银钟花根尖染色体制片及核型分析

以银钟花种子的初生根尖为材料,探讨不同预处理试剂、预处理时间和解离方法对银钟花根尖染色体压片的影响,获得了一套银钟花染色体制片技术,并以此为基础进行核型分析,揭示其核型特征。结果表明:用0.003 mol/L的8-羟基喹啉避光处理6 h,卡诺氏固定液固定10 h,1 mol/L HCl在60℃的恒温水浴锅中解离12 min,20%的卡宝品红染色,可获得分散较好、形态清晰的高质量银钟花染色体压片。银钟花的染色体数目为2n=24,核型公式为2n=24=20m+4Sm,核型不对称系数为55.77%,核型分类属于1B型。

枯叶蛱蝶非越冬雄成虫内生殖器官的形态与发育

通过对不同日龄枯叶蛱蝶雄成虫生殖系统进行解剖观察试验,系统地了解其内生殖器官的形态与发育。试验数据统计分析结果表明:雄性枯叶蛱蝶内生殖器官包括2个精巢、2个贮精囊、1对输精管、1对复射精管、1条单射精管和1对附腺;精巢和贮精囊的长径与短径随日龄的增加,先增后减;输精管长度和输精管基端宽、附腺长度和附腺最大宽随日龄的增加,先增加后趋于平稳;单射精管长度、双射精管长度及基端宽随日龄的增加而缓慢增加。

氰戊菊酯通过诱导mPTP开放干扰小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的机制

目的探讨氰戊菊酯(Fen)干扰小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)睾酮合成的机制。方法TM3细胞随机分为对照组(Control group,0μmol/L Fen)、25μmol/L Fen暴露组、25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组、25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组;采用CCK-8法检测染不同浓度及不同作用时间的细胞增殖情况;ELISA法检测小鼠睾酮(T)和cAMP的含量;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;Fluo-4/AM探针检测细胞内Ca^(2+)浓度;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)变化情况;生化比色法测定细胞ATP含量;Western blot检测3β-HSD、StAR、ANT4和CyPD表达水平。结果Fen暴露后,TM3细胞ROS水平和胞内Ca^(2+)浓度上升(P<0.01),线粒体膜通透性转运孔(mPTP)组成成分ANT4和CyPD表达水平上升(P<0.01),MMP水平下降(P<0.01),细胞ATP和cAMP合成能力降低(P<0.01),cAMP/PKA信号通路依赖性的StAR蛋白和3β-HSD表达水平下降(P<0.01),睾酮合成能力随之下降(P<0.01);与25μmol/L Fen暴露组比较,25μmol/L Fen+5 mmol/L NAC组和25μmol/L Fen+10μmol/L BAPTA-AM组TM3细胞睾酮合成水平显著上升(P<0.05)。结论Fen暴露后,TM3细胞ROS和胞浆Ca^(2+)浓度上升,二者通过协同效应引起mPTP开放,细胞ATP和cAMP合成障碍,cAMP/PKA信号通路依赖性的睾酮合成蛋白和酶表达下降,TM3细胞睾酮合成受阻。本研究的结果提示抑制ROS和Ca^(2+)的信号作用可能有助于抑制Fen诱导的TM3细胞mPTP开放并改善Fen暴露所致TM 3细胞睾酮合成障碍。

附睾中非编码小RNA(sncRNA)的研究进展

非编码小RNA(sncRNA)主要通过抑制性调控靶基因发挥作用。近年的研究发现sncRNA在哺乳动物附睾的各个部位均有表达,并且在调控附睾不同节段的基因表达方面起着非常关键的作用。附睾上皮细胞中sncRNA的多样性及其表达水平的时空差异会影响很多潜在的靶基因,从而调节附睾的生理功能,另外,这些sncRNA还可以通过附睾小体传递给精子,对精子产生一系列的调控作用。综述了附睾中sncRNA表达、sncRNA对附睾和附睾中精子功能调节方面的研究进展,以期为探究sncRNA对雄性生殖细胞调控作用的分子机制提供参考。

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

用光镜、电镜观察了生后 1～ 1 8d昆明白小鼠的生精上皮。结果显示 ,生后 1～ 3 d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞 2类形态结构截然不同的细胞 ,前者位于管中部 ;生后 4～ 5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上 ;生后 6～ 7d,原始 A型精原细胞大量出现并附着在基膜上 ;生后 8d,A型精原干细胞大量出现 ,B型精原细胞开始出现 ;生后 1 0 d,B型精原细胞大量出现 ;生后 1 2～ 1 3 d,前初级精母细胞出现 ,少数曲细精管的管腔开始出现 ;生后 1 4～ 1 5d,多数曲细精管管腔基本形成 ,前初级精母细胞大量出现。本试验的结果表明 ,7～

