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表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析
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作者 黄静 王玉旭 +5 位作者 王豪 陈樱 欧阳康 黄伟坚 黄稳妃 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期48-53,共6页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 感染性克隆 Α干扰素 抗病毒基因
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碱性清洁剂安全性及对PEDV杀灭效果的评估
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作者 欧阳康 黄夏玲 +8 位作者 黄家宝 秦秋英 曾令佑 冯晋平 牛宇峰 覃一峰 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 《广西农学报》 2024年第3期34-40,共7页
近年来,猪病毒性腹泻在我国流行日趋严重,引起仔猪大量腹泻和死亡,给养猪业带来巨大的经济损失。研究评估了碱性清洁剂对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的杀灭效果,为猪场选用合适的清洁消毒剂提供参考。通过p... 近年来,猪病毒性腹泻在我国流行日趋严重,引起仔猪大量腹泻和死亡,给养猪业带来巨大的经济损失。研究评估了碱性清洁剂对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的杀灭效果,为猪场选用合适的清洁消毒剂提供参考。通过pH值测定、细胞增殖和细胞毒性实验以及细胞病变观察测定不同浓度碱性清洁剂A、B和NaOH对Vero细胞增殖活性的影响以及在有机物干扰条件下碱性清洁剂对PEDV的杀灭作用。NaOH对Vero细胞增殖活性无影响的最高稀释浓度为0.03125%,而碱性清洁剂A和B分别为2%和0.5%,在安全性上优于NaOH;在含有不同浓度血清的环境下,碱性清洁剂A、B浓度达到0.5%时均能杀灭病毒。研究证明,碱性清洁剂在体外对PEDV有一定的杀灭效果,可用于猪场的清洗消杀,帮助养殖场做好疫病防控。 展开更多
关键词 碱性清洁剂 猪流行性腹泻病毒 PH值 病毒杀灭 猪场应用
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猫上呼吸道疾病的病原、诊断与防治 被引量:1
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作者 孙凡媛 刘怡婷 +7 位作者 郭昕怡 陈建材 周华波 覃一峰 欧阳康 韦祖樟 黄伟坚 陈樱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2345-2356,共12页
猫上呼吸道疾病(feline upper respiratory tract disease, FURTD)是一种在猫中广泛传播的以上呼吸道、口腔和眼部症状为主的疾病。引起FURTD的病原多样,除常见的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)、猫疱疹病毒Ⅰ型(feline herpesvir... 猫上呼吸道疾病(feline upper respiratory tract disease, FURTD)是一种在猫中广泛传播的以上呼吸道、口腔和眼部症状为主的疾病。引起FURTD的病原多样,除常见的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)、猫疱疹病毒Ⅰ型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)、猫衣原体(Chlamydia felis,C.felis)、猫支原体(Mycoplasma felis,M.felis)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)外,临床中还有许多其他的病原偶见感染。临床中常出现由多种病原体混合感染的情况,并且病原的不断进化容易造成致病性的增强和组织嗜性的改变,这种病因的复杂性往往使得FURTD的防治较为困难。同时,由于许多病原感染引起猫的症状相似,仅凭临床症状无法准确判断出病因,准确认识不同病原的特性、掌握不同的病原检测方法对FURTD的病因快速诊断和提出高效的治疗方案至关重要。目前,不同病原引起的FURTD病例常被报道,而针对FURTD的诊断方法、治疗以及疫苗研制都尚未成熟,本文将对该疾病的常见和新发病原、诊断方法、治疗手段和防控措施进行系统地阐述,旨在为FURTD的防治工作提供更多的思路。 展开更多
