从乙肝到新冠,抗击病毒三十载,初心犹在——记重庆医科大学校长黄爱龙教授

1.HBV cccDNA的合成与转录调控机制研究取得多项原创性成果。国家一直从战略层面高度重视病毒性肝炎和肝癌的防治研究。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)在肝细胞核内持续稳定的存在,被认为是HBV感染慢性化、抗病毒治疗无法清除病毒以及停药后肝炎复发的最主要原因。

腺相关病毒基因治疗在肝脏疾病中的应用及展望

腺相关病毒(AAV)载体基因治疗在多个临床试验中已被证明安全有效。近期,靶向肝脏的AAV载体治疗血友病的临床研究备受关注,为改善凝血功能障碍提供了有效策略。然而,外源基因导入可能导致肝损伤等不良反应,基因治疗的长期风险尚不明确。本文重点探讨AAV载体在血友病基因治疗的应用,总结其在多种肝脏疾病中的应用价值,并提出针对潜在风险的控制措施。

低分子量肝细胞生长素制备工艺研究

本文报道以乳猪肝脏为原料,采用加热、蛋白酶降解和超滤等手段,分离纯化低分子量肝细胞生长素(HPN,M.W.<10KD)的生产工艺.并对有关处理方法及其理化特性进行了初步的研究.经药效学研究证实,该制品能特异性地刺激肝细胞生长,具有保护肝脏、对抗肿瘤坏死因子的作用;另经毒理药理实验证实,该制品安全可靠,无任何毒副作用.因此。

鸭子α-干扰素基因表达及多样性分析

目的 :采用分子杂交及PCR方法 ,分析鸭α 干扰素基因的表达及多态性。方法 :从鸭外周血分离出的单核细胞在体外经PHA(5 μg/ml)刺激不同时间后 ,提取总RNA。以RT PCR方法检测鸭α 干扰素 (DuIFN α)mRNA表达状况。引物根据最近公布的DuIFN α基因序列设计。从鸭外周血单核细胞中提取的基因组DNA经限制性内切酶BamHI,HindIII,PstI,XbaI消化后 ,以公布的DuIFN α序列为探针 ,采用Southern杂交分析DuIFN α基因的多样性。结果 :在未经PHA刺激的鸭外周血单核细胞 (PBMCs)中 ,未检测到DuIFN α表达 ;PHA刺激 4h后 ,即可检测到DuIFN α表达 ,一直持续到 2 4h。基因组DNA限制性内切酶多态性分析表明 ,PstI酶切后 ,出现片段大小各异的杂交信号 ,提示DuIFN α存在多样性。结论 :鸟类α 干扰素基因与哺乳动物类似 。

重型肝炎患者血清HCVRNA的“巢式”PCR研究

采用逆转录和“巢式”PCR技术检测36例重型肝炎患者血清中丙肝病毒RNA,发现7例慢性重型肝炎检出3例(43%),28例亚急性重型肝炎中检出19例(68%),急重肝1例为阴性,HCVRNA阳性率平均为61%,因此丙肝病毒感染可能和肝炎的重症化有密切关系。HCVRNA(+)组乙肝病毒复制率较HCVRNA(-)组低,可能提示丙肝病毒在体内能干扰乙肝病毒的复制。单纯HCV感染或HCV合并HBV感染重肝患者的病死率明显高于仅由HBV引起的重型肝炎,表明感染HCV后,预后较差,易于慢性化。

乙型肝炎发病机理的研究进展

经过多年研究,乙型肝炎免疫发病原理的一些概念已为大家所普遍接受。其一为乙型肝炎病毒(HBV)对肝细胞不是直接致病性的,其二为急、慢性肝炎患者体内程度不等的肝细胞坏死系由机体对病毒抗原免疫应答的结果。上述假说的主要根据为免疫抑制的患者及新生儿的肝内有活跃的病毒复制且不伴明显的肝损害。但是近年来在实验室及临床上有些发现提示HBV有直接致病的可能性,如Chisari在转基因小鼠研究中发现小鼠肝内有大量含前S的大分子包壳蛋白表达,虽然这种小鼠对HBV呈免疫耐受,仍可导致肝细胞坏死。