电磁脉冲辐射对小鼠睾丸血-睾屏障的影响

采用常规苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining,HE staining)、硝酸镧示踪电镜和埃文思兰 (Evans Blue,EB)尾静脉注射三种方法,综合观察100kV／m和400kV／m两种不同强度电磁脉冲辐射对小 鼠睾丸血-睾屏障的影响。三种方法观察结果基本一致,两种强度的电磁脉冲辐射均可造成小鼠睾丸支持细胞和 血一睾屏障不同程度的损伤,400 kV/m辐射组损伤更甚,辐射后1 d即可见大量生精细胞的凋亡与坏死,支持细 胞亦发生形态结构的变化,血-睾屏障严重损伤,随后大量第Ⅷ期生精小管内出现基底室与近腔室的分离,大量 凋亡与坏死的生精细胞向管腔的排放,至辐射后21d仍可见到血-睾屏障损伤;100kV/m辐射组的损伤较 400 kV/m辐射组稍轻,辐射后14 d支持细胞、生精上皮以及血-睾屏障的损伤已基本恢复。结果提示一定强度 的电磁脉冲可以造成小鼠血-睾屏障的损伤,这种损伤呈辐射强度依赖性,并且与损伤后恢复时间相适应。

微波辐射对大鼠睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的影响

目的探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25)。辐射组接受30mW/cm2微波辐射5min,分别于辐射后6h,1、3、7、14d处死5只大鼠。对照组不接受辐射,于1d时活杀。采用免疫组织化学及Western blotting检测睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的变化。结果 pCREB、CREM和CBP均主要表达于睾丸生精小管精子细胞核。微波辐射后6h^14d(pCREB在1d时除外),pCREB和CBP蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),辐射后6h^7d CREM表达亦明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论 pCREB、CREM及CBP表达下调在微波辐射致生精细胞损伤中可能发挥重要作用。

营养性高脂血症对雄性新西兰兔睾丸和阴茎发育的影响

目的:探讨营养性高脂血症对雄性新西兰兔睾丸和阴茎发育的影响。方法:雄性新西兰兔36只,随机分为实验组(n=20)和对照组(n=16),高脂饲料建立营养性高脂血症动物模型。全自动生化分析仪检测外周血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);放射免疫法检测外周血睾酮(T)、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH);HE染色观察睾丸和阴茎发育的形态学改变。结果:与对照组比较,实验组TC、TG、LDL-C明显升高,T、LH和FSH水平明显降低,差异有极显著性(P<0.01);与对照组比较,实验组阴茎长度缩短(P<0.05),睾丸系数下降(P<0.01)。光镜下睾丸生精上皮破坏明显,阴茎组织有明显的脂肪细胞沉积。结论:幼年起摄入大量高脂食物极易诱发营养性高脂血症,并可造成下丘脑-垂体-性腺轴功能紊乱,导致阴茎发育短小,睾丸生精上皮破坏。

保存液及保存条件对中华绒螯蟹精子存活率的影响

以精子存活率和精子密度作为判据,研究了低温(4℃)条件下6种保存液体外保存中华绒螯蟹精子的效果.精子存活率采用伊红染色法检测,六种保存液分别为无钙离子人工海水I、无钙离子人工海水II、海水等渗NaCl溶液、无菌中华绒螯蟹生理盐水、海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液.结果显示,六种保存液中海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液的保存效果最差,保存2d后精子即全部死亡,而两种无钙离子人工海水的保存效果较好,其中以无钙离子人工海水II的效果尤佳,其保存6d后的精子存活率达92.19%,精子密度亦保持较高水平;故无钙离子人工海水II是中华绒螯蟹精子短期体外保存的理想保存液.在此基础上以无钙离子人工海水II作保存液,研究了精子密度、保存液pH值和渗透压对保存效果的影响.结果显示,不同精子密度的保存效果差异显著,其中以106～107个/mL的保存密度效果最好,在保存2d后精子存活率仍保持在95%以上;在7～10的范围内保存效果较好,保存15d后精子存活率均在90%以上;在以NaCl配制的渗透压范围为500～1 000mOsmol/kg H2O的10个梯度保存液中,渗透压在750～850mOsmol/kg H2O的范围内保存效果最好,该条件下保存15d后精子存活率仍在75%以上.以上结果证实,中华绒螯蟹精子适宜的保存条件为:精子密度为106～107个/mL,渗透压范围为750～850mOsmol/kg H2O,pH值为pH7～10.

