灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫学相关性研究

目的:通过观察免疫细胞数量变化与肿瘤大小的关系,探讨灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫学机制。方法:取荷瘤(S180)小鼠40只随机分为生理盐水对照组、灵芝多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,剂量分别为400、200、100 mg/kg体重,每组10只,灌胃给药,每天一次,连续9天。采用血细胞分析仪计数血液中白细胞、淋巴细胞的数量;流式细胞仪检测T细胞亚群百分率;肿瘤称重后做病理石蜡切片,经HE染色,光镜下照相,形态立体计量学方法测量肿瘤组织中淋巴细胞的体密度。结果:灵芝多糖抑瘤率分别为37.85%(Ⅰ组)、45.67%(Ⅱ组)、17.98%(Ⅲ组),第Ⅱ组效果最好,P<0.01;灵芝多糖组血液中白细胞总数、淋巴细胞总数均高于对照组,第Ⅱ组增加最多,P<0.01;给药组CD4+/CD8+T细胞比值明显高于对照组,以第Ⅱ组为最高,P<0.01;肿瘤组织中淋巴细胞的体密度(%),给药组也高于对照组,仍以第Ⅱ组为最高,P<0.01。经相关分析发现,被检各项免疫学指标均与抑瘤率呈正相关趋势。结论:灵芝多糖可能通过促进荷瘤小鼠免疫细胞的增殖与分化,增加效应免疫细胞的数量,从而达到抗肿瘤作用。

黄连药材及葛根芩连方中黄连生物碱毛细管电泳分析

目的 :采用高效毛细管电泳法构建黄连药材及葛根芩连汤中黄连生物碱的指纹图谱。方法 :电泳缓冲液由 6 0 %的磷酸盐 (6 0mmol/L ,pH =7 0 )与 4 0 %甲醇组成 ;未涂层融硅毛细管 (5 4cm× 5 0 μm ,有效长度 32cm) ,分离电压 2 2kV ,进样 1s;检测波长 2 5 4nm ,温度 30℃。结果 :上述条件下 ,黄连 7个组分在 6min内得到很好的分离 ,方法学考察结果符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 (暂行 )》中有关规定。结论 :该方法具有良好的精密度 ,可作为控制黄连药材及葛根芩连制剂的内在质量标准。

三氧化二砷诱导线粒体通透性转变孔道开放的机制研究

背景与目的:线粒体通透性转变孔道(permeabilitytransitionpore,PTP)是线粒体释放细胞色素c和凋亡诱导因子的主要途径,亚砷酸盐可能通过PTP影响细胞凋亡,为了揭示其诱导PTP开放的机制,本实验研究了Ca2+介导的线粒体Ca2+释放(Ca2+-inducedCa2+releasefrommitochondria,mCICR)在As2O3介导的PTP开放及细胞色素C释放中的作用。方法:提取大鼠肝线粒体。通过紫外分光光度仪检测As2O3作用下线粒体的膨胀,测定线粒体PTP的开放状态;采用双波长双光束紫外分光光度仪检测As2O3作用下测试体系内Ca2+浓度的变化引起的吸光度值的变化,以反映线粒体Ca2+的转运(即mCICR)情况;Westernblot检测线粒体上清液中细胞色素c的含量,反映线粒体释放细胞色素c的情况。结果:10μmol/LAs2O3和低浓度Ca2+不能引起PTP开放和细胞色素c释放,10μmol/LAs2O3和高浓度Ca2+诱导PTP开放和细胞色素c释放;当抑制mCICR时,As2O3和Ca2+对PTP开放和细胞色素c释放的作用完全抑制。结论:As2O3介导的PTP开放和细胞色素c释放依赖于mCICR。

