淫羊藿苷对化疗后小鼠骨髓和细胞免疫抑制作用的影响

目的:观察淫羊藿苷(ICA)对环磷酰胺(Cy)所致小鼠骨髓和免疫抑制作用的影响,探讨ICA促进化疗后小鼠造血功能和免疫功能的作用及机制。方法:将小鼠随机分为6组:正常对照组,模型组,阳性对照组,ICA高、中、低剂量组。除正常对照组小鼠外,其余各组小鼠均腹腔注射Cy(200mg/kg)。第2天开始,对ICA高、中、低剂量的实验组小鼠灌胃不同剂量的ICA(150、80、40mg/kg.d),阳性对照组小鼠尾静脉注射参芪扶正注射液(1mL/d),模型对照组给予等量生理盐水,连续给予10d。经HE染色后观察小鼠胸腺组织结构的变化。用MTT比色法检测脾淋巴细胞的增殖率。用乳酸脱氢酶(LDH)法检测腹腔巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。用ELISA试剂盒检测混合细胞培养上清中TNF-α和IL-12的含量。用全自动血液分析仪检测外周血红细胞、白细胞和血小板数量的变化;外周血和股骨骨髓涂片经瑞氏-吉姆萨染色后,光镜下计数单根股骨骨髓细胞(BMC)的数量。结果:ICA具有保护小鼠胸腺、骨髓免受Cy损伤的作用。不同剂量的ICA组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力增加,巨噬细胞吞噬能力和分泌细胞因子的能力均增强,外周血红细胞、白细胞和血小板数量均明显上升。结论:ICA可逆转Cy化疗后小鼠骨髓造血和免疫功能的抑制状况。

淫羊藿苷(ICA)对化疗后免疫抑制小鼠的免疫促进作用

目的:通过观察淫羊藿苷(ICA)对化疗药环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,探讨ICA促进免疫功能的作用及机理。方法:除正常组小鼠外,所有小鼠经腹腔注射Cy(300 mg/kg);第二天开始给予实验组小鼠灌胃不同剂量的ICA[150、804、0 mg/(kg.d)],阳性对照组小鼠尾静脉注射参芪扶正注射液(1 ml/d),模型组给予等量生理盐水,连续干预10天。所有小鼠均于末次给药12小时后处死,计算胸腺指数(TI)和脾指数(SI),光镜下计数外周血和脾淋巴细胞数量。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。ELISA法检测TNF-α的含量。乳酸脱氢酶实验(LDH)检测小鼠脾脏NK和CTL细胞的活性。流式细胞术(FACS)检测脾淋巴细胞中NKT和CD3+T细胞的比例。结果:模型组小鼠以上各项免疫指标均有所下降。ICA处理组小鼠脾脏指数和胸腺指数均升高(P<0.01),脾淋巴细胞数量显著增加(P<0.01),但未达到正常对照组水平;ICA明显提高小鼠脾淋巴细胞的增殖反应,促进了小鼠脾NK和CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤活性(P<0.01),提高了小鼠脾细胞TNF-α的产生(P<0.01)。ICA处理组小鼠脾细胞中CD3+T、NKT细胞比例明显增加(P<0.01)。结论:ICA能促进小鼠免疫功能,具有逆转化疗后小鼠免疫抑制状态的作用。

香加皮杠柳苷对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用

目的:分析中药香加皮醇提物杠柳苷(periplocin from cortex periplocae,CPP)对食管癌细胞株TE-13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞周期阻滞的机制。方法:应用MTT法检测CPP对TE-13细胞的抑制作用;Gimsa染色法分析TE-13细胞的形态学变化;FCM法检测细胞周期分布和凋亡率;Western印迹法检测TE-13细胞经药物处理前后细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、CDK2蛋白表达的变化。结果:CPP对TE-13细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性,药物浓度越大,作用时间越长,抑制效应越强,CPP作用48h时,对TE-13细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.61μg/mL。经2μg/mL的CPP作用48h后,TE-13细胞发生明显的凋亡形态学变化;G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),S期细胞明显减少(P<0.01),G2/M期细胞没有明显变化(P>0.05)。不同浓度CPP作用48h后能降低TE-13细胞中CDK4蛋白的表达(P<0.01),对CDK2蛋白的表达则没有明显影响(P>0.05)。结论:CPP能显著抑制TE-13细胞的增殖,其作用机制可能与CPP诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。

