目的研究陶瓷羟基磷灰石(ceramic hydroxyapatite,CHT)I型和II型对2种单克隆抗体(monoclonal Ab,m Ab)1和2聚集体的去除工艺。方法层析仪为AKTA AVANT 150,层析柱为Tricon 10/50,先进行CHT I、CHT II 2种填料的动态载样量研究,然后选取...目的研究陶瓷羟基磷灰石(ceramic hydroxyapatite,CHT)I型和II型对2种单克隆抗体(monoclonal Ab,m Ab)1和2聚集体的去除工艺。方法层析仪为AKTA AVANT 150,层析柱为Tricon 10/50,先进行CHT I、CHT II 2种填料的动态载样量研究,然后选取合适的载量进行分离纯化研究。上样条件为5 mmol/L磷酸二氢钠(Na H2PO4),p H 6.5,上样,然后用10 mmol/L Na H2PO4,p H6.5和10 mmol/L Na H2PO4,2 mol/L Na Cl,p H 6.5梯度洗脱来分离单体和聚集体。用分子尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)测定上样蛋白溶液和洗脱峰单体及聚集体的含量。使用20 cm高的XK 16/40的层析柱进行工艺放大研究。结果 m Ab 1在CHT I型的载量为40 mg/m L,去除后单体含量为98.6%,工艺收率为92.5%;m Ab 2在CHT I型的载量为45 mg/m L,去除后单体含量为98.8%,工艺收率为91.5%;m Ab 1在CHT II型载量为16 mg/m L,去除后单体含量为99.8%,工艺收率为91.8%;m Ab 2在CHT II型载量为20 mg/m L,去除后单体含量为99.9%,工艺回收率为92.2%。结论 2种类型的陶瓷羟基磷灰石填料在聚集体含量高于10%的情况下,都有很好的去除能力,去除结果符合法规要求。该方法操作简单,能够很顺利的进行工艺放大,满足中试和生产需求。展开更多
文摘目的研究陶瓷羟基磷灰石(ceramic hydroxyapatite,CHT)I型和II型对2种单克隆抗体(monoclonal Ab,m Ab)1和2聚集体的去除工艺。方法层析仪为AKTA AVANT 150,层析柱为Tricon 10/50,先进行CHT I、CHT II 2种填料的动态载样量研究,然后选取合适的载量进行分离纯化研究。上样条件为5 mmol/L磷酸二氢钠(Na H2PO4),p H 6.5,上样,然后用10 mmol/L Na H2PO4,p H6.5和10 mmol/L Na H2PO4,2 mol/L Na Cl,p H 6.5梯度洗脱来分离单体和聚集体。用分子尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)测定上样蛋白溶液和洗脱峰单体及聚集体的含量。使用20 cm高的XK 16/40的层析柱进行工艺放大研究。结果 m Ab 1在CHT I型的载量为40 mg/m L,去除后单体含量为98.6%,工艺收率为92.5%;m Ab 2在CHT I型的载量为45 mg/m L,去除后单体含量为98.8%,工艺收率为91.5%;m Ab 1在CHT II型载量为16 mg/m L,去除后单体含量为99.8%,工艺收率为91.8%;m Ab 2在CHT II型载量为20 mg/m L,去除后单体含量为99.9%,工艺回收率为92.2%。结论 2种类型的陶瓷羟基磷灰石填料在聚集体含量高于10%的情况下,都有很好的去除能力,去除结果符合法规要求。该方法操作简单,能够很顺利的进行工艺放大,满足中试和生产需求。
文摘目的:探讨成纤维细胞生长因子受体在头颈鳞癌细胞中的表达及其定位。方法:提取10种头颈鳞癌细胞系蛋白,采用Western印迹技术检测FGFR家族成员的表达;利用免疫荧光技术检测FGFR各型在SCC25和HN6细胞中的表达位置。应用Image J软件测量免疫印迹条带灰度值,Graph Pad Prism 5.01对灰度值结果进行统计学分析。结果:在10株头颈鳞癌细胞细中,6株表达FGFR1。FGFR2、3、4均在10株头颈鳞癌细胞细中表达。FGFR1、2、4表达于细胞核及细胞质,FGFR3仅表达于细胞质。结论:FGFR在头颈鳞癌细胞细中共表达,可能与头颈鳞癌的发生、发展有关;FGFR家族不同亚型在头颈鳞癌细胞的表达定位存在差异。
