海洋本草软珊瑚共附生真菌Aspergillus terreus EGF7-0-1中γ-芳环丁烯内酯类化合物研究(Ⅰ)

为了从海洋微生物中寻找结构新颖的次生代谢产物,本文采用大米培养基对海洋本草软珊瑚共附生真菌Aspergillus terreus EGF7-0-1进行规模发酵,运用薄层色谱、柱层析和高效液相色谱等多种色谱技术对发酵产物进行分离纯化,通过核磁共振波谱、高分辨质谱和旋光光谱等多种光谱学方法,并结合文献数据比对确定了8个γ-芳环丁烯内酯类化合物:butyrolactonesⅠ—Ⅴ(1—5)、aspernolide E(6)、asperteretal D(7)和terrusnolide A(8)。首次对化合物1—8进行体外抑制酪氨酰-DNA磷酸二酯酶I(tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1,TDP1)活性测试,均无抑制作用。本研究为TDP1抑制剂的发现提供借鉴。

多层碳基固体酸催化合成生物基5-羟甲基糠醛的研究

为改善碳基固体酸制备工艺并扩大其在生物基化学品合成领域的应用,利用L-抗坏血酸与对甲苯磺酸(TsOH)直接研磨共混并结合低温碳化制备了多层碳基固体酸催化剂,探究了催化剂制备条件及催化反应条件对果糖转化率和5-羟甲基糠醛(HMF)产率的影响。利用SEM、TG和FT-IR对催化剂进行表征与分析。结果表明,随着酸用量的增加,碳基固体酸形貌由多层片状变为块状,且其内部含有大量多孔结构;催化剂的热分解温度随着酸用量的增加而升高;碳基固体酸表面含有磺酸基、羧基和羟基。碳基固体酸催化果糖合成HMF最佳条件为:TsOH质量为1.5 g、催化剂质量为50 mg、果糖质量为90 mg、反应温度为120℃、反应时间为60 min,此时果糖转化率达到100%,HMF产率为98.5%。

羊栖菜共附生真菌Aspergillus sp.GXIMD 02045的次级代谢产物研究

本文对羊栖菜(Sargassum fusiforme)共附生真菌Aspergillus sp.GXIMD 02045的次级代谢产物进行研究,运用多种色谱技术分离该菌株代谢产物,基于质谱、核磁共振波谱和旋光等数据结合文献数据比对鉴定化合物结构,并测定抑菌活性。从海洋真菌Aspergillus sp.GXIMD 02045中分离并鉴定了15个化合物,分别是(3S)-6-羟基-8-甲氧基-3,5-二甲基异色满(1)、(3S)-6-羟基-8-甲氧基-3-甲基异色满(2)、(3S,4R)-4,6-二羟基-8-甲氧基-3,5-二甲基异色满(3)、(1S,3R)-3,7-二甲基-1,8-二羟基-6-甲基异色满(4)、(S)-6-羟基-7-甲氧基-3,5-二甲基异色满-1-酮(5)、anserinone A(6)、anserinone B(7)、(+)-formylanserinone B(8)、对羟基苯乙酸(9)、对羟基苯乙酸甲酯(10)、Waol A(11)、(S)-7-甲氧基-2,5-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-6-醇(12)、6-甲基-2-乙酰基-3,5-二羟基苯乙酸甲酯(13)、4-羟基-3,6-二甲基-2-吡喃酮(14)和反式阿魏酸(15)。其中化合物6—8对耐甲氧西林金黄葡萄球菌有抑制活性,最小抑菌浓度为3.91~7.81μg·mL~(-1)。化合物6—8和11对枯草芽孢杆菌有抑制活性,最小抑菌浓度为7.81~15.62μg·mL~(-1)。化合物4、6—8、10和11对铜绿假单胞菌有抑制活性,最小抑菌浓度为1.95~125.00μg·mL~(-1)。本研究为羊栖菜及其共附生真菌的开发研究提供了理论基础。

