CD163双等位基因编辑猪的制备及传代

【目的】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称"蓝耳病",是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种高致死性传染病,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。由于PRRSV遗传变异性较大,因此国内外并未有理想疫苗能够对此病进行有效防制。Cluster of differentiation 163(CD163)是PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的受体之一,研究旨在利用CRISPR/Cas9技术结合体细胞核移植技术制备CD163基因编辑的大白猪。【方法】针对猪CD163基因的第7外显子设计构建CRISPR/Cas9基因编辑载体;转染大白猪胎儿成纤维细胞,获得基因编辑阳性细胞克隆;以基因编辑细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎;胚胎移植到受体母猪生产CD163基因编辑猪,并进行后续的扩繁试验。【结果】设计的g RNA能够高效的识别靶位点。对获得的127个细胞单克隆进行PCR和测序显示,共有21个克隆发生突变,其中14个克隆为单等位基因突变或双等位基因杂合突变,7个克隆为双等位基因纯合突变。通过体细胞核移植技术,成功获得了CD163双等位基因编辑的纯合大白猪;并获得首批F1代CD163基因编辑仔猪,目前健康状态良好。随后将有更多的F1代CD163基因编辑猪陆续出生。【结论】制备的无抗性筛选标记的CD163双等位基因编辑猪,能够安全并快速地为培育抗PRRSV新品种猪提供育种材料。

脂肪决定肉品质,脂肪酸也可以让血管更畅通

随着我国居民生活水平的提高,肉类消费逐渐成为食品消费的主流,且人们对高品质健康肉类的需求越来越高。本文从健康的角度出发,介绍了脂肪对猪肉品质的影响,以及不饱和脂肪酸对人类心血管的保护作用,最后探讨了如何通过基因修饰技术来改善猪脂肪酸的组成和比例,为人们提供更加健康的肉类。

猪卵胞浆内单精子显微注射(ISCI)技术的研究进展

卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术集显微操作技术与体外受精于一体,先后在人和多种家畜动物上成功获得后代,并且被广泛应用于人类辅助生殖、动物性控胚胎制备、转基因动物生产和哺乳动物受精机制等方面的研究。文章以猪为研究对象,综述了猪ICSI技术的研究现状、影响因素及其存在的问题。

CRISPR/Cas9介导的猪IPEC-J2细胞CD13基因敲除细胞系的建立

旨在利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术制备CD13基因敲除的IPEC-J2(猪空肠上皮细胞系)细胞,揭示细胞表面分化抗原13(cluster of differentiation 13,CD13)在肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用。本研究在猪CD13基因第2外显子区域设计2个向导RNA(guide RNA,gRNA),命名为g3、g5,然后分别将g3和g5克隆到pX330-GFP和pX330-RFP载体骨架上,电转染IPEC-J2细胞,48 h后通过流式细胞术分选具有双荧光标记的细胞,培养并获得单克隆细胞,PCR扩增、测序,从而获得CD13基因纯合敲除的阳性细胞系。对获得的20个细胞单克隆进行PCR,并挑取部分克隆PCR产物测序,发现共有7个克隆发生了基因片段缺失,其中1个克隆为单等位基因片段缺失,3个克隆为双等位基因杂合片段缺失,3个克隆为双等位基因纯合片段敲除。本研究检测双等位基因纯合片段敲除细胞的蛋白表达水平,其结果显示,在该纯合敲除细胞中CD13蛋白几乎不表达,表明成功构建了CD13敲除的IPEC-J2细胞系。本研究获得的CD13基因敲除细胞系为探究CD13在猪肠道病原微生物感染肠道细胞中所起的作用奠定了基础。

小鼠Wip1基因的表达及其对受精能力的影响

本研究旨在探讨Wip1基因的表达及其对精子受精能力的影响,为阐明Wip1基因对雄性繁殖的影响提供新的着眼点。选取相同饲养环境、同一遗传背景的8周龄左右的野生型雄鼠,利用实时荧光定量PCR技术检测Wip1基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织及雄性生殖器官中的表达情况,利用免疫荧光技术检测Wip1蛋白在睾丸组织及精子细胞中的分布情况。以Wip1敲除型雄鼠为试验组,野生型雄鼠为对照组,利用ELISA试剂盒检测两组小鼠血清中睾酮水平;通过体外受精试验比较两组的2-细胞率及囊胚率。结果显示,Wip1基因mRNA在野生型雄鼠各组织中广泛表达,且在雄性生殖器官中表达量较高,其中睾丸中表达量最高,附睾体、附睾头、附睾尾次之;Wip1蛋白主要定位于睾丸组织中的长形精子细胞及附睾成熟精子细胞的头部。ELISA检测结果发现,与野生型雄鼠相比,Wip1敲除型雄鼠血清内睾酮含量极显著下降(P<0.01)。体外受精结果表明,Wip1敲除后2-细胞率及囊胚率均极显著下降(P<0.01)。结果表明,Wip1基因敲除能够引起雄性小鼠受精能力降低,这可能与Wip1基因在精子发生过程中发挥作用相关。

