利用结合态亚油酸转化生成共轭亚油酸的乳酸菌筛选

共轭亚油酸(conjugated linoleic acid, CLA)是亚油酸的几何和位置异构体,具有多种生理功能,前期研究集中于以游离亚油酸为底物转化生成CLA,为了利用自然界中大量以结合态形式存在的亚油酸,该文从22株乳酸菌中筛选出以结合态亚油酸为底物转化生成CLA的菌株,结果显示8株乳酸菌能高效利用结合态亚油酸转化生成CLA,其中转化率最高的为短双歧杆菌CCFM683,转化率高达96%。为进一步探究该菌株高效转化结合态亚油酸生成CLA的原因,利用基因序列比对在短双歧杆菌CCFM683全基因组中筛选出2个编码脂肪酶的候选基因Lipase A/B,在大肠杆菌(Escherichia coli BL21)中异源表达进行功能分析,结果表明Lipase B能特异性水解亚油酸单甘油酯,证实以亚油酸单甘油酯为底物时菌株先将亚油酸单甘油酯水解成游离亚油酸后转化生成CLA,这为进一步研究乳酸菌利用结合态亚油酸提供了参考。

Δ12/Δ15脂肪酸脱饱和酶在多不饱和脂肪酸生产中的应用研究进展

Δ12/Δ15脂肪酸脱饱和酶(FADS12/15)广泛存在于植物、动物和微生物中,是多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)合成的关键酶,在其生产中发挥着重要作用。PUFAs具有广泛的益生功能,但是由于人体内缺乏FADS12/15,无法合成亚油酸和α-亚麻酸,因此必须通过食物摄入来补充。此外,人体对其他PUFAs的需求也很高,迫切需要开发优质的PUFAs生产者。微生物是脂肪酸生产的潜在资源,通过FADS12/15基因工程改造可有效提高ω-3和ω-6 PUFAs的产量,从而为人类提供优质的生物脂质资源。作者综述了FADS12/15参与的脂肪酸合成途径及其催化机理,以及FADS12/15基因过表达体系和基因工程微生物种类,总结了FADS12/15同源或异源表达生产PUFAs的研究现状,旨在为FADS12/15基因工程研究和PUFAs的高效生产提供参考。

大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统的初步研究

在近几年来被广泛研究和应用的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中,大肠杆菌抽提物的制备、底物浓度的配比以及能量再生体系的选择是最关键的几个因素.以绿色荧光蛋白(GFP)为报导基因,以缺失核酸酶I基因的大肠杆菌A19为实验菌株,通过对大肠杆菌无细胞抽提物制备过程中菌体收集时间、细胞破碎压力、后处理条件等参数的摸索和确定、无细胞蛋白质合成系统中底物浓度配比的正交实验优化以及系统中能量再生体系的比较和选择,制备得到了GFP表达量为154μg/mL的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统,与优化前相比产量提高了29倍.

电还原耦合膜分离技术净化含铬废水研究

提出了一种电还原与膜分离技术耦合新工艺对含铬废水进行处理。通过导电微滤膜与铁板电极形成的回路,研究了在不同电压和运行时间条件下含铬废水的处理效果,并对铬的去除机理进行探究。实验结果表明,在外加电压为2 V,Cr浓度为20 mg/L,运行90 min,可以取得处理Cr效果的同时不会造成膜损坏。Cr的去除率随电压的增大而增加,2 h后去除效果均趋于稳定,最高去除率在98.5%左右。不同工况条件下,跨膜压差均维持在较低水平。本研究为处理重金属废水提供了新思路。

本科生微生物学(食品)创新教学模式摸索

本文总结了对本科生微生物学（食品）课程创新教学模式的摸索,主要包括双语教学实践、多种教学方式和教学技法研究、网络化、立体化、可编目和可检索的教学资源与素材体系的建设等,希望通过这些摸索,我们能形成一个新的微生物学（食品）课程教学模式,在现有教学模式的基础上提高学生进行微生物学和食品微生物学学习的能力,能运用食品微生物学知识和技能融会贯通地学习和解决相关的专业实际问题,使学生成为在国内和国际上都具有竞争能力的高素质创新人才。

