细胞外信号激酶蛋白5在卵泡刺激素介导的卵泡颗粒细胞甾体激素生成中的作用

目的研究细胞外信号激酶蛋白5(ERK5)在卵巢颗粒细胞甾体激素生成中的作用。方法采用Western blot检测在卵泡刺激素(FSH)刺激原代颗粒细胞甾体激素生成过程中ERK5的表达变化和激活情况,荧光共聚焦技术分析ERK5的亚细胞定位,腺病毒技术观察活化型ERK5和显性负性ERK5对颗粒细胞甾体激素生成的影响。结果 Western blot检测结果表明,FSH处理颗粒细胞后ERK5的表达随处理时间延长而下调,而ERK5活性形式的表达随处理时间延长而逐渐上升。荧光共聚焦技术分析结果显示,FSH的处理并没有明显影响ERK5在颗粒细胞中的定位。腺病毒技术观察结果发现,在细胞中联合感染活化型MEK5重组腺病毒和野生型ERK5重组腺病毒能促进FSH引起的细胞内StAR的表达升高和孕酮分泌,而显性负性ERK5重组腺病毒感染细胞则出现相反的效应。结论 ERK5可能促进了FSH介导的颗粒细胞甾体激素生成。

电信运营商采购管理研究

在对电信运营商采购管理现状进行分析的基础上,根据需求的不确定性和专业化程度,将采购产品和服务分为三类,并分析了不同类别产品和服务的采购管理的重点,采购部门、需求部门以及供应商发挥的作用以及彼此间的关系。最后从制度建设、信息平台建设以及人员培养三方面论述了采购管理的保障措施。

连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响

目的:研究与先天性白内障相关的连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响。方法:将野生型和携带S258F突变的Cx50编码区分别构建到pcDNA3.1myc/his真核表达载体上,通过体外转录获得相应的RNA产物,将RNA产物分别显微注射到1细胞期的斑马鱼胚胎,通过显微镜观察斑马鱼晶状体表型,并利用全胚原位杂交技术分析过表达野生型和突变型Cx50对晶状体标志基因Cx23表达的影响。结果:与野生型胚胎相比,S258F突变型Cx50过表达引起斑马鱼胚胎白内障表型,过表达野生型Cx50也引起白内障表型,但是畸形数量明显少于突变型,野生型和突变型Cx50的过表达均下调了Cx23的表达。结论:连接蛋白Cx50S258F突变体可引起斑马鱼白内障表型,提示Cx50的S258F突变体是造成先天性白内障的原因。

行业特色型高校开展“一带一路”科技合作策略研究

"一带一路"建设开启了我国对外开放的新阶段,开辟了科技合作的新方向、新领域。具有深厚的行业背景以及鲜明学科特色的行业特色型高校开展"一带一路"科技合作,有利于发挥学校在行业科技创新中的引领作用,有利于推动"一带一路"沿线国家相关行业的发展与进步。从行业特色型高校开展"一带一路"科技合作的现状以及问题出发,分析造成这些问题的原因,并从激发行业特色型高校的积极性,基于行业的"一带一路"科技合作统筹布局和前瞻性研究,建立多边协作网络等三个方面提出相应的实施策略。

停车难题:现状、原因及对策

停车难题在我国许多城市都已凸显出来。究其原因,主要是停车场的规划建设没有前瞻性;行政部门管理缺失;我国的法律法规政策缺失;价格机制无法起到有效调节供求的作用等。因此,政府应对停车难题引起高度重视,尽快制定配套的法律法规政策,加强停车场建设,大力发展停车产业,不断完善价格机制,提高既有停车场的利用率,有效调节供需平衡。

地方政府在综合交通枢纽供给中的职能定位

综合交通枢纽已经从单一的运输网点发展成为带动社会经济发展的"城市综合体",地方政府应该重新进行职能定位,把综合交通枢纽的供给作为重要的政府职能而进行科学规划和管理。具体来说,地方政府应成为综合交通枢纽微观层面规划的主导者和协调者,成为枢纽建设的投资主体和融资者,成为枢纽建设与运营过程中公平的市场竞争环境的创造者和监督者。

基于新区域主义的我国特大城市公共交通发展研究

伴随着城市区域化的发展趋势，我国特大城市交通也出现新的特点和问题，人们的通勤时间和通勤距离显著增加，甚至产生跨行政区的公共交通需求。新区域主义作为新型的区域治理理念，为我们解决特大城市交通和公共交通存在的问题提供了有力的理论指导。本文结合新区域主义强调地区之间的合作，不对区域范围做硬性界定，强调区域的个性化发展，强调区域综合目标而非单纯经济目标的实现，强调公平与可持续发展等社会综合目标实现的观点。探索新区域主义理论在我国特大城市公共交通发展中的应用．为我国城市交通的良性发展提供了新的理论支持。