关键词 猫上呼吸道疾病 病原 混合感染 诊断方法
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广西地区腹泻仔猪呼肠孤病毒的感染及序列分析 被引量:1
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作者 隆美金 陆颖 +8 位作者 李茂宁 易春华 廖梦娟 余科辰 覃一峰 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《动物医学进展》 北大核心 2024年第7期31-37,共7页
为了解广西地区腹泻仔猪中哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)的感染情况及主要流行毒株,应用套式RT-PCR对广西部分地区2020-2022年173份腹泻猪样品进行检测,并选取部分阳性样品进行S 1基因扩增与分析,进一步了解广西地区MRV主要流行毒株的基因特... 为了解广西地区腹泻仔猪中哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)的感染情况及主要流行毒株,应用套式RT-PCR对广西部分地区2020-2022年173份腹泻猪样品进行检测,并选取部分阳性样品进行S 1基因扩增与分析,进一步了解广西地区MRV主要流行毒株的基因特征。结果显示,2020-2022年173份样品MR总阳性率为18%(32/173),各年阳性率分别为29.6%、9.9%和33%。获得1株S 1基因全长序列,序列比对结果发现该序列与其他MRV S 1基因序列的核苷酸同源性为43.4%~97.9%,氨基酸同源性为26.1%~97.8%;遗传进化分析显示,获得的毒株序列为MRV3型,与其他猪源MRV3型毒株ZJ2013、IND/MZ/3013789/reo在同一分支上,同属于谱系Ⅳ。结果表明广西地区猪群存在一定程度的MRV感染,为进一步防控广西腹泻猪群中MRV的流行提供科学依据。 展开更多
关键词 哺乳动物呼肠孤病毒 S 1基因 序列分析 感染情况
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3型哺乳动物正呼肠孤病毒SYBR Green I荧光定量PCR方法的建立及应用
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作者 汤文菲 罗宇航 +12 位作者 董覃婷 朱鑫玥 王杨林 韦祖樟 陈樱 欧阳康 覃一峰 钟舒红 谢江 陈集成 王小玲 黄伟坚 潘艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期819-824,共6页
哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV)是双链RNA病毒,可以感染自然宿主的哺乳动物和脊椎动物。为建立一种针对3型哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV-3)的特异且快速的检测方法,本研究根据Genbank登录的MRV-3(OQ627746-OQ627755)S1基因保守区设计1对特异性... 哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV)是双链RNA病毒,可以感染自然宿主的哺乳动物和脊椎动物。为建立一种针对3型哺乳动物正呼肠孤病毒(MRV-3)的特异且快速的检测方法,本研究根据Genbank登录的MRV-3(OQ627746-OQ627755)S1基因保守区设计1对特异性引物,并从MRV-3中扩增S1基因,构建重组质粒p MD18-S1,经PCR和测序鉴定正确后作为质粒标准品,经反应体系及反应条件优化后首次初步建立了检测MRV-3的SYBR Green I荧光定量PCR(q PCR)方法。将质粒标准品10倍倍比稀释后作为模板经该q PCR扩增,建立标准曲线,结果显示,质粒标准品在1.3×10^(8)拷贝/μL~1.3×10^(3)拷贝/μL与各自的Ct值均呈良好的线性关系,斜率为-3.1706,R^(2)为0.9999,熔解曲线为单峰。以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、水牛匈爱病毒(Buf Hu V)、牛冠状病毒(BCo V)、牛细小病毒(BPV)和MRV-3的基因组DNA/c DNA为模板,利用本研究建立的q PCR方法检测,评估该方法的特异性;将质粒标准品10倍倍比稀释至1.3×10^(2)拷贝/μL~1.3×10^(8)拷贝/μL后作为模板,分别利用本研究建立的q PCR和常规PCR检测,比较两种方法的检测结果,评估本研究建立q PCR方法的敏感性;以1.3×10^(3)拷贝/μL~1.3×10^(7)拷贝/μL 5个不同浓度的质粒标准品为模板,利用该方法分别进行批内和批间的重复性试验,评估该方法的重复性。