人参总皂苷诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 研究人参总皂苷诱导白血病细胞凋亡及其机制 ,为进一步开发人参总皂苷提供实验依据。方法 采用细胞体外培养、图象分析技术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法 ,研究人参总皂苷诱导 K5 6 2细胞凋亡。结果 人参总皂苷对 K5 6 2细胞有增殖抑制作用 ,并可诱导 K5 6 2细胞凋亡明显增加 ,同时 K5 6 2细胞癌基因产物 C- MYC,BCL- 2表达明显降低。结论 人参总皂苷能诱导 K5 6 2细胞凋亡 ,其机制可能与调控癌基因产物的表达有关。

三种中药皂甙对K_(562)细胞诱导分化作用的实验研究

目的研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）、绞股蓝总皂甙（ＧＰ）、三七总皂甙（ＰＮＳ）对Ｋ５６２细胞诱导分化的影响；方法采用细胞体外培养技术，通过细胞形态学、细胞化学、表面膜抗原（ＨＩＲ２、ＣＤ１５、ＣＤＷ４１）等检测方法；结果经三种皂甙诱导后，ＴＳＰＧ、ＧＰ不能诱导Ｋ５６２细胞合成过氧化物酶（ＰＯＸ）而能合成血红蛋白（Ｈｂ），仅有表达ＣＤＷ４１，ＨＩＲ２的阳性细胞数明显增加；而ＰＮＳ不能诱导Ｋ５６２细胞合成Ｈｂ而能合成ＰＯＸ，表达ＣＤＷ４１、ＨＩＲ２、ＣＤ１５的阳性细胞数均明显增加；结论ＴＳＰＧ、ＧＰ、ＰＮＳ均能诱导Ｋ５６２细胞向多系分化为较成熟的细胞，ＴＳＰＧ、ＧＰ主要诱导其向红系分化。

抗白血病中药及天然药物的研究现状

抗白血病中药及天然药物的研究现状陈婷梅，祝彼得迄今用于白血病临床的化疗药物包括烷化基、抗代谢药、抗生素及激素和杂类等，这些药物副作用较强，且对起重要防御作用的淋巴细胞、骨髓造血细胞的破坏较大，使机体对癌、感染失去抵抗力，临床上白血病患者死于肺炎、败血...

人胱抑素C的原核表达纯化鉴定及抗血清的制备

目的构建人胱抑素C(cystatin C,Cys C)的原核表达载体,并用纯化的Cys C重组蛋白免疫家兔,制备CysC抗血清。方法从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,将测序正确的目的基因克隆至pET32(a)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA、Western blot进行检测。结果测序证实克隆的基因序列与GeneBank中的Cys C序列相符;SDS-PAGE、Western blot结果证实获得相对分子质量为35×103的Cys C融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶8000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合。结论获得了Cys C重组蛋白及特异性多克隆抗体。

四年制医学检验技术专业的培养目标及教学的思考

根据教育部制定的"普通高等学校本科专业目录(2012年)",原有医学检验专业(五年制)改为医学检验技术专业(101001),学制为四年,授予理学学士学位。新医学检验专业的学制、学位及归属类别的改变,不仅突出了该专业的检验技术属性,也必然引起本专业培养目标的转换,因此亟需探索与新专业目录、新培养目标适应的新教学体系和教学思想,文章就此提出一些思考。

微生态制剂—活菌制剂现状

自抗生素问世以来,曾挽救了无数人的生命,但它在发挥其有益于人类作用的同时,不免留下了某些菌群失调的遗憾。目前常用的菌群调整疗法主要有营养调整,投菌措施、活菌制剂以及菌群促进物质,其中活菌制剂的方法疗效佳、针对性强。1981年,我国著名微生物学家魏曦教授曾预言:“

慢性肝病患者血清精氨[基]琥珀酸裂合酶的变化

目的建立自动生化分析仪检测血清精氨[基]琥珀酸裂合酶(ASL)的方法,探讨其对慢性肝病的诊断效能。方法测定149例慢性肝病患者、247例非肝病患者和32例健康对照血清ASL活性,同时测定ALT和AST活性。结果本组病例ASL、ALT和AST水平与健康对照间均存在明显差异;对照组与非肝病患者ASL活性无明显差异(q=0.051,P=0.959);慢性肝病组与非肝病组、健康对照组ASL活性无重叠。ROC曲线显示ASL对判断慢性肝病的敏感性为98.7%,特异性为97.5%(cutoff值=9.2U/L);ALT、AST的敏感性为60.4%和57.7%,特异性仅分别为33.4%和36.6%(cutoff值=40.0U/L)。结论ASL诊断慢性肝病的敏感性和特异性均优于AST和ALT,是慢性肝病诊断的有用指标。

