150mg高维持量氯吡格雷提高急性冠脉综合征患者药物洗脱支架植入术后的长期疗效

目的评价氯吡格雷600mg负荷量后予150mg维持量治疗对植入药物洗脱支架(drug eluting stents,DES)的急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者的长期疗效及安全性。方法2004年12月到2005年12月前瞻性入选608名成功行DES植入术的ACS患者。所有患者于术前顿服600mg负荷量氯吡格雷,术后在服用阿司匹林基础上随机接受每日75mg(n=307)或150mg(n=301)维持量的氯吡格雷治疗30d,30d后所有患者接受每日75mg的氯吡格雷治疗直至术后1年。主要终点包括全因死亡、致死或非致死性心肌梗死(myocardial infarction,MI)以及靶血管血运重建(target vessel revascularization,TVR)。次级终点包括严重及轻微出血事件。结果平均随访时间为18个月。150mg组MI及再次血运重建发生率均显著低于75mg组(P<0.05)。包括死亡、MI及TVR的主要终点发生率三联组亦显著低于两联组(13%比20.2%,绝对风险降低7.2%,P=0.017)。两组全因病死率无明显差异(2.7%比4.2%,P=0.375)。两组间严重出血(2.3%比1.6%,P=0.574)、轻微出血(9.0%比6.8%,P=0.368)和输血(2.0%比1.3%,P=0.542)的风险无差异。结论在600mg负荷量治疗后再给予150mg高维持量氯吡格雷可降低ACS行DES植入术的患者术后长期发生不良事件的风险,并且不增加出血事件的发生。

急性ST段抬高心肌梗死患者院内死亡发生率的相关因素分析：冠心病介入治疗数据库资料

目的探讨急性ST段抬高心肌梗死（STEMI）患者发病到血管开通时间与院内死亡发生率的关系。方法分析军队心血管疾病介入诊疗直报系统数据,其中包括冠心病介入治疗资料。研究终点为院内死亡发生率,通过患者年龄及心梗部位进行分层,探讨这两个因素对患者院内死亡发生率的影响。结果全军92家医院行急诊介入治疗的8878例STEMI患者入选本研究。根据从发病到罪犯血管开通的时间将患者分为3组：开通时间≤3h（n=2999）、开通时间3~6h（n=2369）及开通时间〉6h（n=3510）。3组患者的院内死亡发生率分别为2.5%、2.9%和3.0%（P=0.405）。其中非前壁心肌梗死且年龄〈50岁的患者,若发病3h内接受介入治疗,院内死亡发生率为0.5%;若患者为前壁心肌梗死且年龄〉70岁,超过6h才接受介入治疗,则院内死亡发生率可高达7.4%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.001）。结论 STEMI患者院内死亡发生率与罪犯血管开通时间相关,老年及前壁心梗患者是院内死亡的高危人群。

国产生物降解涂层雷帕霉素洗脱支架置入术治疗冠心病一年结果：国内首项单中心注册研究

目的:评价国产生物降解涂层雷帕霉素洗脱(EXCEL)支架置入术后1年的临床疗效和安全性。方法:前瞻性连续入选100例均单一置入EXCEL支架的住院冠心病患者。术后联合应用抗血小板药氯吡格雷和阿司匹林(ASA)6个月,其后单用阿司匹林。主要研究终点为术后1年主要不良心脏事件(MACE),次要终点为术后30天及6个月主要不良心脏事件及平均8个月冠状动脉(冠脉)造影判定的支架内再狭窄(ISR)发生率。结果:患者全部成功置入EXCEL支架。在153处靶病变中127处为B2/C型复杂病变(83.0%),平均靶病变长度(29.42±15.90)mm,直径(3.17±0.53)mm。共置入211枚EXCEL支架,人均(2.02±1.53)枚,平均支架长度和直径分别为(35.34±17.35)mm和(3.23±0.46)mm。患者住院期及术后30天无主要不良心脏事件发生。1例分别于术后5个月,3例分别于术后6～12个月因支架内再狭窄行再次PCI,主要不良心脏事件发生率4.0%,无死亡、心肌梗死和血栓事件发生。75例患者(112处靶病变)行造影复查,定量冠脉造影测量(QCA)支架内病变再狭窄率3.6%(4/112),支架段病变再狭窄率5.4%(6/112)。结论:这项对冠心病患者应用国产生物降解涂层EXCEL支架的国内首次注册研究表明,与其它药物洗脱支架的关键性研究文献相比。EXCEL支架术后1年支架内再狭窄和主要不良心脏事件发生率相似,患者术后接受6个月氯吡格雷抗血小板治疗是安全的。这一结论有待大规模、多中心的随机对照试验进一步证实。

