大鼠损伤性周围神经组织cDNA文库的构建

为克隆神经损伤及再生过程中出现的诱向因子和营养因子基因，以ＳＤ大鼠手术损伤的坐骨神经组织为材料，提取ｍＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ，以λｇｔ１１为载体，构建了一个ｃＤＮＡ文库。经测定，该文库的容量大于１．５×１０６，重组百分率为９６．７％，插入片段长度分布在０．５～８＼＾０ｋｂ之间。扩增后的滴度达１．４／１０１２ｐｆｕ／ｍｌ。以该文库ＤＮＡ为模板，运用ＰＣＲ方法扩增出３６０ｂｐ的ＮＧＦ和６１６ｂｐ的ＣＮＴＦ阅读框架片段。以地高辛标记的ＣＮＴＦ探针，从文库中筛选出ＣＮＴＦ克隆。经ＤＮＡ测序证实确为ＮＧＦ和ＣＮＴＦｃＤＮＡ全序列。根据已获得的６５ｋＤ化学诱向因子抗体，应用ＡＢＣ法筛选文库，获得了阳性克隆，其插入片段为１．１ｋｂ左右。经Ｇｅｎｂａｎｋ查询证实为一新序列。该文库的建立为筛选和分离目的基因，从基因水平深入研究神经再生。

小鼠脊髓重与颈膨大截面积QTL研究(英文)

应用近交系小鼠A/J和C5 7BL/ 6J以及其F2 代重组小鼠定位脊髓重与颈膨大截面积数量性状基因座(QuantitativeTraitLoci,QTL)。结果表明 13个QTL与脊髓重和截面积相关 ,这些QTL分别位于 2、4、8、14、15、17、18、19和X染色体上。其中 6个QTL与脊髓重相关 ;4个QTL与颈膨大截面积相关 ;3个QTL与二者均相关。在 13个QTL中 ,3个QTL (P <0 0 1)———SC1(位于D15Mit15 8附近 )、SC2 (DXMit14 0附近 )和SC3(DXMit6 4附近 )其表型变异的解释率分别为 2 4 %、19%和 15 % ;加性效应分别为 - 3 78、3 4 1和 2 0 6mg。其他QTL的P值在 0 0 1～ 0 0 5之间。在上述 3个QTL中 。

大鼠坐骨神经损伤后神经与肌肉中一氧化氮合酶基因的表达

目的 探讨外周神经机械损伤对神经和所支配肌肉中神经型一氧化氮合酶 (nNOS)和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达的影响。方法 12只雌性SD大鼠分为 4组 ,分别用止血钳挤压右侧坐骨神经 30分钟、1、2和 5小时 ,然后取右侧坐骨神经和腓肠肌作为实验组材料 ,取左侧为自体正常对照。Trizol法提取样品总RNA。应用RT PCR法和RNA酶保护试验 (RPA)法测定 2种NOS的表达 ,以 2 ,3 二羟基丙醛 3 磷酸脱氢酶 (GAPDH)为内参。PCR电泳带和RPA杂交带的密度测定采用NIH图像分析软件。结果 与自体对照比较 ,神经组织在损伤各时间段中 2种NOS表达基本不变。肌肉组织的nNOS在 1小时组中表达升高 ,2小时组下降 ,5小时组升高。iNOS在 1和 2小时组中表达下降 ,5小时组升高。结论 神经机械损伤后神经短期内对神经自身NOS表达无影响 ,但对所支配组织中NOS表达产生影响 ,这种影响与非NOS的神经信号变化相关。

地塞米松对人肝癌细胞系诱导分化作用的初步观察

在无血清培养条件下，人肝癌细胞系SMMC-7721在浓度为1．0μg／ml的地塞米松诱导下，若干表型发生逆转．培养的细胞贴壁更加牢固，形态由长棱形为主转变为以多边形为主。PHA诱导凝集程度大幅度下降。Ag－aNOR明显萎缩、消失，数量也由1．66／核下降到0．12／核．初步观察表明地塞米格对人肝癌细胞系具有明显地诱导分化作用．

睫状神经节神经营养因子基因克隆

在构建了再生性外周神经组织cDNA文库的基础上，人工合成了睫状神经节神经营养因子（CNTF）阅读框架的引物，用PCR地高辛标记法标记了CNTF探针．筛选CDNA文库，得到了CNTF的阳性克隆，运用PCR法证实了克隆中存在着全长CNTF阅读框架，Sanger法测定了DNA序列，证实序列无误。CNTF基因克隆为从基因水平上研究CNTF的分子生物学作用机制打下基础．

