装载人参皂苷Rh2外泌体的制备及其对肝癌细胞株Huh7、PLC半数抑制浓度测算

目的制备装载人参皂苷Rh2(G-Rh2)的外泌体(Exos@G-Rh2),并测算其对肝癌细胞株Huh7、PLC的半数抑制浓度(IC50)。方法利用外泌体提取试剂盒从肝癌Huh7细胞培养上清中分离提纯外泌体(Exos),采用电穿孔法制备装载G-Rh2的外泌体Exos@G-Rh2,使用透射电子显微镜观察Exos@G-Rh2、Exos形态,使用纳米颗粒跟踪分析仪测算Exos@G-Rh2、Exos粒径,采用高效液相色谱(HPLC)法测算Exos@G-Rh2中G-Rh2含量,并计算Exos@G-Rh2载药量。采用PKH-26荧光染色法观察肝癌细胞株Huh7、PLC对Exos@G-Rh2的摄取情况,采用CCK-8法测算Exos@G-Rh2、游离G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50。结果Exos及Exos@G-Rh2在电镜下均可见经典的茶托状结构,且有质膜包裹,形态无显著差异。Exos@G-Rh2、Exos粒径分别为(156.90±10.23)nm、(143.47±8.62)nm,两者相比,P>0.05。Exos@G-Rh2载药量为24.25%±0.27%。在Huh7细胞、PLC细胞中,红色荧光清晰可见,主要在细胞质中。在Huh7细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(34.96±1.37)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(29.74±2.83)µg/mL,两者相比,P<0.05;在PLC细胞中,游离G-Rh2的IC50值为(33.41±1.47)µg/mL,而Exos@G-Rh2的IC50值为(30.08±1.12)µg/mL,两者相比,P<0.05。结论成功制备Exos@G-Rh2,其形态和粒径与Exos无显著差异,可被Huh7细胞、PLC细胞摄取。与游离G-Rh2相比,Exos@G-Rh2对Huh7细胞、PLC细胞的IC50更低。

护士对NICU早产儿声音使用和听觉需求认知问卷的汉化及信效度检验

目的汉化护士对NICU早产儿声音使用和听觉需求认知问卷并检验其信效度。方法通过邮件联系获得问卷开发团队的授权,遵循标准的问卷翻译模型形成中文版问卷。采用便利抽样选取广西壮族自治区6所妇幼保健院265名NICU护士进行调查,以检验该问卷的信度和效度。结果中文版问卷由15个条目组成。问卷的Cronbach'sα系数为0.830,折半信度为0.627,重测信度为0.827。中文版问卷各条目内容效度指数(I-CVI)为0.875~1.000,全体一致内容效度指数(S-CVI/UA)为0.950。探索性因子分析为0.835,累计方差贡献率为62.13%。结论中文版护士对NICU早产儿声音使用和听觉需求认知问卷具有较好的信效度,可适用于评估我国护士对NICU早产儿声音使用及听觉需求认知程度。

lncRNA LOC730101对肝细胞癌增殖、迁移与侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LOC730101对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)生物学行为的影响。方法利用R软件分析TCGA数据库LIHC数据集374例HCC组织和50例正常组织中LOC730101的表达差异。收集2018年广西医科大学附属肿瘤医院外科手术切除、经病理确诊的40例HCC患者的癌组织及其相应癌旁组织,培养肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3、HepG2和人正常肝细胞系L02,采用qRT-PCR检测组织和细胞系中LOC730101的相对表达水平。在肝癌细胞系Huh-7、HCCLM3中采用慢病毒感染法构建过表达LOC730101(OE-LOC730101)和敲低LOC730101(sh-LOC730101)的稳转细胞株,同时设置相应空白对照(control组)及阴性对照组(sh-NC组、OE-NC组),然后采用qRT-PCR验证感染效果,CCK-8实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。结果TCGA数据库分析结果显示,LOC730101在HCC组织中的表达水平高于正常组织(P<0.001);qRT-PCR检测结果显示,LOC730101在HCC组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001);LOC730101在各肝癌细胞系(Huh-7、HepG2、HCCLM3)中的表达水平也高于人正常肝细胞系L02(均P<0.05)。与相应阴性对照组相比,LOC730101敲低组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降(均P<0.05),而过表达组细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(均P<0.01)。结论LncRNA LOC730101在肝癌组织和细胞中表达上调且可能促进其增殖、迁移和侵袭。