滇产高原唐松草的非生物碱类成分研究

为了更全面了解我国药用植物高原唐松草(Thalictrum cultratum Wall.)的化学成分,首次研究了其非生物碱类成分。利用色谱分离技术从中分离得到了10个化合物,根据核磁共振波谱数据,其结构分别鉴定为催吐萝芙木醇(1)、blumenol C glucoside(2)、酪醇(3)、4-羟基-3-甲氧基-苯乙醇(4)、β-D-果糖(5)、甲基-α-D-呋喃果糖苷(6)、乙基-β-D-吡喃果糖苷(7)、1-O-β-D-吡喃果糖-α-D-吡喃阿洛糖苷(8)、β-谷甾醇(9)和sitost-5-en-3β-ol acetate(10)。所有化合物均首次从该植物中分离。

银杏叶总黄酮绿色提取工艺及抗氧化活性研究

采用单因素实验考察了低共熔溶剂种类、液料比、提取温度、n(氯化胆碱)∶n(尿素)、低共熔溶剂含水量、提取时间对银杏叶总黄酮提取率的影响,通过响应面法进一步优化了银杏叶总黄酮的提取工艺,并通过测定银杏叶总黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基、·OH、·O_(2)^(-)的清除能力,金属离子螯合能力及总还原能力综合评价其抗氧化活性。结果表明,最优提取工艺为:液料比30∶1(mL∶g)、提取温度57℃、n(氯化胆碱)∶n(尿素)为1∶1.6、低共熔溶剂含水量40%、提取时间60 min,在此条件下,银杏叶总黄酮提取率为1.062%,且其抗氧化活性显著优于传统乙醇提取工艺。

基于质谱的单细胞蛋白质组学分析策略与应用

细胞间异质性已被证明存在于各类生物体及其发育过程中。传统对于群体细胞的测量所得到的平均结果往往无法用于单细胞异质性的分析,因此开展单细胞水平的研究对于单个细胞的生理状态至关重要。蛋白质作为生命活动的主要承担者,进行单细胞蛋白质组学分析对于准确研究信号分子与相关信号通路之间的关系具有重要意义。常规的免疫荧光等技术受限于抗体的结合特异性与可用性,且仅限于分析预先选定的蛋白质。该文综述了近年来基于质谱的单细胞蛋白质组学中的常用方法,根据分析策略的不同,将其分为自下而上、自上而下与天然蛋白质组学3种方法,在介绍研究方法的同时对蛋白质样品预处理的进展进行了讨论。最后,对基于质谱的单细胞蛋白质组学研究所面临的挑战以及发展方向进行了总结与展望。

cGAS-STING通路在肿瘤免疫治疗中的作用机制与研究进展

环磷酸鸟苷酸合成酶[Cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate(GMP-AMP)synthase,cGAS蛋白]-干扰素刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING蛋白)(cGAS-STING)信号通路是识别细胞质中异常DNA、激活先天免疫应答系统的重要通路.cGAS蛋白在识别细胞质内异常DNA后,可催化三磷酸腺苷(ATP)和三磷酸鸟苷(GTP)合成环状鸟苷酸二磷酸腺苷(Cyclic GMP-AMP,cGAMP).cGAMP作为第二信使激活STING蛋白,促进I型干扰素的释放,从而引起一系列免疫反应.cGAS-STING通路可以调控肿瘤的转移和增长,参与抗肿瘤的先天免疫反应,探究cGAS-STING通路的作用机制在肿瘤免疫治疗中具有重要意义.本综合评述介绍了cGAS-STING通路的作用机制,概述了目前在抗肿瘤免疫治疗中激活cGAS-STING通路的各类策略.

