兽用中化药生产企业GMP监督检查情况分析与思考

对近年来中国兽医药品监察所组织实施的兽用中化药企业GMP监督检查发现的缺陷项目进行统计和分析,研究企业在生产质量管理中存在的主要问题并提出建议,以期帮助兽药生产企业提高自身GMP执行水平,确保产品质量,并为兽药监管部门提供参考。

关于兽药生产企业执行GMP过程中质量管理薄弱环节的几点思考

本文从质量管理理念的发展与新版兽药GMP要求出发,剖析了目前兽药生产企业在质量管理理念、质量管理和质量控制力量及水平、GMP管理文件的执行、风险意识等方面的问题,提出了兽药生产企业应从强化质量管理理念、重视发挥QA和QC的作用、针对新版GMP要点和难点切实开展工作和真正建立风险管理机制方面切实采取措施,希望能借此帮助兽药生产企业完善质量管理,保证兽药GMP要求落实到位,推动兽药行业的高质量发展。

术前穿刺活检及术中冰冻病理技术用于乳腺导管原位癌伴微浸润诊断的价值

目的:探讨术前穿刺活检及术中冰冻病理技术用于乳腺导管原位癌伴微浸润的诊断价值,并分析疾病特征。方法:选取2021年2月—2022年2月龙岩市第二医院62例乳腺导管原位癌患者,所有患者均行术前穿刺活检和术中冰冻病理检查,以术后病理结果为诊断金标准,对比两种方式诊断效能,并比较两种疾病临床特点和肿瘤浸润淋巴细胞分布状态。结果:术后病理学研究结果显示,62例患者中,38例为单纯乳腺导管原位癌患者,24例为乳腺导管原位癌伴微浸润患者;术前穿刺活检诊断敏感性为91.67%、特异性为84.21%、准确性为87.10%、阳性预测值为78.57%、阴性预测值为94.12%,高于术中冰冻病理的58.33%、55.26%、56.45%、45.16%和54.74%,差异有统计学意义(χ^(2)=7.111、7.544、14.370、6.904、7.494,P<0.05);乳腺导管原位癌伴微浸润病灶直径为(3.21±0.54)cm,可触及肿块概率为95.83%,增殖细胞抗原(ki67)高表达概率为66.67%,高分化概率为70.83%,高于乳腺导管原位癌;孕激素受体阳性率为17.86%,雌激素受体阳性率为29.17%,低于乳腺导管原位癌,差异有统计学意义(t=4.948,χ^(2)=4.439、4.876,P<0.05)。结论:与术中冰冻病理比较,术前穿刺活检乳腺导管原位癌伴微浸润准确性高;乳腺导管原位癌伴浸润和乳腺导管原位癌临床特征和肿瘤浸润淋巴细胞分布状态各不相同,可为疾病鉴别诊断提供依据。

线粒体调控肿瘤免疫的研究进展

肿瘤细胞通过改变自身代谢以适应能量和生物合成的需求。线粒体作为肿瘤细胞代谢重编程的关键细胞器,其功能异常是癌症发生和进展的主要驱动因素。线粒体动力学和能量代谢途径的改变对免疫细胞活化、增殖和分化至关重要,肿瘤微环境通过诱导免疫细胞线粒体代谢重编程和线粒体动力学变化,影响肿瘤浸润免疫细胞的活化和功能,进而促进肿瘤免疫抑制微环境形成;线粒体应激介导的线粒体DNA泄露可通过激活多条天然免疫信号通路,如cGAS-STING、TLR9和NLRP3,在宿主抗肿瘤免疫响应和肿瘤免疫抑制微环境的塑造中扮演复杂的调控角色,线粒体DNA介导的免疫原性细胞死亡是目前极具潜力的抗肿瘤免疫治疗手段;线粒体活性氧作为肿瘤发生的重要媒介,通过改变肿瘤微环境中免疫细胞组成,推动肿瘤免疫抑制微环境形成。本文围绕线粒体生物学与抗肿瘤免疫应答之间的关系,从多个角度探讨线粒体在肿瘤-宿主互作中的核心作用,以期为开发靶向线粒体的抗肿瘤免疫治疗策略提供参考。