稀有鮈鲫精子主要生物学特性及活力的观察

研究了不同水体、盐度(NaCl溶液)和pH对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)精子活力的影响,并测定了精子的大小、密度。结果显示:稀有鮈鲫精子头部长(1.246±0.083)μm,宽(1.053±0.172)μm,尾长约(37.21±2.536)μm;精子密度为(4.623±0.170)×109 ind./mL;精子活力以江水中最高;精子生存的最适NaCl浓度为0.55%,此溶液中精子的快速运动时间,有效运动时间及寿命分别为(36.04±2.55)s、(50.57±2.69)s和(87.83±9.02)s;精子在pH为8.0的蒸馏水中活力最强,此时精子的快速运动时间,有效运动时间及寿命分别为(22.01±2.35)s、(33.82±3.06)s和(78.02±2.99)s。

切除颌下腺对大鼠生精细胞影响的流式细胞分析

颌下腺是表皮生长因子（ＥＧＦ）的主要分泌器官。本实验应用流式细胞术对大鼠切除颌下腺后３０和４８天的睾丸生精细胞ＤＮＡ含量进行了分析。结果表明：切除颌下腺４８天时，１Ｃ细胞群（精子细胞和精子）比例明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），平均减少１２．２２％，３０天和４８天时２Ｃ细胞群（精原细胞和次级精母细胞等）比例明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），平均增加１４．３９％和２９．３１％，切除颌下腺３０天时对４Ｃ细胞群（初级精母细胞）的比例影响不大，但４８天时４Ｃ细胞群明显减少（Ｐ＜０．０１）。同时ＰＩ值明显降低（Ｐ＜０．０１）。提示切除颌下腺后导致体内ＥＧＦ缺乏，可影响生精过程中的多个阶段并延缓生精细胞的增殖。

己烯雌酚对幼年香猪睾丸细胞的影响

为了认识己烯雌酚(DES)对幼年雄性香猪睾丸生殖细胞和支持细胞数的影响,将20只20～25日龄幼年雄性香猪分成4组,对照组只注射生理盐水,试验组连续9d(每天1次)经腹腔分别注射不同剂量(0.03、0.3、3mg·kg-1)己烯雌酚后,最后一次注射24h后取左侧睾丸,入40g·L-1多聚甲醛固定24h,常规制备5μm石蜡切片,用免疫组织化学方法对睾丸支持细胞特异性蛋白生长转录因子4(GATA4)进行检测。显微镜下分别计数支持细胞和生殖细胞数,并统计分析。结果发现:己烯雌酚用量为0.3和3mg·kg-1能促使睾丸生殖细胞数显著增多(P<0.05);而使睾丸支持细胞数量显著减少(P<0.05);首次发现DES能促进幼年香猪睾丸生殖细胞增殖而抑制其支持细胞增殖。DES的作用因细胞类型不同而有所不同,但其机制还需进一步研究。

温度对体外培养小鼠精原干细胞的影响

将分离纯化的小鼠精原干细胞分别置于 37、34、30℃及 5% CO2 、饱和湿度条件下进行体外培养。结果表明 ,3种温度下的精原干细胞均可以存活并增殖 ,但随着体外培养时间的延长 ,细胞的生长状态、增殖数量和存活时间有明显差异。34℃下细胞平均存活时间最长 ,增殖数量最多。统计分析显示 ,34℃与 30、37℃下细胞平均存活时间有显著差异 ( P<0 .0 5) ,表明

微波辐射致睾丸早期损伤的蛋白质组学研究

目的探讨微波辐射早期睾丸蛋白质表达谱的改变及其意义。方法24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=6)和辐射组(n=18)。辐射组接受30mW/cm2微波辐射,并分别于辐射后6、24、72h处死6只大鼠;对照组不接受辐射,于72h时间点处死。观察两组大鼠睾丸组织的病理学改变;采用双向凝胶电泳(2-DE)-基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)-生物信息学分析比较蛋白质组学技术检测辐射72h后睾丸组织蛋白质表达谱的改变。结果微波辐射后72h内,辐射组大鼠睾丸出现不同程度的损伤性改变,主要表现为生精细胞变性、坏死和脱落,精子减少或缺失,生精小管腔内红细胞和血浆蛋白积聚,间质水肿,血管淤血。对照组、辐射组(辐射后72h)睾丸组织蛋白质点分别为1379±166、1509±243个,匹配的蛋白质点为1178±102、1217±135个,匹配率为85.4%、80.6%。对两组进行匹配分析,发现差异表达的蛋白质点共136个,其中28个在辐射组上调,108个在辐射组下调。对其中的26个差异蛋白质点的鉴定结果显示,蛋白功能涉及细胞骨架、能量代谢、分子伴侣、离子结合运输、应激、信号转导等。结论微波辐射可导致睾丸组织一系列蛋白表达发生改变,这些蛋白可能参与了生精细胞损伤的病理生理过程。

