数字PCR和荧光定量PCR检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数方法的建立及其应用

传统的检测转基因植物中外源基因拷贝数的方法是Southern杂交,该方法成本高、周期长,难以满足高通量检测外源基因拷贝数的育种需求,因此,本研究旨在建立快速且高通量检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。本研究从番木瓜基因组中筛选出2个单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770,以已知外源基因为单拷贝整合的转基因番木瓜为参照,利用数字PCR鉴定其拷贝数,进一步以其为内参基因,以番木瓜转基因育种常用的筛选标记基因NPTⅡ为外源目的基因,建立利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法。结果表明:Cpa03g018830和Cpa03g018770均为单拷贝基因;建立的数字PCR方法对转基因番木瓜中的外源基因拷贝数的检测准确可靠,而荧光定量PCR对转基因番木瓜中外源基因单低拷贝整合的检测准确度较高,对外源基因多拷贝整合的检测准确度则较低,因此,荧光定量PCR适合用来在大量转基因植株中初筛出单低拷贝整合的植株。本研究鉴定的单拷贝基因Cpa03g018830和Cpa03g018770可作为转基因番木瓜中外源基因拷贝数检测的内参基因,且建立的利用数字PCR和荧光定量PCR技术检测转基因番木瓜中外源基因拷贝数的方法,操作简单,速度快,适合批量检测,可为番木瓜转基因抗病育种中单低拷贝株系的选育提供新的方法。

基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究

番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。

美国“萨德”系统能带给以色列多少安全?

美国国防部2024年10月15日宣布,美军先遣部队和部分“萨德”反导系统组件已经抵达以色列。此前,美国国防部13日刚刚宣布向以提供“萨德”并派遣相关美军人员的决定,短短两天时间相关人员和装备便抵达以色列,足见美国对以色列的支持力度。

番木瓜赖氨酸基序类受体激酶LysM-RLK基因家族鉴定及生物信息学分析

本研究采用生物信息学方法在番木瓜全基因组范围系统鉴定了7个LysM-RLK家族基因,并解析了其染色体分布特征、基因结构特征、蛋白理化性质和亚细胞定位信息。基因家族进化分析表明番木瓜的7个LysM-RLK基因可划分为3个亚组(Lym-II,Lym-III,Lym-IV),并分布于4条染色体上。基因复制是番木瓜LysM-RLK家族进化的主要驱动力,基因复制分析鉴定得到7对复制基因。启动子序列调控元件分析发现其包含多个光响应元件及参与低温应答和逆境相关激素信号应答的元件。大规模比较转录组分析系统地解析了LysM-RLK在番木瓜生物胁迫、非生物胁迫条件下及不同组织中的基因表达模式,揭示其特异性的表达模式及潜在的生物学功能。复制基因对的表达分化、结构域组成差异和蛋白质三级结构的变化,暗示其在进化过程中的亚功能化现象。生物和非生物胁迫条件下的核心共表达网络分析鉴定了27个与LysM-RLK3强关联的核心基因,揭示了LysM-RLK3潜在的转录调控模式。相关结果为番木瓜LysM-RLK家族起源演化、功能分化及其在逆境响应和生长发育过程中的角色提供重要依据。

红麻及其近缘种的RAPD分析(英文)

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析了木槿属(Hibiscus)Furcaria组中纤维作物红麻(H.cannabinus)及其6个近缘种植物的25份材料。用筛选出的16个引物扩增出192个RAPD条带,它们表现出丰富的多态性。根据得到的RAPD指纹图谱,计算其Nei氏相似系数和遗传距离,并构建了它们的系统树。结果表明:25份材料可划分为7个组,H.penduriformis和H.calyphyllus两个种为一组;红麻种分为两个组,一组为栽培品种,另1组为野生型材料;其余4个种各成为1组。玫瑰麻(H.sabdariffa)和金线吊芙蓉(H.radiatus)的关系较近,而且两者与红麻的亲缘关系也较近,而其它四个种与红麻的关系较远。H.trionum与其它六个种的关系较远。

苎麻属植物RAPD反应体系影响因子的研究

以苎麻属植物中的4个种为材料,用SDS和CTAB2种方法提取基因组DNA并比较其RAPD分析的效果;对RAPD反应体系中的一些重要参数进行了优化,建立了适合苎麻属植物RAPD分析的反应体系。即在25μL的反应总体积中Mg2+浓度为1.5mmol/L,dNTPs浓度为0.20mmol/L,40ng模板DNA,Taq酶1.0单位;反应程序为95℃预变性5min;前5个循环为94℃变性1min,36℃结合1min,72℃延伸2min;后40个循环为94℃30s,36℃1min,72℃2min(最后1个循环为10min);共45个循环。该反应体系具有良好的稳定性和重复性。

几种麻类作物及其近缘种植物总DNA的提取与鉴定

采用Pich和 Schubert 1993年发展的SDS方法，经适当改进后，成功地从苎麻、红麻、黄麻、青麻四种麻类作物及其近缘种植物中提取了细胞总DNA，并对其得率、质量和纯度进行了鉴定。所得的DNA可进行限制性内切酶消化、PCR扩增和RAPD分子标记。本研究发展的这一快速、简便、适于麻类作物及其近缘种植物的总DNA提取方法，将有助于在DNA分子水平研究麻类种质资源的遗传多样性。

