氧化硫硫杆菌启动子功能片段在大肠杆菌中的克隆和表达

用DNA体外重组技术,以氧化硫硫杆菌(T.thiooxidans)染色体DNA的EcoPIHindⅢ片段取代pBR322的相应片段,构建成一个重组质粒pSDR12。转化大肠杆菌C600受体菌株后,表现了较强的抗四环素能力。表明了一个专性自养细菌的启动子功能片段在异养细菌中表达。

启动子探测质粒pSDSI的构建

关于自养细菌启动基因的研究报道甚少。我们曾报道了一个专性自养细菌——氧化硫硫杆菌具有启动子活性的染色体DNA片段在大肠杆菌中的克隆和表达。

浸矿细菌的遗传工程

硫杆菌属(Thiobacillus)的一些种,氧化硫硫杆菌(T.thiooxidans)和氧化亚铁硫杆菌(T.ferrooxidans),广泛分布于硫化矿床的酸性矿水中,最适生长pH为2.0—2.5,是一类革兰氏阴性专性自养细菌。这类细菌广泛应用于有用金属的浸出。

一株高效抗砷喜温硫杆菌工程菌的构建

利用DNA体外重组技术,将大肠杆菌质粒载体pUM3上的抗砷基因簇片段亚克隆到含有强启动子(tac启动子)并具有广泛寄主范围特性的IncQ族质粒pMMB24上,删除调节基因片段,构建了含有强启动子、可在tra基因诱动下转移的组成型表达的抗砷质粒pSDRA4。通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性喜温硫杆菌Acidithiobacillus caldus中,构建了冶金工程菌Acidithiobacillus caldus(pSDRA4),接合转移频率为(1.444±0.797)×10-4。表明在大肠杆菌和喜温硫杆菌之间成功地建立了一个遗传转移系统。经检测,重组质粒在喜温硫杆菌中具有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代50次基本保持稳定(重组质粒保留76%以上)。经抗砷性能检测,与野生菌相比,构建的喜温硫杆菌工程菌抗砷能力明显提高,从10mmol/L提高到45mmol/L。

一株中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌的分离和系统发育分析

从云南腾冲温泉酸性水样分离得到一株中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌MTH 0 4 ,对分离菌株进行了形态、生理生化特性研究及 1 6SrDNA序列分析。该菌株为革兰氏阴性细菌 ,短杆状 ,菌体大小 (0 6～ 0 8) μm× (1～ 2 ) μm ,化能自养 ,可利用硫磺、四硫酸盐、硫代硫酸盐为能源生长 ,不能利用蛋白胨、葡萄糖、酵母粉 ,也不能进行混合型生长。最适生长温度在 4 0℃～ 4 5℃之间 ,最适生长pH 2 0～ 3 0 ,代时 8h。以 1 6SrDNA序列同源性为基础构建了包括 1 3株相关种属在内的系统发育树 ,结果表明 ,MTH 0 4与喜温硫杆菌 (Thiobacilluscaldus)处于同一进化树分支中 ,相似性达 99 5

氧化亚铁硫杆菌铁氧化系统分子生物学研究进展

氧化亚铁硫杆菌（Thiobacillus ferrooxidans,简称T.f）是目前研究最多、最具经济价值的浸矿微生物。由于该菌的能量代谢对于生物浸矿起决定作用,因此其机制的研究必然能促进对该菌生理特性的认识及其遗传改造。氧化亚铁硫杆菌生长方式代表了迄今所知的能够进行生长的热力学极限,可供该菌生长利用的△Eh仅有340mV,氧化Fe2+所能得到的能量很少。在 Fe2+氧化过程中,电子通过电子传递链最终传递给氧,

