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利用随机多肽文库研究ZO-1中PDZ3结构域的配体结合特点 被引量:3
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作者 郭佳岩 宋婀莉 +2 位作者 黄海明 马素参 高友鹤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期341-346,共6页
建立一种研究PDZ结构域配体结合特点的简单方法 .利用酵母双杂交技术从随机多肽文库中寻找所有可能与ZO 1中PDZ3结构域结合的C末端序列 ,从现有蛋白质数据库中检索所有具有该C末端蛋白 .利用液体培养物 β 半乳糖苷酶检测实验 ,比较文... 建立一种研究PDZ结构域配体结合特点的简单方法 .利用酵母双杂交技术从随机多肽文库中寻找所有可能与ZO 1中PDZ3结构域结合的C末端序列 ,从现有蛋白质数据库中检索所有具有该C末端蛋白 .利用液体培养物 β 半乳糖苷酶检测实验 ,比较文库中筛选的C末端序列和已知的PDZ3结构域结合配体———JAM的C末端 (SFLV)与PDZ3结构域结合的强弱 .共筛选到 3个阳性克隆 ,其C末端序列分别为 LGWV、 LVWV和 DEWV .前 2者属于第二类PDZ结构域 ,后者属于第三类 .蛋白质数据库检索结果表明 ,有多个蛋白质具有 LGWV、 LVWV末端 ,没有检索到任何具有 DEWV末端的蛋白质 .结合强度实验结果表明 ,它们与PDZ3结构域结合强度依次为 DEWV > LGWV > LVWV > SFLV ,说明筛选的 3个C末端除了反映ZO 1中PDZ3结构域可能的潜在结合配体外 ,也有可能成为JAM蛋白阻断性试剂甚至药物的重要组成部分之一 .利用随机多肽文库 ,可以尽可能寻找所有可能与PDZ结构域结合的C末端序列 。 展开更多
关键词 ZO-1 PDZ3结构域 蛋白质相互作用 随机多肽文库 酵母双杂交
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基于SWISS-MODEL的蛋白质三维结构建模 被引量:25
2
作者 谌容 陈敏 +1 位作者 杨春贤 廖志华 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期54-56,共3页
蛋白质的三级结构预测可通过同源建模、Threading和TOPITS等方法进行,但同源建模是应用最为广泛的方法。SWISS-MODEL正是一个基于同源建模的蛋白质结构服务器。它与ExPASy网站和DeepView程序是紧密相联系的。该文重点介绍SWISS-MODEL的... 蛋白质的三级结构预测可通过同源建模、Threading和TOPITS等方法进行,但同源建模是应用最为广泛的方法。SWISS-MODEL正是一个基于同源建模的蛋白质结构服务器。它与ExPASy网站和DeepView程序是紧密相联系的。该文重点介绍SWISS-MODEL的提交方式、建模的步骤、结果的评估和应用程序等。 展开更多
关键词 同源建模 SWISS—MODEL 结构预测
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二维电泳和iTRAQ的实验比较 被引量:11
3
作者 潘三强 宿宝贵 吕来清 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期538-542,共5页
对蛋白组学中的二维电泳和iTRAQ两种技术进行比较研究,为神经科学的蛋白组学研究提供选择参考。取生后1~3d C57Bl/6小鼠背根神经节进行培养,对照组加DMSO,实验组加JNJ460。分别用二维电泳和iTRAQ两种技术检测背根神经节细胞蛋白的变化,... 对蛋白组学中的二维电泳和iTRAQ两种技术进行比较研究,为神经科学的蛋白组学研究提供选择参考。取生后1~3d C57Bl/6小鼠背根神经节进行培养,对照组加DMSO,实验组加JNJ460。分别用二维电泳和iTRAQ两种技术检测背根神经节细胞蛋白的变化,用4700 TOF/TOF串联飞行质谱仪检测变化蛋白的肽片段质量,用GPS软件检索Mascot蛋白质数据库,鉴定出匹配的蛋白。利用二维电泳技术观察到4种表达上调的蛋白,2种是结构蛋白,2种是信号转导蛋白。利用iTRAQ技术观察到22种表达上调的蛋白,其中10种是结构蛋白,3种是信号蛋白,2种是代谢蛋白,2种是降解蛋白化,2种是细胞基质蛋白及3种其它蛋白。利用二维电泳技术观察到发生表达变化的蛋白都位于胞浆内,而利用iTRAQ技术观察到的表达变化的蛋白有胞浆蛋白外,还有线粒体蛋白、膜蛋白和核蛋白。同时,利用二维电泳技术观察到的蛋白变化都在2倍以上,而利用iTRAQ技术计算出的蛋白变化在1.3至1.6倍之间。另,iTRAQ技术在鉴定大分子和小分子蛋白方面也有优势。结果表明iTRAQ技术比二维电泳技术能发现更多数量和更多种类的蛋白,但在比较胞浆蛋白的变化及蛋白量的变化方面二维电泳技术有一定的长处,对iTRAQ的实验结果有互补作用。 展开更多
关键词 二维电泳 ITRAQ 蛋白组学 背根神经节
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基于保留时间和质荷比匹配的液相色谱-质谱联用技术用于非标记肽段的差异分析 被引量:3
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作者 厉欣 徐松云 +1 位作者 张宇 邹汉法 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期867-873,共7页