乙型肝炎病毒核心抗原在大肠杆菌中的表达研究

本文报道采用高效表达载体PBS(tac启动子)在大肠杆菌(E·coli)中表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的方法.重组质粒在异丙基一硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下,其表达效率提高近1000倍;经溶菌酶—SDS破壁、DNase处理后,离心上清液中含有大量HBcAg.通过对IPTG诱导浓度、诱导时间及细菌起始诱导浓度等因素的研究.我们找到一系列高效表达HB-cAg的条件,表达滴度高达1:25600。

顺式串联双拷贝DuIFN—γ基因的真核表达

目的：以鸭γ－干扰素（DuIFN-γ)基因为目的基因，研究同一启动子调控下，不同拷贝数的目的基因的表达状况。方法：采用基因重组技术构建含DuIFN-γcDNA单拷贝和双拷贝重组质粒并转入真核细胞COS－7中进行表达。DuIFN-γ活性采用Griess试剂检测。结果：双拷贝重组质粒和单拷贝重组质粒50％最大活性稀释度分别为1：320和1：160。双拷贝重组质粒转染上清稀释10240倍后，仍保留DuIFN-γ活性，而单拷贝重组质粒转染上清经1280倍稀释后，即丧失活性。结论：在同一启动子作用下，顺式插入双拷贝目的基因可明显增强目的基因在真核细胞中的表达量。

乙肝表面抗原清除新策略

病毒表面抗原清除是慢性乙型肝炎功能治愈的主要指标。目前,功能性治愈慢乙肝已成为有望达成的目标。但是,要达到较高的功能治愈率,仍需要发展有别于现有治疗手段的抗乙肝新策略。围绕乙肝表面抗原清除这一目标,本文对现行治疗新策略研究作了简要归纳总结。

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性。方法 18只健康雄性Wistar大鼠 ,取 3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂 ,观察对心肌组织显微结构的影响。将另 15只急性心肌梗死 3天后的雄性Wistar大鼠分为 3组 ,每组 5只。第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式 ,将pcD2 VEGF12 1基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影 (约 6min) ;第二组尾静脉输入同等剂量携pcD2 VEGF12 1基因的造影剂 ;第三组为对照。 2周后 ,取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色 ,观察心肌组织血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白表达情况。结果 超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血 ,产生大量空泡 ,并有部分心肌细胞坏死。采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染 ,能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达。结论 超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应 ,其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。

多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb/c小鼠引起的免疫应答

目的 观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法 在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体 (pQ ELP)的基础上 ,以亲和层析法纯化重组蛋白 ,SDS PAGE鉴定 ,Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白 (A组 )及ELP重组蛋白加弗氏佐剂 (B组 )免疫Balb c小鼠 (10只 组 ) ,以生理盐水 (NS组 )作对照。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG2b水平。双抗体夹心ELISA试剂盒检测免疫鼠脾脏单个核细胞 (PMNC)在受到特异抗原刺激后 ,产生IL 4、IL 12和IFN γ的能力 ,3H TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增殖能力。结果 本研究成功获得高纯度重组蛋白ELP。首次免疫后 2周 ,A、B组小鼠均产生了大量的特异IgG1抗体 ,B组还产生了少量的特异IgG2b抗体。除B组小鼠脾PMNC产生了微量IFN γ外 ,A组、NS组IFN γ及各组IL 4和IL 12均未检出。A、B组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高 ,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的 2 .8和 10 .8倍 ,受到多房棘球绦虫抗原或刀豆素刺激时 ,A、B组淋巴细胞增殖更明显。结论 多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗可引起很强的体液免疫应答和微弱的细胞免疫应答 。