我院门诊药房事前审方系统的建立与应用

目的:探讨我院事前审方系统的建立及开展对门诊合理用药的影响。方法:根据门诊药房实际需求,对原有的医院信息系统(HIS)相应模块进行修改后建立药房事前审方系统,将该系统用于缴费前审核门诊处方并实施相应的配套管理措施。比较事前审方系统运行前(2014年4-9月)、后(2015年4-9月)各相关评价指标的变化。结果:通过在HIS中按相关标准建立审核处方模板、制订审方系统工作流程及进行处方干预管理,我院实现了门诊处方在缴费前的处方合理性审核。与运行前比较,运行后口服类抗菌药物使用率、注射类抗菌药物使用率、不合理处方率分别由25.7%、31.5%、5.10%下降至16.5%、19.8%、1.98%;不合理处方干预成功率由24.3%上升至85.5%;错误处方不良反应发生率、医保费用超标率和门诊患者投诉率均显著降低(P<0.000 1)。结论:事前审方系统的建立可促进医院合理用药及服务水平的提升。

莫西沙星致老年人不良反应文献分析

目的了解莫西沙星致老年人不良反应发生的情况。方法以"莫西沙星"为题名,检索《中国医院数字图书馆》2000～2010年中有关莫西沙星致老年人(≥60岁)不良反应的文献资料49篇,共73例,并按患者性别、ADR发生时间、给药途经、累及系统及临床表现等进行统计分析。结果引起不良反应以男性居多(63.0%);81～90岁老年人发生不良反应较多(31.5%);多表现为神经系统反应(41.1%)、消化系统反应(27.4%)、心血管系统反应(15.1%),睡眠障碍和烦躁是神经系统不良反应的主要表现(40.0%)。结论临床应重视莫西沙星在老年人中引起的不良反应,警惕严重不良反应的发生。

黄麻工艺纤维细度的研究

研究表明:圆果种比长果种工艺纤维支数高65公支左右;品种间差异极显著;工艺纤维细度与单株原麻重等5个经济性状呈极显著负相关,与出麻率等性状呈显著正相关;麻株各部位中以中部工艺纤维支数最高,梢部次之,基部最低;适时播种、适当密植、适量适时施肥,适时早收等栽培技术措施能提高工艺纤维支数。通过对构成产量和工艺纤维细度各因子的剖析,提出了提高黄麻产量和工艺纤维细度的途径。

黄麻长果种新品种“湘黄麻二号”的选育研究

黄麻长果种新品种“湘黄麻二号”是以“巴麻７２—２”中的一优良雄性不育株为母本，以“０７０—３６”为父本杂交，采用早期世代定向选择个别目的性状、较高世代选择经济性状的定向选择与混合选择相结合的方法育成．品系比较亩产原麻３５２．２公斤，较“广丰长果”增产１７．６％、较“宽叶长果”增产１４．２％．全国区试亩产纤维１５２．８５公斤，较对照“广丰长果”增产１４．６％。增产达极显著标准。该品种的显著特点是：生长速度快、后期不早衰；丰产性和稳产性好；纤维品质优良；有较强的抗病能力和较高的出麻率。

圆果种黄麻主要农艺性状的遗传相关及通径分析

本文通过12份圆果种品种(系)8个主要农艺性状的分析,7个性状(x)与单株干皮产量(y)的遗传相关系数都达到了显著或极显著水平,其绝对值由大到小的顺序是干茎重>茎粗>皮厚>株高>出麻率>分枝位高>分枝数。除出麻率与干皮产量呈负相关外,其余性状与干皮产量均呈正相关。干茎重对产量起着决定性的作用,而茎粗,皮厚,株高则是影响干茎重的主要性状。在选择较大干茎重的前提下,提高出率麻能较大地提高产量。

1987—1989年全国黄麻长果种新品种区域试验总结

为了鉴定近年来全国各育种单位新选育的黄麻长果种新品种的生产潜力、品种特性和适应性,为新品种的生产推广提供科学依据,在中国农业科学院麻类研究所的主持下,从1987年开始,在长江流域麻区的浙江、湖南、湖北3省5个点连续进行了3年新品种区域试验。

长果种黄麻品种主要农艺性状与单株产量关系的分析

本文对长果种黄麻品种的8个主要性状进行了表型相关分析,就7个主要农艺性状和产量的关系作了多元回归分析,并计算了性状对产量的通径系数。通过七元回归分析知道,在诸多性状中,以单株干重对产量的贡献最大,其次为出麻率。进而只就5个能目测到的性状对产量进行多元回归分析,发现茎粗和株高对产量的作用较大。在高产育种上,可将提高麻株的茎粗、株高和出麻率作为主攻目标。生产上可根据麻株茎粗和株高两个性状的生长发育规律来制定高产栽培技术措施.