建立了一种无需化学标记的,基于纳升级毛细管液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术和质谱数据处理的肽段差异分析方法。本方法采用定量差异分析与肽序列鉴定分析分别进行的策略,首先对样品进行质谱全扫描的液质全谱式分析,在全扫描质谱数... 建立了一种无需化学标记的,基于纳升级毛细管液相色谱-电喷雾离子阱质谱联用技术和质谱数据处理的肽段差异分析方法。本方法采用定量差异分析与肽序列鉴定分析分别进行的策略,首先对样品进行质谱全扫描的液质全谱式分析,在全扫描质谱数据中提取肽特征点信息,通过保留时间和质荷比参数匹配不同样品中的共有肽特征点,比较其相对峰强度有无差异。最后对样品中存在丰度差异的肽特征点进行选择性二级质谱分析和序列鉴定,从而实现复杂样品中肽段的差异比较分析。以血浆蛋白酶解混合物为实验对象,考察了本方法用于肽段相对定量分析的重现性以及浓度信号响应曲线等。结果表明:提取的肽特征点峰强度相对标准偏差的中值<22%,肽段离子强度动态范围达3个数量级,在5~1000fmol范围内对肽段定量具有良好线性关系。本方法可用于不同条件样品中具有倍数差异的内源性肽的比较分析。 展开更多
关键词 无标记 液相色谱-质谱联用 定量蛋白质组学 多肽组
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探针JDC-108测定生物样品中的蛋白质 被引量:2
5
作者 崔凤灵 秦利霞 +1 位作者 张贵生 卢雁 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1539-1542,共4页
在模拟人体生理条件下,基于JDC-108与人血清白蛋白(HSA)相互作用生成复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,而建立了以JDC-108为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法。体系同步荧光光谱特征及强度受Δ... 在模拟人体生理条件下,基于JDC-108与人血清白蛋白(HSA)相互作用生成复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,而建立了以JDC-108为分子探针,用固定波长同步荧光光谱分析测定蛋白质的新方法。体系同步荧光光谱特征及强度受Δλ、反应介质、反应温度等因素的影响。在20℃、Tris-HCl缓冲液(pH=7.40)及离子强度为0.1 mol/L的NaCl溶液中,体系的Δλ为20 nm的同步荧光强度(ISF)与人血清白蛋白在2.0-497 mg/L的浓度范围内呈良好的线性关系;检出限为0.76 mg/L(n=11)。本实验对血清、尿样和唾液样品进行了测定,回收率在97.7%-103.4%之间。实验结果表明:本方法具有简单、快速、灵敏度较高、线性范围宽、精密度和回收率较好等优点,可直接用于生物样品中蛋白质总量的测定,结果令人满意。 展开更多
关键词 荧光探针 人血清白蛋白 同步荧光光谱 蛋白质
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骨桥蛋白中多肽片段的FT-ICR-MS分析 被引量:1
6
作者 石磊 王韶 +4 位作者 刘晓梅 程舸 于雷 段芳芳 韩丽华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期50-52,共3页
Biological mass spectrometry has received a great progress in recent years.The osteopontin(OPN) isolated and purified from the human milk was studied by HPLC using SCX and C4 columns.After hydrolyzing the purified OPN... Biological mass spectrometry has received a great progress in recent years.The osteopontin(OPN) isolated and purified from the human milk was studied by HPLC using SCX and C4 columns.After hydrolyzing the purified OPN sample by trypsin,the correlative polypeptide fragments GDSVVYGLR and QNLLAPQTLPSK were obtained by FT-ICR-MS.It showed that the method of nano-spray HPLC combined with FT-ICR-MS and Mascot search was very efficient for the analysis of the purified OPN and its polypeptide fragments.Further study provides more academic theories of their different modifications and the relative bioactivities. 展开更多
关键词 osteopontin(OPN) Fourier transform ion CYCLOTRON resonance mass spectrometry(FT-ICR-MS) POLYPEPTIDE FRAGMENTS
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一种可用于评估肽质量指纹谱数据的方法--反转错位数据库 被引量:1