UFLC-MS/MS测定大鼠皮下及血液微透析样品中鬼臼毒素浓度

目的建立和验证一个测定大鼠皮肤下及血液微透析样品中鬼臼毒素浓度的超高速液相色谱-质谱联用（UFLC-MS/MS）方法。方法微透析样品中加入依托泊苷为内标,经乙酸乙酯液-液提取后进行UFLC-MS/MS测定。采用Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱（2.1 mm×50 mm,3.5μm）,柱温为室温,以乙腈-10 mmol/L乙酸铵（40∶60,V/V）为流动相,流速0.3 ml/min;质谱采用正离子模式和多反应离子监测方式进行检测。结果用于定量分析的离子对分别为m/z 432.7→397.3（鬼臼毒素）和589.5→229.5（依托泊苷,内标）,鬼臼毒素标准曲线线性范围为2.0~1000 ng/ml,最低定量下限及最低检测限分别为2.0 ng/ml和0.7 ng/ml。日内和日间精密度及准确度均小于15%。结论该方法灵敏度高、专属性强,可用于测定大鼠皮肤下及血液微透析样品中鬼臼毒素含量。

葛根芩连汤的HPCE指纹图谱研究

目的 采用高效毛细管电泳法 ( HPCE)建立葛根芩连汤的指纹图谱。方法 电解质溶液由 30 mm ol/ L磷酸盐和 4 0 m mol/ L硼酸盐组成 ,未涂层融硅毛细管 ( 6 5 cm× 5 0μm,有效长度 4 3cm ) ,分离电压 2 2 k V,进样 1s,检测波长 2 5 4 nm ,温度 30℃。结果 上述条件下 ,葛根芩连汤中 2 7个成分得到了较好的分离 ,方法学考察结果符合定量测定和定性研究的要求。结论 该方法具有较好的分离效果和良好的精密度 。

自动顶空-气相色谱-质谱法测定血液中乙醇含量

提出了自动顶空-气相色谱-质谱联用检测血液中乙醇含量的方法。取一定量的血样或乙醇标准样品置于顶空瓶中（其中各加固定量的叔丁醇作为内标）,在60 ℃及中速振摇的条件下平衡20 min,通过进样环定量地将一定量样品引入于气相色谱-质谱联用仪器中进行测定。乙醇和叔丁醇的保留时间分别为1.47 min和1.56 min。方法的线性范围为0.01-10.00 g·L-1,检出限（3S/N）为0.6 mg·L-1,测定下限（10S/N）为1.0 mg·L-1。乙醇的回收率在92%-105%之间,测定值的相对标准偏差（n=6）小于7%。

葛根芩连汤及微丸中葛根素、大豆苷元的HPCE分析

目的:建立高效毛细管电泳法分离葛根异黄酮并测定葛根芩连汤及微丸中葛根素和大豆苷元的方法。方法:以555.8μg·mL-1苄基三乙基氯化铵为内标,缓冲液由85%的硼砂(30 mmol·L-1,pH=9.2)与15%甲醇组成;未涂层融硅毛细管(52 cm×50μm,有效长度30 cm),分离电压18 kV,进样压力6.7 kPa,进样1 s;检测波长254 nm,温度30℃。结果:上述条件下,葛根芩连汤及微丸中葛根素和大豆苷元在8 min内得到很好的分离,葛根素和大豆苷元的加样回收率分别为99.75%和98.59%;RSD分别为2.0%和1.6%。结论:该方法具有良好的精密度和回收率,可为葛根制剂中葛根素及大豆苷元的含量测定提供参考。

可吸收性生物材料PCL在体外与动物体内降解机制的研究

检测了可吸收性生物高分子材料PCL在体外、动物体内的特性粘度[η]、数均分子量Mn及结晶度的变化；探讨该材料在体外与动物体内降解的机制。试验结果表明，降解速率与材料原始分子量无关，降解的临界数均分子量（Mn）。接近于5000；在该分子量以前材料以水解机制为主并伴有表面酶浸蚀机制，在该分子量以后则以浸蚀机制为主．失重明显，并用扫描电镜图片比较了材料浸蚀前后的表面形态．

