曼氏血吸虫虫卵蛋白IPSE基因合成、表达及特性分析

目的合成并表达曼氏血吸虫虫卵白介素4诱导物(IPSE)基因,并对其免疫特性进行分析。方法应用重叠PCR方法合成曼氏血吸虫IPSE基因,将其定向克隆至表达载体pET32a(+)的硫氧还蛋白(Trx)序列下游,构建重组表达质粒IPSE/pET32a(+)。将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达Trx-IPSE融合蛋白。大量制备表达产物,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化重组Trx-IPSE融合蛋白。用大量PBS对变性融合蛋白进行透析,获得部分复性的可溶性Trx-IPSE融合蛋白。应用蛋白质印迹(Westernblotting)分析其是否能被慢性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体所识别,及其与健康人血清中IgE抗体的结合能力。结果人工合成的IPSE基因序列与天然基因序列完全一致。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,含重组质粒的转化子细菌能表达相对分子质量(Mr)约35700的蛋白分子,与预计Trx-IPSE融合蛋白的相对分子质量大小相符。Westernblotting分析结果显示,变性的和复性的Trx-IPSE融合蛋白均能被慢性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体识别,融合蛋白Trx-IPSE能与健康人血清中IgE抗体非特异性结合。结论曼氏血吸虫IPSE基因合成获得成功,重组表达的IPSE具有与天然抗日本血吸虫抗体反应和与IgE非特异性结合的能力。

日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶基因克隆和序列分析

目的克隆日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)基因,并进行序列分析。方法制备日本血吸虫成虫mRNA,反转录合成cDNA,采用聚合酶链反应(PCR)技术,从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出SjTGR基因片段。通过TA克隆技术将该基因片段克隆到pGEM-T载体中进行DNA序列测定和生物信息学分析。结果采用PCR技术成功地从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出TGR基因片段,TA克隆后DNA序列分析显示该基因长度为1791bp,编码596个氨基酸残基,理论分子质量65kDa,生物信息学分析显示与曼氏血吸虫TGR氨基酸序列同源性为82%,含有吡啶核苷酸二硫化物氧化活性中心CVNVGC序列,在氨基端含有谷氧还蛋白特征性的活性位点CPFC基序。结论SjTGR基因克隆获得成功,为发展抗日本血吸虫新药及疫苗候选分子奠定了基础。

日本血吸虫再感染小鼠模型的实验观察

目的观察反复感染小鼠化疗后抗日本血吸虫再感染的效果，为分析人群再感染的规律提供实验依据。方法采用Ｃ５７ＢＬ／６纯系小鼠建立日本血吸虫再感染的动物模型，于攻击感染后４５天剖杀小鼠，计算小鼠体内成熟成虫数及肝虫卵数。结果与对照组相比较，攻击感染后再感染小鼠体内成熟成虫和肝虫卵数较对照组明显减少，减虫率达２７．１３％，减卵率为３６．６２％，肝脏虫卵芽肿数量也明显减少。结论表明反复感染小鼠经过治疗后可产生一定程度的对再感染的抵抗力，从而间接地验证了人群再感染的现场观察结果。

蛔虫重度流行区实施不同化疗措施后人群再感染的观察

目的了解蛔虫重度流行区采取不同方案的全民化疗措施后,居民个体和群体的蛔虫再感染状况。方法选择鹿塘、大园和杨墅塘3个自然村,全体居民用噻嘧啶首次化疗后,分别间隔3、6和12个月进行重复化疗,并在每年的春、秋季用Kato-Katz法各粪检1次。结果化疗后鹿塘、大园、杨墅塘3个自然村居民蛔虫感染率分别下降53.43%、41.93%和22.62%,人群受精蛔虫卵的比率分别下降50.02%、35.73%和38.30%,化疗1年后的再感染率分别为35.62%、35.48%和50.00%,新感染率分别为16.39%、21.05%和31.94%。人群蛔虫再感染1次和2次的发生率杨墅塘村>大园村>鹿塘村。结论1)试点村人群蛔虫再感染率均比同期新感染率高,蛔虫感染人群比未感染人群表现出更容易发生再感染的倾向;2)间隔6个月的全民化疗方案对控制人群蛔虫的再感染和新感染较经济、有效。