人参皂苷调控非编码RNA抗肿瘤的研究进展

人参皂苷(Ginsenoside)是人参中主要的活性成分之一,具有广泛的药理作用,包括抗炎、抗肿瘤及增强免疫力等。非编码RNA (non-codingRNAs,ncRNAs)是肿瘤发生、发展过程中的重要调节因子。近年来,大量研究证实人参皂苷作为非编码RNA的调控因子,能通过多个生物学过程影响肿瘤细胞恶性表型发挥抗肿瘤作用。本文围绕人参皂苷调控非编码RNA发挥抗肿瘤作用的研究进展进行综述。

免疫微环境调控转移性肝癌机制研究进展

转移性肝癌仍是癌症相关死亡的主要原因和挑战。肝脏具有促转移、促侵袭等特性,包含了复杂的免疫系统,该系统对肠肝循环产生的新抗原能够一定程度上抑制免疫。本综述以结直肠癌肝转移为背景,重点讨论转移性癌细胞在肝脏中遇到的免疫微环境,分别从先天性免疫和适应性免疫应答方式阐述免疫微环境在转移性肝癌中的调控,既有利于新型治疗策略的制定,又为临床提供参考。

人脐带间充质干细胞条件培养基及外泌体对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

背景:间充质干细胞可通过分泌含细胞因子、生长因子和外泌体的细胞外囊泡调节肿瘤微环境,对肿瘤细胞生物学行为进行精准调控。目的:研究人脐带间充质干细胞条件培养基及外泌体对肝癌细胞生物学特性的影响。方法:收集人脐带间充质干细胞培养上清,通过高速离心并过滤获得人脐带间充质干细胞条件培养基;收集人脐带间充质干细胞培养上清,通过超高速梯度离心法提取人脐带间充质干细胞外泌体。使用PKH26标记人脐带间充质干细胞外泌体,与肝癌细胞MHCC97-H共培养,荧光显微镜观察MHCC97-H细胞摄取外泌体情况。通过CCK-8增殖实验、Transwell迁移和侵袭实验以及流式凋亡实验评估人脐带间充质干细胞条件培养基、人脐带间充质干细胞外泌体对肝癌细胞生物学功能的影响。结果与结论:(1)人脐带间充质干细胞外泌体可被MHCC97-H细胞摄取且主要分布于细胞质中;(2)人脐带间充质干细胞条件培养基处理后,MHCC97-H细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著增强(P<0.001,P<0.05,P<0.01),凋亡能力显著下降(P<0.001);而人脐带间充质干细胞外泌体处理后,MHCC97-H细胞的增殖能力下降(P<0.001),迁移、侵袭及凋亡能力显著增强(P<0.001);(3)结果表明,人脐带间充质干细胞条件培养基具有促进MHCC97-H细胞增殖、迁移、侵袭和抑制凋亡的能力;而人脐带间充质干细胞外泌体则具有促进MHCC97-H细胞迁移、侵袭及凋亡和抑制增殖的能力。

肝癌细胞抗原致敏树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞

目的:探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞(DC)体外经自体肝癌细胞抗原致敏后,对特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL) 的诱导作用. 方法:肝癌患者外周血经梯度密度离心法分离,获得DC前体细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM- CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DC. 制备自体肝癌细胞抗原,体外脉冲DC,检测DC诱导自体T细胞增生能力及特异性CTL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性. 结果:经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能诱导较强的自体T 细胞增生,且能诱导特异性CTL,该CTL,对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对CT26细胞、BEL-7402细胞无明显的杀伤作用. 结论:肝癌患者外周血DC体外能诱导高效而特异的抗肝癌免疫,提示DC可能在肿瘤治疗及预防其复发与转移中发挥重要作用.