结果显示,该方法只能检测出MRV-3,其他相关病原的检测结果均为阴性;该q PCR对质粒标准品的检测限为1.3×10^(3)拷贝/μL,比常规PCR敏感性高10 000倍;批内和批间重复性试验的变异系数均小于或等于1.0%,表明该q PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法检测220份牛粪便样品,结果显示MRV-3的检出率(3.64%,8/220)高于常规PCR的检出率(1.36%,3/220),两种检测方法的阳性符合率达100%,阴性符合率为97.75%,总符合率为97.78%。综上所述,本研究首次建立的检测MRV-3的SYBR Green I q PCR方法可以用于临床牛腹泻病原的检测,为MRV-3尤其是牛源MRV-3提供了一种快速灵敏的检测手段,也为MRV-3的后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 哺乳动物正呼肠孤病毒 SYBR Green I 荧光定量PCR 病毒检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立
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作者 覃建光 姚静 +7 位作者 刘文波 刘嘉琪 陈国昌 任同伟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2024年第9期1-6,共6页
为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pE... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白免疫小鼠,获得N蛋白多克隆抗体。将纯化后的N蛋白作为抗原,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,并评估该方法的特异性、重复性和准确性。结果表明,表达的重组N蛋白呈可溶性,制备的N蛋白多克隆抗体ELISA效价能达到1∶2048000,IFA和Western blot结果表明制备的鼠多克隆抗体能特异性识别PRRSV N蛋白。建立的间接ELISA方法特异性良好,重复性试验变异系数均小于10%,且与同类型商品化试剂盒结果比较,符合率达到91.10%,可为PRRSV N蛋白的免疫学检测和结构功能的研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体 间接ELISA
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广西地区1株牛细小病毒1型分离鉴定及遗传进化分析
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作者 吴奥祺 罗宇航 +10 位作者 任同伟 王豪 董覃婷 覃一峰 韦祖樟 欧阳康 陈樱 黄伟坚 潘艳 李凤梅 谢江 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4540-4549,共10页
【目的】了解广西地区牛细小病毒1型(Bovine parvovirus 1,BPV1)的生物学特性及遗传变异情况,为BPV1的防控提供理论依据和支撑。【方法】试验从广西地区养牛场采集409份犊牛腹泻粪便样本,通过BPV1特异引物进行PCR检测,使用牛鼻甲骨细胞(... 【目的】了解广西地区牛细小病毒1型(Bovine parvovirus 1,BPV1)的生物学特性及遗传变异情况,为BPV1的防控提供理论依据和支撑。【方法】试验从广西地区养牛场采集409份犊牛腹泻粪便样本,通过BPV1特异引物进行PCR检测,使用牛鼻甲骨细胞(BT)对阳性样品进行病毒分离。收集产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)的BT细胞上清液,通过PCR扩增、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、电镜观察等方法进行病毒鉴定。测定BPV1分离株感染BT细胞后不同时间病毒半数组织培养感染剂量(median tissue culture infectious dose,TCID_(50)),绘制病毒多步生长曲线。利用高通量测序获得病毒全基因组序列并对其进行遗传进化分析。【结果】409份粪便样本检测到1例BPV1阳性,阳性率为0.24%。病料接种BT细胞盲传至第3代,可观察到细胞圆缩、弯曲、形成细胞团块、溶解等现象。PCR扩增结果显示,产生CPE细胞上清经PCR扩增可出现特异性条带;电镜可观察到圆形、无囊膜、直径约24 nm的病毒粒子;IFA结果显示,接种分离株的BT细胞内可观察到特异性绿色荧光,成功分离到1株BPV1,命名为GXBS2209。第6代分离株病毒滴度为10^(5.75)TCID_(50)/mL,多步生长曲线显示分离株感染BT细胞后病毒滴度在120 h达到峰值,随后逐渐下降。测序结果显示,分离株基因组全长为5515 bp(GenBank登录号:PP158225),与美国Bovine parvovirus株全基因组序列相似性最高,为98.7%。遗传进化分析结果显示,分离株与Bovine parvovirus株处于同一分支,亲缘关系最近。分离株与参考毒株NS1、VP2基因核苷酸序列相似性分别为98.8%~99.4%、94.4%~98.1%,氨基酸序列相似性分别为98.8%~99.5%、90.3%~99.4%;NS1和VP2序列中各有2和3个氨基酸位点替换。【结论】本研究成功分离到1株BPV1,并对其全基因序列进行分析,为后续BPV1的致病机理、疫苗研究以及疾病防控奠定了基础。 展开更多