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作者 吴松锋 薛晓芳 +5 位作者 张纪阳 应万涛 马洁 钱小红 朱云平 贺福初 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期439-443,共5页
反转数据库常被用于估算大规模蛋白质组研究中串联质谱搜索数据库结果的可靠性。然而,对于经典的且现在依然在产出的肽质量指纹谱的数据,这种方法并不适用。为解决该问题,构建了另外一种随机数据库,称为反转错位数据库。这种数据库是在... 反转数据库常被用于估算大规模蛋白质组研究中串联质谱搜索数据库结果的可靠性。然而,对于经典的且现在依然在产出的肽质量指纹谱的数据,这种方法并不适用。为解决该问题,构建了另外一种随机数据库,称为反转错位数据库。这种数据库是在反转数据库的基础上,将序列中的K和R及其后的氨基酸交换位置(对于胰蛋白酶切割的结果)获得。这种处理避免了某些肽段因前后胰蛋白酶酶切位点氨基酸相同而在序列反转后质量依然不变,导致肽质量指纹谱法无法区分的问题。通过串联质谱和肽质量指纹谱测试数据的搜索结果,证明了这种方法同时适用于串联质谱和肽质量指纹谱的数据。这种方法扩大了经典反转数据库的适用范围,将对评估和整合串联质谱和肽质量指纹谱的数据具有重要意义。 展开更多
关键词 蛋白质组 反转数据库 反转错位数据库 肽质量指纹谱
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iTRAQ多重化学标记串联质谱技术在比较蛋白质组学中的应用 被引量:8
8
作者 李伟 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期453-456,共4页
研究不同生理和病理条件下细胞内蛋白质的含量和状态变化是比较蛋白质组学的核心内容。要揭示上述动态过程往往需要进行多个样品的同步比较分析。近年来,在体内和体外同位素标记基础上,用多维液相色谱分离多肽,进而用串联质谱进行相对... 研究不同生理和病理条件下细胞内蛋白质的含量和状态变化是比较蛋白质组学的核心内容。要揭示上述动态过程往往需要进行多个样品的同步比较分析。近年来,在体内和体外同位素标记基础上,用多维液相色谱分离多肽,进而用串联质谱进行相对定量的分析方法已成为高通量比较蛋白质组研究的主要手段之一。该文就目前唯一一种可以进行四重蛋白质样品同步比较的iTRAQ标记-串联质谱分析技术进行综述。 展开更多
关键词 比较蛋白质组学 iTKAQ 多维液相色谱 串联质谱 多重同步分析
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MALDI-TOF MS和电子光谱技术研究海兔肝铁蛋白亚基电离和释放铁动力学特性 被引量:6
9
作者 黄琳 陈旭 +2 位作者 林青 朱斌琳 黄河清 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1745-1750,共6页
选用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)技术鉴定质谱纯海兔肝铁蛋白(liver ferritin ofAplysia,ALF)。来源于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪中的激光和基质芥子酸协同解吸海兔肝铁蛋白(ALF)为带双电荷、... 选用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)技术鉴定质谱纯海兔肝铁蛋白(liver ferritin ofAplysia,ALF)。来源于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪中的激光和基质芥子酸协同解吸海兔肝铁蛋白(ALF)为带双电荷、单电荷[M+H]+和二聚体的亚基离子,并可供质谱分析。ALF亚基的质荷比m/z分别为9784.03[M+2H]2+、19678.42[M+H]+和39387.80[2M+H]+,其中亚基分子量[M+H]+略小于鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin of shark,SLF)。在弱碱介质(pH8.0)条件下,电子光谱技术研究指出,抗坏血酸以1/2级反应方式参与ALF释放铁全过程,同时又使ALF以一级反应动力学方式释放铁,呈现两种不同的速率。推测这一异常现象可能与ALF含低铁量、亚基调节能力和海兔的进化地位有关。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 亚基解离 释放铁 动力学 进化
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红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动 被引量:3
10
作者 王毅飞 蔡德鸿 +3 位作者 陈宏 莫永炎 伊娜 邢飞跃 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期289-291,共3页
目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标... 目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。 展开更多
关键词 红外荧光 电泳迁移率 DNA-蛋白复合物 糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白 过氧化物酶体增殖物活化受体γ2
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甘氨酸-水杨醛席夫碱和邻菲咯啉混合配体的铜(Ⅱ)配合物与蛋白质相互作用的光谱学研究
11
作者 江阳 《山东化工》 CAS 2017年第6期51-53,56,共4页