血清反应因子参与RhoA诱导的人血管内皮细胞肌动蛋白骨架重构

为进一步阐明RhoA调控人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)肌动蛋白骨架重构的分子机制,用逆转录病毒感染并筛选出稳定表达持续活化型RhoA(Q63LRhoA)和主导抑制型RhoA(T19NRhoA)的HUVECs。应用免疫组化和Westernblot方法分析去血清前后HUVECs血清反应因子(serumresponsefactor,SRF)的表达及定位,Rhodamine-Phalloidine染色观察F-actin动态变化。结果显示,Q63LRhoA组细胞核中SRF表达增加,F-actin重排形成大量应力纤维;T19NRhoA组中SRF表达较弱,F-actin无明显改变,无应力纤维形成。去血清后,正常HUVECs(对照组)和感染细胞中SRF的表达均显著增加,但其亚细胞定位明显不同。对照组去血清培养3d,SRF主要定位在细胞核,去血清培养5d,SRF出核转位入细胞浆。Q63LRhoA组SRF发生核滞留,不随去血清培养时间延长发生出核转位现象。T19NRhoA组SRF的表达主要定位于细胞核周。对照组去血清培养3d,F-actin表达增加,同时形成大量应力纤维,去血清培养5d,细胞F-actin表达下调,应力纤维解聚。Q63LRhoA组F-actin重构持续发生并形成大量应力纤维,但不随去血清培养时间延长发生明显解聚。而T19NRhoA组F-actin表达不随去血清时间延长而增加。上述结果提示,RhoA介导HUVECsF-actin的重构与SRF的核转位现象密切相关。

E1A激活基因阻遏子促进人血管平滑肌细胞分化和迁移

为探讨E1A激活基因阻遏子(cellularrepressorofE1A-stimulatedgenes,CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞株HITASY分化和迁移中的调控作用,构建了重组逆转录病毒载体pLNCX2(+)/CREG和pLXSN(-)/CREG.以带绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)的空载体pLNCX(+)/GFP和正常HITASY为对照,用磷酸钙共沉淀法将重组逆转录病毒载体转染293细胞,包装出完整的逆转录病毒后,感染HITASY.经G418筛选,获得稳定感染的细胞克隆.应用免疫荧光染色、蛋白质印迹等方法检测CREG和平滑肌分化标志蛋白α-肌动蛋白(SMα-actin)表达,同时通过刮伤实验、慢速显微摄像技术检测细胞迁移能力以及用明胶酶谱方法分析细胞基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)的活性.结果表明:pLNCX2(+)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9活性升高,细胞迁移速度加快;pLXSN(-)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达下调,MMP-2和MMP-9活性降低,细胞迁移速度减慢.上述研究提示CREG在诱导血管平滑肌细胞分化的同时促进细胞迁移.

E1A激活基因阻遏子过表达抑制体外人血管平滑肌细胞凋亡

为探讨EIA激活基因阻遏子(cellular repressor of EIA-stimulated genes,CREG)对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡的影响及调控机制,应用正、反义重组逆转录病毒表达载体pLNCX_2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染人胸廓内动脉平滑肌细胞克隆株(human internal thoracic artery-Shenyang,HITASY)细胞模型．观察CREG蛋白过表达及表达抑制对平滑肌细胞凋亡的影响。荧光显微镜下观察DAPI染色后凋亡细胞核形态,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术分析凋亡相关基因caspase-9mRNA的表达,蛋白质印迹法分析p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)的表达变化。研究结果显示,CREG蛋白过表达明显抑制血清饥饿诱导的HITASY细胞凋亡的发生；同时细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达增加。相反,抑制CREG蛋白表达则引起正常血清培养状态下VSMCs的自发凋亡明显增加,同时细胞内p38 MAPK、p-p38 MAPK表达显著下降。进一步研究发现,预先应用特异性抑制剂SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后,CREG蛋白过表达引起的细胞凋亡抑制作用被明显减弱,血清饥饿后CREG蛋白过表达引起的HITASY细胞凋亡现象明显增加。上述结果提示,CREG蛋白过表达可以抑制体外培养的VSMCs凋亡．p38 MAPK信号转导通路可能介导CREG蛋白对VSMCs凋亡的抑制作用。