倍半萜类化合物抗肝癌作用机制研究进展

肝癌作为世界上较为常见的实体器官恶性肿瘤之一,其在我国的发病率已攀升至第4位,病死率居第2位,严重威胁着人民的健康。萜类化合物是自然界中广泛存在的天然活性物质,其中倍半萜类化合物数量众多,它们展现出多种药理活性,如抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗病毒及抗氧化等。本文对倍半萜类化合物2015-2024年抗肝癌作用机制研究进展进行综述。结果显示,近10年文献报道了24种用于治疗肝癌的倍半萜类化合物,这些化合物通过抑制癌细胞增殖、诱导凋亡、阻止侵袭转移、调节免疫及增强抗耐药性等途径展现出治疗肝癌的潜力。这些机制主要涉及三大调控路径:磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路、核因子κB信号通路、线粒体途径。未来,需继续探索新的有较高研究价值的抗肝癌药物,深入分析多成分、多靶点、多途径协同抗肝癌的作用机制,并加速成品研发,以期在临床中广泛应用。

萝卜叶多酚的超声波辅助提取工艺优化及抗氧化活性研究

为提高萝卜叶资源的利用率,并发掘其潜在应用价值,探究了萝卜叶多酚的超声波辅助提取工艺,并对其抗氧化活性进行了评估。通过在单因素实验基础上引入Box-Behnken响应面法,对萝卜叶多酚的超声波辅助提取工艺进行了优化。通过体外实验的评估,进一步验证了其抗氧化能力。结果表明,在超声温度为68℃、液料比为32 mL/g、乙醇体积分数为63%以及超声时间为31 min的最佳工艺条件下,萝卜叶多酚可以被高效地提取,其提取率达到了60.84 mg/g,且相对误差低至0.73%,充分证实了响应面分析方法优化该提取工艺的有效性和可行性。萝卜叶多酚展现出一定的抗氧化特性,对DPPH自由基、O_(2)^(-)自由基的半抑制质量浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为78.91、403.55 mg/L,为进一步研发其作为天然植物源抗氧化剂提供了参考。

亲水作用色谱-串联质谱法测定婴儿配方乳粉中14种母乳低聚糖

本研究建立了亲水作用色谱-串联质谱同时测定婴儿配方乳粉中14种母乳低聚糖的分析方法。样品经乙醇沉淀蛋白、冷冻脱脂,以亲水作用色谱柱分离,采用超高效液相色谱-质谱多反应监测模式进行检测,外标法定量。在优化的条件下,14种母乳低聚糖在各自的线性范围内线性关系良好,决定系数均大于0.994,在两种乳基试样的3个不同加标水平下平均回收率为90.3%~109.2%、相对标准偏差为0.7%~9.7%(n=6),方法检出限为0.002~0.048μg/mL。此方法具有分析速度快、稳定性好、灵敏度高的特点,能够满足婴儿配方乳粉中14种母乳低聚糖的快速检测需求。

基于识别竞争策略的SERS传感器用于快速和同时检测结直肠癌相关miRNA

基于识别竞争策略和金十二面体(AuNDs)阵列,构建了表面增强拉曼光谱(SERS)传感器,并实现了健康人和结直肠癌(CRC)患者血清中两种miRNA的高效检测。通过将拉曼信号分子和适配体互补链修饰到金纳米双锥(AuNBP)表面,制备了两种标记探针,并将其结合在适配体功能化AuNDs阵列上构建SERS传感器。目标miRNAs能够特异性结合适配体,使标记探针从AuNDs阵列表面竞争性脱落,进而使得SERS信号降低。该方法对血清中miR-21和miR-92a的检出限分别低至5.7 pmol/L和8.4 pmol/L,反应时间仅需6 min。临床检测结果显示,相对于健康人,CRC患者血清中miR-21和miR-92a的表达水平显著升高。SERS结果与实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)一致,证实了其准确性。该方法为miRNA的快速、高灵敏、同时检测提供了新的策略,在CRC的早期诊断中具有巨大的临床潜在价值。

淫羊藿中异戊烯基黄酮的鉴别和含量测定的综合实验设计

为加深学生对传统中药淫羊藿的药效成分异戊烯基黄酮的认识,设计了综合化学实验.将淫羊藿粉末经乙醇热回流提取,蒸馏浓缩得到总浸膏,再将总浸膏溶于水,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相.将三相的有机物分别用薄层色谱展开,在紫外灯下观察254 nm和365 nm荧光颜色和强度,同时用硫酸、氯化铁显色,表明各相均含有黄酮.以淫羊藿苷为标品,通过作标准曲线结合紫外光谱对其各相的异戊烯基黄酮含量进行平行测定,同时考察了方法的重复性和样品的稳定性.

