中医药院校食品安全学线上线下混合式一流课程建设实践与探讨

本文围绕食品安全学课程目标,重组课程内容,构建“打基础-做拓展-促提升”的能力递进式知识模块,以学生为中心,以“OBE”为导向,采用创新的“PEDSP”线上线下混合式教学模式,引进一线导师进课堂,引导食安成果入社会,形成“五维融合”课程特色体系,为中医药院校食品安全学的课程改革与实施,以及专业课程的教学改革、实现教育现代化提供参考。

重铬酸钾致N-ras基因DNA损伤作用研究

目的 研究重铬酸钾对N -ras基因的DNA损伤作用,探讨其致癌作用分子机制。方法 制备N -ras基因外显子1单链探针;重铬酸钾染毒细胞提取基因组DNA ,再经RDPCR扩增后与探针杂交显色。结果 重铬酸钾染毒剂量10 0 μmol L可检测到DNA损伤片段杂交条带,其损伤片段长于完整的N ras基因外显子1;更高剂量(10 0 0 μmol L)未能检测出DNA损伤作用。结论 重铬酸钾可能造成N- ras基因外显子1上游序列DNA损伤,且该损伤作用可能正是其致癌作用分子机制的关键所在。

强化中药应用安全性管理

当前患者在使用中药的问题上存在不少误区,形成了用药的安全隐患。影响中药安全有效的因素可概括为药物因素、医学因素和社会因素。主要表现在:盲信中药无毒副作用或过分顾虑中药的毒性作用等。政府及相关部门应加强有效的管理,以保证中药临床应用的安全性。加强中药应用安全的管理具有十分重要和紧迫的意义。

论新形势下的食品添加剂安全管理

近年来,源于食品添加剂滥用或非法添加化学物的食品安全事件不断出现,引起了广大人群对食品安全的担忧。应当在正确认识食品添加剂的基础上,采取积极对策,包括开展食品安全风险监测和风险评估、建立统一的食品安全标准体系、加强事前防范、强化源头管理、规范新闻媒体报道等。

浅析食品安全风险评估对食品安全科学监管的促进

食品安全风险评估作为食品安全科学监管的重要手段,对于促进食品安全具有积极作用。针对风险评估在我国初步实践过程中所出现的一些问题,文章提出了相应的改进措施,包括拓宽沟通协调途径、加强数据共享、通过外部的力量加以规范和平衡、建立适当的评估模型,加强基础研究等。

Ras基因损伤与突变研究现状

ras基因是一种重要的细胞原癌基因 ,活化后参与肿瘤的形成。点突变是 ras基因发生突变的主要方式 ,其突变热点往往比较局限。环境致癌物作用于 ras基因后 ,所致 DNA损伤、损伤修复、突变及肿瘤形成等一系列过程都具有其特点。在核酸序列水平检测该基因的 DNA损伤与突变 ,具有十分重要的意义。

应用彗星试验检测乌头类生物碱致细胞DNA损伤作用

目的:研究乌头类生物碱对细胞DNA的损伤作用,以期在分子水平进一步阐明乌头类生物碱的毒效作用特征及其分子机制。方法:以500、100、50和10μg.mL-1乌头碱、次乌头碱或新乌头碱分别染毒HepG2细胞1.5h,应用24孔板彗星试验检测细胞DNA损伤。结果:乌头类生物碱作用组细胞平均拖尾长度和拖尾细胞率与生物碱浓度存在剂量反应关系,且100和50μg.mL-1作用组细胞平均拖尾长度与阴性对照组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:乌头类生物碱具有细胞DNA损伤作用。

中药毒理学学科建设思路与实践

中药毒理学学科的建立是历史发展的必然需求。基于学科建设实践,提出了相应的思路和措施,包括努力实现理论创新、凝练明确稳定的研究方向、积极推进基地与平台建设、大力实施人才培养战略和开展高效的科学研究等,以促进学科建设的可持续发展。

乌头碱对bcl-2基因表达影响作用的定量研究

目的:研究乌头类中药对bcl-2基因表达的影响,探讨乌头类中药毒性作用机制。方法:建立荧光定量PCR反应体系;体外培养Hep G2细胞,分别以500,100,50和10μg.m L-1浓度的乌头碱作用于细胞,37℃染毒1.5 h,荧光定量PCR仪检测。结果:乌头碱作用下,bcl-2基因表达量增加,且不同剂量组呈现剂量-反应关系。结论:乌头类中药具有促进bcl-2基因表达的作用,可能是其毒效作用的重要因素。

