男性不育机制部分研究热点的探讨

半个世纪以来,男性不育患者的比例有升高趋势,但其病因和发病机制仍未完全阐明。本文结合我们的部分研究成果,概括介绍男性不育机制的部分研究热点,着重介绍精索静脉曲张、甲醛及男性不育相关基因与男性不育的可能关系。

“三位一体”推进“走转改”——以解放日报为例

新闻战线开展“走基层、转作风、改文风”活动将近两年，对其改进创新的实践操作层面进行深入探讨，显得十分必要。去年初，李长春同志曾对“走转改”活动作出批示，强调要努力探索长效机制，推动活动深入开展。如何形成长效机制？近两年来，解放Et报勇于实践，积极探索，将路径、制度和能力“三位一体”建设作为持续改进创新的有力抓手，为推进“走转改”活动深入持久地开展提供了宝贵的理论支撑。

中国书法文化的传播、传承与创新

中华优秀传统文化所凝结而成的思想理念、传统美德和人文精神构成了中国式现代化的文化根基。书法文化传播是一个历史的、发展的、内涵丰富的概念,其承载着文化、政治、宗教、传承、审美和教化等功能。中国书法文化是中国优秀传统文化的典型代表,推动中国书法文化的传承和创新是推动文化事业发展的重要方面。当前,中国书法文化的传播需要积极推出有针对性的对策方案,重点克服一些行业不良现象,树立正确的行业发展导向。

黄芪多糖对1型糖尿病小鼠胰腺β细胞总质量的影响

目的:研究黄芪多糖对1型糖尿病小鼠胰腺β细胞总质量的影响。方法:以低剂量链脲菌素(STZ)多次腹腔注射,建立1型糖尿病小鼠模型,每天分别用黄芪多糖(APS)100,200,400 mg.kg-1或生理盐水腹腔注射,15,30 d时将小鼠处死。以免疫组织化学染色并复染观察胰岛炎性细胞浸润,以间接荧光免疫双标法检测Insu-lin/Ki67(Hoechst33258复染)、Insulin/Cleaved caspase-3的表达,观察胰腺细胞(包括β细胞)增生、β细胞新生、β细胞凋亡和β细胞总质量的变化,以半定量RT-PCR检验胰腺再生蛋白1 mRNA的表达水平,以ELISA法检测脾细胞IFN-γ和IL-4的分泌。结果:与对照组比较,APS处理组胰岛炎症减轻、β细胞总质量增加、新生胰岛增多、β细胞凋亡减少、Th1/Th2分泌因子比值下调,所有这些均与APS的剂量和使用持续时间密切相关。但关于胰腺的细胞增殖和β细胞增殖,APS处理组与对照组没有明显差别。结论:APS通过改善1型糖尿病小鼠的免疫功能增加胰腺β细胞总质量。

血管内皮生长因子和其受体Flt-1在青春期大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上的表达研究

目的:通过对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1在大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上表达的研究,探讨其在雄性生殖系统中的作用。方法:免疫组化SP法和免疫荧光法检测20只青春期SD大鼠睾丸、附睾及精子上VEGF和Flt-1蛋白的表达情况。结果:VEGF和Flt-1在大鼠睾丸和附睾组织及精子上均有特征性表达。睾丸内VEGF蛋白表达于生精细胞、精子细胞发育中的顶体、Sertoli和Leydig细胞胞质内;Flt-1只见于精子细胞发育中的顶体及Leydig细胞胞质中。附睾中VEGF表达于各段上皮主细胞胞质内,而Flt-1表达于头、尾段上皮主细胞胞质内,体部免疫染色阴性;两者在附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性表达。免疫荧光染色显示,VEGF和Flt-1共同定位于附睾内精子头部的顶体,尾部的颈、中和主段。结论:VEGF和Flt-1蛋白在大鼠睾丸、附睾及精子中的特异性表达提示,他们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式单独或共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞或Leydig细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关。