细胞色素P450 3A4 894C>T位点基因多态性与氯吡格雷抵抗的关系

目的探讨细胞色素P4503A4(简称CYP3A4)894C>T位点基因多态性与氯吡格雷抵抗(CR)发生的关系。方法采用病例-对照研究方法,共入选300例沈阳军区总医院心内科住院患者,根据血小板聚集率(PAR)分为病例组(CR组)和对照组(非CR组)。排除2周内曾服用氯吡格雷或噻氯匹啶者。患者入选后均给予氯吡格雷600mg和阿司匹林300mg负荷量治疗,并在服药前和服药后24h分别测定5μmol/L腺苷二磷酸诱导的PAR,根据两次测定结果计算PAR变化值,≤10%者定义为CR。所有患者均采集外周血提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测患者CYP3A4基因894C>T单核苷酸多态性的基因型和等位基因分布。结果入选病例中共70例(23.3%)诊断为CR。CYP3A4894C>T位点在本组患者中存在多态性,分别为TT、CT和CC型,其基因型频率在CR组和非CR组分别为45.7%、50.0%、4.3%和63.5%、31.7%、4.8%。TT基因型的频率在非CR组明显高于CR组(OR=2.06,95%CI:1.201～3.547,P=0.020)。C等位基因型的频率在CR组明显高于非CR组,与T等位基因携带患者相比,C等位基因携带患者发生CR的危险性显著增加(OR=1.59,95%CI:1.037～2.442,P=0.023)。结论CYP3A4基因894C>T位点的多态性可能与CR的发生有相关性。

RhoA和血清反应因子(SRF)介导E1A激活基因阻遏子诱导人血管平滑肌细胞分化

为探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的调控机制,应用重组逆转录病毒表达载体pLNCX2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染HITASY细胞模型,观察CREG蛋白过表达及表达抑制对人VSMCs分化的影响并探讨其调控机制.结果显示:pLNCX2(+)/CREG稳定感染细胞呈分化表型,细胞细长变成组织样聚集生长趋势,细胞中CREG蛋白和平滑肌分化标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)表达显著增加,同时SMα-actin相关调控因子——血清反应因子(SRF)入核转位,RhoA总蛋白表达上调,以Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用后,CREG诱导的SMα-actin表达下调的同时SRF出核转位;pLXSN(-)/CREG稳定感染的细胞体积变大,细胞极性消失,呈无序生长,细胞中CREG和SMα-actin蛋白表达显著降低,同时伴有SRF出核转位及RhoA总蛋白表达下调.免疫共沉淀分析发现,CREG蛋白能被分泌到VSMCs培养基中表达,并可与细胞膜受体6-磷酸甘露糖/胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(M6P/IGF2R)发生直接相互作用.用蛋白磷酸酶PP2A特异性抑制剂okadaicacid减少M6P/IGF2R在细胞膜表面分布,可明显抑制CREG过表达引起的RhoA、SRF和SMα-actin表达.上述结果提示,在体外培养的人VSMCs中,CREG可能作为一种分泌型蛋白质通过与细胞膜受体M6P/IGF2R相互作用,依次激活SMα-actin蛋白相关调控因子RhoA和SRF引起SMα-actin表达增加,促进VSMCs向分化表型转换.