人胱抑素C单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)的单克隆抗体(McAb),并建立检测人血清Cys C的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETIA)。方法:构建人Cys C的原核表达载体pET32a(+)/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备Cys C的McAb;以自制的McAb包被乳胶颗粒,建立PETIA法测定血清Cys C,并对其分析性能进行初步方法学评价。结果:建立分泌抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,其分泌的McAb为IgG1,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合;将杂交瘤细胞注射于小鼠腹腔,腹水中Cys C McAb效价为1∶4×106;用自制的McAb建立定量测定Cys C的PETIA,方法学评价试验结果证实我们建立的PETIA法,与进口试剂有很好的可比性,具有较满意的方法学性能。结论:成功制备了抗Cys C单克隆抗体,该抗体可用于建立定量检测Cys C的PETIA法。

人参总皂甙对K_562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

采用细胞体外培养，流式细胞术、形态学观察、组化与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对Ｋ＿６５２细胞增殖与分化的影响。结果表明：ＴＳＰＧ对Ｋ＿５６２细胞增殖具有明显的抑制作用，并能阻止Ｋ６５２细胞由Ｇ０／Ｇ１期向Ｇ２／Ｍ＋Ｓ期过渡：经２００μｇ／ｍｌ的ＴＳＰＧ诱导后，Ｋ５６２细胞形态趋向成熟分化；联苯胺染色、糖原染色和ＨＩＲ２．ＣＤｗ４１阳性表达细胞数显著提高，且阳性强度增加。推测ＴＳＰＧ是能抑制白血病细胞增殖并诱导其分化的天然诱导剂，但对其机理有待进一步探讨。

新医科背景下检验医师培养的思考

新医科背景下,检验医学人才培养应积极面向“健康中国”战略[1]需求,瞄准医学科技发展前沿,通过升级优化现有检验医师培养体系,积极探索五年制、“5+3”及“5+3+X”多层次的检验医师学历教育途径,培养卓越检验医师,建立中国特色的医学检验教育新体系。

人参皂甙对K562细胞表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响

目的 :进一步探讨人参皂甙 (TSPG)诱导K5 6 2细胞分化的作用机制及了解K5 6 2细胞的生物学特点 ,为开发TSPG临床应用提供理论与实验依据。方法 :采用形态学观察和流式细胞术等方法 ,研究TSPG在诱导K5 6 2细胞向较为成熟细胞分化过程中 ,对其表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响。结果 :TSPG可诱导K5 6 2细胞向较成熟的红系、粒系细胞分化 ,作用后细胞表达CD15、HIR2 、EPO -R和GM -CSF -R的阳性细胞率均有所升高。结论 :K5 6 2细胞为分化受阻滞的异常造血祖细胞 ,其生物学特点与正常人多向造血祖细胞 (CFU -Mix)相似 ;TSPG诱导K5 6 2细胞成熟分化的作用机理可能与TSPG促进K5 6 2细胞EPO -R、GM -CSF -R表达升高有关。

三种中药皂甙对HL-60细胞诱导分化的实验研究

目的 :研究人参总皂甙、绞股蓝总皂甙和三七总皂甙诱导白血病细胞分化及其机理 ,为进一步开发三种皂甙的临床应用提供理论与实验依据。方法 :采用细胞体外培养、流式细胞术、形态学观察、组化与免疫细胞化学等方法 ,研究人参总皂甙(TSPG)、绞股蓝总皂甙 (GP)和三七总皂甙 (PNS)对HL—60细胞诱导分化的影响。结果 :三种中药皂甙均能阻止HL—60细胞由G0/G1 期向G2/M +S期过渡 ;经三种中药皂甙诱导后 ,HL—60细胞形态趋向成熟分化 ,NBT还原反应阳性细胞数和过氧化物酶(POX)染色阳性细胞数增加 ,CD14、CD15 表达阳性细胞数也显著提高 ,但对照组细胞与实验组细胞非特异性酯酶 (NAE)染色均为阴性。结论 :提示TSPG、GP、PNS诱导HL—60细胞向粒系分化为主。