男男性接触者焦虑与抑郁症状的相关性及其与艾滋病高危性行为的关系

目的探讨男男性接触者(MSM)焦虑与抑郁症状的相关性,以及焦虑、抑郁、焦虑和抑郁共病与艾滋病相关行为特征的关系,为该人群的艾滋病行为干预提供依据。方法以非随机抽样方法招募研究对象,用焦虑自评量表(SAS)和流调中心抑郁量表(CES-D)对MSM进行焦虑和抑郁症状的评定。根据量表结果将研究对象分为焦虑组、抑郁组、共病组和焦虑抑郁阴性组,比较焦虑组、抑郁组和焦虑抑郁共病组艾滋病相关行为的差异,并通过典则相关分析焦虑组和抑郁组各症状的相关性。结果共调查了854名MSM,焦虑和抑郁的检出率分别为31.97%(273/854)和45.55%(389/854),焦虑抑郁共病者占27.28%(233/854)。差异分析结果显示焦虑、抑郁患病状况以及焦虑抑郁共病与户口、文化程度、性取向以及性病史这4个人口学特征相关(P<0.05);女性性伴数、最近6个月通过互联网寻找性伴的频率以及最近半年是否提供或得到商业性性服务这3个艾滋病相关行为特征与焦虑、抑郁患病状况以及焦虑抑郁共病相关(P<0.05)。焦虑和抑郁两组症状的典则相关分析表明,焦虑量表中的焦虑和恐慌(Y1)、身体控制(Y3)和肠胃相关感(Y4)与抑郁量表中的抑郁情绪(X1)和躯体症状(X3)正相关;焦虑量表中的前庭感觉(Y2)与抑郁量表中的积极情绪(X2)正相关,与文化程度(X6)负相关。结论 MSM中,焦虑、抑郁问题普遍存在,焦虑症状与抑郁症状之间存在高度相关,其共病现象较严重,并与MSM的艾滋病相关行为特征关系密切。

中国西部地区男男性行为人群艾滋病相关知识及行为调查分析

目的:中国西部地区男男性行为人群(Men who have sex with men,MSM)艾滋病病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染率较高,对该地区MSM的艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)相关知识及行为进行调查,为制定该人群艾滋病防治策略及行为干预措施提供较为切实的依据和参考。方法:研究设计为横断面调查,于2009年7月至2010年4月对我国西部的重庆、四川、广西三省市1 407名MSM进行问卷调查。结果:MSM的年龄中位数是26岁,同性恋者占69.26%,双性恋者占21.40%。艾滋病相关知识知晓率为88.37%。最近6个月,61.22%的MSM有2个及以上同性性伴,7.42%的有同性商业性行为,12.48%的有异性性行为。近6个月内男男肛交性行为时每次都坚持使用安全套的占46.40%。最近6个月与不同对象发生性行为时的安全套使用有差别(P<0.05)。不同地区、是否多性伴和是否有同性商业行为与安全套的使用有关联。结论:中国西部地区MSM人群中普遍存在感染艾滋病的高危行为,且与其较高的艾滋病知识水平分离现象严重,这对该人群的行为干预提出了挑战,因此,探索控制MSM人群艾滋病传播的新干预模式具有重要意义。

HIV感染者配偶或固定性伴安全套使用影响因素分析

目的分析影响人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者配偶或固定性伴安全套使用的影响因素。方法将HIV感染者的配偶或固定性伴作为研究对象,采用问卷调查方法收集一般资料及安全套使用情况资料,以等级资料的秩和检验和logistic回归方法分析使用安全套的影响因素。结果共纳入395位研究对象,其中72.66%的人与配偶或固定性伴发生性行为时每次都使用安全套,15.70%的人从不使用安全套。经统计分析,民族、是否有小孩、艾滋病知识知晓情况、配偶或固定性伴查出感染HIV的时间和自认为从配偶或固定性伴处感染HIV的可能性是安全套使用的影响因素。结论我国HIV感染者配偶或固定性伴安全套的使用状况仍不甚理想,其影响因素是多方面的。在以后的工作中,应针对重点人群,加强艾滋病的干预工作,并按时进行高危人群的筛查,以便及早采取预防措施。