关键词 牛细小病毒1型(BPV1) 病毒分离 序列分析
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H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV多重PCR检测方法的建立及应用
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作者 徐毅 余良政 +10 位作者 林霜 任同伟 王豪 曾昊 郭嘉宁 郭金凡 黄崇强 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 陈樱 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期135-141,共7页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染肺泡巨噬细胞,严重损害免疫系统,导致与其他病毒共感染现象,其中猪流感病毒(SIV)也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型,本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染肺泡巨噬细胞,严重损害免疫系统,导致与其他病毒共感染现象,其中猪流感病毒(SIV)也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型,本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、M基因的保守序列,分别设计了4对特异性扩增引物,在引物浓度、退火温度等反应条件的系统优化下,分别对其特异性和敏感性进行验证,建立了能够快速检测以上4种病原的多重PCR方法,并对155份临床样品进行了检测。结果显示,该检测方法特异性好、灵敏度高,对H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV的最低检出量均低至9.86×10^(0) copies/μL。以单一PCR方法对所有临床样品进行检测后发现,检测结果与多重PCR检测结果一致,证明这种多重PCR方法可以用于这4种病毒的快速检测与分型鉴定。 展开更多
关键词 猪流感病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重PCR
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猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 边金妮 黄诗婷 +7 位作者 许佳乐 米雪 王奕斐 杜琛 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期178-182,共5页
本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆... 本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。 展开更多
关键词 猪肠病毒G型 部分VP1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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广西地区犬和猫肠道病毒的病原学调查研究
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作者 黎波宏 黄馨 +8 位作者 何庆元 方友桥 满婷婷 陈建材 周华波 韦祖樟 欧阳康 黄伟坚 陈樱 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期24-31,共8页