乳块消方对实验性乳腺增生大鼠的影响

目的:研究乳块消方(RKX)对实验性乳腺增生大鼠的影响,并探讨其作用机制。方法:60只大鼠随机分为乳块消方5.8,11.6,23.2 g.kg-13个剂量组,三苯氧胺组,模型组和正常组。采用肌注苯甲酸雌二醇联合黄体酮的方法复制乳腺增生大鼠模型,造模同时给予药物治疗。测定乳房直径和乳头高度、脏器系数、血清性激素水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及血液流变性,镜下观察各组大鼠乳腺病理形态学变化。结果:乳块消方能明显减小大鼠乳房直径、乳头高度和乳腺小叶数、小叶内腺泡数,此外,明显降低血清雌二醇(E2)、催乳素(PRL)水平,提高孕酮(P)水平,增加SOD活性,抑制胸腺系数减少。结论:乳块消方对大鼠乳腺增生病有良好的治疗作用。

青藏高原黑果枸杞花青素稳定性评价

采用控制变量法分别研究了环境因素(pH、温度、光照)和添加物(氧化剂、还原剂、食用酸、糖、防腐剂和金属离子)对青藏高原黑果枸杞花青素稳定性的影响。用分光光度计法测定花青素含量的变化。结果表明,酸性(pH<3)、低温(T<60℃)、避光条件有利于花青素溶液稳定保存。氧化剂(H_2O_2)和还原剂(Na_2SO_3)对花青素稳定性有不良影响;食用酸(柠檬酸、抗坏血酸、草酸、酒石酸)、葡萄糖、蔗糖可增加花青素稳定性;防腐剂苯甲酸对花青素稳定性无显著影响;金属离子Na^+、K^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)、Al^(3+)对花青素稳定性无不良影响,而Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)对花青素稳定性有不良影响。

盐生植物灰绿藜对NaCl和NaHCO3胁迫的生理响应

【目的】应对日益严重的土壤盐渍化问题,开发新的具有生态效益和经济价值的盐生植物。【方法】以具经济价值的新疆盐生植物灰绿藜为材料,采用分光光度法测定了不同浓度NaCl和NaHCO3胁迫后植株的日相对生长率（RGR）、丙二醛（MDA）、多种渗调质、抗氧化剂含量变化及几种重要的抗氧化酶活力变化,探讨了其对盐碱胁迫生理响应机制的差异性。【结果】（1）在0-300 mmol/L,NaCl对植株生长的抑制作用较小,300mmol/L NaHCO3对植株生长产生了一定程度的抑制;（2）150和300 mmol/L NaCl和NaHCO3处理后植株叶片丙二醛含量均显著增加;叶片超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）活力均无显著变化;抗氧化剂ASA显著升高。（3）随盐碱处理浓度增加,叶片脯氨酸（Pro）、甜菜碱（BADH）、可溶性糖含量显著升高,其中脯氨酸在较高浓度NaCl处理下升高幅度显著高于相同浓度的NaHCO3。【结论】植株体内抗氧化剂和渗调质ASA和脯氨酸Pro积累的差异可能是造成灰绿藜对高浓度盐碱胁迫耐受差异的原因之一。

