3R理论的形成、发展及在生命科学研究中的应用

一、3R理论的形成及发展 3R是Reduction(减少)、Replacement(替代)和Refinement(优化)的简称. Reduction是指在科学研究中,使用较少量的动物获取同样多的试验数据或使用一定数量的动物能获得更多试验数据的方法. Relacement是指使用其他方法而不用动物所进行的试验或其他研究课题,达到某一试验目的.或者说是使用没有知觉的试验材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法.

酪氨酸激酶抑制剂对hTrp3蛋白介导的α_(1B)-AR引起的Ca^(2+)内流的影响

目的 探讨Trp3(transientreceptorpotential 3)蛋白是否参与α1B AR引起的Ca2 + 内流以及酪氨酸激酶对其调控作用。方法 采用脂质体转染 ,将hTrp3cDNA分别转染到HEK2 93细胞和已有α1B受体稳定表达的HEK2 93细胞 ;Westernblot方法检测Trp3蛋白表达情况 ;Fura 2 /AM荧光分光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 + 浓度。结果 HEK2 93细胞上可检测到hTrp3的内源性表达 ,转染后其表达增加。α1B HEK2 93细胞转染hTrp3cDNA后 ,α1B AR引起的Ca2 +内流显著增加 (P <0 0 1) ;转染hTrp3cDNA对thapsigargin诱导的Ca2 + 内流无作用。 5～ 30 μmol·L-1genistein对转染细胞α1B AR诱发的Ca2 + 内流有抑制作用 ,最大抑制率达(75 2± 12 6 ) %。结论 Trp3cDNA转染可能主要通过非CRAC(calciumreleaseactivatedcalcium )途径增加α1B AR引起的Ca2 + 内流 。

3Rs与生命科学研究

３Ｒｓ与生命科学研究张玉勋第一军医大学实验动物学教研室（广州５１０５１５）从１９９５年动物学家Ｒｕｓｅｌ和微生物学家Ｂｕｒｃｈ在其著作《ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＨｕｍａｎｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｅｃｈｎｉｑｕｅ》中首次提出３Ｒｓ以来，３Ｒｓ－Ｒ...

人胃癌裸鼠原位移植瘤P53、c-erbB-2癌基因蛋白免疫组化和超微结构的研究

为探讨胃癌的分子发病机制及为实验治疗提供理想动物模型 ,采用显微外科原位移植技术 ,将 47例人胃癌标本移植裸鼠胃粘膜层 ,观察原位移植成瘤、侵袭和转移情况 ,及P5 3、c erbB 2、raSP2 1癌基因的表达和形态学特征。从 47例胃癌标本中筛选出的人胃腺癌、鳞癌、鳞腺癌三株裸鼠原位移植模型 ,对三种癌蛋白均呈阳性表达 ,并与肿瘤生长方式、侵袭深度和淋巴结转移有关 ,超微结构观察发现移植瘤与来源人胃癌细胞相似。此模型可用于研究胃癌的分子发病机制、侵袭。

安徽省1986～1993年省科技进步奖医疗卫生获奖项目分析

本文对安徽省1986～1993年省科技进步奖医疗卫生获奖项目的分析结果表明:(1)全省医疗卫生项目获奖比例逐步上升,技术水平不断提高;(2)临床及预防医学研究具有一定优势;(3)医疗卫生获奖项目的推广率及推广覆盖面尚有待提高。

人参皂苷Rg_1和Rh_1抗肿瘤作用的研究

目的 :研究人参皂苷 Rh1及其前体 Rg1的整体及离体抗肿瘤作用。方法 :整体实验 4种小鼠移植性肿瘤 :小鼠宫颈癌 - 1 4( U14 )、艾氏腹水癌 ( EAC)、肉瘤 - 1 80 ( S180 )和肝癌腹水型 ( Hep A)腋部皮下接种 ,于接种 1 0 d内 ,每天给药 1次 ,计算各给药组肿瘤抑制率。离体抗肿瘤实验用 3种瘤株 :A375 - S2、T98G 和 He La。结果 :人参皂苷 Rg1( 2 0 0 mg·kg-1,灌胃 )和 Rh1( 4 0和2 0 mg· kg-1,腹腔注射 )对 U14 均具有明显的抑制作用 ( P<0 .0 1 ) ;人参皂苷 Rh1在较高剂量( 4 0 mg·kg-1)时 ,对 EAC也有明显抑制作用 ( P<0 .0 1 )。但人参皂苷 Rg1和 Rh1对 S180 和 Hep A无抗肿瘤作用。离体实验证明 ,Rg1对 He La细胞的增殖有明显的抑制作用 ,Rh1高剂量组( 1 0 0 mg· L-1)对 3种肿瘤细胞均有明显抑制作用。结论 :人参皂苷 Rh1较其前体