冠状动脉支架术后阿托伐他汀或普伐他汀与氯吡格雷联合治疗的近期疗效比较——随机对照试验

目的比较冠状动脉支架术后通过肝细胞色素P450(CYP)3A4代谢的阿托伐他汀和不通过CYP3A4代谢的普伐他汀与氯吡格雷联合应用的近期疗效,探讨二者对氯吡格雷抗血小板作用的影响。方法收集2006年2月-2007年3月在沈阳军区总医院成功实施冠脉支架术的住院冠心病患者共1250例,术后随机接受阿托伐他汀20mg/d(n=638)或普伐他汀20mg/d(n=612),两组患者均接受常规剂量氯吡格雷治疗。研究主要终点为30d主要不良心脑血管事件(MACCE),包括心性死亡、非致死性心肌梗死(MI)、卒中及紧急靶血管血运重建(UTVR)。次要终点为亚急性血栓形成(SAT)及出血事件。结果两组临床基线资料、冠脉造影及PCI结果无统计学差异。30d时,阿托伐他汀组心性死亡、非致死性MI、UTVR、脑卒中发生率(分别为0.47%、0.47%、1.41%、0.16%)与普伐他汀组(分别为1.14%、0.49%、1.14%、0.33%)比较无统计学差异(P>0.05)。阿托伐他汀组MACCE、SAT发生率(分别为2.51%、0.16%)与普伐他汀组(分别为3.10%、0.16%)比较亦无统计学差异(P=0.523或P=1.000)。两组出血事件发生率分别为2.51%和2.12%,差异无统计学意义(P=0.652)。Kaplan-Meier生存分析显示阿托伐他汀组与普伐他汀组累积风险率无显著差异(P=0.523)。结论冠状动脉支架术后患者采用阿托伐他汀20mg/d或普伐他汀20mg/d联合氯吡格雷治疗的近期疗效相近,长期疗效和安全性还需进一步观察。

冠心病合并慢性肾功能不全介入诊断或治疗围术期的肾功能保护

目的 探讨慢性肾功能不全患者行冠状动脉介入诊断或治疗的安全性及疗效。方法 分析1994年 1月— 2 0 0 2年 7月收治的慢性肾功能不全且行冠状动脉造影术 ( SCA)或经皮冠状动脉腔内成形术( PTCA)及支架术患者围术期的肾功能变化。 90例患者分成 3组 :A组行 SCA,围术期无特殊治疗 ;B组行SCA,围术期给予多巴胺加水化疗法 ;C组行 PTCA及支架术 ,围术期给予多巴胺加水化疗法。结果 90例患者均成功地完成了 SCA或 PTCA及支架术 ,2 8例出现造影剂相关性肾病 ( CAN ) ,其中 A组、B组及 C组发生率分别为 36 .7%、16 .7%和 4 0 .0 % ( 11、5和 12例 ) ,A组 >B组 ( P<0 .0 1)、C组 >B组 ( P<0 .0 1) ,无一例需透析治疗 ,均药物治疗好转而出院。心功能 ～ 级的心力衰竭患者较心功能 级的非心力衰竭患者 CAN发生率明显增加 ( 6 4 .5 %、2 0 / 31例 ;13.6 %、8/ 5 9例 ;P<0 .0 1) ;糖尿病较非糖尿病患者 CAN发生率明显增加 ( 4 2 .6 %、2 3/ 5 4例 ;13.9%、5 / 36例 ;P<0 .0 1)。结论 对慢性肾功能不全患者围术期采用小剂量多巴胺加水化疗法进行充分的治疗 ,可使其耐受 SCA或 PTCA及支架术治疗 。

急性冠状动脉综合征患者冠状动脉支架术前高负荷量氯吡格雷预治疗近期疗效

目的 对比研究氯吡格雷 6 0 0mg与 30 0mg负荷剂量预治疗的急性冠状动脉 (冠脉 )综合征 (ACS)行冠脉支架术的病人的近期疗效和安全性。方法 前瞻性注册研究 ,试验组为 2 0 0 3年 2月至 2 0 0 4年 7月间 31 6例ACS行冠脉支架术的病人 ,术前均予 6 0 0mg氯吡格雷负荷量预治疗。对照组为 2 0 0 1年 1 0月至 2 0 0 3年 2月间 30 9例相同条件病人 ,支架术前予 30 0mg氯吡格雷负荷量。研究主要终点为 30天支架内亚急性血栓发生 ,死亡、心肌梗死和紧急靶血管血运重建的联合终点 ;次要终点为 30天出血事件。结果 两组临床、冠脉造影及介入治疗基线特征无显著差别。氯吡格雷 6 0 0mg组支架内亚急性血栓发生率显著低于 30 0mg组 (0 0 %vs 2 6 %,P =0 0 0 3) ,30 0mg组亚急性血栓发生率与服负荷剂量距手术时间 <6h显著相关 (OR =6 6 6 5 ,95 %CI:1 0 1 7～ 4 3 5 2 1 ,P =0 0 4 8)。 6 0 0mg组死亡、心肌梗死和紧急靶血管血运重建联合终点发生率显著低于 30 0mg组 (0 95 %vs 3 6 %,P=0 0 2 7) ,主要及次要出血事件发生率 6 0 0mg组为 1 2 7%,30 0mg组为 0 97%,差异无统计学意义 (P=1 0 0 )。结论 高负荷剂量 (6 0 0mg)氯吡格雷预治疗与常规负荷量 (30 0mg)相比 ,可显著改善ACS行冠脉支架术病人的近?