为了解引起广西地区犬和猫腹泻等肠道病原的分布情况,并探究犬和猫新型肠道病毒感染的临床特征,为临床中及早诊治和防控肠道疾病提供参考依据,本试验采集宠物犬和猫粪便拭子样品394份(犬样品172份,猫样品222份),并通过聚合酶链式反应(P... 为了解引起广西地区犬和猫腹泻等肠道病原的分布情况,并探究犬和猫新型肠道病毒感染的临床特征,为临床中及早诊治和防控肠道疾病提供参考依据,本试验采集宠物犬和猫粪便拭子样品394份(犬样品172份,猫样品222份),并通过聚合酶链式反应(PCR)或反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)筛查犬细小病毒(CPV)、猫瘟病毒(FPV)和查帕马细小病毒(ChPV)等13种主要犬和猫肠道病毒,并分析肠道病毒阳性率与年龄、性别、免疫状况和临床症状之间的相关性。结果显示,犬粪便样品中总阳性样品数为49份,占比28.49%;其中CPV的阳性率最高,达到15.12%,临床症状为典型的肠道症状;其次,犬粪便样品中还检测到犬冠状病毒(CCoV,4.65%)、猫杯状病毒(FCV,4.07%)、嵴病毒(KoV,4.07%)、博卡病毒(BoV,3.49%)、犬瘟热病毒(CDV,2.91%)和布法病毒(BuV,0.58%);其中11份粪便样品混合感染了2种及以上种类的肠道病毒,CPV感染占10份。幼龄犬对CCoV和FCV比较易感;各肠道病毒阳性率与性别无相关性,部分肠道病毒阳性率与免疫状况和临床症状有相关性。猫粪便样品中总阳性样品数为32份,占比14.41%;FPV的阳性率最高,达到8.11%;其次,猫粪便样品中还检测到新型肠道病毒,包括FCV(4.05%)、ChPV(1.35%)、BoV(1.35%)、BuV(0.45%)和猫冠状病毒(FCoV,0.45%);其中混合感染样品仅4份,而FCV感染占3份。FPV和BoV阳性率与猫的年龄和免疫状况存在相关性,各肠道病毒阳性率与猫的性别和临床症状无明显相关性。值得关注的是,犬和猫粪便中均可检测到A型流感病毒(IAV),阳性率分别为2.91%和0.45%。综上表明,CPV和FPV仍是引起犬和猫肠道疾病的主要病原,同时也是混合感染的重要组成;多种新型肠道病毒的阳性率虽然不高,但仍是引起肠道或肠外疾病中不可忽视的病原;IAV的检出再次强调了犬和猫作为“中间宿主”的重要作用。本试验结果不仅为犬和猫肠道传染病的防控提供预警,也为切断宠物-人IAV传播提供重要参考。 展开更多
关键词 犬和猫粪便样品 肠道病毒 混合感染 流行病学调查
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一例猫华支睾吸虫病的诊治 被引量:1
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作者 盘冬梅 周华波 +2 位作者 唐盈 冼博耀 陈樱 《云南畜牧兽医》 2024年第2期24-27,共4页
猫华支睾吸虫病是一种寄生虫病,多发生于有食生鱼史的猫,临床上常表现为精神不振、厌食、呕吐、体重减轻、消瘦、贫血、便秘或腹泻、黄疸等症状。现就一例猫华支睾吸虫病的诊断及综合治疗进行总结,为该类疾病的诊治提供参考。
关键词 华支睾吸虫 胆囊炎 脂肪肝
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左氧氟沙星治疗细菌性角结膜炎的疗效 被引量:31
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作者 陈樱 喻长泰 甘晓萍 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期216-218,共3页
目的 :验证 0 .3%盐酸左氧氟沙星滴眼液对细菌性角膜炎和结膜炎的疗效。方法 :试验组 31例用左氧氟沙星滴眼液 ,对照组 31例用氧氟沙星滴眼液 ,观察疗效和不良反应 ,测定 2药对结膜囊或角膜病灶分泌物细菌培养分离菌的敏感率和MIC。结果... 目的 :验证 0 .3%盐酸左氧氟沙星滴眼液对细菌性角膜炎和结膜炎的疗效。方法 :试验组 31例用左氧氟沙星滴眼液 ,对照组 31例用氧氟沙星滴眼液 ,观察疗效和不良反应 ,测定 2药对结膜囊或角膜病灶分泌物细菌培养分离菌的敏感率和MIC。结果 :2药疗效无差异 ,但试验组疗程明显短于对照组 (P <0 .0 5 )。左氧氟沙星对分离菌的MIC极显著地低于氧氟沙星的MIC值 (P <0 .0 1)。结论 :0 .3%盐酸左氧氟沙星滴眼液具有抗菌谱广、活性高、使用安全等特点 ,是治疗细菌性角膜炎和细菌性结膜炎的良好药物。 展开更多
关键词 左氧氟沙星 氧氟沙星 细胞性角膜炎 细菌性结膜炎 治疗
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表达猪流行性腹泻病毒N蛋白Vero细胞系的构建及初步鉴定
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作者 卢峥朴 赵平 +3 位作者 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《广西农学报》 2024年第1期27-32,共6页