复发性流产与精液常规参数、精子畸形率和DNA完整性的相关性

目的探讨复发性流产与丈夫精液常规参数、精子畸形率以及DNA完整性的相关性。方法①按纳入标准将研究对象分成复发性流产患者丈夫组(流产组,n=49)、孕前常规检查组(孕检组,n=60)和正常生育男性组(生育组,n=39),对精液进行常规分析,采用改良巴氏染色法,按照严格Kruger标准检测研究对象精子畸形率。②对上述流产组和生育组部分标本通过上游法进行优选,并采用精子染色质结构分析对优选前后的标本分别检测精子DNA完整性。结果①3组间两两比较,流产组总畸形率和头部畸形率与孕检组及生育组比较差异均有统计学意义(P<0.01),流产组精子密度、活动率、前向运动率与孕检组及生育组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);孕检组精子密度、头部畸形率和总畸形率与生育组比较,差异有统计学意义(P<0.05),精子活动率和前向运动率与生育组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②流产组精子DNA完整性指标(cellsoutsidethemainpopulation,COMP)在上游法优选前[(16.57±6.32)%]与生育组[(12.56±5.00)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05);优选后流产组COMP为(13.46±3.51)%,与生育组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。③COMP与精子密度、活动率、前向运动率、a级百分率、b级百分率、c级百分率、总畸形率和头部畸形率呈中度相关性(r值分别为-0.421、-0.652、-0.569、-0.457、-0.511、-0.453、0.474、0.513,P<0.01)。结论复发性流产与丈夫精子质量存在相关性。

甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖毒性的作用研究

目的探讨甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖的影响及其作用机制。方法选用性成熟期健康SD雄性大鼠40只,随机分为甲醛染毒高(10 m g/kg.d)、中(1 m g/kg.d)、低(0.1 m g/kg.d)剂量和对照组4组。腹腔注射染毒14 d后观察睾丸重量和形态学改变,精子数量和质量改变,血液中激素含量的改变;利用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸细胞的凋亡;免疫组化方法检测睾丸F as基因的表达。结果①高剂量染毒组大鼠睾丸组织的质量明显低于对照组(P<0.05),中、高剂量染毒组睾丸曲细精管萎缩,生精上皮细胞层数减少,细胞排列紊乱;②中、高剂量染毒组大鼠精子的数量和精子活动度较对照组明显减少,精子畸形率明显增加(P<0.05);③染毒组与对照组相比,血清卵泡刺激素和黄体生成素含量轻度增高,而睾酮含量轻度下降,但差异没有统计学意义;④中、高剂量染毒组睾丸凋亡细胞较对照组明显增多(P<0.05),F as基因表达明显增加(P<0.05),且F as基因阳性表达与睾丸的凋亡指数呈正相关(r=0.8832,P<0.05)。结论甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖系统有较明显的损伤,这种损伤可能与F as介导的睾丸生精细胞凋亡机制有关。

糖尿病性视网膜病变发病机制研究进展

糖尿病性视网膜病变(DR)是糖尿病最常见和最严重的微血管并发症之一,DR的病理特征为视网膜新生血管形成和BRB破坏,它是糖尿病患者视力丧失的主要原因。高血糖是糖尿病并发症发生和发展的重要危险因素,而糖尿病最终如何导致DR发病的机制十分复杂。长期的高血糖症导致氧化酶损伤,微血栓形成,细胞粘附分子活化,白细胞郁积和细胞因子活化,继之,缺氧调节的生长因子的表达增加和细胞因子的产生。在这个机制中起主要作用的因子为VEGF、IGF-1、TNF-α、IL-1β、FGF等。多种因子相互作用引起视网膜新生血管形成和血—视网膜屏障(BRB)破坏在DR的发生和发展中起着关键作用。本文通过文献回顾,综述了糖尿病性视网膜病变发病机制的研究进展。

