紫草素对肝癌细胞增殖的影响

目的研究紫草素对肝癌细胞株HepG2增殖和表达增殖诱导配体(Aproliferation-inducing ligand,APRIL)水平的影响,并与化疗药顺铂进行对比。方法MTT法检测紫草素对HepG2细胞增殖的抑制作用,采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法证实肝癌细胞株HepG2上APRIL的表达,实时荧光定量PCR法检测加入不同终浓度的紫草素和顺铂后24h、48h和72h HepG2细胞表达APRIL mRNA的水平。结果紫草素对HepG2细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性,HepG2细胞上有APRIL的表达,加入不同浓度的紫草素和顺铂后,HepG2细胞A-PRIL mRNA的水平均逐渐升高,至72h表达最高并与空白对照相比均有显著差异(P<0.05)。结论紫草素可抑制肝癌细胞的增殖,但与顺铂一样,残存癌细胞有因APRIL表达升高而增殖能力增强的潜在趋势。

Toll样受体4在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征

【目的】探讨Toll样受体4(TLR4)在乙型肝炎组织及细胞株HepG2/HepG2.2.15内的表达特征。【方法】采用免疫组化染色法检测慢性乙型病毒性肝炎(CHB)63例、慢性重型肝炎(CSH)11例及健康对照组10例肝组织TLR4的表达,综合评分法判断结果。常规培养肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15,采用直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测TLR4在细胞上表达的平均荧光强度(MFI)及阳性细胞率。【结果】TLR4在慢性乙型病毒性肝炎及慢性重型肝炎患者肝组织上的表达明显高于健康对照组(P<0.01),主要表达于肝细胞胞浆及部分胞膜,在慢性乙型病毒性肝炎中,TLR4的表达强度与肝组织炎症活动度分级(G)呈显著正相关(r=0.632,P<0.001)。TLR4在肝癌细胞株HepG2.2.15上表达的平均荧光强度及阳性细胞率分别为18.24±8.18、(17.79±9.46)%,明显高于HepG2的2.33±0.41、(1.71±0.77)%(P<0.001)。【结论】TLR4的表达与乙型病毒性肝炎肝组织的炎症活动密切相关,而乙型肝炎病毒可直接上调细胞TLR4的表达,故TLR4参与了乙型病毒性肝炎发病过程中的免疫反应并极有可能与免疫损伤有关。

TLR2和TLR4在原发性肝癌中的表达

目的:本研究通过检测原发性肝癌Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,分析其与临床病理生理因素的关系,探讨TLR2,TLR4在原发性肝癌疾病过程中的可能作用。方法:采用免疫组化法和实时荧光定量PCR分别在蛋白水平及mRNA水平检测原发性肝癌组织和配对癌旁组织TLR2、TLR4的表达。结果:原发性肝癌组织在蛋白水平和mRNA水平TLR2和TLR4的表达均明显低于癌旁组织(P<0.01)。但免疫组化结果显示不论是肝癌组织还是癌旁组织,TLR2和TLR4的表达均明显高于正常肝组织(P<0.01,P<0.05),有门静脉分支癌栓的患者癌组织TLR4的表达强度低于无门静脉分支癌栓的患者(P<0.05)。结论:肝癌组织TLR2和TLR4的表达与癌旁组织相比受到相对抑制,但高于正常肝组织,TLR2和TLR4信号途径可能参与了原发性肝癌的病理过程。