【目的】构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的Vero细胞系,将有助于PEDV的进一步深入研究。【方法】本研究将N基因克隆到慢病毒载体中,构建重组质粒pLenti-CMV-N,利用慢病毒载体包装系统转染293T细胞,包装表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢... 【目的】构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的Vero细胞系,将有助于PEDV的进一步深入研究。【方法】本研究将N基因克隆到慢病毒载体中,构建重组质粒pLenti-CMV-N,利用慢病毒载体包装系统转染293T细胞,包装表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Vero细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释法,筛选表达PEDV N蛋白的Vero细胞系,最后进行鉴定。【结果】RT-PCR结果表明构建的细胞系基因组中存在N基因序列,Western blot和IFA试验验证了N蛋白在细胞系中的表达。【结论】本研究成功构建了表达PEDV N蛋白的Vero细胞系。 展开更多
关键词 PEDV N蛋白 细胞系 慢病毒载体
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纤维二糖水解酶在乳酸乳球菌中的表达
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作者 黄凯 何启杰 +5 位作者 陈樱 欧阳康 黄伟坚 彭昊 韦祖樟 李军 《云南畜牧兽医》 2024年第1期1-4,共4页
为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(T.reesei)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴... 为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(T.reesei)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后,将正确的重组质粒通过电击转化进入乳酸菌NZ3900感受态细胞,通过选择性抗生素氯霉素筛选阳性克隆,放大培养后使用终浓度为20 ng/mL的Nisin进行诱导表达,诱导后的菌液经SDS-PAGE鉴定,有符合预期大小的条带,说明CBH II基因在乳酸乳球菌NZ3900中表达。研究为乳酸乳球菌的改造及开发临床应用奠定基础。 展开更多
关键词 纤维二糖水解酶 克隆 乳酸乳球菌 表达
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三种5-HT_3受体拮抗剂对妇科病人术后恶心呕吐的影响 被引量:9
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作者 陈樱 刘克玄 +1 位作者 肖颖 黄文起 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B07期251-253,共3页
【目的】对比观察5-HT3受体拮抗剂对妇科病人术后恶心呕吐(PONV)的影响。【方法】120例择期行妇科开腹手术的患者,ASAⅠ-Ⅱ级,年龄20~60岁,采用腰硬联合阻滞麻醉,术后采用吗啡行硬外镇痛。按双盲原则随机分为4组,每组30例:A组,生理盐... 【目的】对比观察5-HT3受体拮抗剂对妇科病人术后恶心呕吐(PONV)的影响。【方法】120例择期行妇科开腹手术的患者,ASAⅠ-Ⅱ级,年龄20~60岁,采用腰硬联合阻滞麻醉,术后采用吗啡行硬外镇痛。按双盲原则随机分为4组,每组30例:A组,生理盐水对照组;B组,恩丹西酮8mg;C组,托烷司琼5mg;D组,阿扎司琼10mg.于手术结束时静脉注射上述药物。观察术毕24h给止吐药至第1次出现恶心的时间,各组发生恶心、呕吐的病人数,采用补救药物的病例数,恶心的严重程度,病人对止吐药物的满意度,镇静程度,VAS疼痛程度评分及不良反应。【结果】B、C、D组恶心、呕吐的发生率、再次接受止吐药物的病人的百分率均小于A组(P<0.05),B、C、D组恶心、呕吐的发生率组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组初次出现恶心呕吐的时间与其余各组相比有统计学意义(P<0.05),另外C、D组初次出现恶心呕吐的时间明显长于B组(P<0.05);A组恶心严重程度评分与其余各组相比有统计学意义(P<0.05),在A组中还发现有两例病人出现严重呕吐.c组恶心严重程度评分明显小于B、D组(P<0.05)。各组VAS疼痛程度评分无显著差异(P>0.05);B、C、D组镇静程度评分与A组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。【结论】恩丹西酮8mg、托烷司琼5mg。 展开更多
关键词 术后恶心呕吐 呕吐 妇科病人 评分 阿扎司琼 5-HT3受体拮抗剂 托烷司琼 显著差异 人数 补救
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类人H3N2犬流感病毒广西分离株的鉴定及其遗传演化分析 被引量:10