机械挤压对大鼠血管内皮细胞一氧化氮合酶表达的调节作用

目的 :探讨机械挤压大鼠腿部致微循环改变与一氧化氮合酶 (NOS)表达之间的关系。方法 :采用间歇性气囊挤压袋 (IPC)挤压大鼠腿部。将 2 5只雄性SD大鼠随机分为 4个IPC实验组和 3个模拟组 ,4个IPC组分别挤压 0 .5、1、 5h和挤压 1h再等待 4h,3个模拟实验组处理方法与IPC组相同但不挤压。应用RT PCR、WestenrBlot和免疫组化方法检测了IPC作用前后 ,挤压部位的肌肉———胫前肌 (AT)和未挤压部位的肌肉———提睾肌 (CM)中内皮细胞型一氧化氮合酶 (eNOS)的表达。结果 :在IPC作用的不同时间段上 ,eNOSmRNA和蛋白在AT和CM中均有显著上升 ,在IPC作用 1h ,然后再等待 4h的实验组中 ,eNOSmRNA和蛋白又恢复至正常对照水平。结论 :IPC产生的机械压力增加了血管内皮细胞的剪切力 ,刺激该细胞NOS合成增加 ,进而增加了NO产物的释放量 ,使血管扩张 ,改善了局部微循环。

间歇性气囊挤压大鼠腿部对挤压部位和远端骨骼肌一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的 :为了进一步了解间歇性气囊挤压法 ( Intermittent pneumatic compression,IPC)挤压大鼠腿部与一氧化氮 ( NO)的关系。方法 :检测了大鼠骨骼肌中 3种一氧化氮合酶 ( NOS)同工酶 :神经型 NOS( n NOS) ;诱导型 NOS( i NOS)和内皮细胞型 NOS( e NOS) m RNA在 IPC作用后的表达变化。 2 5只 SD大鼠被随机分为 3个模拟实验组和 4个 IPC实验组。每只鼠取右侧胫前肌( AT)和提睾肌 ( CM)作为正常对照。 IPC组挤压 0 .5 ,1,和 5 h,及挤压 5 h加等待 4h,模拟实验组除不挤压外 ,其他操作均与实验组相同 ,然后分离左侧 AT和 CM作为处理后样品。所有样品应用 RT-PCR进行 NOS m RNA测定。以样品中看家基因 2 ,3 -二羟基丙醛 -3 -磷酸脱氢酶 ( GAPHD) c DNA为内参 ,与 NOS c DNA共同扩增。 PCR产物电泳条带密度用 NIH图像分析软件定量 ,并以与正常对照的对比值作为变化比率。结果 :在 IPC作用 0 .5、1和 5 h后 ,e NOSm RNA显著上升 ,在 AT中分别达到正常对照的 1.2 ,1.8和2 .6倍 ;在 CM中分别达到 1.2 ,1.8和 2 .7倍 ,而其他 NOS,除 5 h IPC组的 n NOS外 ,总体表现下调。在 IPC作用 1h加等待 4h组中 ,e NOS m RNA回复至正常对照水平。结论 :该结果证实了 IPC产生的机械压力至少部分增加了血管壁的剪切压 ,使内皮细?

胶质细胞系源性神经营养因子分子生物学的研究新进展

胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）属于转化生长因子β家族，由两条同源多肽链构成、cDNA长度有581bp和659bp两种。在神经组织和非神经组织中均有表达。GDNF对中脑多巴胺神经元和外周感觉，运动神经元的发育、存活和再生有较高的促进作用。

大鼠周围神经组织cDNA文库的构建

为了克隆周围神经组织中新近发现的营养因子、生长因子和诱向因子的基因，本研究以ＳＤ大鼠坐骨神经为材料，提取和纯化ｍＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ双链，与Ａｄａｐｔｅｒ连接后，再与脱磷酸化处理的λｇｔ１１臂相连，体外包装，构建了大鼠周围神经组织的ｃＤＮＡ文库。经测定，该文库的容量＞１．５×１０６，重组百分比为９６．７％，ｃＤＮＡ片段为０．５～８Ｋｂ。经扩增后的滴度达１．４×１０１３ｐｆｕ／ｍｌ。该文库的建立为筛选和分离目的基因，为从基因水平深入研究神经系统发育、再生。