植物乳杆菌ZS2058生物转化共轭亚油酸反应条件的优化研究

对本实验室从泡菜中筛选到的植物乳杆菌ZS2058完整细胞生物转化共轭亚油酸的反应条件进行了系统研究。在1mL磷酸钾缓冲液反应体系中,通过单因素实验和响应面分析,确定最合适的反应条件为:亚油酸底物浓度为0.8mg/mL,细胞浓度为4×1010cfu/mL,反应温度为37℃,缓冲液pH为6.7。在此反应条件下,cis9,trans11-CLA的浓度为374.24μg/mL,转化率高达46.78%,这对于实现共轭亚油酸的高效生产和研究其生理功能具有重要的现实意义和理论价值。

各类小肠疾病行胶囊内镜检查73例护理体会

目的:总结胶囊内镜检查对各类小肠疾病的检查效果及护理。方法:对73例各类小肠疾病患者采用国产OMOM胶囊内镜检查。结果:除1例外,其余72例均顺利完成检查。诊断小肠血管畸形、静脉瘤13例,小肠炎症10例,克罗恩病、小肠新生物、肠道寄生虫病各6例,小肠溃疡性病变4例,小肠多发息肉、小肠间质瘤、门脉高压性肠病、活动性出血未能发现病因各3例,异位胰腺、可疑肠易激综合征各2例,升结肠肿瘤、放射性肠炎各1例,未见异常10例。结论:胶囊式内镜检查对小肠疾病的诊断效果好,但需改进和完善胶囊内镜检查的护理措施。

超声辅助凝胶化对鲢鱼糜凝胶特性的影响

为了改善鲢鱼糜凝胶的品质,采用超声波辅助强化,定向考察了超声波输出设备内的声场分布,并通过测定鱼糜凝胶强度、持水率、色度、微观结构等指标研究了超声波条件对鲢鱼糜凝胶特性的影响。结果表明:设备内超声波声场分布与换能器的位置存在显著规律,越靠近换能器的区域,声功率强度值越大;当声功率强度达到0.49 W/cm2及以上时,超声波辅助处理可以提高鲢鱼糜的凝胶强度和持水率,且随着声功率强度的增加,鱼糜凝胶强度和持水率呈增加趋势;超声处理对鱼糜凝胶的白度无显著影响。扫描电镜分析显示,0.85 W/cm2超声处理的鱼糜样品,其致密度和均匀度较对照组更好。

植物乳杆菌ZS2058生物转化产物共轭亚油酸的分析方法的研究

研究了紫外分光光度法、GC、Ag^+-HPLC和GC-MS四种分析方法对植物乳杆菌ZS2058生物转化亚油酸(LA)产生的共轭亚油酸(CLA)检测时的异同点。结果表明,这4种分析方法在对CLA进行检测时各有特色,应用范围也有不同。紫外分光光度法检测成本最低,操作最快速,但检测结果为转化产物中各种CLA异构体的总和,而GC、Ag^+-HPLC和GC-MS能将产物中的各类CLA异构体分开,可对复杂的生物转化产物进行分析。其中,GC的最大优点在于可以检测到转化底物LA,Ag^+-HPLC可将转化产物中c9,t11-CLA和t8,c10- CLA很好的分离,而GC-MS可以将各种异构体与其它副产物明确区分开来。总之,在检测生物转化法产生的CLA时,根据不同的实验需求来选择不同的检测方法,并需将这几种方法灵活的结合起来应用。

肝脓肿临床分析183例

目的:总结肝脓肿的诊断和治疗经验,提高诊疗水平.方法:回顾性分析本院2001-01/2011-06收治的183例肝脓肿诊断和治疗的临床资料.结果:男112例,女61例,年龄最小18岁,最大83岁.左肝脓肿65例,右肝脓肿110例,混合型脓肿8例.单腔脓肿152例,2个以上脓腔31例.脓腔最大139mm×115mm,最小17mm×16mm;合并糖尿病、空腹血糖受损、糖耐量低减107例,感染性休克5例.好转治愈178例,2例转外科手术治疗,3例自动出院;B超引导下穿刺抽脓107例,穿刺次数1-7次.结论:肝脓肿与糖尿病密切相关;病原菌以肺炎克雷伯菌多见;B超引导下肝脓肿穿刺操作简便,效果好,可作为肝脓肿局部治疗的首选治疗方法.