乳铁蛋白的抑菌作用及其机制

叙述了乳铁蛋白和乳铁蛋白多肽的抗菌机制。包括:乳铁蛋白的结构特性、抗病毒、抗菌功能、抗菌机制、影响抑菌活性的因素等,并对其应用前景作了展望。

电针重置超前性光暗周期转移小鼠的节律特征及其对SCN内相关钟基因表达的影响

为了探索电针重置超前性光暗周期转移模型小鼠的时相特征及视交叉上核(Suprachiasmatic nucleus,SCN)多种节律相关基因及转录因子的表达,将符合筛选标准的44只C57BL/6J小鼠完全随机分为空白组(n=10)、模型组(n=12)、捆绑组(n=12)和电针组(n=10)4组。其中,模型组、捆绑组和电针组运用超前性光暗周期转移法进行造模,连续10 d。造模结束后,模型组小鼠于ZT18时相点处死取材;电针组小鼠恢复正常光暗交替(Light and Dark,LD)状态,并于ZT16时相点选取"肝俞"和"至阳"穴进行电针治疗,连续3次,每天1次;捆绑组采用与电针组相同的方法进行平行捆绑。捆绑及治疗结束后,处死动物并剥取SCN,采用PCR Array检测各组动物SCN内节律相关基因及部分节律相关转录因子相对表达量。实验结果显示:(1)电针重置昼夜节律结果:造模后,模型组、捆绑组及电针组与造模前比较峰相位、起始活动时间均显著超前,昼夜活动节律周期缩短(P<0.05);再同步期,电针组峰相位、起始活动时间后移,与造模期及空白组比较具有统计学差异(P<0.05);再同步第1天及第2天电针组小鼠的昼夜活动节律周期与空白组和造模前比较有统计学差异(P<0.05),再同步第3天与空白组和造模前比较无统计学差异(P>0.05)。(2)SCN节律相关基因及转录因子变化:与空白组比较,模型组小鼠的SCN节律相关基因表达上调8个(Aanat、Crx、Epo、Nkx2-5、Pax4、Prf1、Rora、Stat5a),下调4个(Egr1、Per1、Per3、Prokr2);与模型组比较,捆绑组节律相关基因上调3个(Esrra、Mat2a、Per3),下调11个(Cartpt、Crx、Epo、Kcnma1、Mtnr1b、Nkx2-5、Nms、Pax4、Prf1、Prkacb、Prkca);与模型组比较,电针组节律相关基因上调6个(Egr1、Esrra、Mat2a、Per1、Per3、Prokr2),下调21个(Aanat、Arntl、Cartpt、Crx、Csnk1e、Epo、Kcnma1、Mtnr1b、Myod1、Nkx2-5、Nms、Opn3、Pax4、Prf1、Prkacb、Prkca、Prkcb、Prokr2、Rora、Rorb、Slc9a3、Tgfb1)。以上实验结果提示电针可缩短超前性光暗周期转移小鼠的昼夜节律重置时间,加速紊乱昼夜节律的恢复,这可能是通过对SCN内Per1、Egr1、Aanat、Prokr2等节律相关基因的调控作用实现的。

电针调控CD73及腺苷信号对脓毒症急性肾损伤的影响

目的:观察电针对小鼠脓毒症急性肾损伤的影响,明确电针改善脓毒症急性肾损伤与调控CD73及下游腺苷信号之间的联系。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为空白组(Control)、模型组(LPS)、电针组(EA)、假电针组(shamEA);采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)腹腔注射建立脓毒症急性肾损伤小鼠模型;在造模前及造模后12 h,给予小鼠“足三里”穴10 Hz、3.0 mA、30 min的电针干预,假电针干预仍连接电针仪但不通电;采用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测肾组织肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor Alpha,TNF-α)水平变化;采用免疫印记法(Western Blot,WB)检测肾组织IL-6、CD73、A_(2A)R、HIF-1α蛋白表达的变化。结果:与Control组比较,LPS组小鼠肾组织中TNF-α水平、IL-6蛋白表达升高(P<0.001);与LPS组比较,EA组小鼠肾组织中TNF-α水平、IL-6蛋白表达降低(P<0.001)。与Control组比较,LPS组小鼠肾组织中CD73、A_(2A)R蛋白表达减少(P<0.001)、HIF-1α蛋白表达上升(P<0.001);与LPS组比较,EA组小鼠肾组织中CD73、A_(2A)R蛋白表达增强(P<0.001)、HIF-1α蛋白表达下降(P<0.001)。结论:电针可降低脓毒症急性肾损伤小鼠肾组织中IL-6蛋白表达,降低TNF-α水平,具有抗炎效应;电针减轻脓毒症急性肾损伤可能与其调控CD73及下游腺苷信号相关。

西南战区部队官兵颈椎病患病率及危险因素调查分析

目的 了解西南战区部队官兵颈椎病的患病率及危险因素，为制订颈椎病的早期防治策略提供依据。方法采用整群抽样的方法．在2012年4月～2013年7月对西南战区10个连队1134人进行问卷调查，由调查人员逐个询问症状并对调查对象进行查体，对疑似颈椎病患者再进行影像学检查。结果筛查出颈椎病患者121例，患病率为10．67％。其中男91例，女30例；年龄20—44（33．31±5．60）岁；病程3．25～45.31（20．35±6．40）个月；高中及以下34例，大学87例；有长时间倚靠史者45例；每日埋头〉1h者19例：有颈部外伤史者39例。结论部队官兵颈椎病发病与长时间倚靠沙发（平均≥2h／d）、连续埋头〉1h（至少3d／w）、颈部外伤、学历等密切相关。