来氟米特对急性化学性肝损伤小鼠肝Cyt.P450酶含量及CYP2E1 mRNA表达的影响

目的观察来氟米特(Lef)作用前后急性化学性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)、细胞色素b5(Cyt.b5)含量及P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平的变化,进一步研究其治疗机制。方法采用CCl4诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量以及肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)含量,RT-PCR法检测小鼠肝脏细胞色素P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平,并作肝组织切片病理观察。结果Lef明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平;降低肝匀浆MDA含量;提高GSH含量并提高肝微粒体Cyt.P450、Cyt.b5含量;抑制CYP2E1 mRNA表达;减轻肝脏病理损伤。结论Lef治疗CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤,可能与其诱导肝微粒体Cyt.P450表达,抑制CYP2E1 mRNA转录及抗脂质过氧化有关。

菠萝叶纤维酶法脱胶技术

为充分利用热带农业生物资源,弥补我国天然纺织原料的短缺,对菠萝叶纤维进行了酶法脱胶技术的理论探讨和试验研究。从自然界筛选高产果胶酶菌株,发酵生产出高活性果胶酶。研究结果表明:果胶酶用量8%,pH值7.0,温度52℃,处理4 h左右菠萝叶纤维能达到良好的脱胶效果。脱胶后菠萝叶纤维再经木聚糖酶处理45 min,再用30%的H2O2处理15 min能满足纺织工艺要求。

菠萝叶纤维的开发与应用现状及前景

菠萝叶中含有较为丰富的纤维(菠萝麻),是一种优质的天然纺织原料,可纯纺,也可混纺。从新鲜菠萝叶中可提取1．5％的干纤维。一般每公顷菠萝地可产60～90t鲜叶片,能提取900～1 350kg干纤维。开发利用菠萝叶纤维,实现果、叶兼用,能大幅度提高菠萝种植业的经济效益,形成热带和亚热带地区新的产业和经济增长点。同时,菠萝叶纤维作为可再生天然纤维对于我国纺织原料的可持续发展具有重要的意义。

苦丁茶冬青的RAPD影响因素及实验条件的优化

以苦丁茶冬青为材料研究随机扩增多态DNA (RAPD)的影响因素及各种实验条件优化。研究结果表明 :模板DNA的浓度适宜范围为 2 0ng 反应～ 80ng 反应RAPD均可得到一致的结果 ;dNTPs的适宜浓度范围为 2 0 0 μmol L～ 4 0 0 μmol L ;Mg2 + 适宜浓度范围为 1 5mmol L～2 0mmol L ;其合适的复性温度为 35～ 37℃ ;2min的延伸时间 ,4 5次热循环。按照此优化的RAPD条件进行重复实验 ,实验结果重现性良好 ,因而确定了苦丁茶冬青RAPD反应体系之最佳的实验条件。

苎麻遗传转化再生体系的建立

苎麻(BoehmerianiveaL.Guad)是荨麻科苎麻属宿根型草本植物,主要分布在热带和亚热带地区,为我国特产,是重要的纺织纤维和饲料作物。由于苎麻为杂合体,其遗传背景十分复杂,有性杂交等常规方法难以取得育种上的突破,因此,探讨利用基因工程技术改良苎麻品种具有重要意义。本研究以苎麻品种圆叶青叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素BA、IAA、GA3和NAA,通过研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响以及不同激素配比对生根的作用,建立了较好的遗传转化再生体系。试验结果表明圆叶青叶盘最适诱导愈伤培养基为MS+6-BA2.0mg/L+GA30.4mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L;分化培养基为MS+6-BA2.0mg/L+GA30.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L;小苗的最佳生根培养基为MS+NAA0.2mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L。在抗生素浓度梯度筛选实验中获得50mg/L卡那霉素可以抑制叶盘的分化;40mg/L卡那霉素可以抑制再生植株的生根。筛选出的遗传转化再生体系,为进一步利用基因工程技术对苎麻进行遗传改良打下基础。

用RAPD技术探讨冬青属苦丁茶的遗传差异、亲缘关系与分类地位

利用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术对 2 2份冬青属苦丁茶不同种质材料的遗传变异进行了研究。 4 0个 10 bp的引物用于多态性检测 ,从中筛选出了 2 7个多态性良好的引物。用该 2 7个引物对上述 2 2份种质材料进行PCR扩增 ,共得到 4 45条DNA谱带 ,其中多态性带4 32条 ,占 97 0 8%。根据扩增结果计算了各份材料之间的遗传距离 ,并用UPGMA构建了聚类树状图。分析结果表明 :2 2份供试材料分成 4类 5组 ,第Ⅰ类为Ilexpentagona (分为A、B两组 :A组为新变种var mashanensisG .M .L .;B组为原变种var pentagona) ,第Ⅱ类为I kudingcha,第Ⅲ类为I latifolia ,第Ⅳ类为I cornuta ;第Ⅱ ,Ⅲ ,Ⅳ三类各有一组材料组成。物种的差异、亲缘关系以及同一物种内不同种质材料在起源地域上的差异均可从系统树中反映出来。RAPD分子标记的结果可作为判断冬青属苦丁茶种质资源材料的起源地域、遗传差异。