FGF21在小鼠非酒精性脂肪肝病程中的变化及与SREBP的相关性

【目的】探讨成纤维细胞生长因子(FGF21)在小鼠非酒精性脂肪肝病程中肝组织和血清中的变化及其与胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)的相关性,探讨其中的可能机制。【方法】分别给予C57BL/6小鼠素食和高脂饮食喂养1、9、18周,Western blot和实时荧光定量RT-PCR检测肝脏组织FGF21和SREBP的表达,并分析二者的相关性;ELISA法检测小鼠血清的FGF21水平,分析血清FGF21水平与肝组织FGF21的蛋白和m RNA水平的相关性。【结果】高脂饮食喂养至9周时,小鼠肝脏的大体外观呈典型脂肪肝表现,至18周时HE染色可见肝细胞内大量的脂质颗粒聚集。与素食喂养小鼠相比,小鼠肝组织FGF21 m RNA水平在高脂饮食喂养至9周和18周时明显升高(均P<0.05),与高脂饮食的时间呈正相关(r=0.952,P=0.000)并同时与SREBP m RNA水平正相关(r=0.725,P=0.000)。而与素食喂养小鼠相比,小鼠肝组织FGF21蛋白在高脂饮食喂养至9周和18周时明显降低(P<0.05),SREBP蛋白表达则呈相反的趋势。血清的FGF21水平,与素食喂养相比,在高脂饮食喂养至9周和18周时明显升高(均P<0.05),与高脂饮食的时间呈正相关(r=0.944,P=0.000),与肝组织的FGF21蛋白水平负相关(r=-0.704,P=0.000),与FGF21 m RNA水平正相关(r=0.910,P=0.000)。【结论】在小鼠脂肪肝的逐渐进展中,肝组织FGF21 m RNA水平升高,蛋白水平降低,血清水平升高,并伴随SREBP的表达升高,提示肝脏中FGF21转录合成增加同时分泌亦明显增加,并与肝脏脂质合成及沉积密切相关。

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点。方法采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TLR4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率。结果TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异无显著性(P>0.05)。根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达。结论TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关。

APRIL在大肠癌组织中的表达及化疗药物对大肠癌SW480细胞APRIL表达的影响

背景与目的:增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)是最近发现的肿瘤坏死因子家族新成员,有促进肿瘤生成和增殖的能力。本实验通过研究APRIL在大肠癌组织中的表达,并对比氟尿嘧啶和顺铂对大肠癌细胞株SW480表达APRIL水平的影响,探讨抗癌药对APRIL在大肠癌组织中表达的影响。方法:采用免疫组化法和荧光定量PCR检测56例大肠癌患者癌组织和配对癌旁相对正常组织及大肠癌细胞株SW480上APRIL的表达。将不同终浓度的氟尿嘧啶和顺铂加入培养中的SW480细胞,用荧光定量PCR检测加入药物后24h、48h和72hSW480细胞表达APRIL mRNA的水平。结果:大肠癌组织表达APRIL的阳性率为76.8%,mRNA水平为0.71±0.08,高于癌旁相对正常组织的16.1%和0.16±0.05(P<0.001)。SW480细胞上有明显的APRIL表达,加入不同浓度的氟尿嘧啶后,SW480细胞APRIL的mRNA水平逐渐升高,至72h表达最高,25、50、100、200μg/mL4个药物浓度作用72h后细胞APRIL mRNA水平分别为0.85±0.10、0.81±0.09、0.83±0.11和0.90±0.12,与空白对照(0.57±0.06)相比差异有统计学意义(P<0.001);而加入不同浓度的顺铂后,细胞APRILmRNA水平与空白对照相比差异无统计学意义(P>0.05),仅在10、20μg/mL浓度作用72h后细胞的APRIL mRNA水平(分别为0.44±0.05,0.40±0.07)低于空白对照(P<0.05)。结论:APRIL在大肠癌的进展过程中可能起到一定程度的促进作用;氟尿嘧啶可能具有对抗APRIL功能的潜在作用。

慢性乙型肝炎患者肝组织中Toll样受体2的表达及其临床意义——附63例报告

目的：探讨Toll样受体2（Toll—like receptor 2，TLR2）在慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）中的表达及其临床意义。方法：取63份CHB患者的肝组织标本（CHB组）及9份移植肝常规留取的正常肝组织标本（对照组），采用免疫组织化学法检测2组TLR2的表达情况。结果：TLR2表达主要定位于肝细胞胞浆及部分胞膜上。CHB组中、重度患者肝组织上的TLR2的表达均比对照组明显增强，比较差异均有统计学意义（P〈0．05～P〈0．01）；在CHB组中，中、重度患者肝组织上的TLR2的表达均比轻度患者明显增强，比较差异均有统计学意义（P〈0．05-P〈0．01）；CHB组患者肝组织上的TLR2的表达程度与临床分度呈显著正相关（r=0．559，P〈0．001）。结论：对于CHB，TLR2具有重要意义．提示调控或干扰TLR2有利于控制病情。