五种微量元素对MMC诱导的人外周血淋巴细胞SCE频率的影响

本文报道了 Mo、Co、Se、Mn、Ⅰ5种微量元素在一定浓度下,对丝裂霉素 C(MMC)诱导的人外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)频率具有抑制作用。

无血清培养基培养人全血制备染色体研究

无血清培养基培养人全血制备染色体研究谭湘陵，刘梅江苏省南通医学院生物学教研室，２２６００１通过人外周血的培养制备染色体是最常用的方法。常规培养基中含一定量的血清，血清的使用被认为必不可少，但也存在一定的弊端［１］。国外对于细胞无血清培养技术进行了广泛...

杜仲醇提取物诱导骨髓间充质干细胞成骨分化中的Wnt信号途径

背景:近年来,中药及中药有效部分对骨质疏松的干预和治疗作用的报道较多,但涉及细胞成骨分化调控的信号途径的报道较少。目的:观察杜仲诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Wnt信号途径相关基因表达的变化。方法:将第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞,接种到6孔培养板中,每孔1×103个细胞,24h后更换诱导培养基(含体积分数为7.5%胎牛血清的DMEM/F12(1:1)加1/1000浓度的杜仲醇提取物)。阴性对照组仍为正常培养基培养。诱导8h,1d,3d和7d时采用RT-qPCR法测定Wnt信号途径中Fzd和LRP受体系列、β-catenin、核内Wnt调控靶基因系列及Wnt抑制因子(WIF1)等表达变化。结果与结论:与阴性对照组比较,诱导3d后Fzd2表达升高11.86倍,Fzd3升高达到2倍;诱导7d后,Fzd2表达升高5.12倍,Fzd3恢复到正常水平;β-catenin在诱导3d时表达升高达2倍;WIF1在诱导3d和7d后表达显著下降。结果提示Wnt信号途径可能参与了杜仲促骨髓间充质干细胞成骨分化过程。

杜仲水/醇提取物对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的观察杜仲水提取物和醇提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法 SD大鼠骨髓细胞体外培养并传代3次后进行成骨化诱导,诱导物分为水/醇提取物的102、103、104和1054个稀释度。诱导6 d后,测定细胞增殖活力和细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,14 d后水溶性茜素红S染色法钙化测定结节形成。结果 杜仲水/醇提取物对MSCs的增殖活力均无明显影响,对ALP活力均有上调作用。水/醇提取物在103到105稀释度下,对钙化结节的形成具有显著刺激作用,醇提取物对ALP活性和钙化结节形成的促进作用大于水提取物。结论杜仲水/醇提取物能促进骨髓MSCs成骨分化,醇提取物的作用大于水提取物。

五种中药对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用

目的:观察单味中药黄芪、丹参、淫羊藿及复方右归饮药物血清和煎剂以及雪莲花药物血清及其醇提液对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用。方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌。按10倍于任用剂量进行SD大鼠灌胃,心脏采血,制备血清。取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入含药血清、煎剂及雪莲花醇提液。药物血清分为15%1、0%5、%和1%浓度,其煎剂及雪莲花醇提液浓度分为10-2、10-3、10-4、10-5,作用3天后用MTT法测定细胞活力。结果:雪莲花含药血清及其醇提液在4个浓度组均显示促进细胞增殖。结论:雪莲花具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。

留学生医学遗传学教学初探

医学留学生教育已成为中国高等教育中的一个重要组成部分。遗传学是医学留学生重要的必修课程。高等教育的国际化对医学遗传学的教学模式提出了挑战。文章主要讨论了留学生医学遗传学的教学现状,详细阐述了我校印度籍留学生教学的特殊性,总结了其中出现的问题,并就如何迎接这些新的挑战,有效地提高教学质量提出一些可行的建议。

用原位杂交法研究猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位

用体外转录方法合成了瘦素 (leptin)长形受体 (Ob Rb)反义和正义RNA探针 ,用原位杂交法研究了 5头 2～ 3月龄母猪下丘脑内瘦素长形受体mRNA的分布定位。结果表明 ,猪瘦素长形受体mRNA分布于下丘脑的弓状核、腹内侧核、背内侧核、室旁核。