牛磺酸对维生素D_3和尼古丁诱导的大鼠钙化血管精氨酸/NO途径的影响

目的 观察钙化血管精氨酸 /NO途径的改变和外源性牛磺酸 (taurine,Tau)对血管钙化及精氨酸 /NO途径的影响。方法 维生素D3 (vitaminD3 ,VitD3 )肌注和尼古丁(nicotine ,Nic)灌胃制备大鼠血管钙化模型 ,检测血管钙含量和血管碱性磷酸酶 (ALP)活性、血浆精氨酸和亚硝酸盐(NO-2 )含量、血管环磷酸鸟苷 (cGMP)含量、血管一氧化氮合酶 (NOS)活性及血管精氨酸 (arginine ,Arg)转运。结果 钙化组 (VDN)大鼠血管钙含量较对照组升高 6 6倍 (P <0 0 1) ,血管ALP活性高 12 6倍 (P <0 0 1) ;血浆NO生成减少 ,血管cGMP水平降低 ,血管NOS活性增高 ,其中cNOS活性高 18 9% (P <0 0 1) ,但精氨酸转运在血管平滑肌和内皮明显减少 (- 6 3 8% ,- 5 5 2 % ,P <0 0 1)。口服牛磺酸治疗的大鼠较单纯VDN组 ,血管钙含量降低 4 9 5 % (P <0 0 1) ,血管ALP活性明显降低 ,血浆NO生成增加 ,血管cGMP含量增加 2 9 1% (P均 <0 0 1) ,血管精氨酸转运在血管平滑肌和内皮分别增加 79 4 %和 5 5 1% (P <0 0 1)。结论 给予外源性牛磺酸可以减轻VitD3 加Nic大鼠的血管钙化程度 ,改善钙化血管L Arg/NOS/NO/cGMP途径紊乱 ;

普通级、SPF级SD大鼠、Wistar大鼠血常规的测定与比较

目的 测定普通级、SPF级SD大鼠、Wistar大鼠血常规指标并进行比较。方法 Coulter -JT全自动血常规检测仪自动检测。结果 普通级、SPF级SD大鼠白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白、血小板计数、血小板平均分布宽度、红细胞平均分布宽度相差非常显著 (P <0 0 1) ;中性粒细胞、单核细胞相差显著 (P <0 0 5 )。普通级、SPF级Wistar大鼠白细胞计数、中性粒细胞、单核细胞、红细胞计数、红细胞平均体积、平均红细胞血色素量相差非常显著 (P <0 0 1) ;血红蛋白、血小板计数、血小板平均分布宽度相差显著 (P <0 0 5 ) ,其他指标相差不显著。结论 不同微生物学环境对SD。

RP-HPLC法测普鲁托品在大鼠体内分布和排泄

目的 用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定大鼠的尿、粪、肝和脑等组织中普鲁托品 (protopine ,Pro)的药物浓度 ,并对Pro在大鼠体内的分布和排泄过程进行研究。方法 流动相为甲醇、水和体积分数 2 0mol·L- 1 乙酸 (80∶2 0∶2 ) ,以ODS C1 8柱分离 ,紫外检测器检测 ,波长为 2 85nm ,生物样品在碱性条件下 ,经两次乙醚处理 ,可获得良好的分离效果。为全面了解Pro在大鼠体内的代谢过程 ,给大鼠尾静脉注射Pro 1 0mg·kg- 1 后 ,测定不同时间各组织中Pro的含量。结果 静脉给药后 ,Pro快速分布到肺、肾、脾、脑、小肠、心脏、脂肪、睾丸、肝脏、胃壁及骨骼肌、以肺、肾、脾、脑、肠组织中药物浓度较高 ,尤以肺组织浓度最高。药后 3h各组织中药物浓度下降 ,但睾丸中仍维持较高浓度。实验还发现 ,药后 5min即可测得尿中有原形药 ,1 2h尿中累积排泄量为给药量的 30 .2 1 % ,48h尿中累积排泄量为给药量的 36 87%。原形药经胆汁及粪排泄量不足 1 %。药后 5min及 1 5min血浆蛋白结合率均低于 5 %。结论 普鲁托品在大鼠体内广泛分布 ,部分经尿排泄 。