高山被孢霉生产多不饱和脂肪酸发酵条件的研究进展

高山被孢霉能发酵生产多不饱和脂肪酸如花生四烯酸等,具有安全性好、产率高、生产易控制等优点,适宜于工业化生产。本文论述了高山被孢霉产多不饱和脂肪酸发酵条件的研究进展,着重于论述发酵过程中碳源、氮源、溶解氧及培养条件等对产物产率的影响作用研究。

耐热β-半乳糖苷酶的研究进展

耐热-半乳糖苷酶因其具有较高的作用温度和良好的热稳定性,在乳制品生产领域展现出广阔的应用前景,其理论及应用价值正逐渐成为近年来的研究热点。从耐热-半乳糖苷酶的来源、酶学性质、结构特征、催化机制及定向进化研究方面综述了耐热-半乳糖苷酶的研究进展,并对其应用及研究前景进行了展望。

蚕蛹脂肪酸和游离氨基酸组成及分布特征分析

为了考察蚕蛹的主要化学成分组成,为蚕蛹的生物利用及营养研究提供物质基础,采用气相色谱-质谱法系统分析了不同品种和不同孵育时间的蚕蛹的脂肪酸和游离氨基酸组成。结果表明,桑蚕蛹和柞蚕蛹中的脂肪酸在种类上是相同的,共9种。但柞蚕蛹中的多不饱和脂肪酸(74.7%)要高于桑蚕蛹(60.9%),而其软脂酸(C16∶0)和硬脂酸(C18∶0)的含量低于桑蚕蛹。游离氨基酸分析发现,除了在柞蚕蛹中检测到天冬酰胺二在桑蚕蛹中没测到外,二者的其它氨基酸组成在种类上相同。在含量上,柞蚕蛹中脯氨酸含量最高(37.5%),丙氨酸次之(20.5%),桑蚕蛹中丙氨酸含量最高(34.9%),都远高于其它氨基酸。孵育过程中柞蚕蛹的脂肪酸和氨基酸分析结果显示,大部分脂肪酸随孵化时间的延长总体呈下降趋势,只有部分脂肪酸在成蛾阶段有小幅上升。其氨基酸的变化要相对复杂些,在蚕由糖宝完全转化为蛹的初期所有氨基酸的含量均显著升高,孵化阶段开始后由于机体开始利用储存的氨基酸其含量开始下降,表明在蚕蛹由蛹变蛾的过程中可能存在大量的蛋白质合成。该结果表明了蚕在由虫体向蛹和蛾的变化过程中的代谢物变化情况,可能反映了孵育过程中蚕蛹体内能量利用的情况,也为确定后加工时蚕蛹的处理时间和方式提供依据,并为蚕蛹的进一步开发与利用提供物质基础和理论依据。

高山被孢霉GDP-L-岩藻糖合成途径中GDP-甘露糖-4,6-脱水酶的克隆、表达和功能鉴定

GDP-L-岩藻糖是糖复合物生物合成和糖类代谢的重要中间产物,作为岩藻糖转移酶的供体参与岩藻糖基化反应,具有重要的生理功能。高山被孢霉是重要的产油真菌,是唯一在分子水平上证明可合成GDP-L-岩藻糖的真菌。GDP-L-岩藻糖从头合成途径中的GDP-甘露糖-4,6-脱水酶(GMD)能催化GDP-D-甘露糖合成GDP-4-酮基-6-脱氧-D-甘露糖。对高山被孢霉中的GMD基因进行克隆、表达和功能鉴定,可进一步阐明GDP-L-岩藻糖体内代谢的分子生物机制。首先对GMD序列进行分析,并以p ET28a+质粒为骨架构建了GMD的表达载体,然后转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。进一步利用Ni金属螯合层析纯化目的蛋白,采用液相色谱-质谱法分析酶反应产物,表明纯化蛋白具有GMD活性。最后对高山被孢霉进行发酵培养,发现GDP-L-岩藻糖产量在氮源耗尽后较高,可达0.10 mg/g。同时GMD的转录水平在氮源耗尽后发生了明显的上调,表明GMD在氮源耗尽后对高山被孢霉体内GDP-L-岩藻糖的合成具有重要作用。这为进一步利用高山被孢霉发酵生产GDP-L-岩藻糖和酶法转化生产GDP-L-岩藻糖奠定了理论基础。

抗黄曲霉毒素B_1单链抗体的表达载体的比较

目的:比较4种不同的pET载体在表达抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的单链抗体(scFv)克隆的特点,确定用以表达scFv-H4的合适载体。方法:将目的基因H4分别克隆到载体pET20b、pET22b、pET28a和pET32a上,分别转入大肠杆菌BL21(DE3)或Origami(DE3)中,比较诱导过程中细胞的生长状况和诱导结束后细胞破碎液中scFv-H4的生物活性以及细胞各部分包涵体。结果:pET20b和pET22b能表达具有生物活性的scFv-H4,这些具有生物活性的蛋白主要存在于周质中;pET28a和pET32a不能表达有生物活性的scFv-H4,而pET32a仅能在细胞质中产生大量的包涵体。结论:pET22b可能是表达AFB1的单链抗体较优的表达载体。