螺旋状专性化能自养铁氧化细菌ML-04菌株的分子鉴定

对 1株螺旋状专性化能自养铁氧化细菌ML 0 4的 16SrDNA基因PCR扩增产物进行了序列分析 ,并以 16SrD NA序列同源性为基础构建系统发育树 ,结果表明 ,ML 0 4菌株与氧化亚铁钩端螺旋菌 (Leptospirillumferrooxidans)具有较大的差异性 ,而与嗜铁钩端螺旋菌 (Leptospirillumferriphilum)的相似度达 99.7%以上 。

浸矿细菌—钩端螺旋菌属菌株研究进展

钩端螺旋菌属菌株在微生物浸矿工业中具有重要作用。介绍了钩端螺旋菌属菌株的种类、特性,分离、培养方法,以及近些年来有关该属菌株在分子生物学及浸矿机理方面的研究进展。

苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞及转基因植株再生的研究

以葡萄的胚性愈伤组织作为农杆菌介导,Ti质粒转化材料,利用共培养法将苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞,通过胚状体发生途径再生转基因植株。实验发现:80μmol/L的乙酰丁香酮诱导处理农杆菌和葡萄愈伤组织后可将转化效率提高50倍。OD值为0.8的农杆菌菌液稀释8—10信后与在G培养基预培养10天的胚性愈伤组织共培养2—3夭,Ti质粒对葡萄愈伤组织细胞的转化效率可达50%左右。筛选得到的转基因植株在含Km 30 mg/L的选择培养基上继代存活6个月,生长正常;提取叶片染色体DNA做Southern blot,杂交结果为阳性。将转基因植株各部分切段置于含Km 50 mg/L的选择培养基上,能够脱分化产生抗性愈伤组织并能增殖。

氧化亚铁硫杆菌基因转移系统研究进展[综述]

Thiobacillus ferrooxidans is a extremely acidophilic and obligately chemlithotrophic bacterium. It is the most important work for gene engineering of T.ferrooxidans to develop an efficient gene transfer systems. This paper summarized the genetics background of T.ferrooxidans, the process of establishing such a kind of gene transfer system, and its application in constructing arsenic resistance genetically engineered bacteria. Ref

一株螺旋状铁氧化细菌的分离及特性研究

利用双层平板培养技术 ,从云南腾冲地区高温温泉边酸性水中分离出 1株螺旋状铁氧化细菌ML 0 4 ,对该菌的理化特性研究结果显示 ,该菌专性化能自养 ,可利用亚铁和黄铁矿为能源 ,不能氧化硫磺、四硫酸盐、硫代硫酸盐 ,最适生长温度 4 0℃ ,最适生长pH2 .5 .对砷黄铁矿的浸矿实验表明 ,ML 0 4菌株可以有效浸出矿粉中的铁和硫元素 .

氧化亚铁钩端螺旋菌在固体平板上的培养及形态观察

用底层加入嗜酸性异养细菌Heterotroph Acidiphilium SJH的琼脂糖双层培养基,成功地培养得到氧化亚铁钩端螺旋菌(Leptospirillum ferrooxidans)的单菌落,并在电镜下观察到了该菌的形态。

抗砷载体的构建及在氧化亚铁硫杆菌中的表达

利用ＤＮＡ体外重组技术，将抗砷质粒ｐＵＭ３经ＨｉｎｄⅢ酶切后得到的４．３ｋｂ抗砷片段克隆到有广泛寄主的ＩｎｃＱ质粒ｐＪＲＤ２１５的ＨｉｎｄⅢ位点上，构建了一个新的抗砷质粒ｐＳＤＸ３。砷抗性研究表明，在大肠杆菌中，ｐＳＤＸ３的抗砷水平与ｐＵＭ３相近。将ｐＳＤＸ３通过接合的方式引入氧化亚铁硫杆菌Ｔｆ－５９中并得到了表达，与对照相比，含质粒ｐＳＤＸ３的Ｔｆ－５９抗砷水平有了很大的提高。