对去血清后HITASY细胞分子表达及表型分析

以人血管平滑肌细胞克隆株HITASY为实验材料 ,探讨HITASY细胞分子表达与表型转换间的关系 ,为阐明血管新生内膜形成及再狭窄病理机制提供实验依据 .实验表明 ,在含血清或去血清培养条件下 ,平滑肌细胞于体外发生表型转换 .去血清后细胞外基质蛋白合成中止 ,增殖及移行能力趋于降低 ,细胞特异性标志物平滑肌α肌动蛋白、肌球蛋白重链及钙调结合蛋白等的表达随去血清时间延长而增加 .进一步实验证实 ,在血管活性介质作用下 ,胞液钙离子浓度骤增产生膜信号级联反应 ,引发细胞面积减小而显示收缩功能 .上述处于分化表型的细胞经补加血清后其表型特征又恢复到原有去分化型 ,提示体外培养人平滑肌细胞可发生表型转换 .为验证去血清诱导表型转换过程中相关基因的表达变化 ,用差异显示PCR筛选出E1A激活基因阻遏子 。

转录因子E2F1抑制CREG表达调控体外培养的人血管平滑肌细胞分化

为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基因启动子并确定转录因子E2F1在hCREG启动子区的结合位点,PCR方法克隆并构建hCREG基因启动子绿色荧光报告基因载体,以hCREG启动子区E2F1结合位点为模板,化学合成E2F1寡聚脱氧核苷酸(ODN)和错配E2F1ODN,利用转录因子"诱骗(Decoy)"策略,用E2F1ODN转染体外培养的VSMCs以阻断E2F1与hCREG基因启动子区的结合,蛋白质印迹(Western blot)分析检测阻断前后细胞内hCREG蛋白、报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和平滑肌细胞分化标志蛋白SMα-actin表达变化.结果显示:分化表型HITASY细胞中E2F1表达下调伴出核转位,而增殖表型的HITASY细胞中E2F1蛋白表达明显增加且定位于核内.进一步应用FuGene6瞬时转染E2F1ODN和错配E2F1ODN于体外培养HITASY细胞中,蛋白质印迹分析发现,转染E2F1ODN后,HITASY细胞中hCREG、SMα-actin和GFP表达均较未阻断组及错配组细胞明显增加.上述研究结果证实,E2F1是hCREG基因转录的重要调控因子,能够直接结合于hCREG启动子区阻遏hCREG表达,参与hCREG蛋白对VSMCs表型转化的调控作用.

药物洗脱支架联用普通金属支架治疗多支冠状动脉病变的疗效评价

目的探讨多支冠状动脉病变患者药物洗脱支架与普通金属支架(普通支架)联用预防再狭窄的疗效及安全性。方法801例行多支冠状动脉内支架置入术达到完全血运重建的冠心病患者分3组。药物洗脱支架组206例、药物洗脱支架与普通支架联用组(联用组)158例及普通支架组437例。比较3组支架术后近期及远期结果。结果3组患者冠心病危险因素、心功能、冠状动脉病变程度、支架术成功率及并发症发生率均无显著差异。术后平均随访(17.3±10.9)个月,总随访率和造影随访率无显著差异。联用组普通支架置入于31.3%的前降支病变(均为A、B1型病变)及81.6%的回旋支病变和69.9%的右冠状动脉病变。与普通支架组相比,药物洗脱支架组和联用组造影再狭窄率明显降低,分别为20.3%vs7.3%和8.8%(P均<0.05),且主要不良心脏事件发生率均较低,分别为18.4%vs6.5%和9.9%(P均<0.05)。但药物洗脱支架组与联用组相比上述各指标无显著差异。结论多支冠状动脉病变患者单用药物洗脱支架或合理联用普通支架后再狭窄率降低,安全性近似,均优于单用普通支架。