香加皮杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:探讨中药香加皮醇提物杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制。方法:应用MTT法检测香加皮醇提物杠柳苷对食管癌细胞TE-13、Eca-109、TE-1和TE-10增殖的影响,并计算其对食管癌细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50);在光学显微镜下观察经杠柳苷处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察Eca-109细胞凋亡的形态学变化;FCM检测杠柳苷对Eca-109细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测经杠柳苷处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;caspase-3/7蛋白酶活性检测试剂盒检测细胞caspase蛋白酶活性的变化。结果:香加皮醇提物杠柳苷对人食管癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;经杠柳苷处理后,Eca-109细胞出现明显的凋亡形态学变化,与未处理组比较,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);经杠柳苷处理后,Eca-109细胞中survivin和bcl-2 mRNA的表达下调(P<0.05),bax mRNA的表达水平升高(P<0.05),xiap、caspase-3和caspase-7 mRNA的表达水平无明显变化,而caspase-3/7蛋白酶活性明显增加(P<0.05)。结论:杠柳苷可明显抑制食管癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调凋亡抑制基因的表达而诱导细胞凋亡。

木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤B16细胞的分化及其机制

目的:探讨从中药木鳖子中提取的单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxylcinnamaldehyde,PHD)对小鼠黑素瘤B16细胞分化的影响及其可能的作用机制。方法:以10、20、40μmol/L PHD作用B16细胞,设空白对照及福司克林(Forskelin)阳性对照组。磺酰罗丹明(suphrhodamineB,SRB)法检测PHD对B16细胞生长的抑制率,平板克隆集落形成实验检测细胞的克隆形成能力,Giemsa染色观察细胞形态,比色法检测细胞中黑色素含量和酪氨酸酶(tyrosinase,Tyr)活性,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力,Western blotting检测Tyr、酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase protein,Trp1)及MAPK信号转导通路中p-P38、pJNK和p-ERK1/2的表达。结果:PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的增殖抑制作用,10、20、40μmol/L PHD作用B16细胞48h后,其增殖抑制率与对照组相比明显增加[(12.78±0.87)%、(37.70±2.28)%、(42.17±4.18)%vs 0,P<0.05],20、40μmol/L PHD组增殖抑制率与Forskelin组相比明显增加[(37.70±2.28)%、(42.17±4.18)%vs(22.00±1.13)%,P<0.05]。40μmol/L PHD处理B16细胞24、48、72 h后,B16细胞呈典型分化形态,黑色素含量及Tyr活性与对照组相比均明显增加[(0.097±0.02)、(0.13±0.04)、(0.15±0.05)vs(0.085±0.003);(1.11±0.31)、(1.43±0.05)、(1.67±0.49)vs(0.64±0.10),P<0.05];细胞集落形成能力和迁移能力都明显降低(均P<0.05)。与空白对照组相比,PHD处理组细胞Tyr和Trp1的表达明显增加(P<0.05),MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的表达水平也明显增加(P<0.05),而p-ERK活性差异则无统计学意义(P>0.05)。结论:PHD通过上调MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的活性而对小鼠黑素瘤B16细胞产生明显的增殖抑制,并在形态和功能上诱导黑素瘤细胞的分化。