端粒酶在大肠癌组织中表达的临床意义

目的探讨端粒酶在大肠癌组织中表达的临床意义。方法采用端粒重复序列扩增法(telom ericrepeat amp lification protocol,PCR)及免疫组化方法对比检测大肠癌、癌旁、正常大肠粘膜及腺瘤性息肉组织的端粒酶活性和端粒酶催化亚基(hum an telom erase reverse transcriptase,hTERT)的表达。结果端粒酶活性和hTERT在大肠癌组织中的表达率明显提高;低分化大肠癌组织中的端粒酶和hTERT表达率明显高于中分化及高分化大肠癌;伴淋巴结转移大肠癌端粒酶和hTERT阳性表达率明显高于无淋巴结转移者。结论端粒酶高表达可能与大肠癌的发生有密切关系,端粒酶表达水平的高低与肿瘤细胞侵袭、肿瘤进展和转移相关。

肿瘤抗原致敏树突状细胞协同CD3AK细胞的抗肿瘤作用

树突状细胞(dendritic cells,DC)作为体内的专职抗原提呈细胞,具有强大的激发初次免疫应答的独特功能,在肿瘤免疫治疗中已显示出其重要的应用价值[1-2].CD3AK细胞(anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells,CD3AK),具有高效而广谱的抗肿瘤作用[3].本实验旨在探讨DC与CD3AK细胞联合应用能否产生协同抗肿瘤作用,为肿瘤临床治疗提供新的思路.

树突状细胞介导的肝癌免疫治疗实验研究

目的探讨以树突状细胞(DC)为介导的原发性肝癌免疫治疗新方法。方法采用肝癌细胞制备肿瘤细胞性抗原冲击致敏体外培养的DC,体外混合淋巴细胞反应检测抗原致敏DC刺激同基因T淋巴细胞增殖的能力,观察负载肿瘤抗原的DC体内外诱导产生肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其抗肿瘤能力。结果经肝癌细胞抗原致敏的DC能诱导较强的自体T细胞增殖,且能诱导特异性CTL,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC和未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对非同种肿瘤细胞无明显的杀伤作用,经BEL7402肿瘤细胞抗原致敏的DC经皮下免疫小鼠可诱导有效的免疫保护作用,可抵抗野生型BEL7402细胞的再攻击,肿瘤生长受到明显抑制,瘤体出现延迟,生长减慢。结论DC具有强大的刺激T淋巴细胞增殖和诱导产生特异性CTL的能力,在体内外均能激发特异性抗肿瘤免疫应答。

树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞治疗肿瘤研究进展

树突状细胞(dendriticcells,DC)是已知的功能最强的专职抗原提呈细胞,在抗原加工提呈、抗原识别及T细胞激活中发挥重要作用。而细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillercells,CIK)是由多种细胞因子诱导而成,对多种肿瘤细胞具有杀伤作用的细胞毒性T细胞。以DC为基础的肿瘤免疫治疗日益受到人们的重视。文章就近年DC与CIK免疫治疗肿瘤的研究进展作一综述。

论信息不对称境遇下患者的诚信期待异化

当前我国医患危机境遇是一种价值选择困境,根源在于医患之间的信息不对称。历史经验与现实体验强化患者对医方的信任,患者在共同的诚信建构过程中变得懒惰,其行为本质上是患者医疗健康权利的非理性扩张,最终导致信息不对称境遇下患者诚信期待异化。反思患者自身的思维方式是消除诚信期待异化、重建医患诚信的必由之路。

肿瘤患者血清sIL-2R水平变化的临床意义

观察肿瘤患者血清可溶性白细胞介素 2受体 (s IL- 2 R)水平的变化及临床意义。方法 :采用双抗体夹心 EL ISA法对 40例正常人、 30例良性肿瘤及 180例恶性肿瘤患者的血清 s IL- 2 R水平进行测定。结果 :1正常人和良性肿瘤患者血清 s IL-2 R水平较低 ,恶性肿瘤患者明显升高 ,与正常人及良性肿瘤患者比较均有极显著性差异 (P <0 .0 0 1) ;2 s IL- 2 R水平与临床分期及病情严重程度有关 ,处于 、 期的肿瘤患者血清 s IL- 2 R水平显著高于 、 期肿瘤患者 (P <0 .0 1) ;3 6 5例恶性肿瘤患者经手术切除及综合治疗后血清 s IL- 2 R水平较术前明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :恶性肿瘤患者血清 s IL- 2 R水平明显高于正常人及良性肿瘤患者 ,并与病情发展和转归密切相关。

德性与死亡——论苏格拉底“德性即知识”

苏格拉底是第一个将道德建立在理性知识基础上的西方思想家。他为"德性即知识"的道德原则而不懈努力并为之受难。他的死亡成为一次意味无穷的哲学事件。苏格拉底通过自己的悲剧使理性成了西方人生活的普遍原则。