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作者 陈樱 莫彦宁 +8 位作者 周华波 肖雄 於庆雄 杨文娟 韦祖樟 谢婷 韦志文 侯韶毅 黄伟坚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期401-404,共4页
为了解广西各地区宠物犬流感病毒(CIV)的流行情况,本研究从9个地级市宠物医院采集了326份犬鼻拭子样品,经RT-PCR检测为CIV阳性后对其进行MDCK细胞分离病毒,并对分离株进行全基因组测序和序列分析。结果表明获得2株CIVs分离株,均属于... 为了解广西各地区宠物犬流感病毒(CIV)的流行情况,本研究从9个地级市宠物医院采集了326份犬鼻拭子样品,经RT-PCR检测为CIV阳性后对其进行MDCK细胞分离病毒,并对分离株进行全基因组测序和序列分析。结果表明获得2株CIVs分离株,均属于人源谱系,与Moscow/10/99(H3N2)人流感病毒株的同源性大于99%。8个基因节段的核苷酸序列遗传演化分析显示,这2株CIVs与人源H3N2亚型猪流感病毒(SIV)最为相近,同在Moscow/99分支。HA1蛋白氨基酸位点分析显示aa190~aa196位点处仍保留SIV的受体相关结合位点(DQISVYA),但却改变了流行于人类的部分受体结合位点(DQTSLYT)。本研究为有效预防人-犬流感病毒传播提供了实验依据。 展开更多
关键词 宠物犬 类人H3N2亚型 流感病毒 遗传演化
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2009~2013年广西H1N1和H3N2亚型猪流感病毒血清学调查 被引量:8
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作者 陈樱 於庆雄 +9 位作者 银凤桂 薛辉 李法凯 莫彦宁 肖雄 杨文娟 韦祖樟 刘芳 蹇慧 黄伟坚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期155-159,共5页
摘要:【目的】了解广西H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的存在形势及其流行规律,为下一步有效监测和防控猪流感(SI)提供理论依据和原始溯源。【方法】对2009~2013年于广西11个地级市的屠宰场、规模化养猪场和个体养殖户采集的117... 摘要:【目的】了解广西H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的存在形势及其流行规律,为下一步有效监测和防控猪流感(SI)提供理论依据和原始溯源。【方法】对2009~2013年于广西11个地级市的屠宰场、规模化养猪场和个体养殖户采集的1170份猪血清进行血凝抑制(Hr)试验检测,统计欧洲禽源H1N1(EA.H1N1)亚型和新型人源重组H3N2(Hu.H3N2)亚型4株毒株(LB144和BB2、NNXD和JGB4)的抗体阳性率,并分析H1N1和H3N2亚型毒株的存在形势及其流行规律。【结果】2009-2013年,EA.H1N1亚型LB144毒株的平均抗体阳性率高达20.68%,且保持稳定,是广西地区主要的流行毒株;Hu.H3N2亚型JGB4毒株从2010年开始流行,且呈逐渐蔓延的趋势,平均抗体阳性率为19.96%。广西北海、南宁、玉林、贺州、桂林、贵港和柳州市受到EA—H1N1和Hu—H3N2亚型毒株多重感染,且感染程度较严重;百色、河池和防城港市的感染程度相对较低。育肥猪最易感染SIV,尤其是BB2和JGB4毒株,其抗体阳性率分别达66.00%和40.00%。EA—H1N1亚型毒株间的交叉感染阳性率(21.52%)略低于Hu—H3N2亚型毒株间的交叉感染阳性率(27.45%),而两株不同亚型毒株交叉感染时以BB2与JGB4毒株的交叉感染阳性率最高(16.23%),3株交叉感染时以BB2、NNXD和JGB4毒株间的交叉感染阳性率最高(11.60%),4株同时交叉感染阳性率也有6.96%。【结论】广西猪群已普遍存在EA-H1N1和Hu.H3N2亚型毒株混合感染的现象,尤其是地处两省边界上的地级市感染更严重,并以育肥猪和保育猪较易感。因此在sI防控工作中,除做好哺乳仔猪和种猪的日常管理外,还应减少保育猪的外来应激,适当调整育肥猪的饲养密度,以减少新型SIV重组毒株的产生。 展开更多
关键词 猪流感病毒(SIV) H1N1亚型 H3N2亚型 血清学调查 重组毒株
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浅析猪场清洗消毒带来的经济效益
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作者 黄衍庆 黄家宝 +7 位作者 程振孔 黄夏玲 卢峥朴 冯晋平 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《广西农学报》 2024年第3期128-132,共5页
