检测到12种（包括9种新的）RHD可变剪接体，发现外显子遗漏、5’和3’剪接位点变异3种剪接形式，涉及外显子2～9，其中6种新的剪接体同时存在RHD和RHCE基因同源杂交现象。ESTs分析还检索到内含子保留形式的剪接体。研究表明，RHD基因mRNA存在复杂的可变剪接机制，除己报道的剪接体外，检测到9种新的RHD可变剪接体，并发现了可变剪接和同源杂交并存现象。

中国浙江人群中Lewis血型相关的FUT3基因多态性初步研究

为研究中国浙江人群中Lewis血型相关的FUT3基因多态性,以血清学方法鉴定183例随机样本的Lewis表型,将其中39例Le(a-b-)以及选取的Le(a+b-)、Le(a-b+)和Le(a+b+)各3例进行FUT3基因全编码区序列分析,并对各种可能的复合杂合基因型进行单倍体序列分析。结果显示,真正的Lewis阴性表型在中国浙江人群中比例约为10.4%,在48例直接测序样本中发现59T>G、202T>C、314C>T、508G>A和1067T>A等5个变异位点;单倍体分析显示,除功能性的Le等位基因外,发现5种非功能性的le等位基因,分别为le59(59T>G);le1067(1067T>A);le59,1067(59T>G和1067T>A);le59,508(59T>G和508G>A)和le202,314(202T>C和314C>T)。结论:在浙江人群中,FUT3非功能性等位基因具有较为广泛的遗传多态性。

流式细胞仪法用于血小板相关抗体检测和血小板交叉试验

目的 应用流式细胞仪(FCM)进行血小板相关抗体检测和血小板交叉试验。方法 利用血小板抗体阳性、阴性血清探寻FCM法实验条件,血小板经血清致敏,洗涤后,加入荧光标记鼠抗人IgG反应,由FCM获取和分析。52人次正常人血清经FCM法检测后,统计界定正常值范围。1份阳性血清经9个稀释度倍比稀释,分别用FCM法和固相ELISA抗体筛选法检测。31名临床血小板输注无效患者分别用FCM法和抗原捕获酶免分析法(MACE)进行102人次血小板交叉配合试验。结果 FCM法检测正常值为荧光强度比值R<1.156,9个稀释度的阳性血清检测表明,FCM法最高可检稀释度为86.67,固相ELISA法最高可检稀释度为56.34(抗-HPA)和67.25(抗-HLA)。102人次血小板交叉结果显示,FCM法和MACE法无显著性差异(P>0.05)。结论 FCM法可用于血小板相关抗体检测和血小板交叉配血,是一种快速、灵敏的新方法。

重组表达糖蛋白GPIIIa片段偶联荧光微球分析人血小板抗原-1系统同种抗体

目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性。结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml)。微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照。36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果。其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPIb/IX和非HPA-1特异性的抗-GPIIb/IIIa)未发生交叉反应。结论:基于重组偶联血小板GPIIIa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定。

O01/O02基因型表现为B^(el)表型的分子研究

目的研究健康献血者ABO血型血清型和基因型不符的分子遗传背景。方法对1例ABO血型正反定型不符标本,进行血型血清学鉴定和ABO基因分型。在分析其ABO基因全编码区序列后,进一步对基因5’端表达调控区约5kb范围进行DNA序列分析,并分别以MKN28、KatoⅢ细胞株和正常ABO表型gDNA为对照,以重亚硫酸盐修饰法定量分析先证者ABO基因启动子区域CpG岛甲基化水平,观察CpG岛可能包含的表观遗传学信息。结果先证者红细胞正定型为O型,反定型为B型,吸收释放试验B抗原强阳性,血清糖基转移酶GTB阳性,确认其血清型为Bel表型。

基于免疫磁珠分选的调节性T细胞亚群嵌合性定量分析

为了探讨免疫分选偶联短串重复序列(STR)方法用于调节性T细胞(Treg)嵌合性定量监测的可行性,以淋巴细胞不同比例混合制备14组人工嵌合体血样,以单个核细胞为起点,以免疫磁珠阴性和阳性选择法获取CD4+CD25+Treg细胞,分选后的Treg细胞再进行16位点的STR长度多态性分析。结果显示,从分选后的Treg细胞提取的DNA量能满足STR检测要求,当嵌合体中受体比例≥10%时,16个STR位点均能检出受体和供体特异性等位基因,按照STR峰面积计算的受体比例与理论值相符;当受体比例≤1%时,仅有部分位点能检出受体特异性等位基因,实测嵌合率与理论值存在差异。结论:建立了基于免疫分选的Treg细胞嵌合性定量分析方法,对造血嵌合体的检出灵敏度和准确性在1%-10%,可用于造血干细胞移植术后嵌合体监测。