PNPLA5基因敲除对大鼠睾丸形态学及精子运动能力的影响

旨在研究PNPLA5基因对雄性大鼠繁殖性能的影响。本研究以PNPLA5敲除型雄性大鼠(KO)为试验组,野生型大鼠(WT)为对照组,分别饲喂普通饲料,并采集大鼠附睾精子及睾丸组织。利用繁殖试验检测配种后雌鼠的妊娠率及平均产仔数,精子运动性能分析检测精子运动能力,Western blot检测精子中线粒体功能相关细胞色素C(cytochrome C,Cytc)与细胞色素C氧化酶亚基IV(cytochrome c oxidase subunit IV,COX IV)的表达水平,HE染色检测睾丸组织形态。结果表明:与野生型雄性大鼠相比,PNPLA5敲除型雄鼠与野生型雌鼠配种后,雌鼠的妊娠率极显著下降(P<0.01);精子的曲线运动速度显著降低(P<0.05)及渐进运动精子的百分率极显著降低(P<0.01);PNPLA5敲除型大鼠精子中细胞色素C表达量下调,细胞色素C氧化酶亚基IV表达量上调,但差异均不显著(P>0.05);PNPLA5基因缺失引起大鼠睾丸组织结构疏松,曲细精管中各阶段生精细胞排列紊乱,上皮细胞脱落至管腔。综上表明,本研究发现PNPLA5基因敲除能够引起雄性大鼠繁殖能力降低,为家畜繁殖研究提供重要的参考依据。

PMF模型的影响因素考察——以某铅锌矿周边农田土壤重金属源解析为例

正定矩阵因子分解模型(PMF)可用于污染源未知情况下的土壤中重金属来源解析,但对数据样本敏感,结果波动大。为探究PMF模型对土壤重金属源解析的适用性,本研究以湖南省水口山铅锌矿周边农田土壤为研究对象,考察成分谱元素种类和异常值剔除两个因素对PMF模型解析结果的影响。根据成分谱中有无地壳元素和是否剔除异常值,建立4种数据样本,对PMF模型结果进行比较分析。结果表明:根据散点图剔除2个异常样本后未改变分类结果,仅改变各源贡献率;引入6种地壳元素后PMF模型的源轮廓(源数量和贡献元素)均发生变化。在成分谱中增加地壳元素后,源解析结果受异常值影响小,结果更稳定且容易解释。因此,应将地壳元素引入成分谱并对数据进行预处理,可较好地保证源解析结果的稳定性和可信度。结合文献和该地区实际情况对模型结果进行解读,最终确定5个来源:Pb、Zn、Cd和Sb主要来自铅锌矿的采选及冶炼等工业活动源(26.81%),As和Hg主要来自污水灌溉和农药化肥施用等农业活动源(14.68%),Cr、Ni、Co和Mo主要来自土壤母质源(24.41%),Mn和Fe主要来自铁矿石开采和交通运输源(16.39%),Al和Ca主要来自矿石风化源(17.72%)。

铝电解槽换极附加电压策略优化的工业试验

换极是现代铝电解工业的必要操作之一,新换冷极对电解槽的热场、电场和磁流体稳定性造成巨大冲击。针对电解企业中换角部极后阳极电流恢复速率小于中间极的状况,本文在数值模拟分析的基础上提出对角部极和中间极采取不同换极附加电压策略的方案,并在某电解企业进行了工业试验。相对于换中间极,本文提出两种针对角部极的附加电压调整策略以提高换极期的热收入,分别为提高换极附加电压幅度和延长换极附加电压时间。工业试验结果表明这两种策略均能有效提高角部极的电流恢复速率,其中以延长换极附加电压时间的方案效果更佳。

碳渣浮选再生冰晶石技术的改进与应用

阐述了综合利用碳渣浮选再生冰晶石,通过不断摸索和改进,最终实现碳渣利用最大化,既解决了危险固体废弃物处置问题,又减少了电解质块的使用,降低了生产成本,具有环保和经济双重效益。