老年急性心肌梗死患者急诊冠状动脉支架术的临床评价

目的 探讨老年急性心肌梗死 (AMI)患者急诊冠状动脉支架术的临床疗效和安全性。方法 共对 95例住院老年AMI患者的 10 4支靶血管、114处靶病变急诊植入冠状动脉支架 110枚。患者术前合并心源性休克 2 9例 ,心肺复苏 3例 ,急诊冠状动脉造影示多支病变 5 8例 ,梗死相关动脉 (IRA)狭窄 99%～ 10 0 % ,心肌梗死溶栓试验 (TIMI)血流 0级 72例 ,1～ 2级 2 3例。结果 IRA开通率 10 0 % ,110枚支架均植入成功 ,术后平均残余狭窄 (0 .4± 3.5 1) % ,全部恢复TIMI 3级血流 ,无操作并发症 ,即刻成功率 10 0 %。从入导管室至IRA开通时间平均 (17.6± 1.87)min。术后共 6例死亡 ,住院期间总病死率 6 .3% ,其中 4例死于不可逆心源性休克 (休克病死率 13.8% )。对出院的 89例随访 1～ 5 2个月 ,平均 (2 5 .1± 12 .3)个月 ,87例存活 ,存活率 97.8%。 2 8例造影随访者中 5例支架内再狭窄 (再狭窄率17.8% )。结论 急诊支架术对老年AMI患者具有理想的即刻和长期疗效。合理选择器械、操作技术熟练和围术期并发症处理经验是保证老年AMI急诊冠状动脉支架术获得高成功率的 3个关键。

EXCEL可降解涂层雷帕霉素洗脱支架长期临床应用的安全性和有效性

目的:评估EXCEL可降解涂层雷帕霉素洗脱支架置入3年后的安全性和有效性。方法:连续入选我院100例冠心病住院患者,均单一置入EXCEL支架。术后接受双联抗血小板治疗(氯吡格雷和阿司匹林)6个月,随后单用阿司匹林。术后平均8个月实施造影随访及冠状动脉内超声检测。观察术后3年主要不良心脏事件(MACE)、全因死亡和血栓事件发生率。结果:100例患者均完成3年临床随访。1年时发生4例(4.0%)靶病变血运重建,无死亡和非致死性心肌梗死发生,1年MACE发生率为4.0%。3年随访时共6例(6.0%)MACE发生,包括靶病变血运重建4例(4.0%)和心性死亡2例(2.0%)。3年累计全因死亡率4%,包括心性死亡2例(2.0%),脑卒中和肺癌导致的非心性死亡各1例(2.0%),术后3年共发生支架内血栓事件2例(2.0%),其中很可能的支架内血栓事件仅1例(1.0%)。造影随访支架内再狭窄率3.6%(4/112),支架内晚期管腔丢失(0.12±0.34)mm。冠状动脉内超声检查共发现4处晚期支架贴壁不良(发生率6.3%,4/64),但随访期间无任何临床事件发生。结论:EXCEL支架置入术后患者的靶病变血运重建及MACE发生率一直处于较低水平,提示其早期临床获益可持续至术后3年。这一结论有待大规模、随机对照及随访期更长的临床研究证实。

人E1A激活基因阻遏子的表达、抗体制备及生物学活性分析

目的:构建人E1A激活基因阻遏子(humancellularrepressorofE1A-stimulatedgene,hCREG)基因的原核表达载体,纯化重组的hCREG融合蛋白并制备兔抗hCREG抗体。探讨hCREG蛋白在人血管平滑肌细胞克隆株(HITASY)中的表达、定位。方法:用PCR技术,扩增hCREG并构建pGEX-4T-1/hCREG原核表达载体。诱导表达重组谷胱甘肽巯基转移酶(glutathioneS-transferase,GST)-hCREG融合蛋白。以GST-hCREG为抗原,制备兔抗人GST-hCREG的抗血清,并通过蛋白A和GST亲和层析纯化。用ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性;用免疫荧光染色法检查去血清培养前后HITASY细胞中hCREG蛋白的表达及定位;用BrdU染色观察分泌型hCREG蛋白对HITASY细胞增殖的影响。结果:经鉴定证实构建的重组质粒正确。诱导后pGEX-4T-1/hCREG菌株可表达大量的GST-hCREG融合蛋白,层析纯化后其纯度达90%。Westernblot检测表明,纯化的兔抗hCREG抗体可与hCREG蛋白特异性结合。ELISA测得该抗体的效价>1∶105。免疫荧光染色检测显示,去血清培养诱导的HITA-SY细胞中hCREG蛋白的表达增加且定位在核周围。BrdU染色表明,hCREG可明显抑制HITASY细胞增殖。结论:成功地获得兔抗hCREG抗体。证实去血清培养的血管平滑肌细胞中CREG蛋白的表达上调。表达的hCREG蛋白可抑制HI-TASY细胞增殖,提示hCREG可能参与调控血管平滑肌细胞的增殖与分化。

