探讨补中益气汤通过转化生长因子-β(TGF-β)/母对抗DPP同源物(Smad)信号通路调节实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的作用。雌性SD大鼠使用高碘饮水联合弗氏佐剂与猪甲状腺球蛋白(pTG)免疫注射的...探讨补中益气汤通过转化生长因子-β(TGF-β)/母对抗DPP同源物(Smad)信号通路调节实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的作用。雌性SD大鼠使用高碘饮水联合弗氏佐剂与猪甲状腺球蛋白(pTG)免疫注射的方法建立EAT大鼠模型,检测血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)水平和苏木素-伊红(HE)染色病理切片。模型成功后使用免疫磁珠法提取大鼠脾脏Treg,并用流式细胞术进行鉴定。将提取的Treg分为空白组、补中益气汤组、TGF-β组、拮抗剂(LY3200882)组、拮抗剂(LY3200882)+补中益气汤组,给药干预后,cell counting kit(CCK)-8实验检测细胞活力;蛋白免疫印迹(Western blot)法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和基因表达情况。结果显示,与空白组大鼠比较,模型大鼠TPOAb、TGAb水平显著升高,HE染色提示模型大鼠甲状腺组织部分滤泡破坏,可见大量淋巴细胞浸润,说明造模成功。Treg体外给药后,CCK-8结果显示补中益气汤含药血清质量分数在20%以下促进细胞增殖。与空白血清组比较,补中益气汤含药血清组可显著增加TGF-β1、叉头框蛋白P3(FoxP3)、Smad2、Smad4蛋白表达,p-Smad2、p-Smad3、Smad3较空白血清组表达增加但差异无统计学意义;拮抗剂组加入补中益气汤含药血清后,与拮抗剂组比较,p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、Smad4、Smad7表达无明显增加或减少。RT-qPCR结果显示,与空白血清组比较,补中益气汤组中TGF-β1、FoxP3、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA表达升高或降低趋势与TGF-β组趋势一致,但差异无统计学意义;拮抗剂组加入补中益气汤含药血清后,与拮抗剂组比较,TGF-β1、FoxP3、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA差异无统计学意义。综上,补中益气汤可通过促进TGF-β1的分泌,调节TGF-β/Smad信号通路中关键信号分子TGF-β1、Smad2及Smad4的表达促进Treg稳定及活性,进而影响辅助性T细胞17(Th17)/Treg细胞免疫平衡,抑制EAT大鼠的炎症反应。展开更多