氧化铝产品碱含量控制措施

氧化钠是氧化铝中的主要杂质,本文探讨了氧化钠对铝电解质成分及生产成本的影响,重点介绍了在氧化铝生产过程中,氢氧化铝的分解和过滤洗涤两道工序中如何降低氧化钠的含量。

电解铝生产中烟气处理与余热利用探讨

电解铝这个过程本身的能量利用率不高,再加上烟气也会带走相当一部分的热量,从而导致损失的热量较多,因此,我们要尽可能地将烟气所带走的热量回收利用,以达到节能环保的目的。本文则通过详细的分析电解铝生产过程中产生的烟气特点,论述了如何尽可能地充分利用烟气余热这部分的能量,以期将来得到更好的发展。

双塔交叉吸附工艺在金属镓生产中的应用

本文阐述了在离子交换法生产金属镓工艺中,采用双塔交叉吸附技术,改变离子交换树脂吸附工艺和树脂运行方式,提高饱和树脂容量,提高树脂吸附率和解吸率,从而提高了金属镓的产量,达到增产降本的目的。

《文选集释》骚卷引书脱文考辨九则

清代是文选学研究的繁盛期,朱珔《文选集释》是清代研究《文选》集大成著作之一。《文选集释》重征实、详训诂、考名物、精校勘。然详考该书骚卷(第十八、十九卷),发现其征引文献时脱文较多。今列出有明显疏漏的九则加以考辨,以求有益于《文选集释》的文献校勘与整理。

山西兆丰铝冶有限公司240KA预焙槽通电焙烧启动技术及后期管理

兆丰铝冶240KA预焙槽于2003年9月份初二期工程已全部投入运行。2004年8月份三期78台槽也准备通电焙烧,我们在二期焙烧启动技术的基础上,取长补短,吸取经验教训,三期现已有24台槽投入生产,生产运行较二期运行平稳。本文对该槽型三期所采用的焦粉焙烧启动技术应用于实践效果进行介绍。该技术具有升流快,冲击电压低,焙烧过程阴阳极电流分布均匀,操作简单,启动平稳等特点。

三期电解槽二次焙烧启动经验

山西兆丰铝冶有限公司，位于山西阳泉矿区贵石沟新区，由山西阳泉煤业（集团）有限责任公司和香港莫兆记集团有限公司合资兴建。公司1994年成立，1996年正式投产，现有电解铝生产规模12万吨，从业人员1000余名，资产总额9．4亿元，全部达产后年综合工业产值将达20亿元。公司主要生产重熔铝锭、电工圆铝杆、铝型材、铝合金，其中“兆丰牌”重熔铝锭为山西省优质产品和名牌产品。

电解铝供电系统的节能措施分析

随着社会的发展,人们的节能环保意识也越来越强,每一个行业都做出了努力。电解铝供电系统作为一个高耗能行业,更应该 加强节能环保的意识。近年来,国家把节能工作当作企业考核的的一项重要的内容,电解铝是一项高耗能的项目,企业需要按照自身的特 点来合理的规划和应用节能技术。

大型预焙铝电解槽大规模停槽与二次启动的研究

通过对电解槽停槽后进行了一系列保温措施、通电前对电解槽侧部、底部进行修补、制定合理的焙烧启动方案、加强二次启动槽的后期管理，成功的实现了二次启动槽的达产、达效，为公司节约了大量的资金。

240kA铝电解系列在线磁场补偿优化实践与分析

在系列正常生产的情况下,某公司利用增设外补偿母线的方案,对整个系列电解槽磁流体进行优化升级。补偿母线投入使用后,电解槽稳定性显著提升,技术经济指标明显改善。表明本优化升级项目的技术方案、施工方案等都是成功的,达到了预期的技术目标。但实践也表明,本技术的使用也存在一定的局限性,本文也进行了分析。

争当山西铜链主企业 引领山西铜产业发展

9月21日,省委书记林武深入中条山集团进行调研,历史、客观、辩证地对中条山企情进行深入分析和把脉,为中条山集团铜产业高质量发展指明前进方向。铿锵话语鼓舞人心,使命任务催人奋进。中条山集团将把学习宣传贯彻党的二十大精神,与企业中心工作紧密结合起来,提升战略思维,明晰发展思路,本着对党负责、对企业负责、对全体干部职工负责的态度,力争把各项目标推进好、实现好。