鄱阳湖血吸虫病疫区人群肝脾肿大的流行病学调查

目的了解鄱阳湖血吸虫病流行区居民肝脾肿大情况。方法以B超和粪检方法对鄱阳县表波村居民同时进行检查。结果居民肝肿大率和纤维化率分别为16.1%和76.6%,男性高于女性,并随着年龄的增大而肝肿大/肝纤维化率都呈现增高的变化趋势。脾肿大率较高,20-岁以上年龄组均高于79%,男性也高于女性。渔船民肝肿大和肝实质纤维化Ⅱ级改变率分别为22.2%和36.5%,均高于其他职业人群。结论血吸虫病疫区人群肝脾肿大和纤维化率均较高,B超检查可以反映血吸虫病疫区人群肝脾病理变化。

江西省蛔虫感染条件Logistic回归分析

目的探讨江西省蛔虫感染的危险因素。方法采用1:1匹配的病例对照研究,选择改良加藤厚涂片法检查蛔虫卵阳性者为病例组,同一调查县粪检虫卵阴性者为对照组,按性别、年龄(±5)配对,共收集255对病例和对照。EpiInfo6.0建立数据库,SAS8.2软件进行单因素和多因素条件Logistic回归分析。结果单因素及多因素条件Logistic回归分析表明,饭前、便后洗手是蛔虫病的保护因素,OR值分别为0.352和0.474;瓜果不洗即食、喝生水是蛔虫病的危险因素,OR值为1.753和1.722;使用卫生厕所是可能的保护因素,单因素Logistic回归OR值为0.375。结论饭前、便后洗手,瓜果不洗即食和喝生水是江西省蛔虫感染的主要影响因素。

日本血吸虫抗体检测试剂盒在鄱阳湖区现场应用分析

目的分析常用的日本血吸虫抗体检测试剂盒在鄱阳湖区日本血吸虫病流行区人群的应用价值。方法在鄱阳湖区3个日本血吸虫病不同流行程度的行政村(新建县曹会村、都昌县井头村和星子县新华村),对5岁以上的常住居民同时采用日本血吸虫感染的病原学(Kato-Katz法和尼龙绢集卵孵化法)检查方法和常用5种抗体检测试剂盒检查人群日本血吸虫感染情况。结果 3个调查点人群的5种常用免疫诊断试剂盒检测的抗体阳性率(33.1%～57.1%)均显著高于粪检阳性率(5.0%-8.2%)(P<0.05)。抗体阳性率的年龄分布趋势与粪检结果一致,人群粪检阳性率、抗体阳性率高峰均出现在40～49岁组人群。不同免疫诊断试剂盒的抗体阳性率随着感染度的增加而增高,敏感性为81.2%～94.5%,其中ELISA检测试剂盒敏感性最高;但粪检阴性者中仍有约26.9%～46.1%为抗体阳性。粪检阳性者中,仍有5.5%～18.8%为抗体阴性。结论 5种免疫诊断试剂盒均可用于流行区群体水平的血吸虫病流行病学调查,其中ELISA诊断试剂敏感性最高,且在不同感染度水平间无显著性差异。

重组IFN-γ用作reSj26kDaGST佐剂的实验观察

目的探讨重组ＩＦＮ－γ用作血吸虫抗原佐剂的可能性。方法用ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加鼠重组ＩＦＮ－γ，ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ加福氏佐剂以及ＩＦＮ－γ分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后４５ｄ解剖小鼠，比较各组小鼠成虫检获数及克肝卵数。结果ＩＦＮ－γ／ＧＳＴ组小鼠的减虫率和减卵率均略高于ＦＣＡ／ＧＳＴ组。结论ＩＦＮ－γ可以增强ｒｅＳｊ２６ＧＳＴ保护性免疫效果，初步提示ＩＦＮ－γ可作为血吸虫抗原佐剂使用。

鄱阳湖区人群土源性线虫感染与土壤污染状况调查

目的了解鄱阳湖区进贤县4个村土壤中土源性线虫卵污染情况及其与人群感染率的关系。方法在4个村131户农户的庭院、客厅、厕所、菜园4处采集土壤,土壤寄生虫卵检查采用饱和硫酸镁离心漂浮法,人群土源性线虫检查采用Kato-Katz法。结果4个村共调查1210人,蛔虫、鞭虫、钩虫感染率分别为26.26%、65.26%、1.74%。土壤样本共检查131户,蛔虫卵、鞭虫卵、钩虫卵检出率分别为58.02%、77.86%、3.82%。相关分析表明,4个村人群土源性线虫感染率与土样中土源性线虫卵检出率非常显著正相关(γ=0.995,P<0.01),其中人群蛔虫感染率与土样蛔虫卵检出率显著正相关(γ=0.954,P<0.05),人群鞭虫感染率与土样鞭虫卵检出率非常显著正相关(γ=0.991,P<0.01)。131户农户的菜园、厕所、庭院、客厅的蛔虫卵检出率依次为48.86%、47.53%、45.04%、34.35%,鞭虫卵检出率依次为66.40%、74.23%、54.20%、45.04%。蛔虫卵、鞭虫卵的每克土壤虫卵数均以菜园和厕所较高。土样中还查到其他寄生虫卵和成虫。结论鄱阳湖区进贤县的4个村土壤中土源性线虫卵检出率与人群感染率之间非常显著相关。