蛋白质组学在生物植物逆境适应中的作用研究

本文对蛋白质组学在植物逆境适应中的作用进行了研究,重点关注干旱、盐碱、高温和低温逆境下的蛋白质变化及其调控机制。研究表明,蛋白质组学技术,包括质谱分析、二维凝胶电泳和液相色谱,能够全面揭示植物在不同逆境条件下的蛋白质表达谱和功能变化。结果显示,在干旱条件下,植物体内热激蛋白和抗氧化酶显著上调,有助于应对水分胁迫;在盐碱逆境中,离子通道蛋白和渗透调节蛋白的变化增强了植物的盐碱耐受性;而高温和低温逆境下,热激蛋白和冷激蛋白的表达变化则帮助植物抵御温度极端的影响。这些发现为理解植物的逆境应对机制和提升作物抗逆性提供了重要依据。

小分子肽在农业中的应用

【目的】探讨小分子肽在农业中的应用现状及其对植物的影响机制,以期为其在农业领域的广泛应用提供理论基础。【方法】本文综述了小分子肽的种类及其在农业中的应用,重点分析了小分子肽在植物生长调节、抗菌及抗逆性诱导等方面的作用机制。【结果】研究表明,小分子肽相比氨基酸更易被植物吸收,能够显著促进植物生长、增强植物抗逆性和抗菌能力。然而,目前对小分子肽的作用机理尚不完全明确,影响其应用效果的因素还需进一步研究。【结论】小分子肽在农业中具有广泛的应用前景,但其作用机制的复杂性和不确定性仍是当前研究的挑战。本文为未来的研究方向提供了参考,以期推动小分子肽在农业领域的深入研究与应用。

智能手机辅助双探针比色法检测α-葡萄糖苷酶

该文以3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和罗丹明B为比色探针,建立了α-葡萄糖苷酶的比色检测方法,并在此基础上基于智能手机策略,通过RGB值对α-葡萄糖苷酶进行检测。结果表明,Fe^(3+)-TMB-罗丹明B显色体系的吸光度与α-葡萄糖苷浓度在20~100 U/L范围内呈线性关系,检出限为3.3 U/L。采用photo⁃shop软件分析样品图像和样品荧光图像的RGB值,其与α-葡萄糖苷酶浓度在10~100 U/L范围内呈线性关系,检出限分别为2.5 U/L和1.2 U/L。该法已成功用于α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖抑制率评估和胎牛血清中α-葡萄糖苷酶浓度的测定。所构建的智能手机辅助检测法为α-葡萄糖苷酶的临床分析和酶抑制剂的快速筛选提供了简便、快捷和准确的方法。

响应面法优化沙枣叶多酚提取工艺及体内外抗氧化活性研究

采用单因素实验和响应面法优化了新疆沙枣叶多酚的超声辅助提取工艺,并通过测定沙枣叶多酚对DPPH自由基的清除能力及对小鼠血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)的影响评价其抗氧化活性。结果表明,沙枣叶多酚的最佳提取工艺为:料液比1∶40(g∶mL)、乙醇体积分数58%、提取时间21 min、提取功率250 W,在此条件下,多酚含量为36.45 mg·g^(-1);当浓度为0.20 mg·mL^(-1)时,沙枣叶多酚和VC对DPPH自由基的清除率分别为90.3%、96.5%;与空白对照组比较,模型对照组小鼠血清中MDA水平极显著升高(P<0.01),SOD、GSH-Px、T-AOC的水平均极显著降低(P<0.01),且模型对照组的肾脏系数和肝脏系数与空白对照组差异极显著(P<0.01);与模型对照组比较,沙枣叶多酚高剂量组血清中MDA水平极显著降低(P<0.01),SOD、GSH-Px、T-AOC的水平均极显著升高(P<0.01),且肾脏系数和肝脏系数与模型对照组无显著差异(P>0.05)。