自制抗体的颗粒增强透射免疫分析法测定人血清胱抑素C的评价

目的:用自制抗体研制可在自动生化分析仪应用的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETIA)定量测定人血清胱抑素C(Cys C)的试剂盒.方法:构建人CysC的原核表达载体pET32a(+)/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫大白兔,制备Cys C抗血清;以自制的CysC抗血清包被乳胶颗粒,研制PE-TIA法定量检测血清Cys C的试剂盒,并对其分析性能进行方法学评价.结果:本法回收率为97.5%～105.0%,批内及批间CV均<5%,线性范围8.11～0.25mg/L,检测限0.2mg/L;本法与Dako法和BN-Prospect法呈正相关(P<0.0001);胆红素对高浓度Cys C测定有干扰作用,Hb和葡萄糖对本法无干扰.结论:应用自动生化分析仪的自研法性能满意.

人参多糖对K562细胞增殖抑制及诱导分化的实验研究

目的 研究人参多糖(GPS)对人白血病细胞株(K562)增殖抑制及诱导分化的影响。方法 采用细胞体外培 养技术,MTT法检测细胞增殖抑制,光镜和电镜观察细胞形态变化;联苯胺(Benzidine)、糖原染色(PAS)、过氧化物酶 (POX)、非特异性脂酶(α- NAE)细胞化学染色分别检测K562细胞向红系、粒系、巨核系分化的特征;免疫细胞化学检测细胞 表面分化抗原及因子表达(CD14、CD15、HIR2、EPO、GM CSF);FAS及FAS L等检测细胞凋亡情况。结果 GPS对K562细胞 的增殖有明显抑制作用并能诱导K562细胞向红系或粒系细胞分化,表现为:①K562细胞的增殖受到抑制;②K562细胞形 态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,核仁减少或消失,核染色质浓缩,胞浆丰富,核浆比例降低,可见中晚期粒、红系细 胞;③K562细胞血红蛋白(Hb)、糖原、α- NAE的表达明显增加,而过氧化物酶(POX)的表达与对照无显著性差异;④细胞表 面分化抗原CD15、HIR2、EPO、GM CSF的表达明显增强,CD14的表达与对照无显著性差异;⑤细胞凋亡明显增加。结论 人 参多糖(GPS)能明显抑制K562细胞增殖并能诱导其凋亡并使K562细胞向成熟方向分化。

IL-8通过上调Bcl-2的表达和下调caspase-3的表达抑制MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的探讨白细胞介素8(IL-8)对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制。方法 Western blot法检测MCF-7细胞IL-8受体CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2的表达;反转录PCR、Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞Bcl-2、caspase-3表达的影响;CCK-8法检测(0、40、80)ng/mL IL-8对MCF-7细胞增殖的影响;相差显微镜下观察80ng/mL IL-8处理MCF-7后细胞形态的变化;Western blot法检测80ng/mL IL-8联合信号通路抑制剂10μmol/L PD980590、10μmol/L LY294002或50μmol/L AG490[分别为丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)、磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路抑制剂],共同处理MCF-7细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达的变化;Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞磷酸化p-AKT表达的影响;流式细胞术、反转录PCR以及Western blot法分别检测80ng/mL IL-8联合10μmol/L LY294002共同处理MCF-7细胞后,细胞凋亡以及细胞内Bcl-2、caspase-3表达的变化。结果 IL-8受体CXCR1、CXCR2在MCF-7细胞中均有表达;在IL-8的作用下,MCF-7细胞Bcl-2表达升高,caspase-3表达下降,抗凋亡能力明显增强;IL-8能显著上调MCF-7细胞中p-AKT的表达;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能显著抑制IL-8抗MCF-7细胞凋亡的作用,且减少Bcl-2并增加caspase-3的表达。结论 IL-8可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与IL-8激活PI3K/AKT信号通路而上调Bcl-2、下调caspase-3的表达有关。

人参皂甙诱导白血病细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响

目的 研究人参总皂甙诱导白血病细胞凋亡及其机制,为进一步开发人参皂甙提供理论与实验依据。方法 采用图像分析术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法,研究人参总皂甙诱导K562细胞凋亡。结果 人参 总皂甙对K562细胞有增殖抑制作用,并可诱导K562细胞凋亡明显增加,同时K562细胞Fas表达升高。结论 人参总皂 甙能诱导K562细胞凋亡,其机制可能与调控Fas表达升高有关。