雄激素受体在大鼠睾丸发育过程中的表达及雄激素对其表达的调节作用

目的 研究发育不同阶段及二甲磺酸乙烷 (EDS)干预的雄性SD大鼠睾丸内雄激素受体 (Androgenreceptor,AR)的分布、发育模式及雄激素调控。 方法 采用免疫组织化学ABC法 ,并应用图像分析测定AR的视物平均光密度 ,以其表示核内AR相对含量。结果 特异性AR免疫染色见于睾丸间质细胞、肌样细胞、支持细胞、精原细胞、血管壁平滑肌细胞及内皮细胞。间质细胞中AR相对含量随大鼠年龄而变化 :2 1d龄居中 ,35d龄最高 ,90～ 1 2 0d龄最低 ,各组间均有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。肌样细胞在 3个年龄组大鼠均有很强的AR表达。应用EDS消除成年大鼠内源性睾酮后 ,睾丸内所有AR阳性细胞的免疫染色均显著减弱 ,外源性睾酮替代治疗后免疫染色程度可恢复至对照组水平。结论 雄激素可促进青春期大鼠间质细胞的功能与分化 ;肌样细胞在精子发生过程中有重要作用 ;睾丸内AR的表达受内源性睾酮的调控。

实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸和附睾中血管内皮生长因子及其受体1表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸、附睾中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体fms样酪氨酸激酶(Flt-1)蛋白表达的影响。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化SP法检测VEGF和Flt-1在ELV组及假手术对照组睾丸、附睾组织中的表达变化。结果:VEGF和Flt-1蛋白在ELV组和对照组大鼠睾丸、附睾中均有表达,其定位和表达量具有细胞特异性和区域特异性。经图像分析和统计检测显示,ELV2周和4周组双侧睾丸和附睾中VEGF蛋白的表达与相应对照组比较均显著增加(P<0.01和P<0.05);ELV2周组双侧睾丸和附睾中Flt-1蛋白的表达与相应对照组比较也显著增加(P<0.01和P<0.01),但4周时在双侧睾丸和左侧附睾中Flt-1蛋白的表达显著下降(P<0.01和P<0.05),而右侧附睾未见明显差异(P>0.05)。结论:实验性精索静脉曲张可造成青春期大鼠睾丸、附睾中VEGF和Flt-1的表达量变化,该变化可能会影响精子的发生和成熟,因而可能是VC引起男性生育力下降甚至不育的原因之一。

黄芪多糖对1型糖尿病小鼠的免疫调节作用

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对1型糖尿病的免疫调节作用。方法:以低剂量链脲菌素(streptozotocin,STZ)多次腹腔注射,建立1型糖尿病小鼠模型,每天分别用100、200、400mg/kg APS或1ml生理盐水腹腔注射,15d、30d时将小鼠处死。以形态学方法观察胰岛炎症,以放射免疫法检测血胰岛素自身抗体,以放射性同位素氚标记的嘧啶核苷([3H]thymidine incorporation,3H-TdR)掺入法研究脾细胞对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)的增殖反应,以酶联免疫吸附(enzymelinkedi mmunosorbent assay,ELISA)法检测脾细胞白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)和干扰素-γ(inter-feron-γ,IFN-γ)的分泌,以蛋白免疫印迹(Western-blot)法检验脾过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxi-some proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的表达。结果:与对照组比较,APS处理组胰岛炎症减轻,血胰岛素自身抗体水平下降,脾细胞对Con A的增殖能力减弱,Th1/Th2分泌因子比值下调,脾PPARγ水平提高,所有这些均与APS的剂量和使用持续时间密切相关。结论:APS可通过调节体液免疫和细胞免疫治疗小鼠1型糖尿病。

青春期大鼠实验性精索静脉曲张模型的建立及其对睾丸的影响

目的 研究青春期精索静脉曲张对睾丸的损害 ,探讨精索静脉曲张不育的机理。方法 通过部分结扎左肾静脉建立青春期大鼠实验性精索静脉曲张 (ELV)模型 ,分别于术后 4周和 8周研究双侧睾丸的组织学改变并进行统计学分析。结果 成功建立了ELV模型。该模型大鼠的睾丸病理损害以生精上皮退化 ,精子发生阻滞 ,生精细胞脱落 ,曲精小管萎缩 ,间质水肿最为多见。损害为双侧性 ,且有累进性特点。统计学分析显示 ,ELV大鼠左右侧睾丸平均重量和曲精小管直径均较对照组显著减小 ,睾丸间质面积较对照组显著扩大。结论 ELV大鼠双侧睾丸有严重的累进性病理改变 ,这可能是精索静脉曲张不育的主要原因之一。