男男性行为人群艾滋病暴露前预防用药相关情况分析

目的了解男男性行为者(men who have sex with men,MSM)人群对艾滋病暴露前预防用药(pre-exposure prophylaxis,PrEP)的知晓情况、使用经历、使用意愿及其预测因子。方法采用结构式自填定量问卷对中国西部重庆、四川和广西3省招募的1 407名MSM进行调查。获得1 402份有效问卷,采用单变量描述性统计分析方法描述PrEP知晓情况、使用经历、使用意愿;利用单因素和多因素Logistic回归分析探讨PrEP使用意愿的预测因子。结果 22.1%(95%CI:20.0%～24.3%)的调查对象报告先前听说过PrEP,没有证据显示有人真正使用过PrEP。在PrEP安全、有效的条件下,63.6%(95%CI:61.0%～66.1%)的调查对象表示非常愿意使用。使用意愿的主要预测因子为:较低的文化程度、中等收入相对于低收入、最近6个月从不或很少从网上寻找性伴、有性病史、较高的艾滋病知识知晓、担心艾滋病对自己和家人造成威胁、先前听说过PrEP以及认为PrEP预防HIV感染有效。结论 MSM人群PrEP知晓率较低,一旦PrEP的安全性和有效性得到证实,MSM人群有较高的PrEP使用意愿,在MSM人群中推广PrEP具有较高的可行性。

男同性恋与男双性恋HIV阴性者的焦虑抑郁症状特点

目的:研究男同性恋与男双性恋HIV阴性者的焦虑和抑郁症状特点及差异,为心理干预提供指导。方法:通过网络宣传、非政府组织(NGO)等招募男同性恋和男双性恋,利用焦虑自评量表(SAS)和流调中心抑郁量表(CES-D)测量焦虑和抑郁症状,采用t检验和项目功能差异(DIF)分析男同性恋与男双性恋在焦虑和抑郁症状上的差异。结果:t检验结果显示,男同性恋与男双性恋在SAS和CES-D中各有3个条目得分差异有统计学意义(均P<0.05);DIF分析发现,男同性恋与男双性恋在SAS的5个条目上、CES-D的6个条目上存在差异。DIF条目的 ICC曲线显示,在SAS的条目7(躯体疼痛)、13(呼吸困难)及CES-D的条目3(苦闷)、6(压抑)上男双性恋比男同性恋表现更严重。结论:男同性恋与男双性恋焦虑和抑郁症状的特点不同,应该有区别地对待男同性恋与男双性恋的焦虑和抑郁情绪,采取针对性的对策以改善其心理状况。

乙型肝炎病毒感染相关性肝癌中HBV cccDNA水平与突变关系的研究

目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)水平与突变关系。方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌旁组织中乙肝病毒复制水平的表征因子HBV ccc DNA,HBV total DNA及前基因组RNA(pregenome RNA,pg RNA)的表达水平,再用滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)特异性扩增癌组织中HBV ccc DNA,测序分析了病毒基因组4个编码调控区域pre C/C、RT、X、pre S中ccc DNA序列的突变。最后检测了肿瘤组织ccc DNA的AP位点。结果:HBV ccc DNA在癌组织的表达水平明显低于癌旁组织(3.32 copies/cell vs.9.64 copies/cell,P=0.029),但是HBV总DNA和pg RNA的表达没有明显差异(16.94 copies/cell vs.12.18 copies/cell,P=0.325,75.54 copies/cell vs.22.46 copies/cell,P=0.128);在肝癌组织中,HBV ccc DNA pre C/C和X区间,G-A突变是主要的突变类型;其次,pre C/C和X区域发生G-A突变的位置上,均更倾向于GA二联核苷酸组合方式,在肝癌中所占比例为37.1%和40%。最后,肿瘤组织中APE1酶处理后,HBV ccc DNA水平明显下降(1 011 copies/μl vs.501.8 copies/μl,P=0.058)。结论:HBV ccc DNA水平在癌组织中明显低于癌旁组织,可能与癌组织中HBV ccc DNA发生大量GA突变及形成的AP位点有关。