在模拟人体生理条件下,综合利用荧光光谱、紫外吸收光谱、圆二色谱等方法研究了抗肿瘤药物甘氨酸-水杨醛席夫碱和邻菲咯啉混合配体的铜(Ⅱ)配合物与蛋白质相互作用。荧光光谱和紫外吸收光谱的分析表明铜(Ⅱ)配合物能有效猝灭BSA的内源... 在模拟人体生理条件下,综合利用荧光光谱、紫外吸收光谱、圆二色谱等方法研究了抗肿瘤药物甘氨酸-水杨醛席夫碱和邻菲咯啉混合配体的铜(Ⅱ)配合物与蛋白质相互作用。荧光光谱和紫外吸收光谱的分析表明铜(Ⅱ)配合物能有效猝灭BSA的内源荧光。猝灭过程同时表现出动态猝灭特征和静态猝灭特征,猝灭机制为混合机制。圆二色谱结果表明随着铜配物的加入,能引起BSA的构象发生改变,其α-螺旋含量有所减少,肽链结构有所伸展。 展开更多
关键词 血清白蛋白 生物活性小分子 光谱学方法 抗肿瘤
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癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析非变性蛋白质分子量的适用性鉴定
12
作者 臧家涛 徐竞 +2 位作者 李东红 刘建仓 刘良明 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2012年第4期55-58,61,共5页
目的:鉴定癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDecS-PAGE)是否适于分析非变性蛋白质的分子量。方法:以不同SDecS-PAGE凝胶、电泳缓冲液分析5种非变性标准分子量蛋白质,观察蛋白质亚基解离情况,测定分子量对数值(log Mr)与迁移率x之间的相... 目的:鉴定癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDecS-PAGE)是否适于分析非变性蛋白质的分子量。方法:以不同SDecS-PAGE凝胶、电泳缓冲液分析5种非变性标准分子量蛋白质,观察蛋白质亚基解离情况,测定分子量对数值(log Mr)与迁移率x之间的相关性。结果:5种标准分子量蛋白质的四级结构完整,log Mr与x线性相关性较低;但其中的α-牛乳白蛋白、鸡蛋清白蛋白、牛血清白蛋白的log Mr与x线性相关性较好,相关系数平方值(R2)>0.94。结论:SDecS-PAGE可用于测定有限种类的非变性蛋白质的分子量。 展开更多
关键词 癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 非变性蛋白质 分子量测定 SDecS-PAGE
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New approach for predicting protein-protein interactions
13
《Bulletin of the Chinese Academy of Sciences》 2007年第2期76-76,共1页
Protein-protein interactions (PPIs) are of vital importance for virtually all processes of a living cell. The study of these associations of protein molecules could improve people's understanding of diseases and pr... Protein-protein interactions (PPIs) are of vital importance for virtually all processes of a living cell. The study of these associations of protein molecules could improve people's understanding of diseases and provide basis for therapeutic approaches. Although efforts have been devoted to the development of methodology for predicting PPIs and protein interaction networks, the application of most existing methods is limited because they need information about protein homology or the interaction marks of the protein partners. 展开更多
关键词 蛋白质-蛋白质交互作用 生物化学 分子生物学 疾病治疗
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Novel technique sheds new light on protein colocalization patterns
14
《Bulletin of the Chinese Academy of Sciences》 2006年第4期200-201,共2页