尾悬吊状态对性成熟期雄性大鼠生殖功能的影响

目的:探讨尾悬吊造成的模拟失重状态对性成熟期雄性大鼠生殖功能的影响及其机制,为研究太空环境对人类生殖功能的影响打基础。方法:性成熟期健康SD雄性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,分为实验1组(尾悬吊14 d)、实验2组(尾悬吊28 d)和对照1组(自由活动14 d)、对照2组(自由活动28 d),观察睾丸的重量和形态学改变、精子数量和质量改变、血液中激素含量的改变,并利用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸细胞的凋亡。结果:各悬吊组大鼠睾丸重量与相应对照组相比明显下降(P<0.05),附睾精子数量和活动率明显减少(P<0.05),精子畸形率和凋亡率明显增加(P<0.05),卵泡刺激素和黄体生成素轻度增高,而睾酮含量明显下降(P<0.05)。但上述变化在悬吊14 d组和28 d组之间无明显差异(P>0.05)。另外,悬吊组睾丸组织生精小管萎缩,生精上皮细胞层数逐渐减少,管腔内的精子数明显减少,悬吊28 d组比悬吊14 d组改变更明显。结论:模拟失重对性成熟期雄性大鼠生殖功能有较明显的损害,这种损伤可能与引起睾丸生精细胞凋亡有关。抑制睾丸生精细胞凋亡也许可以防护失重状态下的生殖损害。

VEGF、VEGFR2在青春期大鼠睾丸、附睾及附睾精子上的表达

目的通过对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR2在青春期大鼠睾丸及附睾表达的研究,探讨其在雄性生殖器官中的作用。方法采用免疫组化法检测VEGF、VEGFR2在SD大鼠睾丸和附睾的表达定位,用免疫荧光法检测它们在大鼠附睾精子上的表达定位。结果VEGF及VEGFR2在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在睾丸中,VEGF主要表达于精原细胞胞质、精子细胞发育中的顶体、Sertoli细胞胞质及精子残余体内,Leydig细胞胞质也有阳性表达;VEGFR2主要表达于精子细胞发育中的顶体和间质细胞胞质。在附睾中,VEGF表达于附睾管上皮所有主细胞胞质内;而VEGFR2表达于附睾管头段和尾段上皮主细胞胞质内,体段免疫染色阴性。免疫荧光显示,VEGF与VEGFR2都与精子头部顶体、尾部颈段、中段和主段相结合,末段未见阳性荧光。结论VEGF及VEGFR2在大鼠的睾丸和附睾中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在大鼠睾丸精子发生和附睾精子成熟中发挥重要作用。

多次小剂量STZ诱导的成年鼠糖尿病指标的自发恢复

多次小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的迟发型1型糖尿病成年小鼠(MLD-STZ成年鼠)血糖水平可自发恢复正常。该文试图对该现象及发生该现象的MLD-STZ成年鼠糖尿病指标进行综合分析。造模后,以放射免疫分析法、免疫荧光和HE染色等技术研究MLD-STZ鼠糖尿病各指标的变化。结果发现,糖尿病发生后,MLD-STZ鼠的摄食、饮水、体重、血糖和血清胰岛素水平等均随患病时间延长而逐渐加重,在糖尿病第20周时最为严重,此后,上述指标、胰岛β细胞量及胰岛炎症等逐渐改善。在糖尿病第36周时,尽管血糖水平正常的MLD-STZ鼠体重尚不及正常对照,但其摄食、饮水、血糖和血清胰岛素水平等尽皆恢复正常,且其胰岛内未见淋巴细胞浸润。上述结果说明MLD-STZ成年鼠糖尿病各指标可自发恢复至正常水平。