重铬酸钾致鲫鱼肝细胞DNA损伤作用研究

目的建立鲫鱼肝细胞彗星试验方法 ,检测重铬酸钾致鱼肝细胞DNA损伤作用。方法制备鲫鱼原代肝细胞悬液,以0.5,0.25和0.1mM重铬酸钾染毒细胞1.5h,彗星试验检测细胞DNA损伤。结果重铬酸钾各浓度作用组细胞平均拖尾长度和拖尾细胞率存在剂量反应关系,且0.5和0.25mM作用组细胞平均拖尾长度与阴性对照组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论鲫鱼肝细胞彗星试验方法成功建立,重铬酸钾具有致鱼肝细胞DNA损伤作用。

氯化消毒饮用水浓集物对ras基因的DNA损伤作用

目的运用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)技术检测氯化消毒饮用水浓集物对ras基因的DNA损伤作用,探讨其可能致癌作用分子机制。方法采用酚-氯仿-异戊醇法提取人的类淋巴母细胞(TK6)的DNA,采用PCR法制备人类N-ras基因外显子1、2和H-ras基因外显子1、2(以下分别简称为N1、N2、H1、H2)单链探针。将采集的某自来水厂水源水和管网末梢水各150L进行浓集,分别以0.1、0.5、1L/ml的剂量(相当于原水)对TK6细胞进行染毒,提取基因组DNA,再经RDPCR扩增,扩增产物与N1、N2、H1、H2单链探针杂交、显色。结果管网末梢水水样浓集物染毒组DNA经N2特异性引物指导下的RDPCR扩增产物,与N2单链探针杂交,在1L/ml浓度组观察到1条杂交显色条带,在0.1、0.5L/ml浓度组均未观察到杂交条带;经H1、H2、N1特异性引物指导下的RDPCR扩增产物与相应的基因特异性单链探针杂交,在0.1、0.5、1L/ml浓度组均未观察到杂交条带。水源水水样浓集物染毒组DNA经N1、N2、H1、H2特异性引物指导下的RDPCR扩增产物与相应的基因特异性单链探针杂交,在0.1、0.5、1L/ml浓度组均未观察到杂交条带。结论氯化消毒饮用水浓集物对N2具有DNA损伤作用,具有遗传毒性。

p53基因单链探针在RDPCR技术中的应用研究

目的 制备单链探针替代原有的双链探针 ,以解决RDPCR技术中存在的杂交效率较低及特异性较差的问题。方法 应用不对称PCR及单引物PCR技术制备大鼠p5 3基因外显子 7单链探针 ,再经RDPCR扩增比较单链与双链探针的杂交效果。结果 不对称PCR及单引物PCR技术制备单链探针均获得成功 ;目的基因单链探针杂交条带清晰且几乎无背景值。结论 与双链探针比较 ,单链探针的应用可以明显提高RDPCR技术杂交的敏感性及特异性。

N-ras基因DNA损伤检测方法的建立

目的建立应用依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)技术检测N-ras基因DNA损伤的试验方法。方法采用单引物PCR技术制备N-ras基因外显子1单链探针,酶切构建DNA损伤模型,再经RDPCR扩增后与探针杂交显色。结果单引物PCR技术制备单链探针获得成功,目的基因在相应位置出现了清晰的杂交条带。结论RDPCR技术可定位检测到该酶切DNA损伤位点,表明该方法已成功建立,将有利于其在化学致癌作用机制研究及肿瘤预防领域的应用。

二氯乙酸对ras基因的DNA损伤作用

目的研究二氯乙酸(dichloroacetic acid,DCA)对ras基因的DNA损伤作用,探讨其致癌作用分子机制。方法制备各ras基因外显子单链探针;DCA染毒TK6细胞,提取基因组DNA,再经RDPCR扩增,扩增产物与探针杂交显色。结果成功制备各ras基因外显子单链探针,Southern杂交检测到DCA对N-ras基因外显子2和H-ras基因外显子2的DNA损伤片段杂交条带,未检测出其对N-ras基因外显子1和H-ras基因外显子1的DNA损伤作用。结论DCA可造成ras基因DNA损伤,可能与其致癌作用机制密切相关,属于遗传毒性物质。