快速胶体金免疫层析法的建立及其对血吸虫病的诊断效果

目的建立一种快速、简便的血吸虫病免疫诊断方法。方法用金颗粒标记羊抗人多克隆抗体,建立快速胶体金IgG层析法(GICA-IgG),以此检测患者血清中的抗血吸虫抗体,并与常规间接血凝(IHA)抗体检测试剂进行比较。结果GICA-IgG和IHA两种方法对急性血吸虫病患者的检出率分别为95.24%(40/42)和100.00%(50/50);慢性血吸虫病患者的检出率分别为92.86%(130/140)和94.64%(106/112);正常人的阳性率分别为6.40%(8/125)和6.45%(8/124);与肝吸虫、肺吸虫和乙型肝炎患者的交叉反应率分别为3.13%(1/32)、14.81%(4/27)、12.00%(3/25)和6.25%(2/32)、51.61%(16/31)、4.00%(1/25)。对33例治疗前、治疗后0.5年和治疗后1年的同一患者进行疗效考核追踪观察,其血清0.5年和1年的阴转率GICA-IgG分别为50.01%、60.00%,IHA分别为16.13%、19.35%,两种方法的考核效果差异有显著性(P<0.01)。结论胶体金IgG层析法具有敏感、特异、简便和快速的特点,有一定的疗效考核价值。

综合护理干预对改善酒依赖患者疗效的影响

目的:探讨酒依赖患者应用综合护理干预后的疗效,为酒依赖患者的临床护理提供有益参考。方法:对60例酒依赖患者进行随机分组,观察组与对照组各30例,2组患者均给予药物替代治疗,对照组给予常规护理,而观察组在对照组的基础上采取综合护理干预方案,包括风险评估、制定全程健康教育计划、心理护理干预等。对2组患者出院时的戒酒心理、行为进行评价,同时于出院后每隔4个月进行1次随访,持续1年。结果:观察组的复饮率、再住院率分别为20.0%和10.0%,低于对照组的40.0%与33.3%,且观察的复饮间隔时间长于对照组,观察组护理后焦虑评分优于对照组。结论:对酒依赖患者在常规护理的基础上加强综合护理干预可以取得良好的临床效果,有利于患者康复。

重症粪类圆线虫病1例

1 病例 患者,男,58岁,农民．江西新干县人。2008年5月15日因头晕在当地县中医院就诊。患者既往有风湿性关节炎病史5年,间断自服地塞米松治疗3年余。血常规检查诊断为贫血,粪检见幼虫,未经鉴定即诊断为钩虫病。给予阿苯达唑顿服400mg,头晕症状有所改善。2008年6月17日因腹泻、头晕再次到原医院就诊,血常规检查诊断为贫血,粪检见幼虫,仍诊断为钩虫病,给予阿苯达唑400mg／d顿服,连服2d,腹泻减少。2008年7月2日因高热,呼吸衰竭送入江西省人民医院抢救。患者主诉腹痛、腹泻、全身酸痛、喘息及呼吸困难。

血吸虫病低流行状态下抗体检测的现场应用价值

目的评价间接红细胞凝集试验（IHA）和ELISA在血吸虫病低流行状态下的现场应用价值。方法于2008年和2010年同时采用改良加藤厚涂片法（Kato—Katz法）、IHA和ELISA平行检测鄱阳湖区血吸虫病流行区新华村728人和799人．并以三送二十七检Kat0-Katz法结果为金标准对免疫诊断结果进行评估。结果2008年和2010年人群Kato。Katz法、IHA和ELISA检出阳性率分别为10.3％（75／728）和3．8％（30／799）、40．0％（291／728）和31．5％（252／799）、40．1％（292／728）和40．1％（320／799），其中Kato—Katz法（X2=26．92，P〈0．05）和IHA阳性率（x2=11．82，P〈0．05）年间的差异均有统计学意义。IHA、ELISA的诊断结果与粪检结果的一致性较差，Kappa值均低于0．2（均P〈0．01）。IHA或ELISA筛查阳性者再以Kato—Katz’S法确诊。结果表明粪检阳性检出率与送粪次数和检查片数呈正相关（rIHA2008=0．922，rIHA2008=0．908，qnA2010=0．749，rELISA201种．798；均P〈0．05）。IHA和ELISA阴性的粪检阳性者主要为低感染度患者，每克粪虫卵数（EPG）≤40时，IHA抗体阳性率为66．1％（39／59）-87．0％（20／23）．EUSA抗体阳性率为62．7％（37／59）～100％（23／23）；EPG〉40时，ELISA均为阳性，但IHA仍有呈阴性者。结论为提高血吸虫病低流行状态下IHA和ELISA的诊断能力，降低假阳性和假阴性．建议人群化疗对象的确定采用血检过筛后Kato—Kat：粪检．由常规的“一送三检”改为“一送九检”。