Wistar大鼠插线法局灶性脑缺血/再灌注模型的实验研究

目的：局灶性脑缺血／再灌注模型是研究缺血性脑血管病的重要模型。本文介绍一种简便易行的插线法Ｗｉｓｔａｒ 大鼠局灶性脑缺血／再灌注模型的制备方法，并通过神经病学评分、ＴＴＣ染色、病理形态学变化的观察，对该模型的可靠性进行评价。方法：用头端处理过的尼龙钓丝，从颈外动脉向颈内动脉插入，可逆性阻断大鼠一侧大脑中动脉（ＭＣＡ）。结果：大鼠ＭＣＡ阻断后１．５ｈ，同时出现Ｈｏｒｎｅｒ＇ｓ征阳性、提尾悬空时梗塞对侧前肢屈曲、内收、自主运动时身体向偏瘫侧划圈的动物，ＴＴＣ染色能清楚地显示梗塞范围，且相对较稳定，光镜下可见脑缺血后的病理改变。阻断后３ｈ及再灌注３、６ｈ时的病理改变加重，神经病学评分同前。结论：该改良法制备的模型简便易行、稳定性好、结果可靠，是用于研究局灶性脑缺血／再灌注的较为理想的实验动物模型。

survivin基因在化疗药物诱导的肺癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨survivin基因在化疗药物顺铂 (DDP)和足叶乙苷 (VP16 )诱导的肺癌细胞凋亡中的作用。方法 用肺腺癌A5 4 9细胞株进行培养传代 ,MTT试验检测DDP和VP16不同药物浓度对肺癌细胞生长的抑制作用 ,实验分为 :DDP、VP16和对照组。DDP和VP16组的肺癌细胞又分为高浓度和低浓度化疗药物处理组。用逆转率PCR检测sur vivin基因的表达。同时利用流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果 不同浓度VP16和DDP对肺癌细胞生长均有明显的抑制作用 ,并有浓度和时间的依赖性。化疗药物组细胞凋亡率和survivin基因表达抑制率高于对照组 ,也有时间依赖性。

SD大鼠30天喂养试验血液学指标和血清生化指标参考值探讨

目的 探讨SD大鼠 30d喂养试验的血液学、血清生化指标参考值。方法 收集 2 4个批次雌雄共480只大鼠的 16项血液学、血清生化指标进行统计分析。结果 16项指标的平均值及其 95 %参考值范围的性别差异均无显著性 ;雌雄鼠嗜中性粒细胞、淋巴细胞、总蛋白三指标无批间差异显著性 ,甘油三酯测定值在雌鼠各批次间差异有显著性 ,而在雄鼠批间差异无显著性 ,其余 10项指标测定值雌雄鼠批间差异均有显著性。结论 SD大鼠30d喂养试验 16项血液学和血清生化指参考值与文献报道一致 ;并且雌雄鼠可以合并计算。

p38MAPK抑制剂SB-202190对大鼠胶质瘤C6细胞的双重作用

目的 探讨 p38MAPK抑制剂SB 2 0 2 190对C6细胞生物活性的影响。方法 采用透射电镜的方法和DNA琼脂糖凝胶电泳的方法观察SB 2 0 2 190诱导胶质瘤细胞的凋亡 ;应用流式细胞仪检测细胞周期变化和是否有凋亡发生。结果 浓度分别为 10、2 0、4 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190能促进C6细胞的细胞周期从G1期过度到S期 ;但 6 0 μmol·L-1的SB 2 0 2 190却诱导C6细胞凋亡 ,凋亡率与时间呈正相关 ,透射电镜观察结果显示 ,凋亡细胞的体积缩小、细胞核浓聚缩小 ,染色质固缩聚集于核膜下 ,胞质浓缩 ,有的细胞染色质浓缩至核膜下成新月状 ;琼脂糖凝胶电泳呈现出特征性的DNA“梯状”带。结论 SB 2 0 2 190在低浓度时促进C6细胞增殖 ,高浓度时诱导细胞凋亡。