组蛋白去乙酰化酶1在小鼠非酒精性脂肪肝中的表达和作用

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在小鼠非酒精性脂肪肝病程中肝组织的表达和作用,研究其中的可能机制。【方法】分别给予C57BL/6小鼠素食和高脂饮食9周,用western blot检测肝脏组织HDAC1、HDAC3和胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)的表达;培养肝癌HepG2细胞,油酸处理细胞,对细胞进行油红染色并用western blot检测处理后HDAC1、HDAC3和SREBP的表达;用HDAC1抑制剂预处理HepG2细胞,再用油酸处理,western blot检测HDAC1、HDAC3和SREBP的表达。【结果】高脂饮食饲养小鼠9周时,可见肝脏呈明显的脂肪肝表现,与素食小鼠肝组织相比,HDAC1和SREBP的蛋白表达明显升高(n=8,均P<0.05),而HDAC3的变化不明显(P>0.05),HDAC1的蛋白表达与高脂饮食时间呈正相关(r=0.941,P<0.05)。油酸处理HepG2细胞后,与对照组细胞相比,油红染色可见细胞大量脂肪颗粒聚集,伴有HDAC1和SREBP蛋白表达升高(n=6,P<0.05),HDAC3表达变化不明显。HDAC1抑制剂预处理HepG2细胞后,与未预处理细胞相比,SREBP的蛋白表达明显受到抑制。【结论】HDAC1而非HDAC3参与了脂肪肝的进程,可能在蛋白水平通过促进SREBP的转录和表达对脂肪肝起到促进作用。

乙型肝炎病毒对HepG2细胞表达TLR4的影响

目的探讨乙型肝炎病毒对HepG2细胞表达Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的影响。方法采用免疫荧光流式细胞术检测TLR4在肝癌细胞株HepG2、HepG2-X和HepG2.2.15上表达的平均荧光强度及阳性细胞率,采用荧光定量PCR检测三种细胞TLR4的mRNA水平。结果肝癌细胞株HepG2.2.15上TLR4表达的平均荧光强度及阳性细胞率分别为(18.24±8.18)、(17.79±9.46)%,TLR4mRNA水平为(0.62±0.11),明显高于HepG2-X和HepG2细胞的相应值(P’<0.001),而HepG2和HepG2-X两者之间的表达则无统计学差异(P>0.05)。结论乙型肝炎病毒可直接上调细胞TLR4的表达,这种上调是通过乙型肝炎病毒非X基因或蛋白来完成的。

转染乙肝病毒基因的HepG2细胞Toll样受体2的表达上调

目的:前期研究发现先天免疫分子Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR2)与乙型病毒性肝炎的免疫损伤有一定的关系,现进一步观察瞬时和稳定转染乙肝病毒(HBV)基因的HepG2细胞TLR2表达的变化。方法:采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2在肝癌细胞株HepG2和HepG2.2.15上表达的平均荧光强度(MFI)及阳性细胞率,将前期试验获得的HBV全基因组,采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2在细胞上表达的MFI及阳性细胞率。结果:HepG2.2.15细胞上TLR2表达的MFI及阳性细胞率均明显高于HepG2(均P<0.001),HepG2细胞于转染48h后TLR2表达的MFI和阳性细胞率与空白对照组(转染HBVDNA剂量为0)相比均显著升高(均P<0.05),并且MFI和阳性细胞率与转染剂量均呈显著正相关(均r=0.950,P<0.001)。结论:不管在瞬时和稳定转染HBV基因的HepG2细胞,都存在细胞TLR2的上调,提示HBV感染细胞后存在TLR2信号途径的激活。

结肠息肉切除术后迟发性出血的危险因素

【目的】分析结肠息肉切除术后发生迟发性出血的危险因素。【方法】搜集中山大学附属第三医院2010年1月到2018年12月的患者进行回顾性研究,其中发生迟发性出血的106例患者为出血组,未发生出血的3856例患者为对照组,应用Logistic回归模型,筛选息肉切除术后出血的危险因素。【结果】纳入研究的3962例患者中,106例发生术后迟发性出血,出血构成比为2.68%,89.6%的迟发性出血发生在术后3d以内。Logistic回归分析表明息肉大小、合并高血压、合并慢性肾病、阿司匹林用药史、华法林用药史在出血组和对照组中差异有统计学意义(P值分别为0.011、0.009、0.028、0.001、0.023)。【结论】息肉大小,合并高血压、冠心病、慢性肾病,应用阿司匹林、华法林可能是息肉切除术后迟发性出血的独立危险因素,绝大多数出血发生在术后3d内,根据患者合并危险因素进行分层,可预测患者迟发性出血的风险。

慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体4的变化及其与IL-6的关系

目的:探讨慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)的变化情况及其意义。方法:用流式细胞仪检测30例正常对照、31例慢性乙型肝炎患者和30例慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞表面TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清白细胞介素6(IL-6)的水平。结果:正常对照组、慢性乙型肝炎组和慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR4的平均免疫荧光强度分别为2.3±1.1、3.7±2.3和6.9±4.1,慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR4表达显著高于正常对照组和慢性乙型肝炎组(P<0.05),慢性乙型肝炎组与正常对照组比较无统计学差异;3组外周血清IL-6水平分别为(11.5±7.2)ng/L、(40.8±31.2)ng/L和(77.6±33.3)ng/L,各组间比较均具有显著差异(P<0.05);慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR4表达水平与血清IL-6表达水平呈显著正相关,相关系数γ=0.618,P<0.05。结论:TLR4可能与慢性乙型肝炎重型化有关。

教育理念更新及其在诊断学教学中的应用

近年来，我国对医学生的培养，主要按照全球医学教育最低基本要求，包括职业价值、态度、行为和伦理，医学科学基础知识，沟通技能，临床技能，群体健康和卫生系统，信息管理，批判性思维和研究等7大领域，重视学生的临床实践能力、终身学习能力、创新能力、职业素质的培养翻。

甘草甜素对HepG2.2.15细胞株HBV感染的影响

目的探讨甘草甜素(GL)对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg、HBeAg、HBV DNA的作用,及对细胞存活率的影响。方法实时荧光定量PCR检测HBV DNA的表达,ELASA检测HBV所分泌抗原,MTT检测细胞的增殖活性,计算细胞存活率。结果给药后各组HBsAg分泌结果显示总体均数间差异显著(P=0.000),GL各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),抑制作用存在剂量依赖关系;而对HBeAg水平的影响因剂量不同而表现为升高和降低两种趋势,除50μg/mL组外,其余各组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但800μg/mL组HBeAg分泌增加,400μg/mL以下组为HBeAg降低;HBV DNA的表达显示GL各组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但400μg/mL以下组为HBV DNA降低,800μg/mL组出现HBV DNA复制增强;MTT实验显示,200μg/mL以下3个剂量组均可促进细胞增殖(P<0.01),400、800μg/mL2组均显著抑制细胞增殖(P<0.01);MTT分别与HBeAg和HBV DNA水平呈显著负相关(P<0.01),但与HBsAg呈显著正相关(r=0.869,P=0.000)。结论GL对HepG2.2.15细胞株上清中的HBeAg和HBV DNA水平可能具有双向作用,而对HBsAg具有剂量依赖的抑制作用,提示GL的使用应注意选择适应证及合适的剂量。

溃疡性结肠炎的中西医治疗

溃疡性结肠炎是一种具体病因尚未明确的结肠黏膜及黏膜下炎症性疾病,其治疗仍是一个难题。西医治疗一般采用氨基水杨酸类、皮质类固醇、免疫调节剂和抗菌药物,效果较确切,但不良反应较大、患者耐受性较差、容易复发。中医则采用中药复方口服、灌肠、外敷离子导入多途径联合治疗,多管齐下,标本兼顾,气血同治,有一定疗效,在一定程度上减少了西药治疗带来的不良反应,且费用低廉,患者依从性好,但对重症溃疡性结肠炎的疗效不确切。该文就西医及中医的治疗观点作一介绍。

念珠菌性食管炎98例诊治分析

目的了解念珠菌性食管炎的危险因素和治疗方案的选择。方法念珠菌性食管炎患者98例,对照组196例,分析其高危因素。念珠菌性食管炎组剔除10例长期服用PPI的患者后,剩余88例按抽签单双号方式随机分为氟康唑治疗组和制霉素治疗组各44例,分别给予2周的抗真菌治疗,疗程结束后复查胃镜,分析治疗效果,并对所有患者进行药物敏感测试。结果念珠菌性食管炎的高危因素包括应用广谱抗生素(OR=5.66,χ2=20.14,P<0.05)、糖尿病(OR=4.00,χ2=7.96,P<0.05)、质子泵抑制剂(OR=3.59,χ2=6.46,P<0.05)、恶性肿瘤(OR=3.41,χ2=10.40,P<0.05)等。治疗效果方面,制霉素治疗组37例(84.1%)患者完全治愈,5例(11.4%)患者治疗有效,2例(4.5%)患者治疗无效;氟康唑治疗组35例(79.5%)患者完全治愈,8例(18.2%)患者治疗有效,1例(2.3%)患者治疗无效;两组在治愈率方面无统计学差异(P>0.05)。氟康唑耐药率为8.6%,制霉素为7.1%,无统计学差异(P>0.05)。制霉菌素组治疗费用明显低于氟康唑组(P<0.05),二者在药物副反应方面无明显差异(P>0.05)。结论使用广谱抗生素、质子泵抑制剂、合并恶性肿瘤、糖尿病是念珠菌性食管炎的危险因素,制霉素可以作为治疗念珠菌性食管炎一种安全、有效、经济的选择。