鄱阳县新报告晚期日本血吸虫病的时空分布特征分析

目的分析鄱阳县新报告晚期血吸虫病(晚血)病例的时空分布特征及规律,为控制晚血的发生提供科学依据。方法以基于行政村的空间数据库,利用SaTScan对2009-2019年晚血发病率按空间、时间和时间-空间3种扫描探测模式进行统计分析,并通过ArcMap将分析结果可视化。结果2009—2019年鄱阳县累计报告晚血病例932例,年报告晚血发病率呈逐年下降趋势,其中最高年份集中在2010—2013年,疫情控制阶段晚血发病率高于传播控制阶段(F=9.617,P=0.013);单纯空间扫描显示,疫情控制阶段出现2个一类聚集区域,传播控制阶段出现4个二类聚集区域;单纯时间扫描显示,疫情控制阶段晚血发病率高峰集中在2012—2013年(RR=64.44,P=0.001),传播控制阶段集中在2018年(RR=11.23,P=0.001);时间-空间扫描显示,2009—2019共探测到2个一类聚集区域和1个二类聚集区域,均沿鄱阳湖分布;在传播控制阶段无一类聚集区域。结论虽然随着疫情的降低,晚血发病率也逐年下降,但在空间分布上依然存在多个集聚区域,针对此类区域在今后的防治工作中,应进一步加大晚血筛查和救治力度。

江西省农村居民肠道寄生虫感染调查及蛔虫生物流行病学研究

目的 探讨江西农村居民肠道寄生虫感染现状及蛔虫病生物流行病学特点。 方法 采用粪检、化疗驱虫后收集虫体等方法对江西进贤县鹿塘试区 6 2 5名居民进行了研究。 结果 该试区居民感染 9种肠道寄生虫 ,总感染率为 72 .80 % ,其中蛔虫、钩虫、鞭虫卵的阳性率分别为 5 1.5 2 %、11.80 %和 34 .6 0 %。以噻嘧啶对全体居民治疗后 ,在 5 9.40 %的居民中检获蛔虫 ,感染者平均虫荷为 2 .97条 (范围 1～ 32条 ) ,10 .0 0 %的排虫者可见未成熟蛔虫 ,推算人群每月蛔虫再感染率为 5 .13%。对粪检虫卵假阴性人群的分析显示 ,仅有单性蛔虫寄生者 (单雄或单雌 )占 82 .93% ,有 1条未成熟雌虫和 1～4条雄虫寄生者占 17.0 3%。粪检虫卵假阴性率随着寄生蛔虫数的增加而减少 ,当感染 6条以上蛔虫时 ,无假阴性出现。 结论 该社区人群肠道寄生虫感染率高 ,蛔虫再感染严重 ,有必要进行反复治疗以巩固防治效果 ;由于单性感染或未成熟蛔虫的缘故 ,居民实际蛔虫感染率要高于 Kato-

鄱阳湖地区影响晚期日本血吸虫病发生的因素分析

目的分析鄱阳湖区晚期日本血吸虫病(晚血)发生的影响因素,为有效控制晚血的发生提供科学依据.方法收集2002年以后发生的晚血病例169例作为观察组,按性别相同、年龄和居住地相近等原则进行1∶1配对,以慢性血吸虫病病例(慢血)作为对照组;采用自行设计的问卷进行回顾性调查,内容包括研究对象基本信息、确诊慢血前后可能与晚血发生的相关因素,以及通过查治病分户册收集2002年以来的查、治病情况,共计20项指标.结果单因素分析显示,职业、职业改变、慢血后伴有消化系统疾病、查病间隔年限、服药依从性、累计服药次数、年间受检率、年间血阳检出率、年间粪阳检出率、年间治疗率等11项指标有统计学意义;logistic回归的多因素分析结果显示,离开疫源地累计年数越多、高暴露接触疫水方式的减少、累计服药次数越多是晚血发生的保护因素;而年间血阳检出率越高、高易感季节接触疫水、服药依从性越差、伴有乙肝是晚血发生的危险因素.结论在今后血吸虫病控制措施中,健全有效地血吸虫病病例追踪管理体系,改进影响晚血发生相关因素的干预措施.