青春期前己烯雌酚暴露对大鼠性成熟后生精细胞凋亡的影响及其机制初探

目的:研究青春期前己烯雌酚(d iethylstilbestrol,DES)暴露对SD大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法:30只21日龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/(kg.d)4个实验组和1个对照组(编码为ADa、ADb、AD c、ADd和AC组,每组6只)。于青春期前[出生后第22 d(postnatal day 22,PND22)至35 d(PND35)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax在生精细胞中的表达。结果:与对照组相比,ADa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,ADb、AD c和ADd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有增加趋势。AC、ADa组生精细胞Bax相对弱表达而Bc l-2强表达,伴随DES暴露剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bc l-2表达逐渐减弱,ADd组Bax强表达而Bc l-2弱表达。结论:青春期前较大剂量DES暴露可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bc l-2参与青春期前DES暴露所致的生精细胞凋亡过程。

附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨附睾分泌蛋白2(HE2/EP2)的一种异构体———HE2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测15只青春期SD大鼠睾丸和附睾组织中HE2β1的定位及其表达情况。结果:HE2β1在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在附睾中,HE2β1主要表达于附睾管上皮主细胞胞质内,而在亮细胞、晕细胞及基细胞内未见阳性表达;其表达水平在附睾头部远段较弱,在体部近、中段及尾部较强,而在附睾始段未见阳性表达。在睾丸生精小管中,部分精原细胞核及支持细胞核均可见明显的棕褐色的阳性颗粒,其他生精细胞以及间质细胞均为阴性。结论:HE2β1在青春期雄性大鼠的睾丸和附睾上皮中均有表达,其定位及表达水平具有区域特异性和细胞特异性,提示其在大鼠精子发生、成熟及附睾上皮天然抗感染机制中发挥重要的作用。

附睾功能及其对精子成熟的影响

哺乳动物的附睾为精子的成熟提供了特殊的微环境,是精子成熟、保护、运输和贮存的部位,在生殖过程中起着重要作用。附睾上皮细胞的合成、分泌、转运等功能使精子发生了一系列结构、生化和功能的改变.从而使精子获得受精和运动能力。作者对附睾的形态结构、功能和对精子成熟影响研究现状等作简要综述。

丙烯腈对小鼠生精过程的影响

目的 探讨丙烯腈对雄性小鼠生精过程的影响。方法 用腹腔注射染毒的方法 ,对 5 0只雄性未成年小鼠及 2 5只成年小鼠分别给丙烯腈 1 2 5、2 5、5mg kg ,染毒 5天 ,于初次染毒后 35天处死动物 ,应用流式细胞术检测睾丸生精细胞DNA含量及细胞周期的变化。结果 (1)染毒组未成年小鼠的单倍体细胞 (1C)的百分含量与阴性组比较有减少 ,但无统计学差异 ;染毒组成年小鼠的单倍体细胞 (1C)百分含量与阴性组比较有减少 (P <0 0 5 ) ;成年和未成年小鼠的凋亡细胞的百分含量与阴性组比较有增加 (P <0 0 5 )。 (2 )细胞周期分析显示 ,染毒组未成年小鼠的S期细胞比例增加 (P <0 0 5 ) ,G0 G1 期细胞比例减少 (P <0 0 5 ) ;染毒组成年小鼠的G2 M期细胞比例增加 (P <0 0 5 ) ,G0 G1 期细胞比例减少 (P <0 0 5 )。结论 丙烯腈对雄性小鼠的生精过程有抑制作用。

豪猪雄性生殖腺(睾丸)的解剖及组织结构研究

以豪猪睾丸为研究对象，观察豪猪睾丸的解剖及组织结构，研究豪猪的雄性生殖腺，为豪猪的人工繁殖研究提供理论依据。结果表明：雄性豪猪没有阴囊，其睾丸位于腹股沟内；睾丸的重量为（2．76±0．08）g，其纵径为（3．93±0．09）cm，横经为（1．38±0．06）cm；睾丸小隔不发达，每个睾丸小叶内有1～4条曲精小管，曲精小管的管壁中可见许多不同发育阶段的生精细胞，其形态多样，但精原细胞和精子细胞数量较少，未见次级精母细胞。