广东省健康人群血液中34种金属元素含量及年龄差异分析

目的分析广东省不同年龄健康人群血液中34种金属元素[锂（Li）、铍（Be）、硼（B）、镁（Mg）、铝（Al）、钙（Ca）、钛（Ti）、钒（V）、铬（Cr）、锰（Mn）、铁（Fe）、钴（Co）、镍（Ni）、铜（Cu）、锌（Zn）、镓（Ga）、砷（As）、硒（Se）、铷（Rb）、锶（Sr）、锆（Zr）、钼（Mo）、银（Ag）、镉（Cd）、锡（Sn）、锑（Sb）、铯（Cs）、钡（Ba）、金（Au）、汞（Hg）、铊（Tl）、铅（Pb）、钍（Th）、铀（U）]的含量水平,为评价广东省人群体内金属元素状况和指导微量元素的补充提供依据。方法采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）对315例健康人血液进行检测,并对元素含量进行年龄差异分析。结果所测34种元素的线性关系均良好（相关系数r〉0.999 2）,方法的检出限为0.001-49.33μg/L,相对误差为0%-11.17%,相对标准偏差为0.76%-9.54%,其中有B、Mg、Ca、Ti、Fe、Cu、Zn、Se、Rb、Sr、Mo、Ag、Cd、Cs、Au、Hg、Pb、U共18种元素含量年龄差异有统计学意义。结论 ICP-MS法可行、有效,适用于血液样品中多元素ICP-MS的同时分析。部分金属元素含量因年龄有所不同,要根据不同年龄段的需求来合理控制元素的补充。

白藜芦醇通过影响线粒体膜电位诱导HepG2细胞凋亡

目的研究白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡的机制,探讨白藜芦醇诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位的变化。方法采用MTT法测定白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用,通过荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡,电子显微镜观察细胞超微结构的变化,用Rhodamine123和TMRE标记细胞线粒体膜电位(ΔΨ),并分别通过流式细胞仪和共聚焦激光扫描显微镜检测。结果低浓度白藜芦醇(≤25 μmol/L)对HepG2细胞的生长抑制作用不显著,而高浓度白藜芦醇(>25μmol/L)显著地抑制HepGZ细胞的生长,且呈时间和浓度的依赖性(F=18．532,P<0．05);流式细胞术分析显示,白藜芦醇能显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0．05);白藜芦醇能降低HepG2细胞线粒体膜电位。结论白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,白藜芦醇使HepG2细胞线粒体膜电位去极化,提示线粒体膜电位去极化在白藜芦醇诱导细胞凋亡的过程中起作用。

预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响

目的:研究预知子提取物(FAE)对大鼠前额皮层、海马、纹状体中去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)含量的影响,为明确FAE可能的抗抑郁机制提供理论依据。方法:设置溶剂对照组、艾司西酞普兰阳性对照组及FAE 25、50mg/kg处理组,成年雄性SD大鼠单次给予药物后1、2、3、5 h及连续给药21 d(亚急性)后收集不同部位的组织样品;所采集样品均采用高效液相-电化学检测法(HPLC-ECD)测单胺类神经递质含量。结果:急性给予FAE后3 h,前额皮层、海马的NA与5-HT、以及纹状体DA含量水平均升高;亚急性给予FAE后,其变化结果与急性给药3 h后的结果相似,但升高程度更为显著。结论:FAE能显著提高前额皮层、海马、纹状体部位的单胺类神经递质的含量,提示FAE的抗抑郁作用与改变单胺类神经递质含量水平密切关系。

自动顶空GC/MS测定血液中乙醇含量不确定度评定

目的评定自动顶空—气相色谱—质谱法(GC/MS)测定血液中乙醇含量的不确定度。方法从分析测量过程着手,依据不确定度评定的指导性文件,分析了不确定度来源,量化不确定度分量,计算检测结果的合成标准不确定度和扩展不确定度。结果血液样本两次测定结果平均值为0.738mg/mL的扩展不确定度为0.084mg/mL。结论血液中乙醇含量的不确定度主要来源于样品检测、乙醇标准溶液和标准曲线。

聚乳酸/甲壳素复合材料的制备及动物安全性评价

目的通过聚乳酸/甲壳素的复合,制备一种具有较好生物相容性和生物可降解性的组织工程支架材料。方法采用溶液法将两种材料进行复合,待溶剂挥发后成型。对此材料进行动物实验以评价其安全性。结果过敏实验结果显示,动物对复合材料浸提液反应与阴性对照没有明显区别,除阳性对照的豚鼠外,均未出现刺激反应;热原实验结果显示,在每种材料初试的3只新西兰白兔中,体温升高均在0.2 ℃以下,并且体温升高总度数在1.0 ℃以下,符合热源实验的评价标准。全身急性毒性实验显示,兔子在注射浸提液后,没有任何不安、焦躁或其它萎靡不振等不健康行为。结论聚乳酸/甲壳素复合材料在生物学评价实验中符合评价标准,可用作组织工程支架体的基质材料。