生物转化共轭亚麻酸乳酸菌的快速筛选

共轭亚麻酸是一种具有共轭双键的十八碳三烯酸,具有抗炎、抗癌等多种生理活性,是功能性脂质研究的热点之一。运用共轭双键的光谱吸收特性,建立了快速筛选高产共轭亚麻酸乳酸菌的方法。利用GC-MS对快速筛选法的结果进行了进一步验证,两者结果完全一致,表明快速筛选法可有效、准确地运用于高通量筛选高产共轭亚麻酸的菌株。

耐热β-半乳糖酶在乳酸克鲁维酵母及毕赤酵母中的表达研究

将嗜热脂肪芽孢杆菌来源的耐热β-半乳糖酶基因bgaB分别插入穿梭质粒pKLAC1、pPIC9k的α-因子信号肽下游,构建bgaB基因的乳酸克鲁维酵母真核表达载体pKLAC1-bgaB及毕赤酵母真核表达载体pPIC9k-bgaB。载体经酶切线性化后采用电击方法分别转化到乳酸克鲁维酵母K.lactis GG799及毕赤酵母GS115中,并通过同源区各自整合到宿主基因组中。重组酶进行镍柱纯化、Western Blot杂交鉴定及酶学性质分析。结果表明,耐热β-半乳糖苷酶在酵母表达系统中可以实现外源表达且热稳定性保持良好,但不能被酵母系统有效分泌。

鼠李糖乳杆菌YHOC137及其发酵乳的体外抗致突变作用

乳酸菌及其代谢产物具有优良的生理功能。本文研究了一株产胞外多糖的鼠李糖乳杆菌L.rhamnosusYHOC137对诱变剂的吸附能力,利用艾姆斯实验模型考察了L.rhamnosusYHOC137发酵乳、发酵乳丙酮提取物和产物胞外多糖的体外抗致突变作用。诱变剂吸附实验表明,YHOC137活细胞对2-硝基芴(2-NF)和4-硝基喹啉-N-氧化物(4NQNO)的吸附率分别为38%和55%,YHOC137死细胞对2-NF和4NQNO的吸附分别为25%和50%。YHOC137发酵牛乳能够显著抑制由于2-NF和4NQNO导致的鼠伤寒沙门氏菌的回复突变(P<0.05),抑制率在38.5%～54.3%之间,L.rhamnosus YHOC137发酵牛乳丙酮提取物对回复突变的抑制率在8.0%～35.3%之间;L.rhamnosus YHOC137胞外多糖对2-NF和4NQNO导致的回复突变的抑制率分别为12.8%和46.0%。

高山被孢霉发酵生产多不饱和脂肪酸的初步研究

高山被孢霉具有很强的脂肪合成能力,并可积累多种多不饱和脂肪酸,为进一步提高高山被孢霉多不饱和脂肪酸产量,对碳源、氮源等对高山被孢霉菌体生长和多不饱和脂肪酸(PUFA)生产的影响进行分析。研究结果表明:甘油可以作为葡萄糖的替代物用于高山被孢霉工业化发酵生产多不饱和脂肪酸;当脱脂豆粉与硝酸钾的比例为2∶1时,此时菌体形态最利于脂肪酸生产,脂肪酸和花生四烯酸的产量分别为11.20g/L和5.89g/L,花生四烯酸的产量提高了4.0倍。

无细胞蛋白质合成系统的研究进展

无细胞蛋白质合成系统是一种以外源mRNA或DNA为模板 ,通过在细胞抽提物的酶系中补充底物和能源物质来合成蛋白质的体外系统 .与传统的体内重组表达系统相比 ,体外无细胞合成系统具有多种优点 ,如可表达对细胞有毒害作用或含有非天然氨基酸 (如D 氨基酸 )的特殊蛋白质 ,能够直接以PCR产物作为模板同时平行合成多种蛋白质 ,开展高通量药物筛选和蛋白质组学的研究等 .本文综述了无细胞蛋白质合成系统的发展历史、系统中合成蛋白质所需的能量供应、遗传模板的稳定性和微型无细胞生物反应器等多方面的研究 ,并探讨了无细胞蛋白质合成系统中存在的难点。