慢性乙型病毒性肝炎患者外周血细胞CCR5及CD30的表达

目的 为研究细胞趋化因子受体 5 (CCR5 )及细胞分化抗原 30 (CD30 )作为 1类辅助性T细胞 /细胞毒性T细胞 (Th1/Tc1)、2类辅助性T细胞 /细胞毒性T细胞 (Th2 /Tc2 )表面标志的可行性及辅助性T细胞 (Th) /细胞毒性T细胞亚群 (Tc)在病毒性肝炎免疫发病机制中的作用。方法对 2 0例正常人群 (NC)及 2 0例慢性乙型病毒性肝炎 (CHB)患者外周血单核细胞 (PMBC)经植物血凝素 (PHA)培养前后CCR5、CD30的表达水平进行了检测。结果 ①培养前 ,NC与CHB患者PM BC的CCR5及CD30的表达无明显的差别 (P >0 0 5 ) ,但两组CCR5的表达均高于CD30 (P <0 0 5 )。②培养后 ,CHB患者CCR5高于NC(P >0 0 5 ) ,而CD30则低于NC(P <0 0 5 )。③培养后 ,NC的CCR5表达较培养前明显的减少 (P <0 0 5 ) ,而NC及CHB患者的CD30的表达较培养前均明显的增加 (P <0 0 5 ) ;培养后 ,CHB患者CCR5的减少量低于NC ,而CD30的增加量少于NC(P <0 0 5 )。④培养前CHB患者CCR5 /CD30低于NC ,而培养后高于NC(P <0 0 5 ) ,两组培养后CCR5 /CD30均明显低于培养前 (P <0 0 5 )。结论 ①CCR5及CD30目前可作为Th及Tc细胞亚群相对特异性的细胞表面标志物 ;

细胞趋化因子受体5在病毒性肝炎患者外周血单核细胞中的表达

目的研究细胞趋化因子受体5(CCR5)在乙型病毒性肝炎(HB)免疫发病机制中的作用。方法用流式细胞仪对20例正常人(NC)及20例HB患者外周血单核细胞(PBMC)水平进行检测,并比较其经植物凝血素(PHA)培养前后的变化。结果培养前NC与HB患者PBMC的CCR5的表达无明显差异(P>0.05);培养后HB患者CCR5表达水平高于NC(P<0.05);NC的CCR5表达均较培养前明显减少(P<0.05),而HB患者的CCR5表达虽较培养前减少,但无统计学意义(P>0.05);急性乙型肝炎(AHB)、慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化(LC)患者的CCR5的表达有一定的差别:AHB>CHB>LC,但无统计学意义(P>0.05)。病毒复制指标阳性组CCR5的表达明显低于阴性组(P<0.05)。结论HB患者PBMC的CCR5的表达水平与HB的临床转归可能有一定的关系,高水平的CCR5患者预后较好;PMBC高水平CCR5的表达可能不利于乙型肝炎病毒(HBV)的复制。

基因1b型不同准种株HCV核心蛋白真核表达质粒的构建及表达

目的构建基因1b型丙型肝炎病毒(HCV)不同准种株截短片段核心蛋白(CP)绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白表达质粒。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增获得等长度片段的CP基因:氨基酸(aa)长度为癌中心株(T)∶T∶1-172aa、癌旁株(NT)∶1-172aa及C191(HCV-J6)∶1-172aa,扩增产物用NheI及EcoRI双酶切后将其插入到真核表达质粒pEGFP-N1中,转染不同细胞系,用荧光显微镜及流式细胞仪观察GFP的表达。结果PCR扩增、序列分析验证,T、NT及C191截短片段CP基因均成功克隆到pEGFP-N1中,在转染HepG2、chang-liver48h后,用荧光显微镜及流式细胞仪均观察到GFP的表达。结论构建基因1b型HCV不同准种株截短片段CP的真核表达质粒获得成功,可用于不同准种株CP的功能研究。