木鳖子醇提物对黑素瘤B16细胞增殖的抑制及其可能机制

目的:观察木鳖子醇提物(ethanol extract from cochinchina momordica seed,CMSEE)对黑素瘤B16细胞增殖的影响,初步探讨其作用机制。方法:MTT法和克隆集落形成实验检测CMSEE对小鼠黑素瘤B16细胞生长的影响,倒置相差显微镜和瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞技术(FCM)检测B16细胞周期分布和凋亡率的变化,比色法检测CMSEE对B16细胞黑素生成和酪氨酸酶活性的影响,RT-PCR法检测CMSEE对B16细胞中C-myc、P38和Tyr基因表达的影响。结果:CMSEE(10～100mg/L)明显抑制B16细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),呈质量浓度和时间依赖性。10～40mg/LCMSEE处理后,B16细胞呈现典型的细胞分化形态,细胞周期阻滞于G0/G1期,黑素产生和酪氨酸酶活性增加(P<0.01),C-myc基因表达下调,P38和Tyr基因表达上调;100mg/LCMSEE处理后的B16细胞呈现凋亡形态变化[凋亡率达(37.2±3.29)%],黑素生成减少(P<0.05),酪氨酸酶活性降低(P<0.01)。结论:CMSEE体外对B16细胞增殖有明显的抑制作用,其机制与其低剂量诱导分化和高剂量诱导凋亡有关。

油酸钠对纳米氢氧化镁的表面改性研究

采用油酸钠对纳米氢氧化镁进行表面改性,讨论了加入量、改性温度、改性时间对活化指数的影响;应用沉降速率、吸油率、粉末接触角等指标对改性前后的纳米氢氧化镁进行分析,并应用TEM、XRD对改性前后的氢氧化镁进行表征。实验结果表明:油酸钠在40℃、改性时间2h、添加量4%时,活化指数较好;改性后氢氧化镁粒径变小,沉降速率减慢,吸油率下降,粉末接触角增大,阻燃性能大大改善。

木鳖子提取物体外抗肿瘤活性的初步研究

目的:观察木鳖子(cochinchina momordicaseed,CMS)水提物(wate rextract of CMS,CMSWE)和醇提物(ethanol extract of CMS,CMSEE)对肿瘤细胞生长的影响,探讨CMSEE的抗肿瘤机制。方法:制备CMSWE和CMSEE。MTT法检测CMSWE和CMSEE对人黑色素瘤B16、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MDA_MB_231、食管癌细胞TE_13,以及正常人外周血淋巴细胞(PBMC)生长的影响,计算细胞生长抑制率;光镜下观察细胞形态变化;瑞氏_吉姆萨染色观察B16细胞凋亡形态学变化。流式细胞技术(FCM)检测B16细胞凋亡率和细胞周期分布。结果:CMSEE(25～300mg/L)对B16、A549、MDA_MB231和TE_13细胞增殖均有明显的抑制作用(P<0.01),对PBMC的增殖没有明显影响。CMSWE(25～300mg/L)对A549、TE_13、MDA_MB231、PBMC的生长没有明显影响,仅对B16细胞的增殖有较弱的抑制作用,且各浓度组抑制率均小于相同浓度的CMSEE(P<0.01)。经CMSEE处理后,B16细胞显示典型的凋亡形态变化,凋亡率明显增高(P<0.01),G0/G1期细胞明显增加,S期、G2/M期细胞减少(P<0.01)。结论:CMSEE体外对人肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用,其抗肿瘤机制可能与阻滞肿瘤细胞周期和诱导凋亡有关。

木鳖子醇提物诱导小鼠黑素瘤B16细胞分化的作用机制

目的:探讨木鳖子醇提物(ethanol extract of cochinchina momordica seed,CMSEE)诱导黑素瘤B16细胞分化的作用机制。方法:CMSEE处理B16细胞后,瑞氏染色法观察B16细胞的形态变化;比色法检测B16细胞的黑素含量。Westernblotting检测经CMSEE和p38、ERK通路抑制剂SB203580、SD98059分别处理后B16细胞中p-p38、p-ERK表达的变化。结果:CMSEE可诱导B16细胞分化,使细胞的黑素量含量明显升高(P<0.01),10、20、40μg/ml CMSEE处理组B16细胞的黑素量D值分别为(0.057±0.007)、(0.173±0.005)和(0.249±0.002),而对照组为(0.037±0.002)。20μg/ml CMSEE处理B16细胞后,p-p38蛋白表达水平明显升高,处理60 min时的相对表达量最高,为对照组的5.6倍;而p-ERK表达水平明显降低(P<0.01),处理60 min时的相对表达量为对照组的25%倍。p38通路抑制剂SB203580可阻断CMSEE对B16细胞的分化诱导作用,而ERK通路抑制剂SD98059可增强CMSEE对B16细胞的分化诱导作用。结论:p38通路和ERK通路的活化参与了CMSEE对B16细胞的分化诱导作用。