血小板数字化配型信息体系构建及其应用

目的 构建血小板数字化配型信息系统。方法 设计血小板数字化配型管理信息框架,开发血小板基因库管理模块主要功能,并与已建成运行的临床申请、实验室检测、献血服务、血液库存与发放等模块对接,将信息系统进行初步的临床应用。结果 成功开发了血小板配型信息体系,入库HLA和HPA已分型数据单采献血者5 048例,完成306份搜寻报告。16.5%的搜寻报告即刻在库存血液中找到配合型血小板,所有配型的中位等待时间为3 d。自动血液锁定方式比手动方式的等待时间明显缩短(3.8±3.1 d和5.4±5.4 d)。结论 研发的血小板数字化配型信息系统实现了献血者和患者的全流程管理,有助于提高血小板配型水平。

香港特区政府中小企业扶持政策分析

中小企业是香港经济发展的重要支柱及动力,香港回归以来,随着经济全球化趋势的进一步加强、中国对外开放的不断拓展和知识经济的兴起,中小企业在许多层面面临困难和挑战。特区政府成立以来,在营商环境、人力资源、信息、市场拓展等方面推出了多项对中小企业的扶持措施。基于特区政府的经济哲学和政策理念,在可以预见的时间内,政府对中小企业扶持政策的力度不会有太大的加强。

流式细胞术检测RhD抗原及其临床应用

目的 探讨流式细胞术 (FCM)检测RhD抗原及其临床应用价值。方法 选取标准的RhD(- )和RhD(+)细胞按 9个不同比例混合 ,分别用直标法 (FITC 抗 D)和间标法 (抗 D和FITC 抗 IgG)染色 ,在FCM上作细胞相对和绝对计数。选择合适检测条件 ,对 2名RhD(- )患者误输RhD(+)红细胞后作RhD(+)细胞计数。结果 与间标法相比 ,直标法检测结果更接近理论值。而单平台和双平台计数法与理论值间无显著性差异 (F =0 .0 32 5 ,P >0 .0 5 )。对 2名RhD(- )的 3份不同时间样本检测发现 ,RhD(+)细胞相对计数分别为 4 .73%、1 0 .87%和 2 0 .86 % ,绝对计数分别为 0 .1 2 4× 1 0 1 2 /L、0 .2 4 5× 1 0 1 2 /L和 0 .5 1 7× 1 0 1 2 /L。结论 FCM能检测RhD(- )细胞中不同浓度的RhD(+)细胞 。

流式细胞仪检测HLA-B_(27)抗原初探

目的 建立一种快速、准确的HLA B2 7检测技术。方法 利用流式细胞仪 (FCM)检测HLA B2 7抗原 ,并将结果与基因定型法比较 ,74例临床样本分别用FCM法、PCR ASP基因定型法检测HLA B2 7抗原和基因。结果 FCM法有 2 2例HLA B2 7阳性 ,5 2例阴性 ,与PCR ASP法结果比较 ,阳性符合率 88% ,阴性符合率 10 0 % ,总观察一致率 95 .9% ,二种检测方法无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 可以认为 ,FCM法检测HLA B2 7具有快速灵敏、多参数检测等优点 ,针对不同的样本来源和临床要求 ,与PCR ASP法配合使用 。

论“九七”回归以来的香港公务员制度改革

在回归以后的香港行政改革与行政发展中 ,公务员制度的改革与发展居于重要地位。香港公务员制度改革 ,是香港行政文化转型的必然要求 ,是提高政府能力与管制绩效的重要举措 ,是减轻政府财政压力的现实考虑 ,包括入职与调职、薪酬与福利、行为及纪律处分、表现管理、培训与发展等方面的改革 ,表现出对传统文官制度的变革和当代西方国家的管理主义改革浪潮的回应的特征 ,对我国内地公务员制度改革具有借鉴意义。