重庆男男性行为者暴露前药物预防HIV感染接受意愿及其影响因素研究

目的：探讨重庆地区男男性行为者（men who have sex with men,MSM）对暴露前药物预防（pre-exposure prophylaxis,PrEP）措施用于降低人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）感染风险的接受意愿及其影响因素。方法：采用滚雪球抽样法招募了重庆地区448名MSM,采用调查员协助下的自填问卷方式对他们进行问卷调查,了解MSM艾滋病相关知识、态度、行为特征、艾滋病预防措施的知识、态度、使用意愿、对PrEP知晓情况及接受意愿。采用单因素和多因素的Logistic回归。结果：PrEP在保证药物安全有效的前提下,重庆MSM人群的接受意愿可以达到76.2%左右。多因素Logistic回归分析结果表示：与MSM人群接受PrEP的意愿呈显著联系的因素有：月经济收入[OR：4.775,95%CI（1.274~17.895）,P=0.020 4;OR：1.945,95%CI（0.594~6.376）,P=0.271 8;OR：1.427,95%CI（0.357~5.698）,P=0.615 0]、对艾滋病感染者/病人的态度[OR：3.487,95%CI（0.759~16.021）,P=0.108 4;OR：4.646,95%CI（1.208~17.860）,P=0.025 4]、是否做过艾滋病病毒检测[OR：2.361,95%CI（1.118~4.986）,P=0.024 3]、是否认为应该在MSM人群中推广PrEP[OR：51.365,95%CI（5.184~508.960）,P=0.000 8;OR：8.985,95%CI（0.836~96.509）,P=0.069 9]、是否会建议您朋友采用PrEP[OR：30.882,95%CI（2.121~449.700）,P=0.012 1;OR：2.529,95%CI（0.167~38.315）,P=0.503 4]。结论：重庆地区MSM人群对PrEP接受意愿主要与对待艾滋病的态度和对待艾滋病预防措施的态度有关。提示应加强对MSM人群预防艾滋病的健康教育、扩大艾滋病咨询检测服务工作、加强MSM和PrEP供应商对PrEP的正确认识和宣传、通过网络途径促进MSM同伴教育和对PrEP的传播,以增加MSM人群对PrEP的接受意愿。

NF-κB超抑制物IκBαM重组腺病毒的构建

目的 在克隆IκBα基因并构建IκBαM的基础上 ,构建重组腺病毒AdIκBαM。方法 将IκBαM克隆至穿梭质粒 ,线性化后与骨架质粒共同转染BJ5 183菌 ,构建重组腺病毒质粒。酶切及PCR法鉴定 ;将其线性化后转染 2 93细胞 ,观察绿色荧光以确定转染结果 ,以Westernblot法检测目的基因表达。结果 凝胶电泳及行酶切鉴定表明同源重组成功 ;PCR产物测序证明确为IκBαM ;以重组腺病毒质粒转染 2 93细胞 ,见绿色荧光 ;感染 2 93细胞得到大量病毒。结论 成功构建了IκBαM重组腺病毒 。

男男性行为人群艾滋病暴露前预防用药临床试验队列保持力分析

目的：了解男男性行为者（men who have sex with men,MSM）在艾滋病暴露前预防用药（pre-exposure prophylaxis,Pr EP）临床试验中的队列保持力及其影响因素。方法：采用非概率抽样法招募并筛选出297名MSM进入研究,随机分为每日用药组、高危行为前后用药组和空白对照组,每3月进行临床随访和问卷调查。利用Kaplan-Meier估计的生存曲线描述不同试验组的累积队列保持率,单因素和多因素Cox回归用于分析队列保持的影响因素。结果：43.1%（128/297）的MSM完成了本研究的随访,队列平均保持时间（5.85±3.99）月。高危行为前后用药组相对空白对照组（AHR=0.62,95%CI=0.42-0.91）、年龄30岁以上（AHR=0.65,95%CI=0.47-0.90）的MSM有更高的队列保持力。结论：本研究中MSM人群Pr EP临床试验队列保持力不高,在后期研究中需加强空白对照组和低年龄MSM的队列管理,以提高临床试验的队列保持力。