极端嗜酸性专性化能自养硫细菌有机质代谢的研究进展

极端嗜酸性专性化能自养硫细菌具有独特的生理特性,在农业、细菌冶金、含硫废水处理以及环境保护等方面发挥着重要作用,但这类细菌在其特殊能源缺乏时不能代谢有机质,生长缓慢,代时长,细胞得率低,限制了它在实际生产中的应用效率。对其进行遗传改造,构建能够利用有机质快速生长的基因工程菌,将为这类细菌的工业化应用提供一条可行的途径。主要对极端嗜酸性专性化能自养硫细菌有机质代谢的研究进展进行了综述,其中包括有机化合物的抑制作用、有机化合物的有限利用、中心代谢途径及物质的转运等,还包括专性化能自养硫细菌有机质代谢遗传改造研究的最新进展。

自养细菌RubisCO分子生物学研究进展

在自养细菌中还原C0_2为有机碳有多种途径,在这些途径中主要是还原磷酸戊糖途径(又称卡尔文循环),这个循环的第一步是CO_2的固定反应,它是由核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(简称RubisCO)催化完成的。它催化核酮糖-1,5-二磷酸(RuBp)的羧化反应,生成二分子的3-磷酸甘油酸;

抗砷载体的构建及在喜温硫杆菌中的接合转移

利用DNA体外重组技术,将质粒载体pUM3上的抗砷基因片段亚克隆到含有强启动子(tac启动子)并具有广泛寄主范围特性的IncQ族质粒pMMB24上,成功构建了含有强启动子的抗砷质粒pSDRA3,以及删除调节基因片段的组成型表达的抗砷质粒pSDRA4。通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性的喜温硫杆菌中,首次成功地建立了喜温硫杆菌的遗传转移系统,构建了冶金工程菌T.caldus(pSDRA3)和T.caldus(pSDRA4)。与野生菌相比,重组菌抗砷性能明显提高。

大肠杆菌磷酸果糖激酶基因在野生型专性自养嗜酸性氧化硫硫杆菌Tt-Z2中的表达

利用PCR技术扩增E .coliK 12磷酸果糖激酶 1基因 (pfkA) ,将该基因与广泛寄主的IncQ质粒pJRD2 15连接构建重组质粒pSDK 1,该质粒可与pfk基因缺陷株E .coliDF10 10互补 .通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性氧化硫硫杆菌Tt Z2中并得到表达 .pSDK 1在宿主Tt Z2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下连续传5 0代仍可保留 6 8% .酶活性测定表明 ,pSDK 1的pfkA基因在缺陷株E .coliDF10 10中表达水平略高于出发菌株E .coliK 12 ;而在氧化硫硫杆菌中则以较低水平进行表达 .葡萄糖可促进含pSDK 1的氧化硫硫杆菌Tt Z2的生长 ,而对照菌株的生长则未受明显影响 .说明重组菌可部分利用葡萄糖作为碳源而生长 .

利用氧化亚铁硫杆菌抗砷工程菌Tf—59（pSDX3）处理含砷金精矿

利用构建的氧化亚铁硫杆菌抗砷工程菌对含砷金精矿进行了有关试验，结果表明：含有抗砷质粒的氧化亚铁硫杆菌Ｔｆ－５９（ｐＳＤＸ３）的生长和产酸能力不低于对照菌Ｔｆ－５９加入硫酸亚铁和提高接种量可明显缩短生长延迟期，并加快脱砷速度；可将矿浆浓度从２０％提高到３０％，抗胂试验显示，当ｃ（ＮａＡｓＯ２）达到８０ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｔｆ－５９的生长受到严重预制，而对Ｔｆ－５９（ｐＳＤＸ３）的生长影响较少。

无机硫化合物的微生物氧化

无机硫化合物的微生物氧化徐海岩，颜望明（山东大学微生物研究所，济南２５０１００）硫是自然界存在的重要元素之一，也是构成生物有机体必不可少的一种元素。自然界硫的转化主要是在微生物直接或间接参与下完成的。在这些微生物中，有异养菌，也有自养菌。自养菌主要是...