硫酸铵法提取血吸虫感染兔血清IgG初探

目的探索硫酸铵法提取血吸虫感染兔血清IgG用于制备阳性参考品的可行性。方法采用饱和硫酸铵溶液对感染兔血清中IgG进行沉淀分离,IHA试剂测定分离前后、冻干前后的抗体滴度以及冻干IgG复溶后的稳定性。结果滴度为1:320的血吸虫感染兔血清经硫酸铵沉淀法提取IgG,经透析、浓缩至原体积后抗体滴度为1:320,粗提IgG以阴性兔血清和蔗糖为冻干保护剂,冻干前、后滴度均为1:160;冻干IgG复溶0d、3d、6d和8d抗体滴度分别为1:160、1:80、1:40和1:40。结论硫酸铵沉淀法提取、冻干IgG不引起滴度改变,冻干保护剂的加入会使抗体滴度下降,冻干IgG复溶3d后滴度出现下降。因此,硫酸铵沉淀法可用于提取血吸虫感染兔血清IgG。

循环抗体与循环抗原组合检测诊断血吸虫病的应用观察

目的探讨血吸虫病循环抗原与循环抗体组合检测的诊断效能以及在血吸虫病疫区中的应用价值。方法采用夹心ELISA法和间接ELISA法对不同类型人群的血清标本进行循环抗原和抗SEAIgG抗体检测,比较抗原抗体组合检测的敏感性、特异性,以及在重疫区的检测效果。结果循环抗原与循环抗体平行检测敏感性和特异性分别为97.9%、92.2%;序列检测敏感性和特异性分别为76.0%、99.2%。对血吸虫病疫区粪检阳性人群平行检测阳性率为94.6%(35/37),序列检测阳性率为67.6%(25/37);疫区粪检阴性人群平行检测阳性率为69.8%(97/139),序列检测阳性率为39.6%(55/139)。结论组合检测方案中平行检测在重疫区对有效检出病人具有更高的应用价值。

外源性干扰物对血吸虫间接血凝试验结果的影响

目的了解溶血样本、抗凝剂、血清血脂和胆红素等对血吸虫间接血凝试验（IHA）的影响。方法制备或收集溶血血清、抗凝血血浆、不同浓度血脂及胆红素的血吸虫病阳性和阴性血清,进行IHA检测。结果血清溶血样本血红蛋白〈16g/L对IHA结果无影响;血红蛋白≥16g/L时,抗体效价随血红蛋白浓度升高而下降。不同抗凝剂血浆样本较对照血清均下降1个滴度。甘油三酯浓度在2.0-5.0mmol/L间对IHA结果无影响;在6.0-10.0mmol/L间阴性血清出现假阳性;在11.0mmol/L以上时阳性血清比对照血清出现一个滴度的上升,同时阴性血清出现假阳性结果。血清胆红素浓度小于450μmol/l,对IHA结果无影响。结论在模拟状态下,溶血、高血脂及抗凝样本均对IHA结果产生影响;血清胆红素浓度小于450μmol/L对IHA结果无影响。因此在现场及临床进行IHA检测时应避免使用溶血和有抗凝剂的标本,高血脂标本需要复查结果。

临床疑似弓形虫病患者血清流行病学调查

目的了解临床不同症状可疑弓形虫病患者感染状况,为临床弓形虫病诊断提供参考依据。方法采用ELISA法对疑似弓形虫病患者血清进行抗体IgGI、gM和循环抗原(CAg)检测。结果在1677份血清样本中,抗体IgGI、gM和CAg阳性率分别为28.50%、13.00%和4.95%;不同症状患者中脑炎症状者IgG、IgM抗体阳性率最高,分别为36.14%、19.28%,其次为不明原因发热者;癫痫症状者CAg阳性率最高,为7.29%。患者治疗三个月后复查CAg和IgMI、gG,阴转率分别为78.94%、71.93%、43.75%,具有显著性差异。结论临床患者在出现脑炎、长期不明原因发热及癫痫症状时应考虑排除弓形虫感染。