The potential of MELC, a brand-new and highly efficient technique for studying the temporal and spatial distribution of proteins in living tissue, has been explored jointly over the last years by Walter Schubert, its ... The potential of MELC, a brand-new and highly efficient technique for studying the temporal and spatial distribution of proteins in living tissue, has been explored jointly over the last years by Walter Schubert, its inventor from the Molecular Pattern-Recognition Research Group at the Institute of Medical Neurobiology, Otto-von-Guericke University (Magdeburg, Germany), and his collaborators including Andreas Dress from the CASIMPG Partner Institute for Computational Biology (PICB), the Shanghai Institutes for Biological Sciences(SIBS). 展开更多
关键词 活组织 蛋白质分子 时空分布 分级结构 抗体标记 计算方法
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高效液相色谱/质谱法识别不同明胶酶解产物中特征多肽 被引量:22
15
作者 张贵锋 刘涛 +3 位作者 王前 雷建都 马光辉 苏志国 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1499-1504,共6页
在不同动物胶原蛋白序列比对基础上,利用高效液相色谱/质谱联用技术(HPLC/MS)建立一种通过特征多肽进行明胶鉴别的方法。实验以牛明胶和猪明胶为对象,序列比对结果表明,牛和猪的Ⅰ型胶原蛋白α1链和α2链均存在氨基酸序列差异。利用胰... 在不同动物胶原蛋白序列比对基础上,利用高效液相色谱/质谱联用技术(HPLC/MS)建立一种通过特征多肽进行明胶鉴别的方法。实验以牛明胶和猪明胶为对象,序列比对结果表明,牛和猪的Ⅰ型胶原蛋白α1链和α2链均存在氨基酸序列差异。利用胰蛋白酶将牛明胶和猪明胶降解,通过HPLC/MS分析了两种明胶酶解产物中的多肽片段。结果表明:牛明胶和猪明胶酶解产物中均可检测出存在序列差异的特征性多肽,其氨基酸序列差异与两种胶原蛋白序列比对结果中的序列差异一致;酶解产物中特征多肽上的脯氨酸存在不同程度的羟基化修饰,特征多肽的相对含量主要受明胶分子量范围影响。利用HPLC/MS检测明胶酶解产物中的特征多肽是一种鉴别牛明胶和猪明胶的有效方法。 展开更多
关键词 明胶 酶解 特征多肽 高效液相色谱质谱联用 多肽识别
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葛根素及其衍生物与牛血清白蛋白相互作用研究 被引量:23
16
作者 屈凌波 王玲 +3 位作者 陈晓岚 袁金伟 杨冉 李萍 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第21期2417-2422,共6页
采用改造后的Atherton-Todd反应合成了葛根素的两种磷酰化异黄酮,并应用荧光光谱法研究了葛根素及其磷酰化产物与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果显示葛根素及其磷酰化产物均能与BSA发生相互作用,但磷酰化产物与蛋白的结合作用相对较... 采用改造后的Atherton-Todd反应合成了葛根素的两种磷酰化异黄酮,并应用荧光光谱法研究了葛根素及其磷酰化产物与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果显示葛根素及其磷酰化产物均能与BSA发生相互作用,但磷酰化产物与蛋白的结合作用相对较弱;三个小分子对BSA荧光的猝灭是静态猝灭过程,结合力以疏水作用力为主;依据能量转移原理求得小分子与BSA间结合距离均小于7nm.通过比较葛根素及其磷酰化产物与BSA的相互作用,初步探讨了三个小分子分子结构与其结合能力之间的联系,并进一步考察了金属离子对结合反应的影响. 展开更多
关键词 荧光光谱 葛根素 磷酰化 牛血清白蛋白
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金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究 被引量:13
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作者 李淑娟 孙永亮 +2 位作者 胡道道 陈超 崔亚丽 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期941-946,共6页
以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Seph... 以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量,Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间,介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果,开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究,并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明:对200μL细胞裂解液纯化体系,Co-CM-Asp-Sepharose(50%悬浮液)的优选体积为60μL,最佳孵育时间为30min,洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L,纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL(50%悬浮液)对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比,本介质具有选择性好,清洗条件简单,得到的靶蛋白纯度高等优点。 展开更多