神经诱向生长因子18kD蛋白的纯化

提取与纯化诱向生长因子是神经生物化学研究中的一个重要课题．采用自然系统凝胶电泳，分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长作用的１８ｋＤ蛋白，再以等电聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养，揭示了ｐＩ为５．２的１８ｋＤ蛋白具有诱神经生长的作用．经高效液相色谱仪分析获得较纯的１８ｋＤ诱向因子．蛋白／多肽测序仪检测，１８ｋＤ蛋白Ｎ端氨基酸序列为：ＰＥＰＡＷＳＡＰＡＰ．

中药血清对大鼠bMSCs体外成软骨分化中Col2a1和Acan表达的影响

目的观察中药雪莲花、丹参、仙灵脾、黄芪和复方右归饮含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bMSCs)成软骨分化中Ⅱ型胶原α1(Col2a1)和软骨聚糖蛋白(Acan)表达的影响。方法 2月龄SD大鼠分离骨髓间充质干细胞,置含15%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基中培养。传至第3代后,将培养细胞分为未诱导组、TGF诱导组、中药血清诱导组和TGF-中药血清联合诱导组。中药血清的使用浓度为5%,由上述中药连续大鼠灌胃3 d后,分离外周血获得。各组细胞诱导至7 d和14 d时,分别提取总RNA,逆转录成cDNA,荧光定量PCR法检测Col2a1和Acan的表达,同时应用细胞免疫化学法检测诱导14 d的Ⅱ型胶原的表达。结果 bMSCs在TGF-β1的诱导下可以分化为软骨样细胞,在诱导后7 d和14 d,TGF诱导组Col2a1的表达量显著高于未诱导组,分别为14.272倍和35.833倍,中药血清组Col2a1的表达量变化不显著,TGF-中药血清联合诱导组Col2a1的表达量虽高于未诱导组,但显著低于TGF诱导组。Acan基因的表达量在各组中均显著低于未诱导组。结论骨髓间充质干细胞在体外可以分化为软骨样细胞,中药对细胞成软骨分化没有明显的促进作用,并对TGF诱导效应具有一定的抑制作用。

杜仲对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达的影响 水提液与醇提液有区别吗?

背景:以往实验证实杜仲能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,但对促进成骨分化的分子机制报道很少。目的:观察中药杜仲水/醇提取物对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达的影响方法:盐杜仲2g,分别加蒸馏水或甲醇至15mL,室温振荡1h,静置过夜后,15000r/min离心10min,弃沉淀。水浸上清不经处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩,再加水至15mL溶解剩余物后,得醇提取物水、醇提取物,用0.22μm滤膜过滤后于-20℃保存。取2月龄SD大鼠6只,体外培养至第3代SD大鼠骨髓基质细胞进行杜仲水/醇提取物诱导,诱导物分为1×10-2,1×10-3,1×10-4和1×10-54个稀释度;阴性对照组加入PBS;诱导培养6d。以免疫细胞化学法测定诱导6d的骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达。应用反转录-聚合酶链反应方法测定1×10-3,1×10-4稀释度诱导3d的骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素的基因表达。结果与结论:细胞免疫化学显示,杜仲水/醇提取物对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白的表达均有显著的刺激作用,以1×10-4的稀释度作用最强,且醇提取物的作用大于水提取物;骨保护素的表达却无显著变化。反转录-聚合酶链反应显示,水提取物对诱导3d后大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白的基因表达量显著高于醇提取物,骨保护素未检测出表达。证实杜仲水/醇提取物诱导骨髓基质细胞成骨分化与刺激骨桥蛋白表达相关,与骨保护素无关;水提取物促进骨髓基质细胞骨桥蛋白表达早于醇提取物。

四种中药煎剂和雪莲花醇提液对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响

背景:中药可能具有促进骨髓间充质干细胞增殖的作用。目的:观察单味中药黄芪、丹参、仙灵脾和复方右归饮煎剂及雪莲花醇提液对大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的影响。方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌。取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入煎剂及雪莲花醇提液。其浓度分为10-2,10-3,10-4及10-5,作用3d后用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活力。结果与结论:黄芪煎剂和右归饮煎剂及雪莲花醇提液4个浓度组均可促进骨髓间充质干细胞增殖(P<0.05)。提示雪莲花醇提液、右归饮煎剂和黄芪煎剂均具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。