丙型肝炎病毒基因分型与临床关系的研究

目的：研究不同基因型丙型肝炎病毒（HCV）感染后丙型肝炎（HC）患者的临床特征。方法：对90例血清HCVRNA阳性HC患者进行基因分型，并对不同型患者的临床资料进行比较。结果：（1）徐州地区HCV流行株基因型主要为Ⅱ型（78.9％），同时存在Ⅲ型（18．9％）及Ⅱ／Ⅲ混合型（2.2％）。本地区HCV基因型分布符合我国HCV基因型分布的总特征，可能反映我国东部沿海地区HCV基因型分布。（2）Ⅱ型患者肝报重于Ⅲ型，而其免疫原性低于Ⅲ型，两者在致病机理方面可能存在一定差异。（3）Ⅱ／Ⅲ混合型感染与反复输血制品及多次血液透析有关，在致病过程中可能起协同作用。

血清Ⅲ型前胶原对肝纤维化的诊断价值

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬变发展的必经阶段。探讨早期诊断肝纤维化,动态观察肝纤维化过程的临床指标,是近年来颇受重视的研究课题之一。国内外许多学者报道,血清Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)是诊断肝纤维化较好的血清学指标,但因PⅢP进口药盒价格昂贵,不易推广应用。我们应用国产血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)试剂盒测定了116例慢性肝炎、肝硬化患者的PCⅢ含量,以探讨PCⅢ测定在肝纤维化诊断中的意义。

13例甲型H1N1流感危重症病例临床资料回顾性分析

目的探讨甲型H1N1流感危重症患者的临床特征及部分实验室检查的特点。方法回顾性分析13例甲型H1N1流感危重症患者临床资料。结果①13例中女性11例,孕妇7例,多以发热、咳喘等呼吸道症状就诊。②13例中有11例发生轻度肝功能损伤,其中7例孕妇均发生肝功能的损伤,主要表现为谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)不同程度的增高,肝功能损伤多见于病程的第1周;12例出现乳酸脱氢酶(LDH)的升高;8例出现肌酸激酶(CK)的升高。③13例患者最终死亡2例,均为女性,入院时均有ALT、AST的轻度升高,而LDH和CK明显升高,均于发生少尿后48 h内死亡。结论女性尤其是孕妇感染甲流H1N1容易发展为危重症;多数危重症甲型H1N1流感患者伴有轻度肝功能损伤;危重症甲型H1N1流感患者伴有LDH及CK明显升高者预后不良。

慢性乙型肝炎患者CD4/CCR5、CD4/CD30细胞亚群失衡研究

目的研究辅助性T细胞亚群(Th)在慢性乙型肝炎(CHB)发病机制中的作用,寻找治疗CHB的新方法。方法用流式细胞仪对20例正常人(NC组)及20例CHB患者外周血单核细胞(PBMC)经植物血凝素(PHA)培养前后的Th1、Th2水平进行了检测,Th1、Th2细胞表面特异性标志分别为CD4/CCR5、CD4/CD30。结果培养前,Th1在NC组与CHB组无明显差别(P>0.05),CHB组Th2明显高于NC组,同时CHB组及NC组Th1均明显高于Th2(P<0.05);培养后,NC组的Th1较培养前明显减少(P<0.05),而NC组的Th2、CHB组的Th1及Th2较培养前均明显增加(P<0.05),而以CHB组的Th2增加更明显;培养后,CHB组Th1、Th2均高于NC组(P<0.05),而CHB组及NC组的Th1与Th2之间则无明显差别(P>0.05);培养前CHB组明显低于NC组(P<0.05),而培养后CHB组高于NC组(P<0.05),2组培养后Th1/Th2均明显低于培养前(P<0.05)。结论CHB患者体内Th细胞亚群的应答模式与正常人群存在一定的差异;Th1向Th2细胞的漂移与乙型肝炎的慢性化及反复肝损伤有一定的关系。

抗HCV是否步入以DAA为主的特异性治疗时代?

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是导致慢性肝脏疾病的原因之一.直接抗病毒(direct-acting antiviral,DAA)药物的问世无疑给不能耐受或不适合干扰素治疗的患者带来了希望.2014-2015年国外已经发布了6部关于抗HCV治疗的指南,而2015-10我国也更新了HCV感染的诊治的指南.本文对抗HCV的治疗现状及趋势作一简要概述.