藜CaMAPKK2的表达分析及盐胁迫信号通路互作组分的筛选

【目的】通过对抗逆植物藜的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径中MAPKK的胁迫表达模式分析及信号转导途径互作组分的筛选,探索植物藜响应外界胁迫信号诱发逆境耐受的机制。【方法】以藜叶片总RNA为模板,利用定量PCR方法对NaCl、H2O2和ABA胁迫下藜MAPKK表达规律进行了分析。利用RT-PCR结合RACE技术获得了藜MAPKK的全长cDNA序列。利用酵母双杂交技术对MAPKK盐胁迫信号通路互作组分进行了分析。【结果】获得一个藜MAPKK的全长cDNA序列,命名为CaMAPKK2,其开放阅读框为1 089 bp,编码一个由362个氨基酸组成的丝裂原活化蛋白激酶。定量PCR显示CaMAPKK2受盐胁迫诱导明显上调表达,同时受外源H2O2和ABA调控。H2O2合成抑制剂DPI与ABA合成抑制剂Na2WO4显著抑制了300 mmol.L-1NaCl处理下CaMAPKK2的表达。以全长CaMAPKK2为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术筛选到5个可能与CaMAPKK2相互作用的蛋白。测序结果显示,其中1个序列可通读,该cDNA序列长794 bp,与欧洲赤杨(Alnus glutinosa)和拟南芥的噻唑合成酶(thiazole biosyntheticenzyme)基因AgTHI1和AtTHI1核酸序列相似度达79%和78%,其它4个序列没有连续的读码框。【结论】CaMAPKK2受NaCl和H2O2诱导上调表达,暗示盐胁迫可能通过诱导H2O2和ABA的积累从而导致CaMAPKK2表达增加。要进一步筛选CaMAPKK2互作组分需获得更多阳性克隆并开展相关功能验证试验。

结合时-频纹理特征的随机森林分类器应用于鸟声识别

研究一个基于时频纹理特征和随机森林分类器的抗噪鸟声识别系统。首先,针对实际环境中,各种不可预料的噪音会使得系统识别性能严重下降的问题,使用一种基于噪声估计的音频增强算法对带噪鸟声信号进行前端处理。然后将增强后的信号功率谱以时频图形式输出,并根据时频图中所包含的纹理信息,利用基于灰度共生矩阵的纹理分析法进行纹理特征提取。最后使用基于决策树的组合分类器—随机森林进行分类和识别。实验结果表明,该方法不仅能对鸟类声音进行快速准确地识别而且具有良好的抗噪性。

新月体比例在Ⅳ型狼疮性肾炎患者中的临床意义

目的:探讨新月体比例在Ⅳ型狼疮性肾炎(LN)患者中的临床意义。方法:回顾性分析南京军区南京总医院肾脏科2000年1月至2010年12月经肾活检证实新月体比例≥10%的Ⅳ型LN患者520例,根据光镜下肾小球中新月体形成的百分比将患者分为三组,组1:新月体比例≥10%且<25%(n=240);组2:新月体比例≥25%且<50%(n=160);组3:新月体比例≥50%(n=120),以100例无新月体形成的Ⅳ型LN患者为对照组比较四组间临床、实验室检查和病理特点。结果:520例患者中男性70例(13.4%),女性450例(86.6%),其平均年龄31.6±11.3岁,平均发病年龄28.8±11.1岁,SLE病程34.5±42.9月,LN病程20.7±34.1月。与对照组相比,新月体组患者病程更短,临床主要表现急进性肾炎综合征(21.8%)、肾病综合征(23.4%)、发作性肉眼血尿(26.7%)和慢性肾衰(7.9%),蛋白尿,镜下血尿和小管损伤指标更重,低蛋白血症,高胆固醇血症更常见,补体水平、ANA、ds-DNA滴度更低,狼疮抗凝物(LA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)阳性率更高。新月体组患者,免疫荧光可见肾小球免疫复合物沉积较弱。光镜下球性废弃及袢坏死比例高,白金耳和毛细血管袢微血栓较少见,肾小管间质(急性/慢性病变)和血管病变重,间质广泛炎细胞浸润。肾外表现如贫血和高血压发生率高,而血小板减低、白细胞减少和肾外器官受累发生率低。新月体比例与浆膜炎发生率、高血压比例、贫血、肉眼血尿发生率、ANCA阳性率、袢坏死比例、尿素氮、肌酐水平、补体C3及C4水平、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、视黄醇结合蛋白、活动指数(AI)和慢性指数(CI)评分成正相关,与年龄、LN病程、SLE病程和白金耳比例成负相关。结论:Ⅳ型LN合并新月体形成的患者多起病急、病程短,肾脏表现较重,肾外器官受累较轻,免疫学活动性较低,病理上肾小球毛细血管袢坏死、肾小管萎缩、间质炎细胞浸润、纤维化突出,肾小球免疫复合物沉积较少。