联氨基姜黄素抑制STAT3信号通路对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭迁移性的影响

目的探讨姜黄素衍生物——联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)通过抑制STAT3(signal transduction and activators of transcription-3)信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移性的影响。方法以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,分DMSO对照组和HC处理组。采用MTT法检测HC对MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长抑制作用,刘氏染色检测细胞形态学改变,Transwell小室检测细胞侵袭能力,细胞划痕试验检测细胞迁移能力,Western blot检测STAT3、p-STAT3、MMP-9及MMP-2的蛋白表达水平。结果 MTT检测显示,HC处理的细胞生长受到抑制,其抑制率呈时间-剂量依赖关系;刘氏染色发现处理细胞形态发生改变,细胞变圆;Transwell小室检测显示对照组穿膜细胞数为(598.00±21.28)/视野,而10、20μmol/LHC处理后透膜细胞数分别为(94.00±6.56)/视野和(4.00±1.00)/视野,穿膜细胞数显著低于对照组(P<0.05);划痕试验表明对照组划痕闭合率约为54%,而10、20μmol/LHC处理组基本无闭合(P<0.05);Westernblot检测显示,不同浓度HC处理MDA-MB-231细胞后,p-STAT3明显降低,而总STAT3水平无明显差异,MMP-9、MMP-2的表达也有减少。结论 HC可以通过抑制STAT3的活化(即p-STAT3),降低MMP-9、MMP-2的蛋白表达水平,从而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭迁移性。

瘦素对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的探讨瘦素(leptin)对人乳腺癌MCF-7细胞迁移及侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法 RT-PCR,Western blot法检测MCF-7细胞leptin受体(OB-R)的表达;Western blot法检测leptin(100 ng/mL)对MCF-7细胞信号通路分子p-ERK1/2,p-AKT,p-STAT3表达的影响;细胞划痕实验检测leptin对MCF-7细胞迁移能力的影响;TranswellTM细胞侵袭实验检测leptin对MCF-7细胞侵袭能力的影响;RT-PCR,Western blot法检测leptin对MCF-7细胞基质金属蛋白酶(MMP-9),转化生长因子β(TGF-β)表达的影响。结果 Leptin长短受体(OB-Rb,OB-Rt)在MCF-7细胞中均有表达;Leptin能显著上调MCF-7细胞p-ERK1/2,p-STAT3,p-AKT的表达(P<0.05);Leptin能促进MCF-7细胞的迁移及侵袭能力(P<0.05),JAK/STAT,PI3K/AKT信号通路抑制剂AG490(50μmol/L),LY294002(10μmol/L)能抑制leptin对MCF-7细胞的促迁移和侵袭作用(P<0.05),而MAPK/ERK通路抑制剂PD98059(10μmol/L)作用不明显(P>0.05);Leptin促进MCF-7细胞MMP-9,TGF-β的表达,AG490,LY294002能抑制其作用(P<0.05),PD98059对其无影响(P>0.05)。结论 Leptin可能通过JAK/STAT、PI3K/AKT信号通路上调MMP-9,TGF-β的表达促进MCF-7细胞迁移和侵袭。

人参皂甙协同EPO和GM-CSF对K562细胞诱导分化的实验研究

目的 研究人参总皂甙 (Totalsaponinsofpanaxginseng ,TSPG)协同细胞因子 (EPO、GM CSF)对人红白血病细胞株 (K5 62 )诱导分化的影响。方法 采用细胞体外培养技术 ,光镜和电镜观察细胞形态变化 ;联苯胺染色、POX染色、α NAE细胞化学染色分别检测细胞血红蛋白、过氧化物酶、非特异性脂酶α NAE ;免疫细胞化学检测细胞表面分化抗原CD15、HIR2、EPO R、GM CSF R。结果 TSPG协同细胞因子对K5 62细胞的诱导作用与TSPG单独作用相比 ,①K5 62细胞形态学更趋向于成熟 ;②K5 62细胞血红蛋白 (Hb)、过氧化物酶 (POX)的表达明显增加 ;③细胞表面分化抗原CD15、HIR2、EPO R、GM CSF R的表达明显增强。结论 TSPG协同细胞因子作用能明显诱导K5 62细胞向成熟方向分化。