继承晋商文化 推动山西经济发展

文化对区域经济的发展有着深刻的影响。文章对晋商文化作了提炼与概括,认为诚信、创新、共赢、勤奋进取是该文化的精髓。晋商文化的精髓是当代企业经营管理的宝贵精神财富。这些文化精髓在当代新晋商中相对缺乏,因此当代新晋商应继承、运用这些文化精神,推动山西经济发展。

CO2激光灸耐受温度及耐受时间的初步观察

目的:观察小功率CO2激光灸重复照射足三里穴时耐受温度与耐受时间的变化规律,为CO2激光灸的临床广泛应用提供实验支持。方法:应用Powerlab多导生理记录仪记录10.6μm CO2激光灸重复照射8次时的30名健康人右、左足三里穴的耐受时间与耐受温度,并与温和灸重复熏灼8次的每次结果进行对比分析。结果:温和灸两侧足三里穴耐受温度均随温和灸重复熏灼次数的增加而逐渐升高,而耐受时间均随温和灸重复熏灼次数增加而逐渐降低;CO2激光灸左右侧足三里穴耐受温度随重复照射次数的变化不大,而耐受时间随重复照射次数的增加而增加。与温和灸相比,CO2激光灸各次重复照射时的耐受温度均显著小于温和灸(P<0.01),耐受时间显著短于温和灸(P<0.01)。结论:本试验所用CO2激光灸照射面积过小,功率密度偏大,应采用散焦等办法降低CO2激光束的功率密度。

太原市可持续交通发展策略研究

针对太原市社会、经济、交通现状提出发展可持续交通的思想,并从交通管理体制、制定交通规划以及具体措施几个方面提出相应的策略以求交通发展能满足当代人和后代的交通需求,实现与资源、环境的协调发展。

黑龙江省不动产登记疑难问题的思考——以佳木斯市为例

做好不动产统一登记工作对明晰不动产权属、保障交易市场安全有着重大意义,是政府高效管理不动产市场的基础。黑龙江省在实施不动产统一登记工作过程中,许多疑难问题逐步凸显,解决疑难问题对做好不动产登记具有很强的现实意义。本文采用案例分析法,在实地调查、文献研究的基础上,以佳木斯市为研究区,分析黑龙江省不动产统一登记的现状及存在问题的种类和原因,并结合《物权法》等法律法规及外省市先进经验,对现存问题提出具体、合理的建议,为黑龙江省解决不动产统一登记问题提供参考。

亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的机制研究

目的探究亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的分子机制。方法利用5μmol/L亚砷酸钠处理HEK293ET细胞,收集细胞样品,利用实时定量PCR(Q-PCR)检测p66Shc转录水平,Western Blot检测Sirt1的蛋白表达;利用Sirt1siRNA和对照siRNA分别转染细胞,随后5μmol/L亚砷酸钠处理细胞,收集细胞样品,Western Blot检测亚砷酸钠对Sirt1和p66Shc蛋白表达的影响。结果与对照组相比,5μmol/L亚砷酸钠处理组p66Shc转录水平显著升高(P<0.001),Sirt1蛋白水平显著降低(P<0.001)。Sirt1siRNA转染能够抑制细胞Sirt1的表达。亚砷酸钠处理后,Sirt1siRNA转染组Sirt1的表达与对照siRNA转染组相比显著降低(P<0.001),p66Shc的表达显著升高(P<0.001)。结论亚砷酸钠可能通过抑制Sirt1的表达上调p66Shc的表达。

3种从猪精液中提取病毒核酸方法的比较

试验分别以猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作为猪DNA、RNA病毒的代表,通过添加法制备带毒精液,采用样品前处理联合试剂盒硅基质柱纯化法(简称柱纯化法)、优化TRIzol方法(简称TRIzol法)和国外文献方法(简称文献法)分别对带毒精液进行核酸提取,用实时荧光定量RT-PCR或PCR比较不同核酸提取方法的效率。结果显示,柱纯化法提取的病毒核酸的检测灵敏度达到最高,对PRRSV及PRV带毒自然精液、商品化稀释精液的检测低限分别可达1.26和0.13TCID50/mL。柱纯化法全程包括精液的前处理和核酸提取可在1h内完成,与文献法所用时间相当,比优化TRIzol法缩短0.5h。本试验优化了适用于从猪自然精液和商品化稀释精液中高效提取病毒核酸的方法。

吡虫啉对大鼠卵巢颗粒细胞孕酮合成的影响

目的探究新烟碱类杀虫剂吡虫啉(IMI)对大鼠卵巢颗粒细胞孕酮合成的影响。方法使用不同浓度(0、100、200、500、1000μmol/L)的IMI分别处理大鼠卵巢颗粒细胞48 h,收集细胞及细胞培养液上清,电化学发光法检测孕酮和雌二醇(E_(2))水平;Western Blot法检测IMI处理后颗粒细胞孕酮合成关键酶甾体激素合成急性调节蛋白(StAR)的相对表达量;使用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002与1000μmol/L IMI共处理颗粒细胞48 h后,收集细胞培养液上清检测孕酮水平。结果IMI处理大鼠卵巢颗粒细胞48 h,与对照组相比,随着IMI浓度的增加,细胞培养上清液中孕酮水平呈剂量依赖性增加(P<0.05),E_(2)水平无显著变化(P>0.05);Western Blot结果显示,与对照组相比,不同浓度的IMI处理颗粒细胞48 h后,StAR蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.01)。PI3K/AKT通路抑制剂LY294002与1000μmol/L的IMI共处理颗粒细胞48 h后,与对照组相比,LY294002显著降低颗粒细胞基础孕酮的合成水平(P<0.01);与IMI共处理能显著抑制IMI刺激孕酮合成的效果(P<0.001)。结论IMI影响大鼠卵巢颗粒细胞孕酮的合成,其机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活有关。