淫羊藿苷增强CIK细胞对B-MD-C1(ADR^(+/+))细胞杀伤敏感性的实验研究

目的观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对CIK杀伤子宫内膜癌耐药细胞株的影响,初步探讨其作用机制。方法 MTT检测ICA对子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)检测ICA对肿瘤细胞周期分布和凋亡的影响;乳酸脱氢酶释放法(LDH)法检测CIK(细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞)对ICA处理前后肿瘤细胞的杀伤作用。RT-PCR法和流式细胞术检测肿瘤细胞表面粘附因子CD18和CD54基因和蛋白表达的影响。结果 12.5~50μg/ml ICA对B-MD-C1(ADR+/+)细胞活力和凋亡没有明显影响。100μg/ml ICA能明显抑制B-MD-C1(ADR+/+)细胞的增殖(P<0.01),且可诱导其凋亡。经0~100μg/ml ICA处理12 h后,S期细胞明显增加(P<0.01)。经12.5~50μg/ml ICA处理12 h后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞CD18和CD54基因和蛋白表达均增加,且对CIK细胞的杀伤敏感性增强,呈现ICA浓度依赖性。结论 12.5~50μg/ml ICA增加了B-MD-C1(ADR+/+)细胞对CIK的杀伤敏感性,与ICA诱导肿瘤细胞CD18和CD54表达增加有关。

含幽门螺杆菌特异性抗体牛奶清除幽门螺杆菌效果的临床随机试验

目的:比较观察抗幽门螺杆菌抗体牛奶根除幽门螺杆菌的效果。方法:用4株幽门螺杆菌(1株为标准菌株,3株为本地流行菌株)免疫奶牛,制备出抗幽门螺杆菌抗体牛奶。本次试验共筛选148例患者,C-14呼气试验阳性的患者为72例,最后符合入选标准的为39例,将符合标准的患者随机分为试验组和对照组,分别为21例和18例,试验组饮用含特异性幽门螺杆菌抗体的牛奶,对照组饮用普通牛奶,连续饮用2个月后,观察结果。结果:试验组的21名对象中,9人C-14呼气试验转为阴性,10人降低。有效清除率达42.86%,而对照组未有清除,两组清除率有统计学意义(P=0.005,P<0.05)。结论:抗幽门螺杆菌抗体牛奶具有多克隆性和很高的效价,能够有效清除胃内幽门螺杆菌。

胃癌研究中实时定量PCR实验内参基因的选择

目的寻找胃癌研究中较为恒定和适宜作为内参基因。方法选取50例术后胃癌组织和癌旁组织,1株胃正常上皮细胞株和6株胃癌细胞株,分别提取组织和细胞总RNA。q RT-PCR(real time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction)实时定量方法检测内参基因GAPDH(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)、ACTB(β-actin)、RPⅡ(RNA polymerase subunitⅡ)和18s RNA在上述两组样本中的表达量,对比四种基因表达的变化。选择肿瘤标志物癌胚抗原CEA(carcino-embryonic antigen)作为待测目的基因,分别用上述4种基因作为内参,用相对定量q RT-PCR的方法在上述组织和细胞中检测CEA的表达。使用ge Norm软件分析最优化的内参基因。结果与癌旁组织相比,对应癌组织中GAPDH、ACTB、RPⅡ的表达均发生明显表达上调(P<0.05),上调倍数分别约为(6.49±1.12)、(5.02±0.87)和(3.68±0.78)倍。而18s RNA在两种组织中未发生明显表达变化(P>0.05)。GAPDH、ACTB、RPⅡ和18s RNA在胃正常上皮细胞和胃癌细胞中表达水平未发生明显变化。用GAPDH、ACTB、RPⅡ作为内参基因时,CEA m R N A上升的倍数和比率均明显减小(P<0.05)。用18s RNA作为内参时,CEA在癌组织中表达明显上升,上升倍数为(2.87±0.56)倍,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论在各种组织和细胞中没有完全恒定的内参基因。18s RNA可作为q RT-PCR实验检测胃组织基因表达最适宜的内参基因。