CD_3AK细胞的体外诱导及免疫生物学特征的实验研究

目的 :研究CD3AK细胞的体外诱导方法及其免疫生物学特征。方法 :采用抗单克隆抗体(anti CD3McAb)和基因重组人白细胞介素2(rIL 2)、植物血凝素(PHA)共同诱导人外周血单核细胞(PBMCS)制备CD3AK细胞 ,应用APAAP法、吉姆萨染色法分析CD3AK细胞的表型、核型等免疫生物学特征。结果 :微量的an ti CD3McAb(终浓度30～5000ng/ml)辅以少量的rIL 2(100u/ml)和PHA(100μg/ml)共同培养 ,就能诱导和大量扩增CD3AK细胞 ,细胞扩增倍数随着Anti_CD3McAb的使用浓度提高到5000ng/ml时 ,CD3AK细胞扩增倍数可达800倍以上 ,显著高于LAK细胞的扩增倍数 ,细胞常呈集落生长。CD3AK细胞的表型为CD3、CD4、CD8 的CD3AK细胞比率分别为(72±14) %、(29±4) %、(47±23) %。结论 :CD3AK细胞是一类以CD3、CD4、CD8 细胞为主的异质细胞群 ,并具有淋巴母胞样特征 ,CD3AK细胞为正常二倍体细胞。CD3AK细胞易于体外诱导和大量扩增 ,是一种很有应用前景的肿瘤免疫细胞。

胎肝天然低分子抑瘤物对肿瘤细胞增殖和分化的影响

目的 :观察胎肝天然低分子抑瘤物(LMW NTS)对不同组织来源的肿瘤细胞增殖和分化的作用。方法 :采用MTT比色法和 3H TdR掺入技术 ,测定培养中的肿瘤细胞DNA合成和线粒体琥珀酸脱酶活力 ,间接反映肿瘤细胞的增殖抑制和诱导分化情况。结果 :LMW NTS对受试的4种肿瘤细胞都有生长抑制作用 ,但作用强度有所不同 ,对来源于造血系统的肿瘤细胞作用最为显著。不同浓度的LMW NTS对肿瘤细胞线粒体琥珀酸脱氢酶活力的影响不同 ,低浓度时表现为促进作用 ,而高浓度时表现为轻度抑制作用。结论 :胎肝低分子抑瘤物能够抑制不同种类的肿瘤细胞的增殖 。

论儒家经权观的历史意义

在儒家哲学(伦理学)中,孔子是第一个提出"经权"观念的哲学家。继孔子之后,孟子和荀子明确表达了经与权的关系,并达到了较为完备的理论形态。在儒家"经权"关系的展开中,同时显示了这一理论本身的积极意义和消极意义。

大肠癌端粒酶及其相关因子表达的研究

目的:探讨端粒酶相关因子表达在大肠癌发生、发展以及浸润转移中的意义。方法:采用Southern-blot及端粒重复序列扩增法(Telomeric Repeat Amplification Protocol,PCR)测定端粒长度和端粒酶活性,免疫组化方法测定端粒酶催化亚基(Hu-man Telomerase Reverse Transcriptase,hTERT)以及p53、C-myc的表达。结果:端粒酶活性和hTERT在大肠癌组织中的表达率明显提高,相反,大肠癌平均端粒长度则明显缩短;低分化大肠癌组织中的端粒酶和hTERT表达明显高于中分化及高分化大肠癌;伴淋巴结转移大肠癌端粒酶和hTERT阳性表达明显高于无淋巴结转移者;p53和C-myc在大肠癌中的表达明显高于癌旁肠组织、正常大肠黏膜组织及腺瘤性息肉,C-myc蛋白在端粒酶活性阳性的大肠组织中的表达率为87.76%(43/49)明显高于端粒酶阴性组31.25%(5/16)(P<0.01),而p53在端粒酶活性阳性及阴性组中的表达率分别为79.79%(39/49)和62.50%(10/16),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:端粒长度改变及端粒酶高表达可能与大肠癌的发生有密切关系,端粒酶表达水平的高低与肿瘤细胞侵袭、肿瘤进展和转移相关;C-myc蛋白可能参与端粒酶激活。