电刺激阴茎背神经和海绵体内注射药物诱导大鼠阴茎海绵体内压反应

目的:评价阴茎海绵体内压(ICP)监测在电刺激阴茎背神经和海绵体内注射罂粟碱诱导大鼠阴茎勃起反应中的应用。方法:选取性成熟雄性SD大鼠8只,20%氨基甲酸己酯(1000mg/kg)腹腔注射麻醉下,暴露阴茎并解剖阴茎背神经(DN),将充满肝素盐水并连接于压力传感器的25G针头插入一侧海绵体,取另一30G头皮针插入对侧海绵体,分别用于测定ICP和注射血管活性药物。分别以电刺激海绵体神经(刺激参数:电压4V,波幅0.5ms,频率16Hz,持续20s)和海绵体内注射罂粟碱(0.4mg)诱发阴茎勃起,采用SMUPPC型生物信号处理系统记录ICP变化。结果:麻醉大鼠的ICP基线水平为(12.3±3.1)mmHg(1mmHg=0.133kPa),DN电刺激后约30～60sICP明显升高[(36.4±2.3)mmHg,P<0.05],电刺激结束后缓慢下降至基线水平。海绵体内注射罂粟碱后5～8min可诱发ICP明显升高[(28.4±6.1)mmHg,P<0.05]。结论:监测电刺激大鼠DN及海绵体内药物注射诱发的ICP,为阴茎勃起这一复杂神经血管活动的动物模型在体实验研究提供了一种客观准确的科学工具,对于进一步研究阴茎勃起生理和勃起功能障碍的发病机制,评价治疗勃起功能障碍新疗法的疗效等具有重要意义。

青春期前己烯雌酚暴露对大鼠性成熟后生精细胞凋亡的影响及其机制初探

目的:研究青春期前己烯雌酚(d iethylstilbestrol,DES)暴露对SD大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法:30只21日龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/(kg.d)4个实验组和1个对照组(编码为ADa、ADb、AD c、ADd和AC组,每组6只)。于青春期前[出生后第22 d(postnatal day 22,PND22)至35 d(PND35)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax在生精细胞中的表达。结果:与对照组相比,ADa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,ADb、AD c和ADd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有增加趋势。AC、ADa组生精细胞Bax相对弱表达而Bc l-2强表达,伴随DES暴露剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bc l-2表达逐渐减弱,ADd组Bax强表达而Bc l-2弱表达。结论:青春期前较大剂量DES暴露可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bc l-2参与青春期前DES暴露所致的生精细胞凋亡过程。

性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾显微和超微结构的影响

目的 探讨性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张 (EVC)附睾显微和超微结构的改变及其在不育中的作用。 方法 部分结扎左肾静脉建立大鼠EVC模型 ,常规制作附睾各段光镜及电镜标本。 结果 EVC大鼠附睾各段均出现程度不同且有区段特异性的损害。光镜下主要表现有间质血管充血扩张 ,淋巴细胞浸润、积聚 ,间质内出现精子肉芽肿。附睾管萎缩 ,上皮细胞变性 ,甚至出现空泡化 ,上皮内晕、亮细胞数明显增多 ;管腔内出现大量未成熟生精细胞、畸形精子等。电镜下主要表现为主细胞内溶酶体增多、变大 ,残余小体增加 ,细胞器 (内质网、线粒体、高尔基复合体等 )受损 ,部分主细胞内出现大空泡。晕细胞、亮细胞内溶酶体也增大、增多 ,亮细胞常膨大 ,游离面突入管腔。上皮细胞游离面微绒毛稀少 ,可见局灶性断裂和破坏。上皮基膜增厚。 结论 性成熟期大鼠EVC可致附睾管上皮显微及超微结构明显改变 。

附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨附睾分泌蛋白2(HE2/EP2)的一种异构体———HE2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测15只青春期SD大鼠睾丸和附睾组织中HE2β1的定位及其表达情况。结果:HE2β1在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在附睾中,HE2β1主要表达于附睾管上皮主细胞胞质内,而在亮细胞、晕细胞及基细胞内未见阳性表达;其表达水平在附睾头部远段较弱,在体部近、中段及尾部较强,而在附睾始段未见阳性表达。在睾丸生精小管中,部分精原细胞核及支持细胞核均可见明显的棕褐色的阳性颗粒,其他生精细胞以及间质细胞均为阴性。结论:HE2β1在青春期雄性大鼠的睾丸和附睾上皮中均有表达,其定位及表达水平具有区域特异性和细胞特异性,提示其在大鼠精子发生、成熟及附睾上皮天然抗感染机制中发挥重要的作用。