论兽医生物安全实验室管理

兽医生物安全实验室是指对病原微生物进行试验操作时所产生的生物危害具有物理防护能力的兽医实验室。多年来,随着国家动物疫病防控规划的实施,省、市、县各级动物疫控机构、兽医相关企业的生物安全实验室迅速发展起来,如何安全运行和有效管理兽医生物安全实验室,是实验室管理者、使用者以及有关主管部门需要重视的问题。1我国兽医生物安全实验室布局现状我国生物安全实验室建设起步相对较晚,法规和标准制定也较晚。

贵阳市原发性肝癌危险因素的病例对照研究

目的:探讨贵阳市原发性肝癌主要危险因素。方法:采用成组病例对照研究,对3家医院的120例肝细胞癌患者和199例对照进行一般情况、饮酒史、吸烟史、既往疾病史、家族史、经济状况及其他生活习惯等调查;应用非条件logistic回归分析,通过比值比(OR)和95%可信区间(95%CI)进行评估,探讨与贵阳市原发性肝癌发生相关的主要危险因素。结果:5年前经济状况、肝癌家族史、吸烟、慢性肝病史、乙型肝炎病毒感染、饮酒在病例组和对照组间的差异有显著性,其OR值分别为0.324、5.185、2.649、2.554、10.961、3.345,95%CI分别为0.159～0.661、2.284～11.772、1.162～6.040、1.205～5.415、5.240～22.925、1.696～6.594。结论:肝癌家族史、吸烟、慢性肝病史、乙型肝炎病毒感染、饮酒可能是贵阳市肝癌发生的危险因素,5年前经济状况良好可能是其保护因素。

高效液相色谱法分析龙眼多糖的单糖组成

以新鲜龙眼果肉为原料,采用热水浸提法提取多糖,其提取工艺条件为:料液比(W∕V)1∶3,提取温度90℃,提取时间2 h.2次重复实验的龙眼多糖得率为0.52%,总糖含量为20.23%,还原糖含量3.45%.多糖经硫酸水解后,通过PMP柱前衍生化处理后,以V(水)∶V(甲醇)=50∶50作流动相,1.0 m L/min的流速,检测波长254 nm的色谱条件,利用高效液相色谱法进行分析.结果表明,龙眼多糖中存在L-鼠李糖(L-Rha)、D-葡萄糖(D-Glc)、D-半乳糖(D-Gal)3种单糖.

应用速度向量成像技术对川崎病儿童左心收缩功能的评价

目的探讨应用速度向量成像技术对川崎病儿童左心长轴方向收缩功能的价值。方法对24例急性期川崎病患儿(冠脉扩张8例)、27例恢复期川崎病患儿(冠脉扩张9例)与20例正常儿童进行超声心动图检查。于胸骨旁左室长轴切面测量各腔室径线;通过M型超声获得左室射血分数(EF);采集心尖四腔三个完整心动周期的动态图像,存入光盘中。应用VVI技术脱机分析室壁基底部、中间部、心尖段的收缩期峰值速度(Vmax)、应变(Smax)、应变率(SR-max)。结果急性期组收缩期峰值速度(Vmax)、收缩期峰值应变率(SRmax)低于正常组,在所有基底部和部分中间及心尖节段有统计学差异(P<0.05);恢复期组与正常组比较部分节段差异有统计学意义;恢复期组儿童同一室壁收缩期峰值应变率(SRmax)失去一致性。结论急性期和恢复期川崎病儿童均有不同程度的左室长轴方向收缩功能受损。

我国兽药使用规定及规范管理分析

兽药在防治动物疫病,保障畜牧业健康发展的同时,也影响着动物源性食品质量安全。本文从《农产品质量安全法》《畜牧法》《兽药管理条例》到农业部部门规章和公告,梳理了当前我国兽药使用的有关规定,促进养殖者合理规范使用兽药。分析了当前存在的养殖面广量大、监管力量薄弱、饲料违规加药、执业兽医数量不足等问题,提出了健全法律规范、理顺兽药使用管理机制、发展兽医社会化服务、加强宣传教育、推广健康养殖模式等建议。