线粒体DNA数目不同的人角质形成细胞模型的建立

该研究采用溴化乙锭(ethidium bromide,Et Br)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)进行诱导,采用RT-PCR法、MTT法和健那绿染色技术联合鉴定Et Br对HaCaT细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)拷贝数的影响,建立不同mt DNA拷贝数目的HaCaT细胞模型。结果显示,HaCaT细胞经100 ng/m L和50 ng/m L Et Br分别处理10 d后,细胞形态随着处理时间的延长发生改变,由规则铺路石形状逐渐变圆,某些细胞体积变小,成团生长,细胞膜边缘不光滑,且随着mt DNA数目的减少,细胞增殖速率明显下降。RT-PCR分析结果显示,与对照组相比,50 ng/m L和100 ng/m L Et Br处理10 d的HaCaT细胞中,mt DNA的拷贝数分别减少了52.9%和97.6%[以线粒体DNA脱氢酶1(mitochondrial NADH dehydrogenase 1 gene,ND1)与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的比值来表示mt DNA的相对拷贝数变化情况]。健那绿染色显示,对照组HaCaT细胞中可见分散存在的蓝绿色线粒体颗粒,100 ng/m L Et Br处理10 d后的HaCaT细胞中,显微镜下蓝绿色线粒体颗粒明显减少。综上所述,该研究证明了HaCaT细胞可通过Et Br诱导被成功培养成ρ–细胞,且Et Br浓度与HaCaT细胞mt DNA拷贝数的变化在一定的范围内存在着剂量–效应关系。