香加皮宝霍甙-Ⅰ抑制人食管癌细胞增殖的机制

目的观察香加皮活性成分宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞增殖活性及凋亡的影响,并探讨其与β-catenin通路的关系。方法采用MTT法观察宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞Eca-109增殖活性的影响;An-nexin V/PI染色检测宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞凋亡的影响。RT-PCR法检测宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞β-catenin、survivin和c-myc mRNA表达的影响,Western blot和激光共聚焦显微镜检测食管癌细胞β-catenin、磷酸化β-catenin、survivin和c-myc蛋白表达的变化。结果 10～40μg/ml宝藿甙-Ⅰ明显降低了Eca-109细胞的增殖活性并诱导其凋亡。经宝藿甙-Ⅰ处理24 h后,β-catenin、survivin和c-myc mR-NA和蛋白表达水平均降低,磷酸化的β-catenin蛋白表达升高,β-catenin在细胞核和细胞质中的表达均降低,且在胞核中的降低更为明显。结论香加皮宝藿甙-Ⅰ可通过调节β-catenin通路活性抑制食管癌Eca-109细胞增殖。

TTC-脱氢酶活性测定中标准曲线的影响因素研究

此文采用722S型可见分光光度计,以连二亚硫酸钠为还原剂,对传统TTC-脱氢酶活性测定法中影响标准曲线制作的因素进行了研究,确定了最佳测定条件为:最大吸收峰在475nm处;连二亚硫酸钠的最佳投量为5.0mg/5mL;TTC溶液的保存及整个实验过程应避光。最佳反应时间为30min。

微波消解对剩余污泥活性影响的研究

以活性污泥为材料,连二亚硫酸钠为还原剂,丙酮为萃取剂,采用TTC-脱氢酶活性测定法测定污泥脱氢酶活性。通过在不同温度下对活性污泥进行微波消解,研究其脱氢酶活性变化以及微波消解对活性污泥中微生物的灭活效果,并探讨了脱氢酶活性与细菌总数的关系。

微波消解对剩余污泥中蛋白质的影响研究

采用微波消解的方法对剩余污泥进行处理,设定四个消解温度梯度:45℃、65℃、85℃和95℃,消解5min后考察剩余污泥中蛋白质的溶出量;在设定的不同温度下分别增加10min和30min的消解时间,考察剩余污泥中蛋白质溶出量的变化。试验结果表明:蛋白质的溶出量随着微波加热温度的升高而增加,增加消解时间,蛋白质的溶出量也有所提高。

碱性pH条件下增强剩余污泥厌氧产酸的研究

在污水处理厂内部,将污泥进行厌氧发酵来获取用于生物除磷所需的乙酸和其他挥发性脂肪酸等生物易降解基质是可行的,同时还实现了污泥的资源化利用。在污泥厌氧发酵的影响因素中,pH值是重要的参数之一。在温度为20～22℃的条件下,研究了剩余污泥在不同pH条件下(4.0～11.0)厌氧发酵产酸的情况。结果表明:pH值为8.0～11.0时所产生的挥发性脂肪酸(VFAs)总量多于pH值为4.0～7.0的,特别是在pH=10.0的条件下,第12天时的产酸量高达256.16mg/gVSS,是pH=7.0时的3.0倍左右。此外,还从SCOD溶出量、水解酶活性、甲烷产生量等方面探讨了碱性条件下剩余污泥产酸增多的机理。