N-乙酰半胱氨酸抑制亚砷酸钠诱导心肌细胞凋亡和自噬作用的研究

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制亚砷酸钠诱导H9C2细胞凋亡和自噬作用及机制。方法:用亚砷酸钠诱导H9C2细胞构建凋亡和自噬模型。采用CCK-8比色法检测细胞的存活率,Hoechst 33258核染色法观察凋亡细胞的形态和数量改变.双氯荧光素染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western Blot法测定蛋白P53、Bcl-2、Bax及LC3的表达水平,以及磷酸化ERK1/2蛋白及ERK1/2蛋白总量的表达水平。结果:与对照组相比,15μM亚砷酸钠处理的H9C2细胞存活率显著降低.细胞内ROS水平明显增加.凋亡细胞数量明显增多,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值明显增大(P<0.01)。1 mM NAC预处理后显著减少H9C2细胞内ROS的生成和促凋亡蛋白P53和Bax的表达,诱导抗凋亡蛋白Bcl-2表达升高,同时降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ的比值。亚砷酸钠处理诱导ERK1/2蛋白磷酸化(P<0.01),而NAC和亚砷酸钠共处理抑制了ERK1/2蛋白的磷酸化。结论:亚砷酸钠降低H9C2细胞的存活率,增加细胞内ROS的生成,诱导细胞凋亡和自噬。NAC通过降低H9C2细胞内的ROS水平和抑制ERK1/2蛋白的磷酸化拮抗亚砷酸钠诱导的细胞凋亡和自噬。

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan~荧光PCR检测的建立

目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应，牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应，对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应。两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝，对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞。对临床样品的检测结果显示，荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞。所建立的方法，全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测，可在5～6h内完成。采用上述荧光PCR方法从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品。

多重PCR-变性高效液相色谱法快速检测结核致病菌群并同步鉴别致病菌种

本研究旨在运用多重PCR联合变性高效液相色谱(DHPLC)技术原理,建立快速检测人兽结核致病菌群并鉴别主要致病菌种的新方法。建立了四重PCR-DHPLC方法,可同时检测结核分枝杆菌复合群(MTC)特异的IS6110和IS1081插入序列、结核分枝杆菌特异结构基因和牛分枝杆菌特异结构基因共4个目标基因。采用13种分枝杆菌标准菌株和分离株以及23种常见微生物样品进行特异性试验,采用纯化标准菌株DNA以及克隆了扩增序列的重组质粒DNA进行检测灵敏度试验,采用从临床疑似发病牛群采集的牛组织样品进行临床检测试验,并与细菌分离培养方法进行比对。结果表明:所建立的多重PCR-DHPLC方法能特异检测MTC并准确鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌,而对其它11种分枝杆菌以及23种常见微生物样品均呈典型阴性检测结果;检测灵敏度达到每个反应102～103基因拷贝或3.6～6.8fg DNA模板浓度。采用该法从39份临床疑似样品中检出33份MTC阳性并检出其中28份为牛分枝杆菌阳性,而培养法检出21份阳性样品。采用该法临床检测全程可缩短至1d之内,其中对纯化DNA样品的检测分析可在2h内完成。本研究为人兽结核致病菌(群)的快速检测鉴别提供了新型分子生物学方法。

实时荧光定量PCR检测鸡传染性贫血病毒方法的建立

建立了Taqman实时荧光定量PCR方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)。选取CAV病毒的序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有CAV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×105～2.0×102个拷贝,4个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为200个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、禽白血病病毒和马立克病毒核酸都没有扩增反应。采用实时荧光定量PCR方法检测试验感染鸡的肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、法氏囊、泄殖腔棉拭子等样品,所有检测样品都有"S"型扩增曲线,且荧光信号值高。实时定量PCR检测CAV的方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在禽病的快速检测上具有重要意义。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均<10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。

实时荧光定量RT-PCR检测禽白血病病毒方法的建立与应用

建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测禽白血病病毒（ALV）。选取ALV病毒的LTR序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有ALV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。阳性标准品在3.0×102~3.0×107个拷贝共6个数量级的范围内,定量PCR反应有＂S＂型扩增曲线,检测灵敏度最低为30个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对新城疫病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、传染性囊病病毒、鸡传染性贫血病毒和马立克病病毒核酸都没有扩增反应。实时定量PCR检测ALV的方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在禽病的快速检测上具有重要意义。