抗HCV药物研制现状和发展方向

目前丙型肝炎的抗病毒治疗方法比较单一,主要为干扰素(IFN)与利巴韦林(RBV)联合治疗,即所谓的标准化治疗(standard of care,SoC)。

干扰素治疗丙型肝炎疗效相关因素分析

目的：探讨预测干扰素治疗慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）疗效的临床上适用、简便、易行的指标。方法：对采用干扰素（ＩＦＮα－１ｂ）治疗３２例ＣＨＣ临床资料进行观察，包括治疗前后肝功能（ＡＬＴ、ＳＢ、ＧＧＴ）、抗－ＨＣＶＯＤ水平、ＨＣＶ基因型、ＨＣＶＲＮＡ、ＳＩＬ－２Ｒ、β２－ＭＧ等，治疗结束时有效者为肝功能复常同时ＨＣＶＲＮＡ阴转，其余反应模式均为无效者。结果：ＨＣＶ基因型为Ⅲ型患者疗效（５／１０）明显高于Ⅱ型（２／１９）（Ｐ＜０．０５），有效者治疗前血清抗—ＨＣＶＯＤ明显低于无效者（Ｐ＜０．０５），治疗后有效者β２－ＭＧ升高水平（３．４５±１．０８）ｍｇ／Ｌ明显高于无效者（１．３３±０．９５）ｍｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０５），而两者治疗前ＡＬＴ、ＳＢ、ＧＧＴ、ＩｇＭ、β２－ＭＧ患者的年龄无明显差别（Ｐ＞０．０５）。结论：感染ＨＣＶ基因型，治疗前抗—ＨＣＶＯＤ水平及治疗后β２－ＭＧ变化对预测ＩＦＮ治疗ＣＨＣ疗效有一定参考价值。

丙型肝炎病毒基因分型研究及其意义

1989年choo获得首株丙型肝炎病毒(HCV)的基因克隆,并完成了核酸序列测定。至目前已报道了许多HCV全序列及部分序列,对这些毒株序列进行比较研究,发现HCV基因组存在很大变异,即株间变异大,因而认为HCV存在不同基因型,并进行了广泛研究。HCV分型标准初步定为:同型之间的核酸序列的同源性应大干80％,并且具有一些型特异性的核酸序列,型与型之间的变异应大于20％。分型研究显示不同基因型与HCV感染的地区分布、临床表现、预后以及对干扰素治疗的反应可能具有相关性。因此,对HCV进行基因分型,具有一定实用价值。现将近几年分型研究综述如下。

蛋白激酶R与丙型肝炎病毒核心蛋白相互作用区域定位

目的:观察丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(CP)对蛋白激酶R(PKR)表达的影响;定位PKR与CP直接结合的区域。方法:对Huh-7、转染表达CP的Huh-7及含有全长HCV复制子(replicon)Huh-7细胞株的PKR表达水平及干扰素(IFN)诱导前后replicon Huh-7细胞中HCV结构蛋白和非结构蛋白表达水平作比较;对CP与PKR进行免疫共沉淀试验、谷胱苷肽S转移酶(GST)结合试验。结果:Replicon Huh-7中PKR表达水平高于Huh-7及转染表达CP的Huh-7;IFN诱导后PKR表达增加,且明显抑制HCV结构和非结构蛋白的表达;PKR能与CP直接结合,依赖于PKR的N端1-180氨基酸(aa)。结论:CP能直接作用于PKRN端1-180aa,导致PKR组成性激活,从而干扰PKR介导的相关信号转导通路。CP与PKR的相互作用是HCV病毒蛋白与细胞蛋白相互作用又一新的模式,在HCV持续感染及肝癌2者发病机制方面可能起重要作用。