利用RAPD技术分析实验用比格犬的遗传背景

目的 运用RAPD技术对实验用比格犬 (Beagle)进行遗传背景分析。方法 筛选的 16个RAPD引物对 4 0个样品的分析 ,共得到 93个扩增条带。结果 所有样品的相似系数 80 4 %到 10 0 %间变动 ,平均相似系数为93 2 8% ,聚类分析得到了这些个体的同源树资料。

Wistar乳鼠中脑黑质器官型脑片的培养

【目的】探索中脑黑质器官型脑片的培养方法 ,寻找一种较好的帕金森病组织模型材料。【方法】选出生 5d～ 7d的Wistar乳鼠 ,制备中脑黑质层面脑片。用Millicell CM微孔膜将脑片放置在培养液和气体界面上培养。分为培养 0d、10d、2 0d和 30d 4组 ,进行倒置显微镜观察、酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化和电镜超微结构观察。【结果】培养 10d和 2 0d的脑片与 0d对照组相比无明显差异。培养 30d脑片发现有部分神经元变性坏死 ,胶质细胞明显增生 ,TH阳性神经元减少。同时发现在脑片长期培养过程中存在“微血流”现象。【结论】Millicell CM膜的中脑黑质器官型脑片培养是一种简便有效的神经组织体外培养方法 。

三七皂苷单体Rg1对D-半乳糖模型鼠学习记忆和免疫功能的影响

目的 :探讨三七皂苷单体 Rg1对 D-半乳糖 ( D- gal)所致衰老模型鼠学习记忆行为和免疫功能的影响。方法 :Balb/c小鼠随机分为 4组 :衰老模型组、正常对照组、实验 组和实验 组。应用跳台和 Y-型迷路方法测定 D-半乳糖衰老模型鼠学习记忆行为 ;采用 3 H- Td R掺入法测定小鼠胸腺、脾细胞的增殖能力 ;生物活性检测法测定 IL- 2和 TNF- α水平的变化。结果 :三七皂苷单体 Rg1能明显提高衰老模型鼠对电刺激的逃避能力 ,改善 D- gal所致学习记忆能力下降。同时三七皂苷Rg1能明显增强衰老模型鼠胸腺和脾细胞增殖能力 ,对 IL- 2水平有所提高 ,血清 TNF- α的细胞毒作用较模型组降低。结论 :三七皂苷单体 Rg1能改善衰老模型鼠学习记忆能力并调节免疫功能。

3种钙激动剂促培养的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 :探讨不同来源的细胞内钙离子 ( [Ca2 +]i)对血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells,VSM Cs)丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)介导的增殖反应的作用。方法 :以培养的大鼠VSMCs为靶细胞 ,用血管紧张素II(AngⅡ )剌激VSMCs跨膜Ca2 +内流、三磷酸肌醇 (IP3)和雷尼丁 (RY)剌激胞内Ca2 +释放 ,[γ - 32 P]-ATP掺入法和免疫印迹 (Westernblot)测MAPK活性及蛋白含量 ,氚 -亮氨酸 ( [3H]-Leu)、氚 -胸腺嘧啶 ( [3H]-TdR)掺入量作为VSMCs增殖的指标。结果 :AngⅡ、IP3和RY均能显著增加VSMCs的 [Ca2 +]i浓度、MAPK活性及蛋白含量 ,并提高氚-亮氨酸 ( [3H]-Leu)、氚 -胸腺嘧啶 ( [3H]-TdR)掺入量 ,与对照组VSMCs相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :钙激动剂诱导的MAPK活性及含量的增加参与了VSMCs的增殖 ,VSMCs的肥大增殖与 [Ca2 +]i浓度增加有关 ,而与[Ca2 +]i的来源无关。