康复新液治疗实验性胃溃疡的作用机制研究

目的:探讨康复新液对实验性胃溃疡大鼠的治疗作用及机制。方法:分别建立束水应激法致急性胃溃疡大鼠模型和乙酸灼烧法致慢性胃溃疡大鼠模型;将健康SD大鼠按体质量分层随机分为空白组、模型组、阳性对照组和康复新液高、中、低剂量组,空白组和模型组灌胃等体积纯水,康复新液各剂量组分别按20、10、5mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃康复新液原药;束水应激法试验中阳性对照组灌胃硫糖铝0.5 g·kg^(-1)·d^(-1),乙酸烧灼法试验中阳性对照组灌胃奥美拉唑2.09 mg·kg^(-1)·d^(-1);分别给药7 d和14 d。给药结束后,对束水应激法建模大鼠测定各组大鼠胃溃疡指数和胃黏膜形态学变化,Elisa法测定血清中5-羟色胺(5-HT)、肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)、胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)水平;对乙酸烧灼法建模大鼠检测胃组织形态学,试剂盒测定血清中总超氧化物岐化酶(T-SOD)、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)水平,胃组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和前列腺素E_2(PGE_2)的表达。结果:两种胃溃疡模型大鼠的胃黏膜均可见大面积溃疡点,病理检测显示胃黏膜缺损的溃疡样变化,提示模型成功。在急性胃溃疡试验中,与模型对照组比较,康复新液各剂量组大鼠血清中5-HT、TNF-α含量显著降低(P<0.05),GAS、MTL含量具有一定的升高趋势。在慢性胃溃疡试验中,与模型对照组比较,康复新液各剂量组大鼠血清中MDA含量显著降低(P<0.05),NO、T-SOD含量呈升高趋势,胃组织中VEGF、PGE_2含量均升高。结论:康复新液对急性和慢性胃溃疡大鼠均可改善胃黏膜损伤,作用机制与调节胃肠激素、改善胃黏膜血流量和抗氧化有关。

不同保藏方法对鲜天麻保鲜效果比较

为明确室温敞放、微孔膜密封、真空保藏对新鲜天麻的保鲜效果,本研究通过感官观察、称量计算、高效液相色谱法对天麻外观改变、水分散失及活性成分含量进行了检测。结果表明,室温敞放天麻的水分散失严重,外观较差,但其活性成分下降较缓慢;微孔膜密封保存能较好的维持天麻外观形态及自身特性;真空保存天麻容易发生腐烂变质,不能食用。在20 d内,以上3种方法保存的天麻中活性成分含量均高于药典要求含量。新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量较高,具有较高的食用或药用价值;在较低温度环境条件下,敞放或微孔膜封藏均能较好的保证其含量。

自噬在乌头碱诱导H_9C_2心肌细胞凋亡中的作用及机制研究

目的:观察自噬在乌头碱诱导H_9C_2心肌细胞凋亡中的作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:以0.05%、0.1%、0.2%、0.4%浓度的乌头碱分别对H_9C_2心肌细胞作用30、60、90、180 min,采用MTT法测定乌头碱对H_9C_2心肌细胞的增殖抑制作用;0.05%乌头碱作用H_9C_2心肌细胞不同时间后,应用MDC荧光染色观察自噬的发生,Hoechst 33342/PI荧光双染观察凋亡的发生;并通过Western blot法检测自噬相关蛋白LC3B、Beclin-1和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的变化。结果:乌头碱对H_9C_2心肌细胞增殖有显著的抑制作用,且该作用呈时间及浓度依赖性;MDC荧光染色和Hoechst 33342/PI双染检测结果显示乌头碱给药后可诱导H_9C_2心肌细胞发生自噬和凋亡;Western blot检测结果显示,自噬特异性蛋白LC3B和Beclin-1被激活,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达升高。用3-MA抑制自噬后,可下调LC3B、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达。结论:乌头碱能抑制H_9C_2心肌细胞的生长,并诱导其发生自噬和凋亡,此过程中自噬和凋亡可能为拮抗作用,3-MA特异性抑制自噬后可增加乌头碱诱导的H_9C_2心肌细胞凋亡。

不同类型杜仲雄花茶活性成分的含量测定

采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定杜仲雄花茶中总黄酮、绿原酸及京尼平苷含量,探讨不同原料生产的杜仲雄花茶活性成分含量差异。结果表明,杜仲雄花茶中总黄酮、绿原酸及京尼平苷含量分别为1.89%～6.22%、0.06%～2.81%、0.06%～2.09%;不同类型杜仲雄花茶中各类活性成分含量有所差异,以花朵为原料生产的杜仲雄花茶中总黄酮含量和绿原酸含量均为最高,以花蕊为原料生产的杜仲雄花茶中京尼平苷含量最高,发酵杜仲雄花茶中各类活性成分含量均偏低。本研究可为开发不同保健功能杜仲雄花茶提供理论依据,有利于进一步推动杜仲雄花资源的开发利用。

联苯胺对k-ras基因DNA损伤位点研究

目的在核酸序列水平定位检测联苯胺对k-ras基因的DNA损伤。方法联苯胺染毒TK6细胞,提取基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针,应用依赖随机化末端连接物PCR进行Southern blot杂交,对产物进行测序分析。结果联苯胺染毒剂量100μmol/L检测到较k-ras外显子2短的一条清晰的杂交条带,测序结果表明linker与k-ras外显子2的第66位碱基T发生连接。结论首次证实联苯胺可引起k-ras外显子2发生DNA损伤,该损伤位点位于k-ras外显子2的第65位碱基G,可能是联苯胺重要的致癌作用靶点。