电喷雾电离质谱鉴定合成莱克多巴胺的副反应产物

采用电喷雾电离质谱(ESI MS)结合碰撞诱导解离 (CA)技术分析了合成莱克多巴胺 (Ractopamine)产品溶液中目标化合物和副反应产物。根据一级和二级质谱图确定了反应副产物的化学结构, 4种副产物分别为Ractopamine脱去水分子、再氢化及烃羟基甲醚化和乙醚化而形成的。质谱方法提供的分子量、分子结构信息对改进反应条件、减少副反应发生、提高产品收率具有指导作用。

高效液相色谱-质谱联用技术分析刺五加抗疲劳化学成分

刺五加粗提物经植化方法处理后,采用液相质谱(LC/MS/MS)联用技术进行分析。得到了LC/MS/MS联用的分析条件,取得较好分离效果,确定了数种已知及未知的化合物的所在部位。在其中一个部位,即11号样品中,发现5个已知成分和相对分子质量分别为302、318、346、354、390、406的6个未知成分。

葛根芩连方药中黄连总生物碱的含量测定

目的建立葛根芩连汤及其制剂中黄连总生物碱的含量测定方法。方法氧化铝柱纯化,紫外分光光度法350 nm处测定含量。结果葛根芩连汤水提物中总生物碱含量为32.4 mg/g,加样回收率为98.1 % (RSD =2.9%)。葛根芩连微丸中总生物碱含量为19.6 mg/g。结论该法测定黄连总生物碱方法简单、结果准确,可为葛根芩连微丸质量标准、葛根芩连方及其他含黄连的方剂中生物碱的含量测定提供参考。

葛根芩连方药中小檗碱、药根碱和巴马汀的高效毛细管电泳分析

目的以高效毛细管电泳法分离并测定葛根芩连方药中黄连生物碱。方法通过毛细管区带电泳法,以60%的磷酸盐(60 mmol/L,pH=8.0)与40%甲醇为缓冲液,苄基三乙基氯化铵为内标,紫外254 nm检测,分离并测定葛根芩连汤水提物及微丸中小檗碱、巴马汀、药根碱的含量。结果黄连中生物碱在6 min内得到很好的分离,小檗碱、巴马汀、药根碱的加样回收率分别为99.05%、98.70%和97.76%;相对标准偏差(RSD)分别为2.12%、1.85% 和1.95%。结论该方法具有良好的精密度和回收率,可作为黄连制剂的研究提供含量测定方法。

微孔杂交检测登革病毒及其分型方法的建立

目的建立特异、敏感、实用的登革病毒检测及分型方法。方法分析登革1￣4型病毒基因组序列,分别设计针对登革病毒1￣4型的特异性包被探针,扩增、克隆测序后包被聚乙烯微孔板。PCR上游引物5'端标记生物素,对待检样品进行扩增后用作检测探针进行微孔杂交(PCR-ELISA)反应,并通过设定不同的包被DNA浓度、包被时间、杂交温度、杂交时间,对PCR-ELISA反应进行优化。结果建立了快速、特异、敏感的登革病毒快速检测及分型方法,试验结果直观,阳性标本吸光度值在0.5以上,阴性结果吸光度值在0.1以下,S/N值在10以上。结论所建立的方法可用作登革病毒感染的早期诊断及分型。

以胶原为基质的组织工程支架材料的制备及组织相容性研究

目的制备一种以胶原为基质的组织工程支架材料,并研究其血液相容性及组织相容性。方法采用物理、化学及物理/化学方法对胶原材料进行交联。结果动态凝血试验显示,通过不同方法交联后的胶原材料,D(λ)值随着与血液接触时间的延长而下降,其中,通过碳化二亚胺交联得到的胶原在与血液接触相同时间后测得的D(λ)值最高;溶血率的数据表明,交联后的胶原材料溶血率均小于5%;血小板粘附与变形电镜照片显示,血液在3种材料表面均未引起血小板的变形,且粘附数量较少。结论3种交联法制备的胶原材料都有较好的血液相容性,材料表面细胞生长状况良好,表明材料具有良好的组织相容性。