丙型肝炎病毒核心蛋白与信号转导及转录活化蛋白3的相互作用

为了观察丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白（CORE）对信号转导及转录活化蛋白3（STAT3）表达的影响，寻找CORE与STAT3相互作用的功能区域。对Huh-7、转染表达CORE的Huh-7和含有全长HCV基因的复制子（Replicon）Huh-7的STAT3及磷酸化STAT3（p-STAT3）表达水平作比较；并对CORE与STAT3进行免疫共沉淀试验、谷胱甘肽S转移酶（GST）结合试验。结果显示，CORE能直接结合并诱导STAT3和p-STAT3表达，不同病毒株CORE及CORE不同功能区域结合STAT3和p-STAT3能力不同，CORE结合于STAT3主要依耐于CORE的N端的1～126氨基酸。因此，CORE与STAT3的相互作用可能是HCV感染又一新的分子致病机制，在引起HCV持续感染和肝细胞癌的发病机制中起重要作用。

江苏徐州地区丙型肝炎病毒基因型研究

为了解本地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布倩况,用限制性片段长度多态性分析法(RFLP),对107例丙型肝炎患者中血清HCV-RNA阳性的90例进行基因型分析.分型结果表明,HCV-Ⅱ(1b)占78.9%(71/90),HCV-Ⅲ(2a)型占18.9%(17/6O),HCVⅡ/Ⅲ(1b/2a)混合型占2.2%(2/90).提示:①本地区HCV流行株基因型主要为Ⅱ型,同时存在Ⅲ型与Ⅱ/Ⅲ混合型.徐州地区HCV基因型分布符合我国HCV基因型分布的特征,可能反映我国中原地区HCV基因型的分布.②Ⅱ/Ⅲ混合型感染可能与反复输入血制品及多次血液透析有关.

HLA-Ia表达水平在预测干扰素治疗丙型肝炎疗效中的运用

目的 从丙型肝炎 (HC)的免疫发病机制中寻找预测干扰素治疗HC疗效的有效指标。方法 在对 32例慢性丙型肝炎 (CHC)的患者运用干扰素治疗过程中 ,动态观察了血清中 β2 -微球蛋白 (β2 -MG)的变化 ;同时检测了 30例正常人作为对照组。结果 CHC患者血清中 β2 -MG的含量明显高于正常组 (P <0 .0 5 ) ,干扰素治疗后 β2 -MG的表达量明显增加 ,其中完全应答者干扰素治疗后 β2 -MG的增加量明显高于无应答者或部分应答者(P <0 .0 5 )。结论 CHC患者肝细胞表面的HLA -Ia类抗原的过度表达是造成肝损伤的原因之一 ,β2 -MG可作为临床上预测干扰素疗效的简便。

不同方法对丙型肝炎病毒基因分型结果比较

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）血清学分型与基因分型结果的一致性、可靠性和实用性，对基因型明确的５７例患者血清用ＥＩＡ 进行血清学分型，并与部分患者临床资料进行比较。结果显示，ＥＩＡ 检出型特异性抗体３２例（５６．１％ ），其中血清１型（相当于基因型Ⅰ，Ⅱ型）１５例（４６．９％ ），血清２型（相当于基因型Ⅲ、Ⅳ型）１０例（３１．２％ ），血清１，２型均阳性７例（２１．９％ ）。血清型与基因型符合率为７１．２％ （２３／３２）。据此认为ＨＣＶ 血清学分型法的灵敏性、特异性及实用性均不及基因分型法。

肝细胞癌与丙型肝炎病毒感染临床观察

用ELISA法检测了92例肝细胞癌(HCC)及53例其他恶性肿瘤患者(对照组)血清乙型肝炎病毒标志物(HBV—M)及丙型肝炎病毒抗体(抗—HCV)。结果:HCC组血清HBV—M及抗—HCV阳性率为87.O%和14.0%,均明显高于对照组的30.2%和3.8%(P均<0.05)。HCC组抗—HCV阳性病人中84.6%HBV—M阳性。提示:HBV是本地区引起HCC的主要病因,而HCV也可能是HCC的致病因素之一,但HCV单独致癌的可能性不大,主要是通过调节和协调HBV而起致癌作用。且不同地区HCV毒株致癌效应不尽相同。