多支冠状动脉病变完全及不完全介入性血运重建1年疗效的比较

目的比较多支冠状动脉病变患者经皮冠状动脉介入术(PCI)进行完全性和不完全性血运重建术后1年的临床疗效。方法分析1995年6月～2004年9月接受PCI的2579例冠心病患者,其中完全性血运重建组2278例(88.3%),不完全性血运重建组301例,对比分析两组PCI术后1年的随访结果。结果不完全性血运重建组患者中3支血管病变、复杂B2/C型病变、完全闭塞病变的比例均高于完全性血运重建组(P<0.01),术前靶血管狭窄程度亦较后者严重(P<0.05);完全血运重建组PCI成功率明显高于不完全血运重建组(96.4%vs94.0%,P<0.05)。对2426例患者进行了12个月的随访,总随访率为94.1%。两组造影复查率、造影复查再狭窄率无显著差异(56.4%vs55.3%,15.2%vs19.2%,P均>0.05)。完全性血运重建组患者心绞痛复发率和主要不良心脏事件发生率均显著低于不完全性血运重建组(5.7%vs9.2%,P<0.05;21.2%vs31.6%,P<0.01)。结论多支冠状动脉病变行介入完全性血运重建的患者1年长期临床疗效优于不完全性血运重建者。

血管球囊损伤后内膜增生及血管重塑对再狭窄的影响

目的 :探讨在血管再狭窄形成过程中内膜增生及血管重塑的作用 .方法 :采用大鼠颈动脉球囊损伤后血管再狭窄的动物模型 ,经形态学观察及计算机图像分析 ,观测术后不同时间点血管壁各成分的变化 .结果 :血管损伤后 3d血管内腔面可见增殖的血管平滑肌细胞 ,损伤后 7d新生内膜形成并继续增厚 ,损伤后 2 8d新生内膜厚度及面积达最大 ,损伤后35d较损伤后 2 8d缩小 (P <0 .0 1 ) .损伤后各时间点中膜厚度无明显变化 ,但损伤后 35d的中膜面积较损伤后 2 8d及对照未损伤侧缩小 (P <0 .0 5 ) .管腔面积于损伤后前 3d略增大 ,损伤后 7d出现管腔面积减少 ,至损伤后 2 8～ 35d管腔面积明显小于对照未损伤侧 (P <0 .0 1 ) .外弹力膜内横截面积在损伤后 3～ 7d略增大 ,损伤后 1 4d最大 ,损伤后 35d较损伤后 2 8d及对照未损伤侧明显缩小 (P <0 .0 1 ) .结论 :内膜增生与血管重塑是再狭窄形成的主要病理机制 ,血管再狭窄的形成是内膜增生与血管重塑的平衡所决定的 ,两者共同导致管腔狭窄 .

胚胎干细胞SM22α-EGFP表达克隆的建立及平滑肌细胞体外发育的动态观察

为探讨血管发育早期血管平滑肌细胞(VSMCs)募集和增殖特点,构建了含有SM22α启动子序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码序列的质粒,建立了平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下稳定表达EGFP的胚胎干细胞株(ESCs),以研究VSMCs的发育特点.实验发现,起源于SM22α-EGFPESCs形成的胚胎小体(EBs)在第11天开启SM22α启动子并表达EGFP.此后EGFP阳性细胞持续增加,在第30天达到高峰.VSMCs多起源于EBs中细胞密集处,应用免疫荧光染色及RT-PCR观察到EGFP阳性细胞表达多种平滑肌特异性标志物.在贴壁培养的胚胎小体中VSMCs形态可分为纺锤形及上皮样的多角形,慢速视频显微摄像测得纺锤形细胞迁移速度较上皮形细胞快.以上结果表明,SM22α-EGFPESCs分化形成的EBs可以模拟体内早期胚胎血管形成过程,从形态学上获得VSMCs募集分化的证据.