乙型肝炎病毒对HepG2细胞表达TLR3的影响

目的乙肝病毒全基因组体外扩增,构建质粒并测序,酶切后瞬时转染HepG2细胞,观察对HBV抗原分泌,病原识别受体Toll样受体3(TLR3)的表达及细胞增殖的影响。方法长片段PCR法扩增HBVDNA全长,构建pBlueScript-HBV质粒并转化宿主菌,摇菌后提取质粒经测序,用SapⅠ酶切,获得HBV3.2kb基因组,采用脂质体瞬时转染HepG2细胞株,IMX检测HBV所分泌抗原,台盼蓝计数检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测表达TLR3的阳性细胞百分率,并与空白对照组对比。结果HBsAg和HBeAg的分泌随着转染HBVDNA量的增加而升高,除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外,差异均有显著性(P<0.05)。TLR3在转染后均有上调,除4μg与6μg组间比较外,各组间差异有显著性(P<0.05)。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少(P<0.05),但4μg和6μg两组间比较差异无显著意义(P>0.05)。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR3的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论本研究初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR3的上调,而且上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制,成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。

TLR2、TLR4在乙型肝炎病毒转染的HepG2细胞株的表达

目的探讨乙肝病毒全基因组瞬时转染HepG2细胞后,对HBV抗原分泌,病原识别受体Toll样受体2、4(TLR2、4)的表达及细胞增殖的影响。方法已构建pBlueScript-HBV质粒并经测序,转化宿主菌,菌后提取质粒,用Sapl酶切,获得HBV3.2kb基因组,采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2,IMX检测HBV所分泌抗原,台盼蓝计数检测细胞增殖活性,直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率,并与空白对照绗对比。结果HBsAg利HBeAg的分泌随着转染HBVDNA量的增加而升高,除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外,差异均有显著性意义(P<0.05)。TLR2、4在转染后均有上调,TLR4在各组间差异显著(P<0.05),但TLR2只在最大剂量转染组时差异有显著性(P<0.05)。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少(P<0.05),但4μg和6μg两组间比较无显著意义(P>0.05)。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR2、4的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论研究结果初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR2、4的上调,而且TLR的上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制,成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。

甘草甜素对HepG2.2.15细胞株HBeAg水平及TLR4表达的影响

目的探讨甘草甜素(GL)对HepG2.2.15细胞上清HBeAg分泌,Toll样受体4(TLR4)信号分子的表达及对细胞增殖的影响。方法实时荧光定量PCR检测TLR4表达;直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测表达TLR4的阳性细胞率;ELASA检测HBV所分泌抗原;MTT检测细胞增殖活性,并与空白对照组比较。结果给药后HBVe抗原(HBeAg)的分泌结果显示,总体均数间差异显著(P<0.05),但甘草甜素各组与对照组比较差异无统计学意义;GL各组TLR4 mRNA及流式细胞TLR4的表达总体均数间均有显著差异(P<0.01),分别与对照组相比差异有显著性(P<0.01),100μg/mL组尤其明显;MTT实验显示,200μg/mL以下三个剂量组均可促进细胞增殖,50μg/mL组与对照组间差异显著(P<0.05);400μg/mL、800μg/mL两组均显著抑制细胞增殖(P<0.01);而MTT结果与HBeAg水平呈显著负相关(P<0.01),与TLR4表达无相关关系(P>0.05)。结论研究表明,甘草甜素对HepG2.2.15的e抗原分泌可能具有双向作用;细胞的存活率与e抗原呈负相关;TLR4在HepG2.2.15细胞株低表达,GL可上调TLR4表达,甘草甜素可影响先天免疫中的TLR4信号分子,有可能在体内通过免疫途径影响HBV复制和抗原分泌。