在养猪产业发展的过程中,疾病一直是影响养猪企业经济效益和食品安全的重要因素。而清洗消毒是控制疫病发生发展、提高生产效率、降低生产成本的最有效措施之一。为了更深入地了解猪场清洗消毒在猪疫病防控措施中发挥的重要作用,文章梳... 在养猪产业发展的过程中,疾病一直是影响养猪企业经济效益和食品安全的重要因素。而清洗消毒是控制疫病发生发展、提高生产效率、降低生产成本的最有效措施之一。为了更深入地了解猪场清洗消毒在猪疫病防控措施中发挥的重要作用,文章梳理了猪场清洗栏舍的主要操作步骤和相关要求,归纳了猪场消毒水线、栏舍的药物及其使用方法,计算了清洗消毒可能会为猪场带来的经济效益。旨在帮助猪场建立健全、完善且规范的生物安全体系,预防病原的入侵和繁殖,控制疫病的发生和传播,降低猪场各类疾病的发病率,减少抗生素等药物的使用成本以及有可能造成药物残留的危害,提高猪群的生长性能,增加饲料的转化率,为猪场提高生产效率、降低生产成本,提高经济效益提供参考。 展开更多
关键词 猪场 清洗 消毒 效益
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纤维乳管镜诊断乳头溢液病变性质与病理学对照分析 被引量:13
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作者 陈樱 徐晓军 王含飞 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期775-778,共4页
目的通过对乳头溢液患者的纤维乳管镜(fiberoptic ductoscopy,FDS)下表现与病理诊断结果作对照分析,探讨FDS在诊断乳头溢液疾病中的临床应用价值。方法对947例病理性乳头溢液患者进行FDS检查,综合分析诊断后与病理结果进行对照分析。结... 目的通过对乳头溢液患者的纤维乳管镜(fiberoptic ductoscopy,FDS)下表现与病理诊断结果作对照分析,探讨FDS在诊断乳头溢液疾病中的临床应用价值。方法对947例病理性乳头溢液患者进行FDS检查,综合分析诊断后与病理结果进行对照分析。结果患者平均年龄43岁,685例占位性病变中良性病变637例(93%),恶性病变48例(7%)。患者年龄35~50岁、肿瘤直径较大、红色溢液的患者中恶性肿瘤比例较高。FDS诊断乳腺导管癌的敏感性为41.7%(20/48),特异性为97.0%(618/637),阴性预测值为95.7%(618/646),阳性预测值为51.3%(20/39),准确性为93.1%(638/685),诊断价值较高。结论FDS对乳头溢液患者的早期良恶性病变的诊断具有重要价值,并且有利于保留乳房皮肤和乳头、乳晕,是乳头溢液患者首选检查方法。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 纤维乳管镜 乳头溢液 病理学
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金葡菌对高糖状态下THP-1人单核细胞表达iNOS和IL-1β的影响 被引量:2
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作者 陈樱 孟东 +3 位作者 孙培 王宝利 邓为民 姚智 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第1期11-13,共3页
目的:探讨高糖状态下金葡菌对THP-1人单核细胞表达iNOS和IL-1β的影响。方法:体外培养THP-1细胞,采用2×2析因分析实验设计,以高糖、细菌2个因素,每个因素2个水平交叉分为对照组、高糖组、细菌组和高糖细菌组。各组提取细胞总RNA,... 目的:探讨高糖状态下金葡菌对THP-1人单核细胞表达iNOS和IL-1β的影响。方法:体外培养THP-1细胞,采用2×2析因分析实验设计,以高糖、细菌2个因素,每个因素2个水平交叉分为对照组、高糖组、细菌组和高糖细菌组。各组提取细胞总RNA,应用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法,检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素(IL)-1β的表达情况。结果:高糖和细菌及两者交互效应均影响THP-1人单核细胞表达iNOS和IL-1β。高糖组与对照组比较细胞表达iNOS和IL-1β均减弱(P<0.01);高糖细菌组表达iNOS和IL-1β均显著低于细菌组(P<0.01)。细菌组与对照组比较iNOS和IL-1β表达均增加;高糖细菌组与高糖组比较IL-1β表达增加,iNOS表达变化不显著。结论:高糖状态下,单核细胞受到细菌感染时表达iNOS和IL-1β功能减弱,提示糖尿病患者抗感染能力降低与高血糖有关。 展开更多
关键词 单核细胞 葡萄球菌 金黄色 感染 葡萄糖 一氧化氮合酶 白细胞介素1Β
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