大麻二酚酸脱羧反应动力学分析

以工业大麻花叶为原料,利用高效液相色谱(HPLC)和热重分析仪(TGA)对大麻二酚酸(CBDA)的脱羧反应过程进行表征,分析CBDA及其脱羧产物大麻二酚(CBD)在不同温度(50~145℃)和反应时间(4~180 min)的含量变化,并开展脱羧反应动力学分析。结果表明,CBDA脱羧反应遵循一级动力学,初步推测最佳脱羧温度区间为95~125℃,加热时间50~70 min。

超声波辅助合成色酮-3-甲酸

以苯酚为原料,经傅克酰基化、甲酰化、水解三步反应制备了色酮-3-甲酸,总收率57.4%,产物纯度98.6%。甲酰化反应以3-(2-羟基苯基)-3-氧代丙酸甲酯0.05 mol为模型,考察了不同溶剂、甲酸钠用量、超声频率、超声功率、反应温度、反应时间的影响。研究结果表明最优化的反应条件为四氢呋喃作溶剂、甲酸钠与3-(2-羟基苯基)-3-氧代丙酸甲酯的用量摩尔比为1.5:1、超声频率50 kHz、超声功率550 W、温度60℃、反应11 h,该步反应收率为80.0%。

以2-硝基糖烯为中间体合成1,2-顺式-2-氨基-2-脱氧糖的研究进展

糖疫苗因具有预防肺炎、脑膜炎和婴儿败血症等疾病的作用,近年来受到广泛关注。1,2-顺式-2-氨基-2-脱氧糖苷是一种重要的糖类衍生物,许多糖缀合疫苗中含有这种化合物结构,合成该结构对糖疫苗的研发非常关键。由2-硝基糖烯合成1,2-顺式-2-氨基-2-脱氧糖,其合成条件比较温和、环保,是理想的合成前体,因此开发一种高效合成2-硝基糖烯的方法至关重要。本文综述了2-硝基糖烯的合成以及以2-硝基糖烯为中间体合成1,2-顺式-2-氨基-2-脱氧糖苷的研究进展,为糖疫苗的研发提供理论参考。

泛素蛋白融合系统高效表达幽门螺杆菌可溶性铁蛋白及多抗制备

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)铁蛋白是储存铁和维持细胞铁平衡的一种蛋白质,在不同生物中均有发现,但铁蛋白氨基酸序列同源性低,这为利用铁蛋白建立Hp分子生物学和免疫学检测方法提供了理论依据。为获得泛素蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)融合系统高效表达的可溶性Hp铁蛋白,根据GenBank中Hp铁蛋白基因序列,设计合成引物,PCR扩增Hp铁蛋白基因片段,构建重组克隆菌株,菌液PCR、双酶切和序列测定筛选阳性克隆。双酶切后回收目的基因,构建pET-28a-SUMO-Ferritin重组表达质粒,转化至DH5α。通过菌液PCR、双酶切和序列测定,获得阳性重组表达菌株pET-28a-SUMO-Ferritin/BL21,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白。然后,利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得高纯度目的蛋白。最后,利用获得的高纯度重组蛋白免疫小鼠制备多抗。结果显示实验扩增出了501 bp的Hp铁蛋白基因。IPTG诱导重组原核表达菌株,SDS-PAGE检测显示在34 kDa处有一条与理论值相符的条带;Western blotting鉴定SUMO融合重组蛋白,结果显示它能与His抗体特异性结合。37℃、0.1 mmol/L IPTG诱导过夜,SUMO融合重组蛋白呈可溶性表达。将去除SUMO标签后的重组蛋白纯化,透析,获得高纯度重组蛋白,免疫小鼠后抗体水平为1∶25600。研究结果表明,利用SUMO融合系统可高效表达可溶性Hp铁蛋白,免疫小鼠制备多抗,为进一步获得Hp铁蛋白的单抗,建立Hp免疫学检测方法奠定基础。