关键词 羧甲基天冬氨酸 CO^2+ 金属螯合亲和层析 纯化 多聚组氨酸融合蛋白
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电感耦合等离子体质谱间接法测定蛋白质含量 被引量:9
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作者 王萌 丰伟悦 +6 位作者 陆文伟 李柏 汪冰 朱墨桃 王云 赵宇亮 柴之芳 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第3期321-324,共4页
尺寸排阻色谱分离牛血清白蛋白(BSA),超氧化物歧化酶(SOD)和金属硫蛋白(MT)等3种标准蛋白的混合物后,在线使用电感耦合等离子体质谱测定这三种蛋白中的S,并根据每种蛋白质含有的S原子数,计算出3种蛋白质的相对含量。尺寸排阻色谱的流动... 尺寸排阻色谱分离牛血清白蛋白(BSA),超氧化物歧化酶(SOD)和金属硫蛋白(MT)等3种标准蛋白的混合物后,在线使用电感耦合等离子体质谱测定这三种蛋白中的S,并根据每种蛋白质含有的S原子数,计算出3种蛋白质的相对含量。尺寸排阻色谱的流动相为0.1mol/LTris-HAc。向电感耦合等离子体质谱的六级杆加入反应气O2,使之与S反应生成SO+,间接测定32S16O+而避开直接测量32S时存在的严重干扰。测量结果与天平称量所得结果一致。方法的精密度好,每个蛋白质峰面积的RSD<3%(n=3)。BSA、SOD和MT的检出限分别为14、52和27pmol。 展开更多
关键词 电感耦合等离子体质谱 碰撞池 尺寸排阻色谱 蛋白质定量
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电泳/质谱技术研究鲨鱼肝铁蛋白及亚基多聚体特性 被引量:9
19
作者 陈平 黄河清 +2 位作者 林庆梅 陈旭 黄慧英 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期667-671,共5页
改良鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin ofsphyrna zygaena,SZLF)分离技术,并结合非变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(NGPAGE)制备质谱纯SZLF,以维系铁蛋白分子和它的亚基之间的作用类型,供研究铁蛋白结构与功能。实验结果表明,SZLF由分子量约为20... 改良鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin ofsphyrna zygaena,SZLF)分离技术,并结合非变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(NGPAGE)制备质谱纯SZLF,以维系铁蛋白分子和它的亚基之间的作用类型,供研究铁蛋白结构与功能。实验结果表明,SZLF由分子量约为20kDa的单类型亚基组成。SZLF和它的亚基均组成不同的聚合体。聚合体类型和聚合数目与铁蛋白亚基和分离介质有关。MALDI-TO F质谱仪的激光和基质协同能有效解吸SZLF中的亚基成为准分子离子,并供质量分析,其亚基特征质谱峰m/z值分别为10889.35和22030.45,确定为带双电荷[M+2H]2+和单电荷[M+H]+的SZLF亚基分子量。SDS-PAGE和变性IEF技术研究指出,形成不同聚合态的SZLF,其分子之间的相互作用强度高于SZLF亚基自身,难以通过MALDI-TOF质谱技术测定其亚基的结构信息。尽管SZLF由单类型亚基组成,但它能通过聚合体和自身亚基之间的相互作用差异性发挥极其重要的生理功能。 展开更多
关键词 铁蛋白 多聚体 质谱 亚基
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牛血清白蛋白在超薄纳米二氧化钛膜表面的印迹与吸附 被引量:10
20
作者 谢亚林 司士辉 +2 位作者 杨政鹏 李赛 彭芳 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期555-558,共4页
基于溶胶凝胶分子印迹方法,以溶胶二氧化钛TiO2为基质印迹了牛血清白蛋白分子。用1%的NaOH溶液可有效地除去纳米TiO2印迹膜中的模板分子。采用石英晶体微天平现场技术,研究了牛血清白蛋白在超薄纳米TiO2膜表面的吸附行为。研究表明... 基于溶胶凝胶分子印迹方法,以溶胶二氧化钛TiO2为基质印迹了牛血清白蛋白分子。用1%的NaOH溶液可有效地除去纳米TiO2印迹膜中的模板分子。采用石英晶体微天平现场技术,研究了牛血清白蛋白在超薄纳米TiO2膜表面的吸附行为。研究表明,牛血清白蛋白在印迹膜和非印迹膜上的吸附量都随溶液浓度增加而增大,印迹膜具有吸附的特异性和可再生性,其吸附量是非印迹膜的3~5倍;在非印迹膜上的吸附符合Langmuir吸附模型,而在印迹膜上的吸附符合allosteric吸附模型;牛血清白蛋白在非印迹膜上的吸附量先随pH升高而增大,当pH为5左右时达到最大值,随后吸附量又随pH的增大而减小;而在印迹膜上其吸附量仅随pH增大而增大。 展开更多
关键词 牛血清白蛋白 分子印迹 石英晶体微天平 纳米二氧化钛
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