连翘叶乙醇提取物对人食管癌细胞增殖抑制作用的研究

目的研究中药连翘叶乙醇提取物体外对食管癌细胞增殖的影响及对TE-13细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法应用MTT法分析不同浓度连翘叶乙醇提取物(ethanol extract of Forsythia sus-pense leaf,FSEE)对人食管癌细胞TE-13、TE-1、Yes-2和Eca-109增殖的影响;光学显微镜下观察经FSEE处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察TE-13细胞凋亡的形态学变化;经Annexin V/PI双染后用流式细胞术检测FSEE对TE-13细胞凋亡率的影响;用不同浓度(0.1、0.2、0.5mg/ml)FSEE作用于TE-13细胞24 h后,分析细胞PARP、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达的变化。RT-PCR法检测FSEE对TE-13细胞凋亡相关基因Bcl-2家族中Bcl-2、Bcl-xL、Bax mRNA表达的影响。结果 FSEE对人食管癌细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);经FSEE处理24 h后,TE-13细胞出现明显的凋亡形态学改变,TE-13细胞凋亡率明显增高,与未处理组比较差异有统计学意义(P<0.01);经0.1、0.2、0.5 mg/mlFSEE作用24 h后,TE-13细胞PARP、Caspase 3、Caspase 9蛋白出现裂解片段,并随药物浓度增加,裂解片段浓度升高,呈浓度依赖性,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。经FSEE处理后,TE-13细胞BaxmRNA表达上调,Bcl-2和Bcl-xLmRNA表达水平下调。结论 FSEE在体外可明显抑制食管癌细胞的增殖,诱导TE-13细胞凋亡,其机制可能与其通过Caspase依赖性的内源途径诱导细胞凋亡有关。

痰热清注射液可增强Lewis肺癌化疗小鼠的免疫功能

目的研究痰热清注射液对Lewis肺癌化疗模型小鼠免疫功能的影响,探讨该药对肺癌小鼠的免疫调节作用。方法构建小鼠Lewis肺癌模型,分为模型对照组、单独痰热清治疗组、单独化疗组、联合痰热清化疗组,另设正常对照组。每组8只。取各组小鼠外周血后,引颈处死小鼠,取瘤组织、股骨、脾脏和胸腺用于后续实验。观察各组小鼠瘤组织质量、体积,流式细胞术检测各组瘤细胞凋亡水平及瘤组织CD3+T细胞、CD3-NK1.1+细胞浸润情况,HE染色观察胸腺组织结构,计算胸腺指数,并检测外周血淋巴细胞计数及股骨有核细胞总数、MTT法检测脾细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性。反转录PCR技术检测小鼠瘤组织表达γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的水平。结果化疗后,联合痰热清化疗组小鼠胸腺指数、外周血淋巴细胞计数及股骨细胞总数均明显高于单独化疗组。化疗后,联合痰热清组小鼠瘤组织CD3+T细胞及CD3-NK1.1+细胞浸润程度均明显强于单独化疗组。化疗后,联合痰热清组小鼠瘤组织表达IFN-γ及TNF-αmRNA水平明显高于单独化疗组,脾CTL杀伤活性明显高于单独化疗组。结论痰热清注射液对肺癌化疗造成的机体的免疫功能损伤有明显保护作用,并对机体抗肿瘤免疫力有明显的促进作用。

天花粉蛋白抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长及逆转syk基因甲基化的研究

目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导细胞凋亡过程中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)基因甲基化状态的改变,以寻找新的去甲基化药物。方法:采用MTT法分析TCS对MDA-MB-231细胞增殖的影响,Giemsa染色法观察TCS作用后细胞形态学的变化,FCM检测不同浓度TCS作用48h后MDA-MB-231细胞凋亡和细胞周期分布情况,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测MDA-MB-231细胞经TCS作用前后syk基因甲基化状态的改变,RT-PCR方法分析TCS作用后MDA-MB-231细胞中syk、Dnmts和MBD2 mRNA表达量的变化,比色法检测TCS对MDA-MB-231细胞DNA甲基转移酶活性的影响。结果:TCS体外对MDA-MB-231细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性;TCS可诱导MDA-MB-231细胞出现空泡样变性、核固缩和核碎裂等细胞凋亡形态学改变,能使MDA-MB-231细胞凋亡并可诱导细胞生长周期阻滞,凋亡率明显高于对照组(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性。TCS可以逆转MDA-MB-231细胞syk基因启动子区甲基化状况;MDA-MB-231细胞syk mRNA表达阴性,经TCS作用后,syk mRNA表达阳性;MDA-MB-231细胞经TCS作用48h前后Dnmts和MBD2 mRNA表达量没有明显变化(P>0.05),但Dnmts活性降低。结论:TCS在抑制MDA-MB-231细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中对syk基因具有明显的去甲基化作用,因而可能成为新型的去甲基化药物。